專利名稱：取代的苯甲酸酯衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的磷脂酶A2抑制劑。具體而言，本發(fā)明涉及對(duì)磷脂酶A2具有抑制效果的新化合物，該類化合物是生物活性物質(zhì)thielocin的類似物，后者通過微生物如屬于Thielavia屬的Thielavia terricola RF-143制備。
磷脂酶是一種酶，其存在于細(xì)胞和分泌液中，特別地，存在于蛇毒液，哺乳動(dòng)物的胰腺，各種動(dòng)物的血小板，較高級(jí)動(dòng)物的關(guān)節(jié)炎滲出液等中。該酶專門水解磷脂。例如，該酶專門水解1，2-二?；视土字腃-2脂肪酸酯，生成Lysoglycerophospholipid和脂肪酸。磷脂A2對(duì)神經(jīng)、肌肉和心臟具有毒性，以及與上面的酶作用相結(jié)合具有抗凝血作用，通常據(jù)說該酶可以引起驚厥、張力減退、溶血、出血、浮腫、等等。而且，該酶還可以直接或間接地引起包括炎癥類的臨床癥狀。值得注意的是，磷脂酶A2被認(rèn)為是一種在人體中的致炎性物質(zhì)。
如果致炎性物質(zhì)磷脂酶A2的酶活性可以被抑制，由這種酶活性引起的或與其相聯(lián)系各種疾病就可能被治療。基于這種假設(shè)，正如阿的平和對(duì)-溴苯甲酰甲基溴已經(jīng)被開發(fā)出來，本申請(qǐng)人也已經(jīng)在歐洲專利申請(qǐng)?zhí)?0304552-4、92913882-4，日本專利申請(qǐng)?zhí)?34955/1990中要求保護(hù)和披露了新的磷脂酶抑制劑。但是，人們想要開發(fā)其他磷脂酶A2抑制劑，因?yàn)榱字窤2分子的類型是變化的，由于分子的結(jié)構(gòu)不同，其分子的活性是不相同的。
本申請(qǐng)人已經(jīng)遞交了日本專利申請(qǐng)，其中要求保護(hù)和披露各種有用的thielocin衍生物，它們經(jīng)化學(xué)合成制備?，F(xiàn)在，本申請(qǐng)人已經(jīng)化學(xué)合成了新的具有較低分子量的thielocin衍生物，使用在各種thielocin衍生物中的thielocin B類作為先導(dǎo)化合物，并建立了本發(fā)明。
具體地說，本發(fā)明涉及如下式的取代的苯甲酸或酯衍生物
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8分別是氫、任意取代的低級(jí)烷基、任意取代的低級(jí)烷氧基、羥基、酰氧基或鹵素;
R9是氫、羥基、酰氧基、任意取代的低級(jí)烷基、任意取代的低級(jí)烷氧基或任意取代的低級(jí)烷基氨基，R9優(yōu)選選自下列的基團(tuán)-NHCH2COOCH2Ph、
-NHCH2COOEt、 -OCH2CH2CH2CH3、
其中Ph是任意取代的苯基;
E1是氫，或酯殘留基;
m是1至4的整數(shù);
或其藥物可接受的鹽。
用于本說明書中的一些術(shù)語定義如下術(shù)語“低級(jí)烷基”是指C1-C6烷基，如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基等等。
術(shù)語“低級(jí)烷氧基”是指C1-C6烷氧基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等等。
術(shù)語“酰氧基”是指乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基等等。
