專利名稱：：提制抗癌新藥“托里埃(Torreya)”方法人工合成抗癌藥物，研制費用大，并且付作用大。從植物中篩選，提取抗癌藥成為當今的世界潮流。我國中國醫(yī)學科學院藥物研究所也在從事這方面工作。在該所發(fā)表的“中國粗榧抗腫瘤有效成分的研究”(《中草藥》1981，NO.6P.1～4)一文中報導了粗榧樹皮中含有的臺灣三尖杉堿，對小鼠白血病L615有微弱作用。海南粗榧(CephalolaxushainaneieLi)為三尖杉屬植物。另外在“長葉榧化學成分的研究”(《中藥通報》Vol.10NO.41985P.32～33)一文報導了從紫杉科植物長葉榧(Torryajackii)中分離出β-谷甾醇和扁豆脂素之外的豆甾-3-烯-4酮等四種化合物。長葉榧提取物的動物實驗發(fā)現有降壓，舒張血管作用。發(fā)明人在抗癌植物篩選研究中首次發(fā)現，從香榧又稱榧樹的樹枝中得到的提取物，發(fā)明人命名為“托里?！?，它具有抗癌活性，經動物腫瘤實驗，具有較好療效，對小白鼠S180腫瘤抑制瘤率為38～64%，其顯著性有效率高達95～99%以上(P值＜0.05～＜0.01)。本發(fā)明的目的在于提供一種由香榧樹枝提制抗癌新藥“托里?！庇行С煞值墓に嚪椒?，并確定其化學成分。香榧樹系裸子植物門，榧樹族，榧樹屬，榧樹組榧樹(TorreyagandisFort.etLindl)，為我國特有樹種，分布在長江以南的貴州，湖南，江西，福建，安徽，浙江及江蘇等地。本發(fā)明工藝流程為1.原料準備采集新鮮香榧樹枝，曬干，粉碎，過20目篩先制成生藥粉。2.提取在榧粉生藥粉中拌入0～10%碳酸鈉和/或Ca(OH)2，用4～12倍體積的甲醇和/或乙醇溶劑，經40～80℃提取2～10小時，得到甲醇和/或乙醇的堿性醇類提取液。當不用碳酸鈉和/或Ca(OH)2時，可用生藥粉用4～12倍體積的水煎煮，其濾液用甲醇和/或乙醇調整醇度到70%～85%經2～3次提取，過濾，得到甲醇和/或乙醇提取液。3.蒸餾濃縮，把提取液在蒸餾裝置中蒸餾濃縮至出現泡沫，停止加熱，得到濃縮物，同時回收甲醇和/或乙醇溶劑。4.沉淀在濃縮物中邊攪拌邊加入8～12倍體積的蒸餾水，用鹽酸和/或硫酸酸析，使pH等于2～4，并析出淡黃色沉淀物。對于非堿性溶液濃縮物則加入熱飽和醋酸鉛水溶液，直至沉淀完全。5.過濾把沉淀物過濾，抽干。6.真空干燥在真空干燥器中真空干燥，得到“托里?！笨偺嵛铮寐?～3%。7.分離把“托里?！笨偺嵛镉霉枘z層析柱分離，以混合洗脫劑洗脫，分別得到“托里?！?號和“托里?！?號，得率分別為3‰和9‰。所述的混合洗脫劑是由氯仿，甲醇，丁酮組成的，其配比為氯仿∶甲醇∶丁酮＝16～24∶1～3∶1。分離得到的“托里埃”1號及“托里?！?號在沈陽化工研究院等有關單位，用核磁共振儀，紅外光譜儀，色質聯用儀等儀器進行測試，分析檢驗，確定“托里?！?號的分子式為C18H10O8，分子量為354.270，結構式如圖1所示，圖1中的R≡1，命名為托里埃黃酮(Torreyaflavone)。同樣確定“托里?！?號的分子式為C27H26O12，分子量為542.490，其結構式如圖2所示。其中鼠李糖的結構如圖3所示，它是一種公知的結構。命名“托里?！?號為托里埃黃酮甙(Torreyaflavonoloside)。圖面說明圖1為“托里?！?號分子結構式。圖2為“托里?！?號分子結構式。圖3為鼠李糖分子結構式。為了檢驗“托里?！?號的抗癌效果，由江西中醫(yī)院病理研究室進行了小白鼠試驗。