專利名稱：：Ws7622a、b、c和d物質及其衍生物、制備方法及應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及新的WS7622A、B、C和D物質及其衍生物。更具體地說，本發(fā)明涉及具有抑制人類白細胞彈性蛋白酶活性的新的WS7622A、B、C和D物質、其衍生物及其可藥用的鹽，它們的制備方法和含有它們的藥物組合物及其使用方法。在營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)產生WS7622A、B、C和D物質的鏈霉菌屬(Streptomyces)菌株，即可生產WS7622A、B、C和D物質。微生物可用來生產WS7622A、B、C和D物質的微生物是一種產生WS7622A、B、C和D物質的菌株，它屬于鏈霉菌屬，其中拒霉素鏈霉菌(Streptomycesresistomycificus)7622已新近從采自日本福島縣廣野區(qū)的土樣中分離出來。新近分離的拒霉素鏈霉菌7622的凍干樣品按照《布達佩斯條約》首次保藏在國際性保藏機構工業(yè)科技署發(fā)酵研究所(日本305，茨城縣筑波市東1區(qū)1-3號)，其登記號為FERMBP-2306(保藏日1989年2月23日)，稱為鏈霉菌第7622號種，因此此菌株被稱為拒霉素鏈霉菌7622。應該理解，新的WS7622A、B、C和D物質的生產并不僅限于使用此處所述的特定微生物，該微生物僅僅用于舉例說明。本發(fā)明還包括使用能夠產生WS7622A、B、C和D物質的任何突變株，包括天然突變株和人工突變株，人工突變株可以由所述菌株通過常規(guī)手段得到，這些手段有例如X光照射、紫外輻射、用N-甲基-N′-硝基-N-亞硝基胍和2-氨基嘌呤處理等。拒霉素鏈霉菌7622具有下列形態(tài)學、培養(yǎng)、生物學和生理學特征。(1)形態(tài)特征應用Shirling和Gottlieb1)所述的方法進行這項分類研究。用光學顯微鏡和電子顯微鏡對在燕麥粉瓊脂、酵母膏-麥芽汁瓊脂和無機鹽-淀粉瓊脂上于30℃下培養(yǎng)14天的培養(yǎng)物進行形態(tài)觀察。營養(yǎng)菌絲體發(fā)育良好，沒有斷裂現(xiàn)象。氣生菌絲體總狀分枝而形成螺旋狀孢子鏈和易曲豎直孢子鏈，每鏈有30多個孢子。孢子表面光滑且為卵形，大小為0.7-0.9×0.8-1.1μm。未觀察到硬顆粒、孢子囊和游動孢子。(2)培養(yǎng)特征在Shirling和Gottlieb(前面已提到)及Waksman2)所述的10種培養(yǎng)基上觀察培養(yǎng)特征。培養(yǎng)過程在30℃下進行21天。本研究中所用的顏色名稱取自Methuen顏色手冊(HandbookofColour3))。結果示于表1。表17622號菌株的培養(yǎng)特征培養(yǎng)基培養(yǎng)特征酵母膏-麥芽汁瓊脂G良好A中等，藍灰色(22E2)R褐色(6F4)S無燕麥粉瓊脂G良好A中等，藍灰色(22D2)R褐色(6F6)S無無機鹽-淀粉瓊脂G良好A豐富，褐灰色(7E2)R紫褐色(11F6)S無甘油-天冬酰胺瓊脂G良好A豐富，褐灰色(6E2)R灰橙色(5B5)S無蛋白胨-酵母膏-鐵瓊脂G中等A無R褐色(6F6)S深褐色酪氨酸瓊脂G良好A差，青綠灰色(24E2)R深褐色(7F8)S無葡萄糖-天冬酰胺瓊脂G中等A無R黃白色(4A2)S無營養(yǎng)瓊脂G差A無R黃白色(4A2)S無本奈特瓊脂G良好A差，藍灰色(22E3)R褐橙色(5C5)S無蔗糖-硝酸鹽瓊脂G良好A無R灰洋紅色(13D4)S無縮寫G＝生長;A＝氣生菌絲體;R＝反面顏色;S＝可溶性色素。氣生菌絲體為藍灰色至褐灰色。培養(yǎng)物的反面在酵母膏-麥芽汁瓊脂和燕麥粉瓊脂上為褐色，在無機鹽-淀粉瓊脂上為紫褐色，在蔗糖-硝酸鹽瓊脂上為灰洋紅色。產生類黑色素，但不產生其他可溶性色素。(3)細胞壁類型用Becker等人4)和Yamaguchi5)的方法進行細胞壁分析。7622號菌株的全細胞水解液分析表明有LL-二氨基庚二酸存在。因此該菌株的細胞壁被分類為Ⅰ型。(4)生物學和生理性質生理性質和碳源的利用分別示于表2和表3。利用溫度梯度培養(yǎng)箱TN-3(AdvantecToyoCo.，Ltd制造)在酵母膏-麥芽汁瓊脂上測定生長的溫度范圍。按Pridham和Gottlieb6)的方法檢查碳源的利用。表27622號菌株的生理性質條件特征生長的溫度范圍12°-34℃最適生長溫度27℃明膠液化陽性牛奶凝固作用陰性牛奶胨化作用陽性淀粉水解陽性類黑色素產生陽性纖維素分解陰性NaCl耐量＞3%而＜4%表37622號菌株的碳利用化合物生長D-葡萄糖+蔗糖+D-木糖±D-果糖+L-鼠李糖+棉子糖-L-阿拉伯糖+肌醇+甘露醇++利用±可疑利用-不利用基于上述形態(tài)和生理特征，7622號菌株被認為是屬于鏈霉菌屬7)。這樣，便將7622號菌株與文獻8-12)中所述的鏈霉菌物種作比較。結果發(fā)現(xiàn)，該菌株與拒霉素鏈霉菌IF012814在細節(jié)上十分相象。還發(fā)現(xiàn)這兩個菌株的性質除幾點差異外幾乎完全相同。表4給出了這兩個菌株間的差異。表47622號菌株與拒霉素鏈霉素IFO12814間的差異條件特征IFO128147622號菌株在蔗糖-硝酸鹽瓊脂上生長差良好蔗糖利用不利用利用生長的溫度范圍14-37℃12-34℃NaCl耐量＞4%而＜6%＞3%而＜4%可恰當?shù)卣J為這些差異很小，不能認為7622號菌株是不同的種。因此，我們將該菌株鑒定為拒霉素鏈霉菌并將其命名為拒霉素鏈霉菌7622。1)Shirling，E.B.andD.GottliebMethodsforcharacterizationofStreptomycesspecies.InternationalJournalofSystematicBacteriology，16，313-340，19662)Waksman，S.A.TheactinomycetesVol.2Classification，identificationanddescriptionofgeneraandspeciesTheWilliamsandWilkinsCo.，Baltimore，19613)Kornerup，A.andJ.H.WanscherMethuenHandbookofColour，Methuen，London，19784)Becker，B.，M.P.Lechevalier，R.E.GordonandH.A.LechevalierRapiddifferentiationbetweenNocardiaandStreptomycesbypaperchromatographyofwhole-cellhydrolysatesAppl.Microbiol.12，421-423，19645)Yamaguchi，T.ComparisonofthecellwallcompositionofmorphologicallydistinctactinomycetesJ.Bacteriol.89，444-453，19656)Pridham，T.G.andD.GottliebTheutilizationofcarboncompoundsbysomeActinomycetalesasanaidforspeciesdeterminationJ.Bacteriol.56107-114，19487)Buchanan，R.E.andN.E.GibbonsBergey′sManualofDeterminativeBacteriology，8theditionTheWilliamsandWilkinsCo.