術(shù)語“鹵素”是指氯、溴、碘或氟。
術(shù)語“酯殘留基”是指具有1至8個(gè)碳原子的烷基(甲基、甲氧基甲基、乙基、乙氧基甲基、碘代乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、乙氧基乙基、甲基硫基乙基、甲基磺酰基乙基、三氯乙基、叔丁基、等等)、具有3至8個(gè)碳原子的鏈烯基(丙烯基、烯丙基、丁烯基、己烯基、苯基丙烯基、二甲基己烯基、等等)、具有7至19個(gè)碳原子的芳烷基(芐基、甲基芐基、二甲基芐基、甲氧基芐基、乙氧基芐基、硝基芐基、氨基芐基、二苯基甲基、苯基乙基、三苯甲游基、二-叔丁基羥基芐基、2-苯并[c]呋喃酮基、苯甲酰甲基、等等)、具有6至12個(gè)碳原子的芳基(苯基、甲苯基、甲氧基苯基、二異丙基苯基、二甲苯基、三氯苯基、五氯苯基、2，3-二氫化茚基、等等)、具有1到至12個(gè)碳原子的N-羥基氨基化合物(丙酮肟、苯乙酮肟、乙醛肟、N-羥基琥珀酰亞胺、N-羥基鄰苯二甲酰亞胺、等等)、具有3至12個(gè)碳原子的烴化甲硅烷基(三甲基甲硅烷基、二甲基甲氧基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、等等)、具有3至12個(gè)碳原子的烴化甲錫烷基(三甲基甲錫烷基、等等)、具有2至15個(gè)碳原子的單-氧化烷基[直鏈、支鏈、環(huán)狀或部分環(huán)狀的烷酰氧基烷基(乙酰氧基甲基、乙酰氧基乙基、丙酰氧基甲基、新戊酰氧基甲基、新戊酰氧基乙基、環(huán)己基乙酰氧基乙基、環(huán)己基羰氧基環(huán)己基甲基、等等)、具有3至15個(gè)碳原子的烷氧羰氧基烷基(乙氧羰氧基乙基、異丙氧基羰氧基乙基、異丙氧基羰氧基丙基、叔丁氧基羰氧基乙基、異戊氧基羰氧基丙基、環(huán)己基氧基羰氧基乙基、環(huán)己基甲氧基羰氧基乙基、冰片基氧基羰氧基異丙基、等等)、具有2至8個(gè)碳原子的烷氧基烷基(甲氧基甲基、甲氧基乙基、等等)、具有4至8個(gè)碳原子的2-氧雜環(huán)烷基(四氫吡喃基、四氫呋喃酯等等)，等等]，具有8至12個(gè)碳原子取代芳烷基(苯甲酰甲基、2-苯并[c]呋喃酮基、等等)、具有6至12個(gè)碳原子的芳基(苯基、二甲苯基、2，3-二氫化茚基，等等)、具有2至12個(gè)碳原子的鏈烯基(烯丙基、(2-氧代-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯基)甲基、等等)、等等。
術(shù)語“任意取代的低級(jí)烷基氨基”是指可以有一個(gè)或多個(gè)取代基的烷基氨基，取代基可以相同或不同，選自芳基、尿烷衍生物的氨基和可以被酯化或酰胺化的羧基。
上述的“尿烷衍生物”包括氨基甲酸乙酯、氨基甲酸甲酯、氨基甲酸丙酯、氨基甲酸銨、氨基甲酸苯酯和氨基甲酸芐酯，在本發(fā)明中，任意取代的氨基甲酸芐酯是最優(yōu)選的。
此外“可以被酯化的羧基”包括羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、芐氧基羰基等等，在本發(fā)明中，乙氧基羰基和芐氧基羰基是最優(yōu)選的。
術(shù)語“任意取代的低級(jí)烷基”是指被一個(gè)或多個(gè)取代基任意取代的烷基，取代基可以相同或不同，選自低級(jí)烷氧基、鹵素、羥基、氨基和任意取代的芳基，優(yōu)選的取代基包括甲氧基、乙氧基、羥基、等等。芳基包括苯基、萘基、蒽基等等。
術(shù)語“任意取代的低級(jí)烷氧基”是指被一個(gè)或多個(gè)取代基任意取代的烷氧基，取代基可以相同或不同，選自低級(jí)烷基、鹵素、羥基、氨基和任意取代的芳基，優(yōu)選的取代基包括任意取代的芳基。最優(yōu)選的取代基是被低級(jí)烷氧基，如甲氧基和乙氧基取代的苯基。