取傳代第10天小白鼠S180瘤株1∶1稀釋液，接種健康小白鼠30只，每只腋窩皮下注射0.2毫升。隨機分為三組對照組，托1一組，托1二組。于接種瘤株的次日，對照組腹腔注射10%酒精0.2毫升/只，每天1次，連續(xù)8天。托1一、二組分別腹腔注射200毫克/公斤/只，100毫克/公斤/只“托里埃”1號，每天1次，連續(xù)8天。停藥的第二天全部動物脫椎處死，取瘤稱重，計算抑瘤百分率，結果列于表1。表1“托里埃”1號對S180瘤株生長的影響表1的結果表明，當“托里?！?號用藥量為200毫克/公斤時，抑瘤率為64%，P值＜0.01。即顯效率在99%以上。同樣對“托里?！?號進行小白鼠實驗，其結果列于表2表2“托里?！?號對S180瘤株生長的影響組別劑量(毫克／公斤)途徑×天動物數體重變化(克)瘤重(克)抑瘤率％P值始終始終對照組(5～10％酒精)0.2毫克／只ip×814141.88+6.21.43托1－組200毫升／只ip×8101018.4+2.60.6257＜0.05托1二組150毫升／只ip×8101018.3+4.10.8938＜0.05</table></tables>從表2可見，“托里?！?號對小白鼠S180瘤株的抑瘤率，當用藥量為200毫克/公斤時，達57%，P值＜0.05，即顯效率在95%以上。實施例11.榧樹枝曬干，粉碎，經20目過篩得生藥粉(1);2.稱取97.5克生藥粉和2.5克無水碳酸鈉混合均勻(2);3.稱取40克拌有無水碳酸鈉的生藥粉，用500毫升甲醇(C.P)于索氏器提取，溫度40～80℃時，最好保持在54～60℃，持續(xù)4個小時，得到甲醇提取液(堿性溶液)(3);4.把(3)轉入蒸餾裝置，回收甲醇溶劑，直至釜內的甲醇提取液出現泡沫，停止加熱，冷卻后，倒入600毫升燒杯中(4);5.在攪拌條件下，在(3)中加入蒸餾水稀釋至500毫升，再加入6N鹽酸(C.P)，調節(jié)pH至pH＝2～3，即析出淡黃色沉淀，過濾，抽干，真空干燥得“托里?！笨偺嵛?5)，得率為2%～3%。6.把(5)用硅膠層析柱分離，以混合洗脫劑(氯仿∶甲醇∶丁酮＝16∶3∶1)洗脫，分離得到“托里?！?號和“托里?！?號。得率分別為3‰和9‰。實施例2同實施例1的原料生粉90份加Ca(OH)2水溶液配成100份，用12倍體積的乙醇，在60～80℃索氏提取10小時，得到乙醇提取液，經蒸餾濃縮至出現泡沫，停止加熱，得到濃縮液，同時回收乙醇，濃縮物用蒸餾水稀釋，再用6N硫酸調節(jié)pH＝3～4，即析出淡黃色沉淀，沉淀經過濾，抽干，真空干燥得到總提物，再用硅膠層析柱分離，以混合洗脫劑氯仿∶甲醇∶丁酮＝20∶2∶1洗脫，得到“托里埃”1號及“托里?！?號，得率2～3‰。實施例31.生藥粉300克加入2000克水煎煮4小時，超熱過濾，得濾液(1)。把(1)濃縮至400毫升，在攪拌下加入乙醇至溶液醇度達70%，得乙醇液(2)，靜置過夜。2.乙醇液(2)過濾，得濾液(3)。3.把濾液(3)回收溶劑，濃縮至500毫升，在攪拌下加入乙醇使溶液醇度達85%，得乙醇液(4)，靜置過夜。4.醇液(4)過濾，回收溶劑，濃縮得濃縮液500毫升(5)，以熱飽和醋酸鉛水溶液加入(5)中，直至沉淀完全(6)。5.將(6)過濾，得黃色沉淀(7)和濾液(8)。6.把(7)溶于400毫升無水乙醇中，用87%H2SO4脫鉛，再以6NNaOH中和至pH～7，過濾，濃縮，得托里埃粗提物，得率1%。7.把濾液(8)用8%H2SO4脫鉛，再以6NNaOH中和至pH～7得托里埃粗提物，得率2%。8.