，Baltimore，19748)Shirling，E.B.andD.GottliebCooperativedescriptionoftypecultureofStreptomyces.2.Speciesdescriptionsfromfirststudy.Intern.J.Syst.Bacteriol.1869-189，19689)Shirling，E.B.andD.GottliebCooperativedescriptionoftypecultureofStreptomyces.3.Additionalspeciesdescriptionsfromfirstandsecondstudies.Intern.J.Syst.Bacteriol.18279-392，196810)Shirling，E.B.andD.GottliebCooperativedescriptionoftypecultureofStreptomyces.4.Speciesdescriptionsfromthesecond，thirdandforthstudies.Intern.J.Syst.Bacteriol.19391-512，196911)Skelman，V.B.D.;V.McGowan&P.H.A.SneathApprovedlistofbacterialnames.Intern.J.Syst.Bacteriol.30225-420，198012)Moore，W.E.C.，E.P.Cato&L.V.H.MooreIndexofBacterialandYeastNomenclaturalChangesPublishedintheI.J.S.B.Sincethe1980ApprovedListsofBacterialNames.Intern.J.Syst.Bacteriol.35382-407，1985WS7622A、B、C和D物質如果在有氧條件(如振蕩培養(yǎng)、深層培養(yǎng)等)下，在含有可同化的碳源和氮源的營養(yǎng)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)屬于鏈霉菌屬的產生WS7622A、B、C和D物質的菌株，即產生WS7622A、B、C和D物質。培養(yǎng)基可以是合成的、半合成的或天然的。優(yōu)選的碳源可以是葡萄糖、甘露糖、甘油、糖蜜、淀粉、淀粉水解物等;優(yōu)選的氮源可以是肉膏、酪蛋白水解物、胨、谷蛋白粉、玉米粉、棉子粉、大豆粉、玉米浸液、干酵母、磷酸銨、硫酸銨、尿素等。還可以摻入無機鹽如金屬的磷酸鹽、鹽酸鹽和其他鹽，例如磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、碳酸鈣、硫酸亞鐵、硫酸鎂、硫酸銅、硫酸鋅、氯化錳、氯化鎂等。如果在發(fā)酵過程中遇到大量發(fā)泡，則可加入適當量的消泡劑，例如植物油(如豆油、亞麻子油等)、高級醇類(如十八烷醇)。發(fā)酵過程最好在30℃左右進行50至200小時。最適的一組發(fā)酵條件根據(jù)所用微生物菌株的特征從上述發(fā)酵條件中選擇。由于在培養(yǎng)液中產生的大部分WS7622A、B、C和D物質存在于細胞內，所以首先將培養(yǎng)液過濾。在所得的菌絲體餅中加入適當?shù)娜軇┤绫?，然后利用通常在抗生素生產中常用的方法從所得混合物中分離純化出所要的化合物。例如，可以使用這樣一些方法如減壓濃縮、冰凍干燥、溶劑萃取、pH調節(jié)、用陰離子交換樹脂、陽離子交換樹脂、非離子型吸附樹脂等處理、用吸附劑如活性碳、硅酸、硅膠或氧化鋁等處理、結晶、重結晶，它們可被單獨使用或視需要結合起來使用?？梢詮呐囵B(yǎng)液中分離出WS7622的各成分即A、B、C和D，例如采用下列高效液相色譜數(shù)據(jù)柱YamamuraChemicalInstitute，Kyoto，A-302(ODS6ψ×150mm)流動相CH3OH-CH2CN-0.3%磷酸水溶液(10∶1∶10)檢測210nm流速1ml/分鐘保留時間(分)WS7622A6.93WS7622B10.08WS7622C5.30WS7622D4.38在培養(yǎng)液中產生的WS7622A、B、C和D物質可以以其游離形式分離出來，如果需要，也可以以可藥用鹽的形式分離出來。如果以可藥用鹽的形式分離這些物質，則用堿或酸處理從菌絲體萃取液中得到的所需化合物，從而可得到WS7622A、B、C和D各自的相應鹽?？捎玫膲A有無機堿如堿金屬化合物(如氫氧化鈉、氫氧化鉀等)、堿土金屬化合物(如氫氧化鈣、氫氧化鎂等);無機堿如氨等;有機堿如三乙胺、二環(huán)己胺等。可用的酸有無機酸如鹽酸、硫酸、磷酸等;或有機酸如甲酸、乙酸、對甲苯磺酸、檸檬酸、草酸等。所得到的WS7622A、B、C和D物質各自的鹽都可以以常規(guī)方式重新轉化成游離的WS7622A、B、C和D物質。(1)WS7622A物質WS7622A物質是一種新物質，具有下列物化性質。WS7622A物質的物化性質外觀無色棱柱體物質性質酸性顏色反應陽性硫酸鈰、碘蒸氣陰性茚三酮、莫里斯氏反應溶解性可溶甲醇、乙醇、正丁醇微溶氯仿、丙酮、乙酸乙酯不溶水、正己烷薄層色譜(TLC)氯仿-甲醇(5∶1，v/v)Rf0.51丙酮-甲醇(10∶1)0.62(KieselGel60F254硅膠板，Merck)熔點250-252℃(分解)旋光率[α]23D+36°(c＝1.0，MeOH)紫外光譜λMeOHmax287nm(ε＝3600)λMeOH-HClmax287nmλMeOH-NaOHmax298nm分子式C47H63N9O13元素分析計算值(C47H63N9O13·2H2O);C56.56，H6.77，N12.63%實測值;C56.65，H6.62，N12.27%分子量FAB-MSm/z984(M+Na)+紅外吸收光譜(附圖1)νKBrmax3400，3300，3060，2980，2940，1735，1710，1690，1670，1660，1640，1540，1520，1470，1380，1330，1300，1260，1220，1200，1160，1130，1090，1000，980，940，920cm-11H核磁共振譜(附圖2)(400MHz，CD3OD)δ7.22-7.09(3H，m)6.88-6.77(3H，m)6.74(1H，s)6.46(1H，s)5.46(1H，m)5.18(1H，s)4.85(1H，s)4.77(1H，m)4.65(1H，m)4.50(1H，m)3.96(1H，m)3.91(1H，d，J＝9Hz)3.60-3.47(2H，m)3.03(1H，m)2.90(3H，s)2.86(1H，m)2.59-2.49(2H，m)2.39(1H，m)2.29-2.16(2H，m)2.00(1H，m)1.84(1H，m)1.74(3H，d，J＝6Hz)1.72-1.53(4H，m)1.44(3H，d，J＝6Hz)1.12(1H，m)1.10(6H，d，J＝6Hz)0.99(3H，d，J＝6Hz)0.94(3H，d，J＝6Hz).13C核磁共振譜(附圖3)(100MHz，CD3OD)δ179.7(s)176.3(s)174.7(s)173.3(s)172.4(s)171.4(s)170.3(s)165.8(s)160.2(s)145.7(s)145.6(s)137.5(s)134.0(d)131.4(s)130.6(d)x2129.8(s)129.1(d)x2129.1(s)127.6(d)119.1(d)118.0(d)76.0(d)73.4(d)63.1(d)61.4(d)57.1(d)53.6(d)52.7(d)50.5(d)39.9(t)36.1(t)35.8(d)31.8(q)31.0(t)30.8(d)29.9(t)29.7(t)25.2(t)22.3(t)20.2(q)20.0(q)x219.7(q)19.5(q)13.3(q)(2)WS7622B物質WS7622B物質是一種新物質，具有下列物化性質。