術(shù)語“任意取代的苯基”是指可以帶有一個(gè)或多個(gè)取代基的苯基，取代基可以相同或不同，選自鹵素、低級(jí)烷氧基、羥基、氨基和任意取代的芳基。
本發(fā)明的化合物可以與能夠與羧酸形成鹽的堿金屬(鈉、鉀等)，或堿土金屬(鈣，等)形成鹽。
本發(fā)明的化合物可以根據(jù)下面的制備方法A和B制備制備方法A
其中X是下式基團(tuán)
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、m和E1如上定義，R10、R11、R12、R13和R14分別為氫、低級(jí)烷基和羥基。
在適當(dāng)?shù)娜軇┲性?50℃至100℃，優(yōu)選在0℃至室溫下，和優(yōu)選在堿存在下將化合物7與適當(dāng)?shù)陌坊虼挤磻?yīng)得到化合物8和9。
胺可以使用脂族胺，如甲胺、乙胺、丙胺、二甲胺、二乙胺等等，芳族胺如，苯胺、甲基苯胺、二甲苯胺等等，和氨基酸，如甘氨酸及其酯、賴氨酸及其酯等等。
醇可以使用甲醇、乙醇、甘氨酸芐氧基甲苯磺?；蓟?qū)?甲氧基-2-苯基乙醇等等。
堿可以使用氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鈣、碳酸鉀、三乙胺、吡啶等等。
溶劑可以使用醇，如甲醇、乙醇等等、二噁烷、四氫呋喃、DMF、DMSO、或它們的含水混合物。
制備方法B(R9是烷基氨基)
其中R5、R6、R7、R8、X和E1如上定義。
在還原劑，如硼氫化物，例如，硼氫化鈉存在下將化合物10與R9H反應(yīng)制備化合物11，如果需要的話，將后者去保護(hù)。
反應(yīng)在適當(dāng)?shù)娜軇┲羞M(jìn)行，反應(yīng)溫度在-50℃至50℃，優(yōu)選在-20℃至室溫，優(yōu)選在氮?dú)饬髦羞M(jìn)行反應(yīng)。
醇，如甲醇、乙醇等等、乙酸、三氟乙酸、苯、甲苯、乙醚、四氫呋喃、四氫吡啶和吡啶等等可以用作適當(dāng)?shù)娜軇?br> 在該方法中，在制備化合物11之前可以先形成化合物11′，然后將化合物11′還原制備化合物11。還原反應(yīng)使用本文前面描述的還原劑進(jìn)行。另外，還原反應(yīng)也可以使用氰氫化鈉等，或通過催化還原根據(jù)常規(guī)的方法使用鉑、鈀、鎳、鈷、鐵、銅等進(jìn)行。
本發(fā)明的化合物可以與各種載體結(jié)合配制成口服或表面用制劑。該化合物的劑量根據(jù)想要達(dá)到的治療效果、給藥途徑、病人的年齡和體重而變化，因此，不能籠統(tǒng)地確定劑量。通常地，口服給藥的每日劑量可以在約0.1mg至約500mg，優(yōu)選約0.5mg至100mg。上述劑量可以分成1至5批給藥。
下面舉例說明在上面的式子中表示的本發(fā)明的典型的化合物的例子
本發(fā)明的所有化合物都可以用現(xiàn)有技術(shù)中公知的方法制備。
下面的實(shí)施例和制備例用于進(jìn)一步說明本發(fā)明的化合物的制備方法。這些實(shí)施例和制備例僅僅是表示性的，不對(duì)本發(fā)明的任何方面有限制。
