本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，尤其涉及一種合成金屬納米顆粒mgo@hsa的方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、肝細(xì)胞癌（hcc）是肝臟最常見的原發(fā)性惡性腫瘤，其特點是惡性程度高，患者預(yù)后差，針對肝癌的傳統(tǒng)治療方法包括手術(shù)切除、化療和經(jīng)動脈化療栓塞等。手術(shù)切除是目前主要的治療手段，但手術(shù)帶來的慢性炎癥會提高肝癌的復(fù)發(fā)率。索拉非尼、侖伐替尼和瑞戈非尼等都是目前臨床上常用的治療肝癌的藥物，但這些藥物在人體組織中非特異性分布，抗腫瘤的同時會殺傷正常細(xì)胞，此外副作用和耐藥等問題嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。藥物在體內(nèi)的分布和發(fā)揮有效作用與遞送載體密切相關(guān)，因此開發(fā)具有優(yōu)異靶向性并且安全的遞送載體，對人類抗擊肝癌是必要的。

2、zhang等人制備外殼為nayf4、內(nèi)核以sio2包覆的磁性fe3o4并具備空心核殼結(jié)構(gòu)的納米球，dox被負(fù)載于該納米球核殼間空心結(jié)構(gòu)內(nèi)（dox-muc-f-nr）,體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn)dox-muc-f-nr可以顯著抑制腫瘤生長，但制備方案中涉及到的高溫?zé)崽幚?、反微乳液法等步驟給實際應(yīng)用中大規(guī)模制備dox-muc-f-nr增添了難度，限制了臨床轉(zhuǎn)化；rudolf等人利用zno納米顆粒的光催化作用，聯(lián)合uva-1處理人頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（hnscc）與原代口腔粘膜細(xì)胞pomcs，與未經(jīng)zno納米顆粒處理或僅接受uva-1處理的hnscc細(xì)胞相比，在uva-1照射15?min后，經(jīng)zno納米顆粒處理的hnscc癌細(xì)胞活力顯著降低，而經(jīng)zno納米顆粒處理過的pomcs細(xì)胞在uva-1的照射下，活性沒有受到任何影響，這些研究表明了zno納米顆?？梢砸种瓢┘?xì)胞的細(xì)胞活力，而對正常細(xì)胞無影響，但僅僅限于體外研究中，在機體內(nèi)zno納米顆粒的去向、生物相容性、潛在的毒副作用及半衰期等問題還不了解。

3、檢索暫未發(fā)現(xiàn)利用白蛋白(hsa)和甘氨酸鎂合成金屬納米顆粒mgo@hsa的方法。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種合成金屬納米顆粒mgo@hsa（簡稱mgo@hsa?nps）的方法及其應(yīng)用。本發(fā)明避開傳統(tǒng)繁瑣的化學(xué)合成路線，所用原材料環(huán)保安全，合成的金屬納米顆粒理化性質(zhì)穩(wěn)定，對正常組織副作用小，特別的是mgo@hsa?nps能特異性靶向肝癌組織，負(fù)載多西他賽（dtx）更能顯著促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡，為制備靶向肝癌的藥物載體提供了有價值的啟示。

2、為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

3、第一方面，本發(fā)明提供了一種合成金屬納米顆粒mgo@hsa的方法，包括如下步驟：

4、步驟1，配制濃度為20-60?g/l的白蛋白母液；

5、步驟2，精確稱取0.01~0.5mg甘氨酸鎂溶解在1?ml滅菌去離子水中，充分溶解，配成0.1-0.4?mg/ml的甘氨酸鎂溶液；

6、步驟3，將步驟2配制好的甘氨酸鎂溶液緩慢滴加在步驟1配制的白蛋白母液中，搖床上孵育24±2?h后停止反應(yīng)；

7、步驟4，離心，棄上清，所得沉淀即為合成好的金屬納米顆粒mgo@hsa。在具體的實施方案中，步驟4的納米顆粒用無菌去離子水溶解后凍干，排除溶劑的干擾。

8、優(yōu)選的，步驟1中，所述白蛋白母液濃度為35-51?mg/ml，這也是人體血清白蛋白的正常濃度，太多的白蛋白會產(chǎn)生多余的產(chǎn)物影響電鏡下的觀察。

9、優(yōu)選的，步驟2中，甘氨酸鎂溶液的濃度為0.1~0.4?mg/ml，過高濃度的mg2+會導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性產(chǎn)生沉淀，不利于反應(yīng)進(jìn)行。

10、更優(yōu)選的，步驟2中，甘氨酸鎂溶液的濃度為0.2?mg/ml。

11、優(yōu)選的，步驟3中，甘氨酸鎂溶液與白蛋白母液體積比為1：5~15優(yōu)選1：10。

12、優(yōu)選的，步驟3中，搖床孵育條件為37±1?℃，220±80?rpm，時間為24?h。

13、更優(yōu)選的，步驟3中，搖床孵育條件為37?℃，220?rpm，時間為24?h。

14、優(yōu)選的，步驟（4）中，離心為超高速離心，超高速離心條件為：4?℃，35000±5000rpm，時間為2±0.5?h。

15、第二方面，本發(fā)明還保護(hù)前文所述的方法得到的金屬納米顆粒mgo@hsa。

16、本發(fā)明合成的金屬納米顆粒mgo@hsa，具備優(yōu)異的腫瘤靶向能力，可以作為靶向腫瘤的藥物遞送載體；具體的，金屬納米顆粒mgo@hsa表面白蛋白與肝癌細(xì)胞表面高表達(dá)的白蛋白受體gp60相互作用，使得金屬納米顆粒mgo@hsa特異性富集在腫瘤部位，并實現(xiàn)化療藥物在腫瘤部位的可控釋放。