WS7622B物質的物化性質外觀無色針狀物物質性質酸性顏色反應陽性硫酸鈰、碘蒸氣、氯化鐵陰性茚三酮、莫里斯氏反應、德臘根道夫反應溶解性可溶甲醇、乙醇、正丁醇微溶氯仿、丙酮不溶水、正己烷薄層色譜(TLC)氯仿-甲醇(5∶1，v/v)Rf0.55(KieselGel60F254硅膠板，Merck)熔點248-250℃(分解)旋光率[α]23D+39°(C＝1.0，MeOH)紫外光譜λMeOHmax287nm(ε＝3800)λMeOH-HClmax287nmλMeOH-NaOHmax299nm分子式C48H65N9O13元素分析計算值(C48H65N9O13·3H2O);C55.96，H6.95，N12.24%實測值;C55.84，H7.05，N12.12%分子量FAB-MSm/z998(M+Na)+紅外吸收光譜(附圖4)νKBrmax3400，3300，2960，1735，1680，1660，1640，1540，1520，1460，1400，1380，1330，1290，1250，1200，1180，1150，1130，1080，1050，1000，980，940，920cm-11H核磁共振譜(附圖5)(400MHz，DMSO-d6)δ9.48(1H，寬s)9.03(1H，寬s)8.76(1H，寬s)8.30(1H，寬d，J＝6Hz)7.77(1H，d，J＝7Hz)7.21(1H，d，J＝8Hz)7.20-7.11(3H，m)6.97(1H，寬d，J＝7Hz)6.80(2H，d，J＝8Hz)6.72(1H，寬s)6.67(1H，s)6.63(1H，q，J＝7Hz)6.37(1H，s)5.48(1H，m)5.40(1H，m)5.09(1H，m)4.77(1H，m)4.64(1H，m)4.38(1H，m)4.31(1H，m)3.87-3.80(2H，m)3.40-3.30(2H，m)2.95(1H，m)2.79(3H，s)2.65(1H，m)2.40-2.20(4H，m)2.00(1H，m)1.87(1H，m)1.73(1H，m)1.65(3H，d，J＝7Hz)1.65-1.40(5H，m)1.32(3H，d，J＝6Hz)1.27(1H，m)0.97(3H，d，J＝6Hz)0.97(1H，m)0.91(3H，d，J＝6Hz)0.88(3H，d，J＝6Hz)0.81(3H，t，J＝7Hz)13C核磁共振譜(附圖6)(100MHz，DMSO-d6)δ175.6(s)174.8(s)172.0(s)170.9(s)170.6(s)170.3(s)168.7(s)162.5(s)157.4(s)144.2(s)144.2(s)136.5(s)131.1(d)130.7(s)129.6(d)x2128.4(s)127.9(d)x2127.8(s)126.4(d)118.9(d)116.8(d)74.2(d)72.1(d)61.0(d)59.8(d)55.2(d)51.6(d)50.8(d)48.6(d)40.9(d)38.2(t)35.0(t)30.8(q)29.8(t)28.8(d)28.4(t)28.1(t)27.1(t)23.3(t)21.2(t)19.6(q)19.1(q)19.0(q)17.7(q)12.9(q)11.9(q)(3)WS7622C物質WS7622C物質是一種新物質，具有下列物化性質。WS7622C物質的物化性質外觀無色針狀物物質性質酸性顏色反應陽性硫酸鈰、碘蒸氣、氯化鐵陰性茚三酮、莫里斯氏反應、德臘根道夫反應溶解性可溶甲醇、乙醇微溶氯仿、丙酮、乙酸乙酯不溶水、正己烷薄層色譜(TLC)氯仿-甲醇(4∶1，v/v)Rf0.56(KieselGel60F254硅膠板，Merck)熔點250-252℃(分解)旋光率[α]23D+36°(C＝0.5，MeOH)紫外光譜λMeOHmax287nm(ε＝3500)λMeOH-HClmax287nmλMeOH-NaOHmax298nm分子式C46H61N9O13元素分析計算值(C46H61N9O13·6H2O);C52.31，H6.97，N11.94%實測值;C51.95，H6.66，N11.77%分子量FAB-MSm/z970(M+Na)+紅外吸收光譜(附圖7)νKBrmax3400，3300，2980，1740，1700，1660，1640，1540，1470，1450，1410，1335，1260，1230，1200，1160，1140，1070，1010，980，940，920，880cm-11H核磁共振譜(附圖8)(400MHz，CD3OD)δ7.21-7.10(3H，m)6.86-6.77(3H，m)6.75(1H，s)6.47(1H，s)5.46(1H，m)5.18(1H，m)4.85(1H，s)4.74(1H，m)4.65(1H，m)4.51(1H，m)3.94(1H，m)3.90(1H，d，J＝10Hz)3.58-3.46(2H，m)3.02(1H，m)2.90(3H，s)2.86(1H，m)2.55(1H，m)2.38(1H，dd，J＝14和11Hz)2.28(2H，q，J＝7Hz)2.30-2.16(2H，m)1.99(1H，m)1.84(1H，m)1.75(3H，d，J＝7Hz)1.78-1.54(4H，m)1.44(3H，d，J＝6.5Hz)1.13(3H，t，J＝7Hz)1.12(1H，m)1.01(3H，d，J＝6.5Hz)0.97(3H，d，J＝6.5Hz)13C核磁共振譜(附圖9)(100MHz，CD3OD)δ176.7(s)176.4(s)174.7(s)173.4(s)172.5(s)171.4(s)170.4(s)165.8(s)160.4(s)145.8(s)145.7(s)137.5(s)134.0(d)131.4(s)130.6(d)x2129.8(s)129.1(d)x2129.1(s)127.7(d)119.1(d)118.0(d)76.0(d)73.5(d)63.1(d)61.4(d)57.1(d)53.7(d)52.7(d)50.5(d)39.9(t)36.1(t)31.8(q)31.0(t)30.8(d)29.9(t)29.7(t)29.7(t)25.3(t)22.3(t)20.2(q)19.4(q)19.4(q)13.3(q)10.3(q)(4)WS7622D物質WS7622D物質是一種新物質，具有下列物化性質。