實(shí)施例實(shí)施例14-[4′(4″-羧基-3″-甲氧基-2″，5″，6″-三甲基-苯氧羰基)-3′-甲氧基-2′，5′，6′-三甲基苯氧羰基]-2，5-二甲基-6-芐氧基甘氨酰基甲基間苯二酚(1a)將Thielocin A2α(2a)[該化合物根據(jù)日本專利公開說明書158790/1992的方法制備](12mg)溶解在1ml二噁烷中，隨后在攪拌的同時(shí)向該溶液中加入甘氨酸芐基酯對(duì)甲苯磺酸鹽、二滴三乙胺和0.2N NaOH(2ml)，然后將混合物在室溫下攪拌一小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水稀釋，用稀鹽酸酸化至pH3.0，混合物用乙酸乙酯提取。提取物用Na2SO4干燥，真空蒸發(fā)溶劑得到殘留物。該殘留物用硅膠薄層色譜經(jīng)CHCl3∶甲醇∶水＝62∶25∶2展開，分離得到所需物質(zhì)(Rf0.6)。然后將該物質(zhì)用高效液相色譜(Nucleosil 5C18，80%乙腈-0.1%H3PO4)純化得到1.5mg標(biāo)題化合物(tR(min.)8.0)。1H-NMR在下文描述MS譜MH+m/z 測定值744(理論值C41H45NO12為744)。
上面的反應(yīng)用下列示意圖表示
R1、R2和R4是甲基，R3是甲氧基，R5和R7是甲基，R6是羥基，R8是羥基，R9是-NHCH2CO2CH2C5H5，R10和R11是羥基，R12、R13和R14是甲基，和E1是氫。
實(shí)施例2-9將Thielocin A2α(2a)或A1α[2b，其在歐洲專利申請(qǐng)No.90304552-4的說明書中被描述]與代替甘氨酸芐氧酯的RNH2或ROH的各種化合物反應(yīng)，并用類似于實(shí)施例1中的方法處理，通過li得到化合物16。該反應(yīng)用下列的示意圖表示。
X2是下式基團(tuán)
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14和E1如上述定義;
其前提是，在化合物2a中m＝n＝2，而在化合物b中m＝1和n＝2。
該反應(yīng)的反應(yīng)條件，和化合物的化學(xué)式相應(yīng)地在表1和2中表示?；衔?a至1i的物理性質(zhì)也列在表3中。

實(shí)施例104-[4′-[5″-(二甲基氨基甲基)-2″，4″-二羥基-3″，6″-二甲苯基羧基]-2′-甲氧基-3′，5′，6′-三甲基]苯基羧基-2-甲氧基-3，5，6-三甲基苯甲酸(6a)
在上面的反應(yīng)式中，Bh指二苯甲基。
向10.7g(130mmol)的二甲胺鹽酸鹽在200ml甲醇中的溶液中，在氮?dú)饬鳁l件下和-10℃至-15℃用約5分鐘加入20.3g(105mmol)NaOMe(在甲醇中，28%)?；旌衔锝?jīng)攪拌40分鐘后，向其中加入下文的制備例1中合成到的4a(1g，1.3mmol)，將所得的混合物溫?zé)嶂?℃，攪拌2.5小時(shí)。用10分鐘向該混合物中加入500mg(13mmol)NaBH4中的60mg(1.6mmol)，然后將剩余的NaBH4一起加入。攪拌40分鐘后，將混合物在室溫下放置過夜。將溶劑甲醇蒸發(fā)，殘留物在乙酸乙酯和水中分配。將乙酸乙酯層用水和鹽水洗滌，然后用Na2SO4干燥。蒸發(fā)溶劑得到1.31g殘留物。將該殘留物經(jīng)過柱色譜(SiO;100g)，用乙酸乙酯-己烷(1∶1)洗滌，然后用CHCl3-甲醇(20∶1)洗脫，得到1g淺棕色油狀的產(chǎn)物。該油狀物用甲醇結(jié)晶得到844mg(81.3%)白色粉末的5a(6a的二苯甲基酯)。
然后，將120mg(1.11mmol)苯甲醚加入5a(200mg，0.26mmol)在5ml二氯甲烷中的溶液中，混合物冷卻至0℃。在混合物中加入300mg三氟乙酸在二氯甲烷中的1ml溶液，將所得的混合物在0℃攪拌1小時(shí)。攪拌后，將混合物在4℃的制冷器中放置過夜，將溶劑蒸發(fā)得到0.46g淺黃色油狀殘留物。將殘留物在乙醚中結(jié)晶，過濾收集結(jié)晶，從乙醇-水中重結(jié)晶得到63mg所需的化合物6a(39.9%)。
