本發(fā)明屬于獸用疫苗領(lǐng)域，具體是涉及一種雞源坦布蘇病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒二聯(lián)疫苗。

背景技術(shù)：

1、坦布蘇病毒(tembusu?virus,tmuv)隸屬于黃病毒科黃病毒屬,是恩塔亞病毒群中的一種新型黃病毒，自2010年以來，在我國浙江、福建、安徽、山東等養(yǎng)鴨集中地區(qū)陸續(xù)暴發(fā)，主要感染蛋鴨、種鴨和部分鵝，感染后主要會出現(xiàn)食欲不振、產(chǎn)蛋量急劇下降、高熱等癥狀，發(fā)病率高達(dá)90％，嚴(yán)重影響鴨鵝養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。隨著病毒的蔓延，自2023年以來，山東、廣東多個雞場的雞群也出現(xiàn)體溫升高、排稀便、產(chǎn)蛋量下降等臨床癥狀，對發(fā)病雞進(jìn)行剖檢可見卵泡變性、出血、脾臟腫大等病理變化，經(jīng)鑒定為坦布蘇病毒感染，可見雞源坦布蘇病毒對養(yǎng)雞業(yè)也存在巨大的潛在危害。減蛋綜合征(egg?drop?syndrome,eds)是一種主要影響產(chǎn)蛋雞的病毒性傳染病，由產(chǎn)蛋下降綜合征病毒(edsv)引起，這種病毒屬于禽類腺病毒屬，是一種雙鏈dna病毒。減蛋綜合征的特征是產(chǎn)蛋量突然下降，以及軟殼蛋、薄殼蛋和畸形蛋數(shù)量的顯著增加，是養(yǎng)雞業(yè)重點(diǎn)需要防控的疾病。

2、為預(yù)防這兩種引起蛋雞產(chǎn)蛋量下降的疾病，我們亟需研制出針對這兩種病毒的二聯(lián)疫苗，但目前現(xiàn)有的坦布蘇疫苗主要是針對鴨源的坦布蘇病毒，雞源的坦布蘇病毒毒株和疫苗還未見報道。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明創(chuàng)造旨在克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供雞源坦布蘇病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒二聯(lián)疫苗。

2、為實現(xiàn)以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、一種雞源坦布蘇病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒二聯(lián)疫苗，所述雞源坦布蘇病毒為雞源坦布蘇病毒sd01株，保藏編號為：cctcc?no：v202472。

4、優(yōu)選的，所述雞源坦布蘇病毒毒株的制備方法為：

5、1)將分離獲得的雞源坦布蘇病毒在雞胚上盲傳3代；

6、2)在雞胚原代成纖維細(xì)胞上噬斑純化；

7、3)在成纖維細(xì)胞和雞肝癌細(xì)胞上貼壁培養(yǎng)，交替?zhèn)鞔?輪；

8、4)在雞肝癌細(xì)胞懸浮細(xì)胞上繼續(xù)傳代，獲得穩(wěn)定傳代的毒株。

9、優(yōu)選的，所述疫苗用雞源坦布蘇病毒107.25tcid50/0.1ml。

10、優(yōu)選的，所述疫苗用產(chǎn)蛋下降綜合征病毒毒價為106.75tcid50/0.1ml。

11、優(yōu)選的，所述疫苗用滅活劑為bei滅活劑。

12、優(yōu)選的，步驟4)所述的雞肝癌細(xì)胞懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的接毒細(xì)胞密度為2.0×106～3.0×106個/ml。

13、優(yōu)選的，所述二聯(lián)疫苗中雞源坦布蘇病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒和疫苗佐劑的體積比為：2:3:1。

14、

15、雞源坦布蘇病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒二聯(lián)疫苗在制備減蛋綜合征疫苗和藥物中的應(yīng)用。

16、相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下優(yōu)勢：

17、本發(fā)明由新分離到的雞源坦布蘇病毒病毒液添加edsv病毒液，制備二聯(lián)滅活疫苗，所制得的疫苗能針對雞群感染坦布蘇病毒病做到對癥預(yù)防，并可以有效控制減蛋綜合征的發(fā)生，安全性好，免疫效果佳，保護(hù)率高。

18、本品利用懸浮細(xì)胞進(jìn)行雞源坦布蘇病毒的傳代，與傳統(tǒng)在雞胚及鴨胚的繁毒方式相比：操作程序簡單，成本低，有效管控外源病毒感染，降低生產(chǎn)風(fēng)險。與lmh貼壁細(xì)胞上傳代相比：lmh懸浮細(xì)胞傳代無需血清，且使用生物反應(yīng)器進(jìn)行懸浮細(xì)胞傳代，可以一次性進(jìn)行大量毒液繁殖，可以大大節(jié)省很多時間成本和試劑成本。

19、本發(fā)明利用一定比例的bei對病毒液進(jìn)行滅活，與傳統(tǒng)的甲醛滅活相比，可以做到滅活效果更好，且對雞群應(yīng)激更小。

20、雞源坦布蘇病毒sd01株，進(jìn)行保藏，保藏時間為2024年9月28日，保藏地址位于：湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號武漢大學(xué)，保藏單位為：中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號是cctcc?no：v202472。

技術(shù)特征：

1.一種雞源坦布蘇病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒二聯(lián)疫苗，其特征在于，所述雞源坦布蘇病毒為雞源坦布蘇病毒sd01株，保藏編號為：cctcc?no：v202472。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞源坦布蘇病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒二聯(lián)疫苗，其特征在于，所述雞源坦布蘇病毒毒株的制備方法為：

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞源坦布蘇病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒二聯(lián)疫苗，其特征在于，所述疫苗用雞源坦布蘇病毒107.25tcid50/0.1ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞源坦布蘇病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒二聯(lián)疫苗，其特征在于，所述疫苗用產(chǎn)蛋下降綜合征病毒毒價為106.75tcid50/0.1ml。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞源坦布蘇病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒二聯(lián)疫苗，其特征在于，所述疫苗用滅活劑為bei滅活劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雞源坦布蘇病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒二聯(lián)疫苗，其特征在于，步驟4)所述的雞肝癌細(xì)胞懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的接毒細(xì)胞密度為2.0×106～3.0×106個/ml。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞源坦布蘇病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒二聯(lián)疫苗，其特征在于，所述二聯(lián)疫苗中雞源坦布蘇病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒和疫苗佐劑的體積比為：2:3:1。

8.如權(quán)利要求1所述雞源坦布蘇病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒二聯(lián)疫苗在制備減蛋綜合征疫苗和藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種雞源坦布蘇病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒二聯(lián)疫苗，所述雞源坦布蘇病毒為雞源坦布蘇病毒SD01株，保藏編號為：CCTCC?NO：V202472。本發(fā)明還提供了雞源坦布蘇病毒毒株的制備方法。二聯(lián)疫苗能針對雞群感染坦布蘇病毒病做到對癥預(yù)防，并可以有效控制減蛋綜合征的發(fā)生，安全性好，免疫效果佳，保護(hù)率高。

技術(shù)研發(fā)人員：劉冠星,楊欣欣,李守軍,楊燚,王志慧,崔紅軍,尹明榮,王宇鵬,李睿
受保護(hù)的技術(shù)使用者：天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9