WS7622D物質的物化性質外觀無色針狀物物質性質酸性顏色反應陽性硫酸鈰、碘蒸氣、氯化鐵陰性茚三酮、莫里斯氏反應、德臘根道夫反應溶解性可溶甲醇、乙醇微溶水、氯仿不溶正己烷薄層色譜(TLC)氯仿-甲醇(4∶1，v/v)Rf0.45(Kieselgel60F254硅膠板，Merck)熔點250-252℃(分解)旋光率[α]24D+35.8°(C＝0.5，MeOH)紫外光譜λMeOHmax287nm(ε＝3640)λMeOH-HClmax287nmλMeOH-NaOHmax298nm分子式C45H59N9O13元素分析計算值(C45H59N9O13·6H2O);C51.86，H6.87，N12.10%實測值;C51.90，H6.26，N12.08%分子量FAB-MSm/z956(M+Na)+紅外吸收光譜(附圖10)νKBrmax3360，2950，1730，1700，1680，1660，1640，1530，1460，1380，1330，1290，1250，1200，1170，1160，1140，1080，980，940，920，880cm-11H核磁共振譜(附圖11)(400MHz，CD3OD)δ7.20-7.10(3H，m)6.85-6.77(3H，m)6.73(1H，s)6.46(1H，s)5.46(1H，m)5.18(1H，m)4.84(1H，s)4.73(1H，m)4.64(1H，m)4.50(1H，m)3.99-3.87(2H，m)3.58-3.46(2H，m)3.01(1H，m)2.90(3H，s)2.87(1H，m)2.53(1H，m)2.38(1H，dd，J＝14和11Hz)2.30-2.16(2H，m)2.00(1H，m)1.99(3H，s)1.84(1H，m)1.75(3H，d，J＝7Hz)1.76-1.55(4H，m)1.43(3H，d，J＝6.5Hz)1.15(1H，m)1.00(3H，d，J＝6.5Hz)0.95(3H，d，J＝6.5Hz)13C核磁共振譜(附圖12)(100MHz，CD3OD)δ176.4(s)174.6(s)173.4(s)173.0(s)172.4(s)171.4(s)170.4(s)165.8(s)160.3(s)145.9(s)145.9(s)137.5(s)134.0(d)131.4(s)130.6(d)x2129.8(s)129.1(d)x2129.1(s)127.6(d)119.0(d)118.0(d)76.0(d)73.5(d)63.1(d)61.3(d)57.1(d)53.9(d)52.7(d)50.5(d)39.9(t)36.1(t)31.8(q)31.0(t)30.7(d)29.9(t)29.6(t)25.3(t)22.4(q)22.3(t)20.2(q)19.5(q)19.4(q)13.3(q)WS7622A物質的衍生物本發(fā)明的WS7622A物質的衍生物可由下式(1)表示其中R1和R2各為低級烷基或低級鏈烷?；?。低級烷基指含有1至6個碳原子的烷基，低級烷基的優(yōu)選實例為甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基等。低級鏈烷?；负?至6個碳原子的鏈烷?；?，低級鏈烷?；膬?yōu)選實例為甲?；?、乙酰基、丙?；?、丁酰基、異丁?；?、戊酰基、異戊?；?、新戊?；?、己酰基等。WS7622A物質(1)的衍生物可用下列方法制備(1)方法1(WS7622A物質的烷基化)二烷基化的WS7622A物質(Ⅰa)或其鹽可以通過使WS7622A物質(Ⅱ)或其鹽與烷化劑反應來制備?；衔?Ⅰa)和(Ⅱ)的鹽的優(yōu)選實例可包括作為WS7622A、B、C和D物質的可藥用鹽列舉的那些化合物及其衍生物。烷化劑的優(yōu)選實例可包括重氮烷(如重氮甲烷、重氮乙烷等)、烷基鹵(如甲基碘、乙基碘等)、硫酸二烷基酯(如硫酸二甲酯等)等。該反應最好在室溫下在對該反應為惰性的溶劑如醇類(如甲醇、乙醇、丙醇等)、氯仿或其混合物中進行。在一些情況下，該反應最好在常規(guī)的堿存在下進行。(2)方法2(WS7622A物質的?；?二?；腤S7622A物質(Ⅰb)或其鹽可以通過使WS7622A物質(Ⅱ)或其鹽與下式的化合物或其活性衍生物反應來制備R-OH其中R為低級鏈烷?；；衔?Ⅰb)和(Ⅱ)的鹽的優(yōu)選實例可包括作為WS7622A、B、C和D物質的可藥用鹽所列舉的那些化合物及其衍生物。所述活性衍生物可包括酰鹵、酰基疊氮、酸酐、活性酰胺、活性酯等。當使用游離羧酸(即式R-OH化合物)時，該反應最好在常規(guī)縮合劑存在下進行。該反應最好在冰冷或室溫下在常規(guī)溶劑如醇(如甲醇、乙醇、丙醇等)中進行，如果該反應在堿如吡啶存在下進行，則多數(shù)情況下都能得到良好的結果。這樣一種液態(tài)的堿還可以作為溶劑。WS7622A、B、C和D各物質的可藥用鹽及其衍生物可包括與無機堿或有機堿形成的鹽，如堿金屬鹽(如鈉鹽、鉀鹽等)、堿土金屬鹽(如鈣鹽等)、銨鹽、乙醇胺鹽、三乙胺鹽、二環(huán)己胺鹽等;以及與有機酸或無機酸形成的酸加成鹽，如甲磺酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽等。WS7622A、B、C和D物質，其衍生物和其可藥用鹽具有抑制人類白細胞彈性蛋白酶的活性，因而可用作人類白細胞彈性蛋白酶抑制劑治療變性疾病，例如肺氣腫、動脈粥樣硬化、類風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、牛皮癬、胰腺炎、成人呼吸窘迫綜合癥等。為了說明WS7622A、B、C和D物質，其衍生物及其可藥用鹽的有用性，以下給出它們的藥理試驗數(shù)據(jù)。蛋白酶抑制試驗(1)粗制人類白細胞彈性蛋白酶的制備從健康志愿者體內取50毫升血。用Mono-Poly分離介質(FLOWLaboratories，Australia)從血中分離白細胞并離心收集。在沉淀物中加入蒸餾水使留下的紅細胞溶解，并以3000rpm離心30分鐘。向所得的沉淀物中加入10ml2MNaClO4提取彈性蛋白酶。于0℃下提取120分鐘后，通過離心得到含有彈性蛋白酶活性的上清液。于此上清液中加入等體積的氯仿并劇烈振蕩，然后分離出含有彈性蛋白酶活性的清澈上清液。于上清液中加入10mlHEPES緩沖液，供進行酶測定。(2)方法整個試驗中所用的緩沖液為含0.5MNaCl的0.1MHEPES(N-(2-羥乙基)哌嗪-N′-2-乙磺酸)(pH7.5)。在96孔微量滴定板的各小孔中混合25微升2mM甲氧基琥珀酰-(Ala)2-Pro-Val-對硝基苯胺(用緩沖液稀釋100mM二甲亞砜溶液)和50微升樣品(有機溶劑中的樣品10微升用緩沖液稀釋5倍)。用微板測量儀(microplatereader，CoronaElectricCo.，Ibaraki，Japan)測量混合物在415nm波長下的吸光度。測量后，加入25微升6μg/ml人痰彈性蛋白酶(HSE)或25微升人白細胞彈性蛋白酶制劑，于室溫下放置30分鐘。然后測量415nm處的吸光度。藥物抑制的百分率由下式確定100×(1-存在抑制劑時的“r”/不存在抑制劑時的“r”)，其中“r”為保溫30分鐘后的吸光度減去加入酶前的吸光度。類似地測定抑制劑對其他蛋白酶的作用，測定豬胰腺彈性蛋白酶(Ⅳ型，終濃度為5μg/ml)時用N-琥珀酰-(Ala)3-對硝基苯胺;測定牛胰胰蛋白酶(Ⅰ型，終濃度為16μg/ml)時用N-α-苯甲酰-Arg-對硝基苯胺;測定牛胰腺胰凝乳蛋白酶(Ⅱ型，終濃度為1.5μg/ml和人痰組織蛋白酶G(終濃度為10單位/ml)時用甲氧基琥珀酰-(Ala)2-Pro-Met-對硝基苯胺。HSE和組織蛋白酶G得自ElastinProductsCompanyInc.，MO，U.S.A.。其他底物和蛋白酶都購自Sigma化學品公司。(3)結果1)WS7622A、B、C和D物質對幾種絲氨酸蛋白酶活性的抑制作用</tables>2)WS7622A物質的衍生物對人白細胞彈性蛋白酶的抑制作用</tables>每個數(shù)值都表示為50%抑制濃度。本發(fā)明的藥物組合物可以常規(guī)藥物劑型如粉劑、細粒劑、粒劑、片劑、糖錠劑、微囊劑、膠囊劑、栓劑、溶液、懸浮液、乳劑、糖漿劑等使用。