MP218-220℃(分解)6a分子式C34H41NO10SIMSMH+m/z6241H-NMR(CDCl3)δ2.14，2.16，2.19，2.24，2.27，2.29，2.42，2.67(3Hs每個(gè)峰，CH3)，δ2.57(6Hs，NMe2)，δ3.99(2Hs，ArCH2N)。
實(shí)施例114-[4′-[5″-(仲-苯乙基氨基甲基)-2″，4″-二羥基-3″，6″-二甲基苯基羧基]-2′-甲氧基-3′，5′，6′-三甲基]苯基羧基-2-甲氧基-3，5，6-三甲基苯甲酸(6b)
除了用658mg化合物C6H5CH(CH3)NH2(仲-苯乙基胺代替Me2NH，和將80mg NaBH4在2.5ml DMF和12ml甲醇反應(yīng)之外，將300mg4a(制備例1)用類似于實(shí)施例10的方法反應(yīng)，得到314mg5b(所需化合物6a的二苯甲基酯)。
然后，在所得化合物5b在二氯甲烷(10ml)的溶液中加入180mg苯甲醚和420mg三氟乙酸，混合物用類似于實(shí)施例10的方法反應(yīng)，得到136mg標(biāo)題化合物6b。
6b分子式C40H45NO10SIMSMH+m/z7001H NMR(CDCl3)[δ1.57(3Hd，J＝6.8Hz)，δ2.13(3Hs，CH3)，δ2.15(6Hs，CH3)，δ2.23，2.26，2.29，2.40，2.42(3Hs，每個(gè)為CH3)，δ3.83，3.84(3Hs每個(gè)峰，OCH3)，3.94(2Hm，ArCH2NH)，7.37(5Hm，C6H5)]。
實(shí)施例12步驟14-[4′-[5″-(芐氧基羰基甲基亞氨基甲基)-2″，4″-二羥基-3″，6″-二甲基苯基羧基]-2′-甲氧基-3′，5′，6′-三甲基]苯基羧基-2-甲氧基-3，5，6-三甲基苯甲酸二苯甲基酯(5c)
將2g(2.6mmol)4a(制備例1)和8.9g(26mmol)甘氨酸芐基酯對(duì)甲苯磺酸鹽溶于30ml干燥的二甲基甲酰胺中，然后向該溶液中加入4.3g(52mmol)乙酸鈉，將混合物攪拌3.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾入300ml冷卻的水中沉淀結(jié)晶，并經(jīng)過濾收集。將結(jié)晶溶于100ml乙酸乙酯中，溶液用100ml水和100ml鹽水洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥。將溶劑蒸發(fā)得到2.58g黃色泡沫狀物質(zhì)的標(biāo)題化合物5c。將該物質(zhì)從乙酸乙酯-正己烷(1∶2)中重結(jié)晶得到2.2g所需化合物(92.2%)的黃色基柱結(jié)晶。
MP153-5℃元素分析(對(duì)C54H53NO12(MW907.972))理論值C，71.43;H，5.88;N，1.54測定值C，71.69;H，5.88;N，1.62。
步驟24-[4′-[5″-(芐氧羰基甲基氨基甲基)-2″，4″-二羥基-3″，6″-二甲基苯基羧基]-2′-甲氧基-3′，5′，6′-三甲基]苯基羧基-2-甲氧基-3，5，6-三甲基苯甲酸(6c)