17、第三方面，本發(fā)明還保護(hù)前文所述的金屬納米顆粒mgo@hsa制備靶向肝癌的藥物中的應(yīng)用。

18、優(yōu)選的，所述藥物由金屬納米顆粒mgo@hsa作為藥物遞送載體。

19、優(yōu)選的，所述藥物為多西他賽。

20、第四方面，本發(fā)明還保護(hù)前文所述的金屬納米顆粒mgo@hsa在制備靶向肝癌的藥物遞送載體中的應(yīng)用。

21、本發(fā)明的有益效果：

22、本發(fā)明對納米顆粒的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征，透射電鏡下觀察到的mgo@hsa?nps大小分布均勻，沒有團(tuán)聚。mgo@hsa?nps在高濃度下紅細(xì)胞破碎率僅為2%左右，證明其在體內(nèi)運輸中是穩(wěn)定的。cck8增殖毒性實驗表明mgo@hsa?nps在100?μg/ml的濃度下，細(xì)胞存活率達(dá)到90%，證明mgo@hsa?nps是一種安全的藥物遞送載體。通過吖啶橙（ao）/溴化乙錠（eb）染色，激光共聚焦觀察負(fù)載dtx?的mgo@hsa?nps促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡情況，對照組細(xì)胞體積較大且舒展，形態(tài)清晰，細(xì)胞核大，染色質(zhì)及核仁清晰可見，dtx?mgo@hsa?nps組細(xì)胞體積縮小無完整細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞核碎裂固縮;dna?ladder表明負(fù)載dtx的dtx?mgo@hsa?nps對肝癌細(xì)胞顯示最明顯的凋亡效果。最后通過小動物可見光成像證明mgo@hsa?nps具有優(yōu)異的腫瘤靶向性。

23、本發(fā)明利用甘氨酸鎂和白蛋白制備mgo@hsa?nps，避開傳統(tǒng)繁瑣的化學(xué)合成路線，所用原材料環(huán)保安全，合成的mgo@hsa?nps理化性質(zhì)穩(wěn)定，對正常組織副作用小，特別的是mgo@hsa?nps能特異性靶向肝癌組織，負(fù)載dtx更能顯著促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡，本發(fā)明為制備靶向肝癌的藥物載體提供了有價值的啟示。

技術(shù)特征：

1.一種合成金屬納米顆粒mgo@hsa的方法，其特征在于，包括如下步驟：

2.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成金屬納米顆粒mgo@hsa的方法，其特征在于，所述步驟1中，白蛋白母液濃度為35-51?mg/ml。

3.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成金屬納米顆粒mgo@hsa的方法，其特征在于，所述步驟2中，所述甘氨酸鎂溶液的濃度為0.1-0.4?mg/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成金屬納米顆粒mgo@hsa的方法，其特征在于，所述步驟3中，甘氨酸鎂溶液與白蛋白母液體積比為1：5~15。

5.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成金屬納米顆粒mgo@hsa的方法，其特征在于，所述步驟3中，搖床孵育條件為37±1?℃，220±80?rpm,?孵育時間為24?h。

6.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成金屬納米顆粒mgo@hsa的方法，其特征在于，所述步驟4中，離心條件為4?℃，35000±5000?rpm，時間為2±0.5?h。

7.權(quán)利要求1-6任一項所述的合成金屬納米顆粒mgo@hsa的方法得到的金屬納米顆粒mgo@hsa。

8.權(quán)利要求7所述的金屬納米顆粒mgo@hsa在制備靶向肝癌的藥物中的應(yīng)用。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物由金屬納米顆粒mgo@hsa作為藥物遞送載體。

10.權(quán)利要求9所述的金屬納米顆粒mgo@hsa在制備靶向肝癌的藥物遞送載體中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種合成金屬納米顆粒MgO@HSA的方法及其應(yīng)用。本發(fā)明的金屬納米顆粒以甘氨酸鎂和人血清白蛋白（HSA）為原料合成，繞過有毒材料和復(fù)雜的合成路線；本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)在血清白蛋白存在的條件下，以Mg<supgt;2+</supgt;為金屬核心，表面包裹白蛋白形成蛋白冠，兩者組裝形成MgO@HSA?NPs,顆粒表面的晶格間距為0.32?nm。本發(fā)明合成的納米顆粒不僅本身毒副作用低，更具備優(yōu)異靶向腫瘤部位的能力，負(fù)載化療藥物多西他賽（DTX）后對肝癌細(xì)胞具有顯著的殺傷抑制作用，具有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：張根,伍森,李思琪,王婷,夏鑫
受保護(hù)的技術(shù)使用者：南京醫(yī)科大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30