如果需要，可在所述組合物中配入稀釋劑或崩解劑(如蔗糖、乳糖、淀粉、結晶纖維素、低取代的羥丙基纖維素、合成硅酸鋁等)、粘合劑(如纖維素、甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙甲基纖維素、聚丙基吡咯烷酮、聚乙烯基吡咯烷酮、明膠、阿拉伯樹膠、聚乙二醇等)、著色劑、增甜劑、潤滑劑(如硬脂酸鎂等)等。所述本發(fā)明組合物的劑量取決于患者的年令、體重、身體狀況等，口服日劑量通常為100mg至10g目的化合物或其可藥用鹽，最好為1g至5g，每日1至3次。典型的單位劑量可為50mg、100mg、200mg、500mg、1g等，當然這些都是舉例，并不是限制性的。為說明本發(fā)明，給出下列實例。實例1(WS7622A物質的生產)在12個500ml錐形瓶中各倒入200ml種子培養(yǎng)液，并于120℃下滅菌30分鐘，培養(yǎng)液中含有1%可溶性淀粉、1%蔗糖、1%葡萄糖、1%Pharmamedia(商品名，即棉子粉)、0.5%多胨、0.5%大豆粉和0.1%CaCO3。從成熟的斜面培養(yǎng)上取一環(huán)拒霉素鏈霉菌7622接種在每個種子培養(yǎng)基上。將錐形瓶置于旋轉搖床上于30℃振蕩3天。將所得的種子培養(yǎng)物接種到裝在200升不銹鋼發(fā)酵罐中的160升無菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基的組成為4%Pine-Dex(商品名，即淀粉酸水解液)、1%谷蛋白粉、0.5%麥胚、0.5%馬鈴薯蛋白、0.2%CaCO3。發(fā)酵反應在25℃下進行5天，通氣速度為160升/分，攪拌速度為200轉/分。用體外彈性蛋白酶抑制試驗對發(fā)酵液中的WS7622A物質進行定量。供試驗的樣品如下制備劇烈攪拌下將等體積的丙酮加到發(fā)酵液中。將混合物于室溫下放置1小時，然后過濾。將濾液減壓濃縮至適當?shù)捏w積。彈性蛋白酶抑制試驗如前所述。借助于硅藻土過濾培養(yǎng)液(160升)。攪拌下向菌絲體餅中加入50升丙酮。將混合物于室溫下放置過夜，然后過濾。減壓濃縮濾液除去丙酮。將前面從培養(yǎng)液中得到的濾液(140升)與菌絲體提取液合并，然后通過聚合吸附劑DiaionHP-20柱(商品名，三菱化學工業(yè)株式會社制造，17升)。用50升水和50升50%甲醇水溶液洗柱，用40升甲醇洗脫出吸附物。減壓濃縮洗脫液得油狀殘余物。將殘余物加到硅膠(Kieselgel60，70-230目，Merck，1.3升)上進行柱層析。用2升正己烷-乙酸乙酯(1∶1，v/v)和4升乙酸乙酯洗柱，用丙酮(3升)和丙酮-甲醇(10∶1，6升)從柱中洗脫出活性物質。合并活性級分(6升)并濃縮至干，將其加到硅膠柱上進行柱層析，用氯仿-甲醇混合溶劑進行分步洗脫?；钚晕镔|被洗脫在氯仿-甲醇(10∶1，v/v)溶液中。減壓濃縮并干燥這些級分得到3g黃色粉末。通過高效液相色譜(HPLC)分離出WS7622A物質。使用裝填有S-15反相硅膠的YMC-D-ODS-15B30×250mm不銹鋼柱(YamamuraChemicalLaboratories，Japan)。將50毫克黃色粉末溶解于50微升甲醇中，并進行高效液相層析，用60%甲醇水溶液作流動相，流速為20毫升/分。WS7622A物質的保留時間為17.6分。層析操作進行60次，合并含WS7622A物質的級分并濃縮至干。將殘留物溶于少量甲醇中并放置過夜，得600mg無色棱狀的WS7622A物質。實例2(二甲基化的WS7622A物質(R1、R2為甲基)的生產)向WS7622A物質(1克)在氯仿(20毫升)和甲醇(20毫升)混合物中的溶液中加入三甲硅基重氮甲烷(4毫升，10%(重量)己烷溶液，購自PetrarchSystems公司)，并將該溶液于室溫下放置過夜。將溶液蒸發(fā)至干得油狀物，將該油狀物加到硅膠上進行柱層析純化，用氯仿和甲醇(95∶5)混合液洗脫。收集產品級分并蒸發(fā)至干。所得白色殘留物加乙醚研制，得0.62克二甲基化的WS7622A物質，為白色粉末。外觀白色粉末分子式C49H67N9O13FAB-MSm/z990(M+H)+薄層色譜(TLC)硅膠板(MerckArt5715)氯仿-甲醇Rf(5∶1，V/V)0.72Rf(9∶1，V/V)0.40旋光率[α]23D+37°(C＝1.6，CHCl3-MeOH(1∶1))紅外吸收光譜ν液體石蠟max3400，3250，1730，1660，1640，1540，1520，1330，1260，1210，1180，1160，1100，1080，1000，980，920cm-11H核磁共振譜(400MHz，CD3OD)δ7.20-7.11(3H，m)6.93(1H，s)6.83(1H，q，J＝7Hz)6.77(2H，d，J＝8Hz)6.59(1H，s)5.48(1H，m)5.15(1H，m)4.85(1H，s)4.76(1H，m)4.67(1H，m)4.42(1H，m)3.99-3.89(2H，m)3.82(3H，s)3.81(3H，s)3.66(1H，m)3.55(1H，m)3.02(1H，m)2.95(3H，s)2.90(1H，m)2.60-1.94(6H，m)1.82(1H，m)1.77(3H，d，J＝7Hz)1.68-1.58(4H，m)1.46(3H，d，J＝7Hz)1.13(3H，d，J＝6Hz)1.12(3H，d，J＝6Hz)1.01(3H，d，J＝6Hz)0.96(3H，d，J＝6Hz)1.00(1H，m)實例3(二乙?；腤S7622A物質(R1、R2為乙?；?的生產)向WS7622A物質(1克)在吡啶(5毫升)中的溶液中加入乙酸酐(0.24毫升)，將該混合物于室溫下放置過夜。將混合物蒸發(fā)至干，得一油狀物，將其加到硅膠柱上進行柱層析純化，用氯仿和甲醇(95∶5)混合液洗脫。用熱甲醇-異丙醚結晶得0.73克二乙?；腤S7622A物質，為白色粉末。外觀無色棱狀體分子式C51H67N9O15FAB-MSm/z1046(M+H)+薄層色譜硅膠板(MerckArt5715)氯仿-甲醇Rf(5∶1，V/V)0.73Rf(9∶1，V/V)0.40旋光率[α]23D+29°(C＝1.0，CHCl3-MeOH(1∶1))紅外吸收光譜ν液體石蠟max3400，1770，1730，1660，1640，1540，1420，1340，1260，1210，1080，1010，980，920cm-11H核磁共振譜(400MHz，DMSO-d6)δ9.48(1H，寬峰)8.37(1H，d，J＝8Hz)7.76(1H，d，J＝7Hz)7.23-7.10(4H，m)7.18(1H，s)7.03(1H，d，J＝9Hz)6.93(1H，s)6.76(2H，d，J＝8Hz)6.74(1H，brs)6.65(1H，q，J＝7Hz)5.74(1H，m)5.42(1H，m)5.08(1H，m)4.77(1H，d，J＝10Hz)4.64(1H，m)4.57(1H，m)4.42(1H，m)3.92-3.78(2H，m)3.49(1H，m)3.34(1H，m)2.90(1H，dd，J＝13和12Hz)2.80(3H，s)2.70(1H，m)2.60(1H，dd，J＝13和11Hz)2.54(1H，七重峰，J＝6Hz)2.42-2.27(2H，m)2.27(3H，s)2.25(3H，s)2.17(1H，m)1.88(1H，m)1.70(1H，m)1.66(3H，d，J＝7Hz)1.60-1.46(4H，m)1.34(3H，d，J＝6Hz)0.99(6H，d，J＝6Hz)0.91(3H，d，J＝6Hz)0.88(3H，d，J＝6Hz)0.90(1H，m)實例4(WS7622B物質的生產)在12個500ml錐形瓶中各倒入200ml種子培養(yǎng)液，并于120℃下滅菌30分鐘，培養(yǎng)液中含有1%可溶性淀粉、1%蔗糖、1%葡萄糖、1%Pharmamedia(商品名，即棉子粉)、0.5%多胨、0.5%大豆粉和0.1%CaCO3。