(1)將由上面步驟1中得到的化合物5c(2.15g，2.37mmol)溶于30ml干燥的二甲基甲酰胺中，然后向其中加入80ml干燥的甲醇和2ml乙酸。在氮?dú)饬鳁l件下，在冰浴冷卻下用15分鐘將0.3g氰基硼氫化鈉在4ml甲醇的溶液加入該混合物中，將所得的混合物直接攪拌3小時(shí)，然后在4℃放置過夜。在真空中蒸發(fā)甲醇，殘留物傾入冷卻的水中。混合物用1N鹽酸酸化，然后用飽和碳酸氫鈉溶液堿化。沉淀的結(jié)晶經(jīng)過濾收集，并溶于200ml乙酸乙酯中，將該溶液用100ml鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥。將溶劑蒸發(fā)得到2.33g黃色油狀物。將該油狀物經(jīng)硅膠色譜(SiO2;120g)，用乙酸乙酯-正己烷(1∶2)洗脫得1.07g 5d(所需化合物6c的二苯甲基酯)的淺黃色油狀物(49.7%)。
(2)將上面得到的化合物5d(1g，1.1mmol)溶于40ml二氯甲烷中，然后向其中加入0.6ml(5.5mmol)苯甲醚。在冰浴中向混合物中慢慢滴加0.85ml(11mmol)三氟乙酸在4ml二氯甲烷中的溶液。將混合物直接攪拌4小時(shí)，在真空中濃縮，殘留物中加入1N鹽酸，沉淀的固體經(jīng)過濾收集。該固體用水重復(fù)洗滌，再溶于50ml乙酸乙酯中，用0.1%磷酸水溶液和水洗滌，然后經(jīng)無水硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶劑得到865mg黃色油狀物。將該油狀物經(jīng)硅膠色譜(SiO2;50g)，用氯仿-甲醇(10∶1)洗脫，得到720mg6c的黃色油狀物(88.1%)。將該油狀物經(jīng)95%乙醇重結(jié)晶得到266mg標(biāo)題化合物6c的淺黃色粒狀結(jié)晶。
MP134-6℃(分解)元素分析(對(duì)C41H45NO12·EtOH·H2O)理論值C，63.93;H，6.61;N，1.73;
測定值C，63.90;H，6.58;N，1.81。
實(shí)施例134-[5′-(芐氧基羰基甲基氨基甲基)-2′，4′-二羥基-3′，6′-二甲基]苯基羧基-2-甲氧基-3，5，6-三甲基苯甲酸(6c′)
將化合物4b(制備例1)(2.02g，3.5mmol)溶于30ml DMF中并向其中加入5.98g(17.7mmol)GLy·OBn·Tos和3.04g(37mmol)乙酸鈉，將混合物在室溫?cái)嚢?。反?yīng)完全后，向混合物中加入300ml水，沉淀的結(jié)晶經(jīng)過濾收集。將濾餅溶于乙酸乙酯，溶液經(jīng)Na2SO4干燥，真空中蒸發(fā)溶劑得到2.33g 4-[5′-(芐氧羰基甲基亞氨基甲基)-2′，4′-二羥基-3′，6′-二甲基]苯基羧基-2-甲氧基-3，5，6-三甲基苯甲酸二苯甲基酯(5c′)。
5c′1H-NMR(δ，CDCl3)2.04(3H，s)，2.08(3H，s)，2.10(3H，s)，2.15(3H，s)，2.83(3H，s)，3.55(3H，s)，4.46(2H，s)，5.24(2H，s)，7.20(1H，s)，7.23-7.50(15H，m)，8.86(1H，s)，11.95(1H，s)。
步驟2將上面得到的化合物5c(2.33g，3.25mmol)溶于200ml甲醇與DMF(1∶1)的混合物中?；旌衔镌?℃冷卻，向其中滴加510mg(8.1mmol)NaBN3CN在10ml甲醇中的溶液，然后將混合物在0℃攪拌40小時(shí)。向混合物中加入約800ml冰水，沉淀的黃色結(jié)晶經(jīng)過濾收集，該結(jié)晶用200g硅膠純化得到120mg4-[5′-(芐氧羰基甲基氨基甲基)-2′，4′-二羥基-3′，6′-二甲基]苯基羧基-2-甲氧基-3，5，6-三甲基苯甲酸二苯甲基酯(5d′)。