托里埃粗提物都用硅膠層析柱分離，以氯仿∶甲醇∶丁酮＝24∶1∶1無混合洗脫劑洗脫，分別獲得托里埃1號和托里埃2號。權利要求1.一種提制抗癌新藥“托里?！钡姆椒ǎ景l(fā)明的特征在于以香榧樹枝為原料，先制成生藥粉，拌入0～10%無水碳酸鈉和/或氫氧化鈣，用8～12倍體積的醇類溶劑索氏提取，提取溫度40～80℃，持續(xù)2～6小時得到醇類提取液，提取液蒸餾濃縮至出現泡沫得到濃縮物，在濃縮物中加入8～12倍體積的蒸餾水，用鹽酸和/或硫酸酸析，使pH為2～4，析出沉淀，在非堿性溶液中則加入熱飽和醋酸鉛水溶液，直至沉淀完全，過濾沉淀，抽干，真空干燥得到總“托里?！碧崛∥?，用硅膠層柱分離總提物，以混合洗脫劑洗脫，分別得到“托里埃”1號及“托里?！?號。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于香榧樹枝是新鮮的，經曬干，粉碎，過20目篩制取生藥粉。3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于醇類溶劑是指甲醇和/或乙醇。4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于最佳提取溫度為54～60℃，持續(xù)4小時。5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于用6N鹽酸調節(jié)pH至2～3。6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于用6N硫酸酸析，調節(jié)pH至3～4。7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于用10倍體積的水煎煮生藥粉，過濾得濾液，濾液濃縮后加入乙醇，達到醇度為70%～85%提取，過濾后的乙醇溶液經濃縮并回收溶液，在濃縮液中加入熱飽和醋酸鉛水溶液，直至沉淀完全，得黃色沉淀和濾液，沉淀溶于無水乙醇，再用80%H2SO4脫鉛，再以6NNaOH中和至pH＝7，過濾，濃縮得“托里?！碧嵛?濾液用8%H2SO4脫鉛，再以6NNaOH中和至pH＝7，得“托里?！碧嵛?。8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于混合洗脫劑中氯仿∶甲醇∶丁酮＝16～24∶1～3∶1。9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于蒸餾濃縮的同時回收甲醇和/或乙醇。10.由權利要求1的方法提取的化合物為“托里?！?號的分子式為C18H10O8，分子量為354.270，圖1為其結構式，命名為托里埃黃酮(Torreyaflavone)，“托里埃”2號的分子式為C27H26O12，分子量為542.490，圖2為其結構式，命名“托里?！?號為托里埃黃酮甙(Torreyaflavonoloside)，它們的抗癌顯效率為95～99%。全文摘要一種提制抗癌新藥“托里埃”的方法，其主要特征在于以香榧樹枝為原料，經提取，蒸餾，濃縮，酸析、沉淀，真空干燥的方法得到總提物，再用硅膠層柱分離總提物，以混合洗脫劑洗脫，制得“托里?！?號及“托里埃”2號。對小白鼠的抗腫瘤實驗證明，“托里埃”的抗癌P值＜0.01，即顯效率＞99％。文檔編號A61K31/35GK1046904SQ9010158公開日1990年11月14日申請日期1990年3月20日優(yōu)先權日1990年3月20日發(fā)明者曾國洲,王延申請人:中國人民解放軍南昌陸軍學院