從成熟的斜面培養(yǎng)上取一環(huán)拒霉素鏈霉菌7622接種在每個種子培養(yǎng)基上。將錐形瓶置于旋轉搖床上于30℃振蕩3天。將所得的種子培養(yǎng)物接種到裝在200升不銹鋼發(fā)酵罐中的160升無菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基的組成為4%Pine-Dex(商品名，即淀粉酸水解液)、1%谷蛋白粉、0.5%麥胚、0.5%馬鈴薯蛋白、0.2%CaCO3。發(fā)酵反應在25℃下進行5天，通氣速度為160升/分，攪拌速度為200轉/分。用體外彈性蛋白酶抑制試驗對發(fā)酵液中的WS7622B物質進行定量。供試驗的樣品如下制備劇烈攪拌下將等體積的丙酮加到發(fā)酵液中。將混合物于室溫下放置1小時，然后過濾。將濾液減壓濃縮至適當?shù)捏w積。彈性蛋白酶抑制試驗如前所述。借助于硅藻土過濾培養(yǎng)液(160升)。攪拌下向菌絲體餅中加入50升丙酮，將混合物于室溫下放置過夜，然后過濾。減壓濃縮濾液除去丙酮。將前面從培養(yǎng)液中得到的濾液(140升)與菌絲體提取液合并，然后通過聚合吸附劑DiaionHP-20柱(商品名，三菱化學工業(yè)株式會社制造，17升)。用50升水和50升50%甲醇水溶液洗柱，用40升甲醇洗脫出吸附物。減壓濃縮洗脫液得油狀殘余物。將殘余物加到硅膠(Kieselgel60，70-230目，Merck，1.3升)上進行柱層析。用2升正己烷-乙酸乙酯(1∶1，v/v)和4升乙酸乙酯洗柱，用丙酮(3升)和丙酮-甲醇(10∶1，6升)從柱中洗脫出活性物質。合并活性級分(6升)并濃縮至干，將其加到硅膠柱上進行柱層析，用氯仿-甲醇混合溶劑進行分步洗脫?；钚晕镔|用氯仿-甲醇(10∶1)洗脫出來。減壓濃縮并干燥這些部分得到3g黃色粉末。通過高效液相色譜(HPLC)分離出WS7622B物質。使用裝填有S-15反相硅膠的YMC-D-ODS-15B30×250mm不銹鋼柱(YamamuraChemicalLaboratories，Japan)。將50毫克黃色粉末溶解于50微升甲醇中，進行高效液相層析，用60%甲醇水溶液作流動相，流速為20毫升/分、WS7622B物質的保留時間為23.0分。層析操作進行60次，合并含WS7622B物質的級分并濃縮，然后用甲醇結晶得180毫克無色針狀的WS7622B物質。實例5(WS7622C和D物質的生產)以與實例1相同的方式進行發(fā)酵。攪拌下向所得到的培養(yǎng)液(70升)中加入70升甲醇。將混合物于室溫下放置1小時，然后過濾。在濾液中加入140升水，制得280升25%甲醇水溶液。使該溶液通過聚合吸附劑DiaionHP-20(商品名，三菱化學工業(yè)株式會社制造，5升)柱。用10升50%甲醇水溶液洗柱并用10升甲醇洗脫。減壓濃縮洗脫液得油狀殘余物。將殘余物加到硅膠(Kieselgel60，70-230目，Merck，2.2升)上進行柱層析。用10升丙酮洗柱，用丙酮-甲醇(5∶1)從柱中洗脫出活性物質。洗脫液各級分的收集如下級分1∶1升;級分2∶5.4升;級分3∶3.8升;級分4∶3.2升。WS7622C和D物質分別被洗脫在級分3和級分4中。WS7622C物質的分離減壓濃縮并干燥級分3得1.2克黃色粉末。取1克含有WS7622C物質的粉末重新溶解于6毫升氯仿-甲醇(10∶1)中，并加到預填有氯仿-甲醇(10∶1)的100毫升硅膠柱上。用300毫升氯仿-甲醇(10∶1)洗柱，用氯仿-甲醇(5∶1)洗脫WS7622C物質。棄去頭180毫升洗脫液，收集隨后80毫升，減壓濃縮并干燥得372毫克粉末。將粉末重新溶解于6毫升乙醇中，于4℃下放置1小時，得170毫克無色針狀的WS7622C物質。WS7622D物質的分離將級分4濃縮至干，得3.3克黃色粉末。取1克含WS7622D物質的粉末溶于6毫升氯仿-甲醇(20∶1)中，并加到預填有氯仿的100毫升硅膠柱上。用300毫升氯仿-甲醇(20∶1)和300毫升氯仿-甲醇(10∶1)洗柱，用氯仿-甲醇(5∶1)洗脫WS7622D物質。棄去頭200毫升洗脫液，收集隨后90毫升并濃縮至干，得127毫克粉末。將粉末溶于少量乙醇中并于4℃下放置過夜，得90毫克無色針狀的WS7622D物質。權利要求1.WS7622的各成分及其可藥用鹽，選自WS7622A物質、WS7622B物質、WS7622C物質和WS7622D物質，其物化性質如下WS7622A物質外觀無色棱狀體物質性質酸性顏色反應陽性硫酸鈰、碘蒸氣陰性茚三酮、莫里斯氏反應溶解性可溶甲醇、乙醇、正丁醇微溶氯仿、丙酮、乙酸乙酯不溶水、正己烷薄層色譜(TLC)氯仿-甲醇(5∶1，V/V)Rf0.51丙酮-甲醇(10∶1)0.62(Kieselgel60F254硅膠板，Merck)熔點250-252℃(分解)旋光率[α]23D+36°(c=1.0，MeOH)紫外光譜λMeOHmax287nm(ε=3600)λMeOH-HClmax287nmλMeOH-NaOHmax298nm分子式C47H63N9O13元素分析計算值(C47H63N9O13·2H2O)；C56.56，H6.77，N12.63%實測值；C56.65，H6.62，N12.27%分子量FAB-MSm/z984(M+Na)+紅外吸收光譜νKBrmax3400，3300，3060，2980，2940，1735，1710，1690，1670，1660，1640，1540，1520，1470，1380，1330，1300，1260，1220，1200，1160，1130，1090，1000，980，940，920cm-11H核磁共振譜(400MHz，CD3OD)δ7.22-7.09(3H，m)6.88-6.77(3H，m)6.74(1H，s)6.46(1H，s)5.46(1H，m)5.18(1H，s)4.85(1H，s)4.77(1H，m)4.65(1H，m)4.50(1H，m)3.96(1H，m)3.91(1H，d，J=9Hz)3.60-3.47(2H，m)3.03(1H，m)2.90(3H，s)2.86(1H，m)2.59-2.49(2H，m)2.39(1H，m)2.29-2.16(2H，m)2.00(1H，m)1.84(1H，m)1.74(3H，d，J=6Hz)1.72-1.53(4H，m)1.44(3H，d，J=6Hz)1.12(1H，m)1.10(6H，d，J=6Hz)0.99(3H，d，J=6Hz)0.94(3H，d，J=6Hz)。