5d′1H-NMR(δ，CDCl3)2.03(3H，s)，2.03(3H，s)，2.08(3H，s)，2.12(3H，s)，2.54(3H，s)，3.55(3H，s)，4.11(2H，s)，5.22(2H，s)，7.20(1H，s)，7.23-7.50(15H，m)，11.60(1H，s)。
步驟3將上面得到的化合物5d′(120mg，0.167mmol)，和97mg(0.85mmol)苯甲醚溶于6ml二氯甲烷中，將溶液在0℃冷卻，然后向溶液中慢慢加入0.12ml(1.64mmol)三氟甲酸，將混合物直接攪拌。反應(yīng)完全之后，在真空中蒸發(fā)溶劑，向其中加入3ml1N鹽酸，沉淀的結(jié)晶經(jīng)過濾收集。將結(jié)晶溶解在乙酸乙酯中，溶液用硫酸鈉干燥，然后將溶液蒸發(fā)得到殘留物，該殘留物用75g硅膠純化。得到的產(chǎn)物(40mg)經(jīng)乙醇重結(jié)晶得到8.5mg白色結(jié)晶的標(biāo)題化合物6c′。
6c′Mp164℃1R(cm-1，nujol)3400-2300，760，1650，1620。
NMR(δ，CDCl3-CD3OD5%)2.05(3H，s)，2.09(3H，s)，2.15(3H，s)，2.29(3H，s)，2.59(3H，s)，3.69(2H，s)，3.82(3H，s)，4.23(2H，s)，5.24(2H，s)，7.36(5H，s)。
制備例14-[4′-(2″，4″-二羥基-5″-甲酰基-3″，6″-二甲基苯基羧基)-2′-甲氧基-3′，5′，6′-三甲基]苯基羧基-2-甲氧基-3，5，6-三甲基苯甲酸二苯甲基酯(4a)，和4-(5′-甲?；?2′，4′-二羥基-3′，6′-二甲基)苯基羧基-2-甲氧基-3，5，6-三甲基苯甲酸二苯甲基酯(4b)
將Thielavin B(日本專利申請(qǐng)No.162847/1991)(4a′)(30g，53mmol)溶于300ml三氟乙酸中，在冰浴中將8.9g(63mmol)六亞甲基四胺加入其中，將混合物攪拌2小時(shí)，將混合物溫至室溫，再攪拌2小時(shí)，溫?zé)嶂?0℃攪拌4.5小時(shí)，在室溫下放置過夜。將溶劑三氟乙酸蒸發(fā)，向其中加入400ml水，將混合物在60℃加熱7小時(shí)。沉淀的固體經(jīng)過濾收集，并用水洗滌，溶于300ml乙酸乙酯中，用1N鹽酸水和鹽水洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶劑得到41.7g橙色泡沫狀物質(zhì)，將該物質(zhì)溶于200ml氯仿。在冰浴中向該溶液中加入18g(93mmol)二苯基甲基重氮甲烷，將混合物攪拌3.5小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，殘留物溶于100ml乙酸乙酯中。溶液用1N鹽酸、飽和碳酸氫鈉水溶液、水和鹽水洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶劑得到46g橙色泡沫狀物質(zhì)。將該物質(zhì)經(jīng)過硅膠色譜法分離(500g和400g SiO2)，用乙酸乙酯-正己烷(1∶4)洗脫，重復(fù)相同的色譜法分離，得到9.95g(24.7%)4-[4′-(2″，4″-二羥基-5″-甲?；?3″，6″-二甲基苯基羧基)-2′-甲氧基-3′，5′，6′-三甲基]苯基羧基-2-甲氧基-3，5，6-三甲基苯甲酸二苯甲基酯(4a)和3.77g(12.5%)4-(5′-甲?；?2′，4′-二羥基-3′，6′-二甲基)苯基羧基-2-甲氧基-3，5，6-三甲基苯甲酸二苯甲基酯(4b)。