13C核磁共振譜(100MHz，CD3OD)δ179.7(s)176.3(s)174.7(s)173.3(s)172.4(s)171.4(s)170.3(s)165.8(s)160.2(s)145.7(s)145.6(s)137.5(s)134.0(d)131.4(s)130.6(d)x2129.8(s)129.1(d)x2129.1(s)127.6(d)119.1(d)118.0(d)76.0(d)73.4(d)63.1(d)61.4(d)57.1(d)53.6(d)52.7(d)50.5(d)39.9(t)36.1(t)35.8(d)31.8(q)31.0(t)30.8(d)29.9(t)29.7(t)25.2(t)22.3(t)20.2(q)20.0(q)x219.7(q)19.5(q)13.3(q)WS7622B物質外觀無色針狀物物質性質酸性顏色反性陽性硫酸鈰、磺蒸氣、氯化鐵陰性茚三酮、莫里斯氏反應、德臘根道夫反應溶解性可溶甲醇、乙醇、正丁醇微溶氯仿、丙酮不溶水、正己烷薄層色譜(TLC)氯仿-甲醇(5∶1，V/V)Rf0.55(Kieselgel60F254硅膠板，Merck)熔點248-250℃(分解)旋光率[α]23D+39°(c=1.0，MeOH)紫外光譜λMeOHmax287nm(ε=3800)λMeOH-HClmax287nmλMeOH-NaOHmax299nm分子式C48H65N9O13元素分析計算值(C48H65N9O13·3H2O)；C55.96，H6.95，N12.24%實測值；C55.84，H7.05，N12.12%分子量FAB-MSm/z998(M+Na)+紅外吸收光譜νKBrmax3400，3300，26960，1735，1680，1660，1640，1540，1520，1460，1400，1380，1330，1290，1250，1200，1180，1150，1130，1080，1050，1000，980，940，920cm-11H核磁共振譜(400MHz，DMSO-D6)δ9.48(1H，寬S)9.03(1H，寬S)8.76(1H，寬S)8.30(1H，寬d，J=6Hz)7.77(1H，d，J=7Hz)7.21(1H，d，J=8Hz)7.20-7.11(3H，m)6.97(1H，寬d，J=7Hz)6.80(2H，d，J=8Hz)6.72(1H，寬S)6.67(1H，s)6.63(1H，q，J=7Hz)6.37(1H，s)5.48(1H，m)5.40(1H，m)5.09(1H，m)4.77(1H，m)4.64(1H，m)4.38(1H，m)4.31(1H，m)3.87-3.80(2H，m)3.40-3.30(2H，m)2.95(1H，m)2.79(3H，s)2.65(1H，m)2.40-2.20(4H，m)2.00(1H，m)1.87(1H，m)1.73(1H，m)1.65(3H，d，J=7Hz)1.65-1.40(5H，m)1.32(3H，d，J=6Hz)1.27(1H，m)0.97(3H，d，J=6Hz)0.97(1H，m)0.91(3H，d，J=6Hz)0.88(3H，d，J=6Hz)0.81(3H，t，J=7Hz)13C核磁共振譜(100MHz，DMSO-d6)δ175.6(s)174.8(s)172.0(s)170.9(s)170.6(s)170.3(s)168.7(s)162.5(s)157.4(s)144.2(s)144.2(s)136.5(s)131.1(d)130.7(s)129.6(d)x2128.4(s)127.9(d)x2127.8(s)126.4(d)118.9(d)116.8(d)74.2(d)72.1(d)61.0(d)59.8(d)55.2(d)51.6(d)50.8(d)48.6(d)40.9(d)38.2(t)35.0(t)30.8(q)29.8(t)28.8(d)28.4(t)28.1(t)27.1(t)23.3(t)21.2(t)19.6(q)19.1(q)19.0(q)17.7(q)12.9(q)11.9(q)WS7622C物質外觀無色針狀物物質性質酸性顏色反應陽性硫酸鈰、碘蒸氣、氯化鐵陰性茚三酮、莫里斯氏反應、德臘根道夫反應溶解性可溶甲醇、乙醇、微溶氯仿、丙酮、乙酸乙酯不溶水、正己烷薄層色譜(TLC)氯仿-甲醇(4∶1，V/V)Rf0.56(Kieselgel60F254硅膠板，Merck)熔點250-252℃(分解)旋光率[α]23D+36°(c=0.5，MeOH)紫外光譜λMeOHmax287nm(ε=3500)λMeOH-HClmax287nmλMeOH-NaOHmax298nm分子式C46H61N9O13元素分析計算值(C46H61N9O13·6H2O)；C52.31，H6.97，N11.94%實測值；C51.95，H6.66，N11.77%分子量FAB-MSm/z970(M+Na)+紅外吸收光譜νKBrmax3400，3300，2980，1740，1700，1660，1640，1540，1470，1450，1410，1335，1260，1230，1200，1160，1140，1070，1010，980，940，920，880cm-11H核磁共振譜(400MHz，CD3OD)δ7.21-7.10(3H，m)6.86-6.77(3H，m)6.75(1H，s)6.47(1H，s)5.46(1H，m)5.18(1H，m)4.85(1H，s)4.74(1H，m)4.65(1H，m)4.51(1H，m)3.94(1H，m)3.90(1H，d，J=10Hz)3.58-3.46(2H，m)3.02(1H，m)2.90(3H，s)2.86(1H，m)2.55(1H，m)2.38(1H，dd，J=14和11Hz)2.28(2H，q，J=7Hz)2.30-2.16(2H，m)1.99(1H，m)1.84(1H，m)1.75(3H，d，J=7Hz)1.78-1.54(4H，m)1.44(3H，d，J=6.5Hz)1.13(3H，t，J=7Hz)1.12(1H，m)1.01(3H，d，J=6.5Hz)0.97(3H，d，J=6.5Hz)13C核磁共振譜(100MHz，CD3OD)δ176.7(s)176.4(s)174.7(s)173.4(s)172.5(s)171.4(s)170.4(s)165.8(s)160.4(s)145.8(s)145.7(s)137.5(s)134.0(d)131.4(s)130.6(d)x2129.8(s)129.1(d)x2129.1(s)127.7(d)119.1(d)118.0(d)76.0(d)73.5(d)63.1(d)61.4(d)57.1(d)53.7(d)52.7(d)50.5(d)39.9(t)36.1(t)31.8(q)31.0(t)30.8(d)29.9(t)29.7(t)29.7(t)25.3(t)22.3(t)20.2(q)19.4(q)19.4(q)13.3(q)10.3(q)WS7622C物質外觀無色針狀物物質性質酸性顏色反應陽性硫酸鈰、碘蒸氣、氯化鐵陰性茚三酮、莫里斯氏反應、德臘根道夫反應溶解性可溶甲醇、乙醇、微溶氯仿、不溶正己烷薄層色譜(TLC)氯仿-甲醇(4∶1，V/V)Rf0.45(Kieselgel60F254硅膠板，Merck)熔點250-252℃(分解)旋光率[α]24D+35.8°(c=0.5，MeOH)紫外光譜λMeOHmax287nm(ε=3640)λMeOH-HClmax287nmλMeOH-NaOHmax298nm分子式C45H61N9O13元素分析計算值(C45H59N9O13·6H2O)；C51.86，H6.87，N12.10%實測值；C51.90，H6.26，N12.08%分子量FAB-MSm/z956(M+Na)+紅外吸收光譜νKBrmax3360，2950，1730，1700，1680，1660，1640，1530，1460，1380，1330，1290，1250，1200，1170，1160，1140，1080，980，940，920，880cm-11H核磁共振譜(400MHz，CD3OD)δ7.20-7.10(3H，m)6.85-6.77(3H，m)6.73(1H，s)6.46(1H，s)5.46(1H，m)5.18(1H，m)4.84(1H，s)4.73(1H，m)4.64(1H，m)4.50(1H，m)3.99-3.87(2H，m)3.58-3.46(2H，m)3.01(1H，m)2.90(1H，s)2.87(1H，m)2.53(1H，m)2.38(1H，dd，J=14和11Hz)2.30-2.16(2H，m)2.00(1H，m)1.99(3H，s)1.84(1H，m)1.75(3H，d，J=7Hz)1.76-1.55(4H，m)1.43(3H，d，J=6.5Hz)1.15(1H，m)1.00(3H，d，J=6.5Hz)0.95(3H，d，J=6.5Hz)13C核磁共振譜(100MHz，CD3OD)δ176.4(s)174.6(s)173.4(s)173.0(s)172.4(s)171.4(s)170.4(s)165.8(s)160.3(s)145.9(s)145.9(s)137.5(s)134.0(d)131.4(s)130.6(d)x2129.8(s)129.1(d)x2129.1(s)127.6(d)119.0(d)118.0(d)76.0(d)73.5(d)63.1(d)61.3(d)57.1(d)53.9(d)52.7(d)50.5(d)39.9(t)36.1(t)31.8(q)31.0(t)30.7(d)29.9(t)29.6(t)25.3(t)22.4(q)22.3(t)20.2(q)19.5(q)19.4(q)13.3(q)2.具有下式的WS7622A物質的衍生物及其可藥用鹽其中R1和R2各為低級烷基或低級鏈烷?；?。3.WS7622A物質的二低級烷基衍生物及其可藥用鹽。4.WS7622A物質的二低級鏈烷?；苌锛捌淇伤幱名}。5.WS7622A物質的二甲基衍生物及其可藥用鹽，該衍生物的物化性質如下外觀白色粉末分子式C49H67N9O13FAB-MSm/z990(M+H)+薄層色譜(TLC)硅膠板(MerckArt5715)氯仿-甲醇Rf(5∶1，V/V)0.72Rf(9∶1，V/V)0.40旋光率[α]23D+37°(C＝1.6，CHCl3-MeOH(1∶1))紅外吸收光譜ν液體石蠟max3400，3250，1730，1660，1640，1540，1520，1330，1260，1210，1180，1160，1100，1080，1000，980，920cm-11H核磁共振譜(400MHz，CD3OD)δ7.20-7.11(3H，m)6.93(1H，s)6.83(1H，q，J＝7Hz)6.77(2H，d，J＝8Hz)6.59(1H，s)5.48(1H，m)5.15(1H，m)4.85(1H，s)4.76(1H，m)4.67(1H，m)4.42(1H，m)3.99-3.89(2H，m)3.82(3H，s)3.81(3H，s)3.66(1H，m)3.55(1H，m)3.02(1H，m)2.95(3H，s)2.90(1H，m)2.60-1.94(6H，m)1.82(1H，m)1.77(3H，d，J＝7Hz)1.68-1.58(4H，m)1.46(3H，d，J＝7Hz)1.13(3H，d，J＝6Hz)1.12(3H，d，J＝6Hz)1.01(3H，d，J＝6Hz)0.96(3H，d，J＝6Hz)1.00(1H，m)6.WS7622A物質的二乙?；苌锛捌淇伤幱名}，該衍生物的物化性質如下外觀白色粉末分子式C51H67N9O15FAB-MSm/z1046(M+H)+薄層色譜硅膠板(MerckArt5715)氯仿-甲醇Rf(5∶1，V/V)0.73Rf(9∶1，V/V)0.40旋光率[α]23D+29°(C＝1.0，CHCl3-MeOH(1∶1))紅外吸收光譜ν液體石蠟max3400，1770，1730，1660，1640，1540，1420，1340，1260，1210，1080，1010，980，920cm-11H核磁共振譜(400MHz，DMSO-d6)δ9.48(1H，8.37(1H，d，J＝8Hz)7.76(1H，d，J＝7Hz)7.23-7.10(4H，m)7.18(1H，s)7.03(1H，d，J＝9Hz)6.93(1H，s)6.76(2H，d，J＝8Hz)6.74(1H，brs)6.65(1H，q，J＝7Hz)5.74(1H，m)5.42(1H，m)5.08(1H，m)4.77(1H，d，J＝10Hz)4.64(1H，m)4.57(1H，m)4.42(1H，m)3.92-3.78(2H，m)3.49(1H，m)3.34(1H，m)2.90(1H，dd，J＝13和12Hz)2.80(3H，s)2.70(1H，m)2.60(1H，dd，J＝13和11Hz)2.54(1H，七重峰，J＝6Hz)2.42-2.27(2H，m)2.27(3H，s)2.25(3H，s)2.17(1H，m)1.88(1H，m)1.70(1H，m)1.66(3H，d，J＝7Hz)1.60-1.46(4H，m)1.34(3H，d，J＝6Hz)0.99(6H，d，J＝6Hz)0.91(3H，d，J＝6Hz)0.88(3H，d，J＝6Hz)0.90(1H，m)7.一種制備WS7622A、B、C和/或D物質或其可藥用鹽的方法，該方法包括在營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)屬于鏈霉菌屬的產生WS7622A、B、C和D物質的菌株，并從培養(yǎng)液中分離WS7622A、B、C和/或D物質或其可藥用鹽。8.根據(jù)權利要求7的方法，其特征在于，產生WS7622A、B、C和D物質的菌株為拒霉素鏈霉菌7622(FERMBP-2306)。9.一種制備具有下式的WS7622A物質的衍生物及其可藥用鹽的方法，該方法包括使WS7622A或其鹽與烷化劑反應，或使WS7622A或其鹽與式R-OH(其中R為低級鏈烷?；?化合物或其活性衍生物反應。其中R1和R2各為低級烷基或低級鏈烷?；?0.一種制備WS7622A物質的二低級烷基衍生物或其可藥用鹽的方法，該方法包括使WS7622A物質或其鹽與烷化劑反應。11.一種制備WS7622A物質的二低級鏈烷?；苌锘蚱淇伤幱名}的方法，該方法包括使WS7622A或其鹽與式R-OH(其中R為低級鏈烷酰基)化合物或其活性衍生物反應。12.根據(jù)權利要求10的方法，其特征在于，目的化合物為WS7622A物質的二甲基衍生物。13.根據(jù)權利要求11的方法，其特征在于，目的化合物為WS7622A物質的二乙?；苌?。14.一種藥物組合物，其中所含的活性成分為WS7622A、B、C和/或D物質、或WS7622A物質的二低級烷基衍生物、或WS7622A物質的二低級鏈烷?；苌铩⒒蛩鼈兊目伤幱名}。15.一種治療有關患者的變性疾病的方法，這些疾病有肺氣腫、動脈粥樣硬化、類風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、牛皮癬、胰腺炎、成人呼吸窘迫綜合癥等;該方法包括給患者服用有效量的WS7622A、B、C和/或D、或WS7622A物質的二低級烷基衍生物或WS7622A物質的二低級鏈烷?；苌?、或它們的可藥用鹽。16.一種生物純的拒霉素鏈霉菌7622(FERMBP-2306)培養(yǎng)物。全文摘要本發(fā)明涉及具有抑制人類白細胞彈性蛋白酶活性的新的WS7622A、B、C和D物質、其衍生物及其可藥用鹽，涉及其制備方法和含有它們的藥物組合物及其使用方法。文檔編號A61K35/74GK1046938SQ90101309公開日1990年11月14日申請日期1990年3月13日優(yōu)先權日1989年3月14日發(fā)明者畑中洋,江崎正美,辻井榮作,岡本正則,重松伸治,奧原正國,高瀨茂弘申請人:藤澤藥品工業(yè)株式會社