4b;白色基柱狀結(jié)晶(乙酸乙酯-正己烷)Mp182-4℃元素分析(對(duì)C34H33O8(MW569.604))理論值C，71.69;H，5.84;
測定值C，71.61;H，5.77。
本發(fā)明的效果用下列的方法檢測本發(fā)明化合物對(duì)磷脂酶A2的抑制活性。
方法將1-棕櫚酰-4-[1-14C]-亞油酰(linoleoyl)L-3-磷脂酰乙醇胺(Amersham，Inc.，59mCi/mmol)用L-α-磷脂酰乙醇胺(Sigma，Co.，來自雞蛋清)[2000dpm/nmol]稀釋，稀釋液用超聲處理，所得的稀釋液用作基質(zhì)。試驗(yàn)中使用的PLA2(磷脂酶A2)來自小鼠血小板。將PLA2和基質(zhì)制劑加入在Tris緩沖液(0.1M，pH7.4)中的CaCl2(3mM)溶液中，讓混合物在37℃反應(yīng)20分鐘。然后，向反應(yīng)混合物中加入1.25ml Dole′s試劑停止反應(yīng)，馬上攪拌所得混合物。向混合物中加入0.5ml蒸餾水和0.8ml正庚烷，將混合物攪拌，離心，將所得上層清液加入另一試管中。在該上層清液中再加入0.8ml正庚烷和硅膠，將混合物攪拌，離心，然后將上層清液加入管形瓶中。在該管形瓶中加入甲苯雞尾酒。用液體閃爍計(jì)數(shù)器測定從PLA2(DPM值)釋放的游離脂肪酸數(shù)量。
抑制活性(%)根據(jù)下式計(jì)算[(加入抑制劑的DPM值-沒有PLA2的DPM值)/(僅有PLA2的DPM值-沒有PLA2的DPM值)]×100。
結(jié)果結(jié)果在下面的表4中列出表4PLA2抑制活性[IC50(μM)]化合物序號(hào) 小鼠血小板1a 0.0261b 0.171c 0.161d 0.121e 1.101f 0.381g 0.341i 3.906b 0.30
權(quán)利要求
1.下式化合物
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8分別為氫、任意取代的低級(jí)烷基、任意取代的低級(jí)烷氧基、羥基、酰氧基或鹵素；R9是氫、羥基、酰氧基、任意取代的低級(jí)烷基、任意取代的低級(jí)烷氧基或任意取代的低級(jí)烷基氨基；E1是氫或酯殘留基；m是1至4的整數(shù)；或其藥物可接受的鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中，R9選自下列的基團(tuán)-NHCH2COOCH2Ph、
-NHCH2COOEt、 -OCH2CH2CH2CH3、
其中Ph是任意取代的苯基;或其藥物可以接受的鹽。
3.一種藥物組合物，含有如權(quán)利要求1中要求保護(hù)的化合物或其藥物可接受的鹽，并與一種或多種藥物可接受的載體或稀釋劑相結(jié)合。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的藥物組合物，用于抑制磷脂酶A2。
5.一種治療患上或易感染上任何由磷脂酶A2引起的疾病的哺乳動(dòng)物的方法。
6.權(quán)利要求1中要求保護(hù)的化合物或其藥物可接受的鹽用于患上或易感染上由磷脂酶A2引起的任何疾病的哺乳動(dòng)物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及下式化合物
文檔編號(hào)A61K31/24GK1088197SQ93116880
公開日1994年6月22日 申請(qǐng)日期1993年7月23日 優(yōu)先權(quán)日1992年7月23日
發(fā)明者松谷茂, 吉田正, 坂崎龍二, 滕井康彥, 田中和重 申請(qǐng)人:鹽野義制藥株式會(huì)社