本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及枳椇子提取工藝，具體涉及一種具有保肝作用的枳椇子保肝活性組分提取物的制備方法及所得產(chǎn)品、應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、酒精性肝?。╝ld）是指過度飲酒產(chǎn)生的肝臟病變，初期癥狀主要是脂肪性肝炎、肝纖維化和肝硬化，嚴(yán)重時(shí)可引起肝癌甚至出現(xiàn)肝臟衰竭。2019年，全世界約25%的肝硬化死亡與酒精有關(guān)。目前其治療方法多為嚴(yán)格戒酒、還原性谷胱甘肽治療等藥物治療、營(yíng)養(yǎng)支持性療法，用于疾病中后期。中醫(yī)中藥在改疾病各個(gè)階段治療都取得有效進(jìn)展。

2、枳椇子始載于《唐本草》，具有止渴除煩，清濕熱、解酒毒的功效，《醫(yī)編》記錄“解酒毒，枳椇子最妙”。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究已證實(shí)枳椇子有解酒、保護(hù)肝臟、抗腫瘤等作用，現(xiàn)已有多款以枳椇子為主的解酒保肝產(chǎn)品在售。然而，其保肝組分不清楚，限制產(chǎn)品的使用和品質(zhì)升級(jí)，因此對(duì)枳椇子中具有保肝作用的活性組分進(jìn)行提取與研究，能夠?yàn)殍讞鹤拥呐R床應(yīng)用、資源開發(fā)提供理論和技術(shù)支持。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種具有保肝作用的枳椇子活性組分提取物的制備方法。本發(fā)明還提供了利用上述制備方法制備得到的枳椇子活性組分提取物。

2、本發(fā)明的另一目的提供了上述枳椇子活性組分提取物的應(yīng)用。

3、本發(fā)明的上述技術(shù)目的是通過以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：

4、本發(fā)明提供了一種具有保肝作用的枳椇子活性組分提取物的制備方法，包括以下步驟：

5、s1.將枳椇子粉碎成粗粉，加乙醇溶液回流提取，濾過，收集濾液，合并回收乙醇，濃縮得稠膏；

6、s2.將所得稠膏用水混懸，使用有機(jī)溶劑依次萃取至有機(jī)層顏色淡，減壓回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥處理得各部位的提取物；

7、s3.取乙酸乙酯部位干浸膏稱重，加甲醇溶解，過濾膜后，加c4粉吸附，攪拌均勻，減壓回收溶劑；干法裝柱，用洗脫劑按洗脫程序進(jìn)行主分離和二級(jí)分離，自動(dòng)接取餾分；

8、s4.減壓回收溶劑至小體積，冷凍干燥即得。

9、進(jìn)一步的，s1中，所述乙醇溶液的體積分?jǐn)?shù)為75%；所述枳椇子和乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1:10；所述回流提取的次數(shù)為2次，每次1.5h。

10、進(jìn)一步的，?s2中，萃取過程中，依次使用二氯甲烷、乙酸乙酯進(jìn)行萃取。

11、進(jìn)一步的，s3中，干浸膏與甲醇的質(zhì)量體積比0.1-0.5:1；干浸膏與c4粉的質(zhì)量比為1-2:1。

12、進(jìn)一步的，s3中，所述主分離所采用的洗脫程序?yàn)椋?/p>

13、

14、主分離階段，收集第33～36min的洗脫部位，然后進(jìn)行二級(jí)分離。

15、進(jìn)一步的，s3中，所述二級(jí)分離使用的洗脫程序?yàn)椋?/p>

16、

17、二級(jí)分離階段，收集第26.7～30.1min的洗脫部位，得餾分trap-48。

18、進(jìn)一步的，s4中，冷凍干燥的操作如下：在-40～-50℃冷阱中預(yù)凍2～4小時(shí)后，再在-45～-55℃下冷凍干燥8～24小時(shí)。

19、本發(fā)明還提供了一種利用上述制備方法制備得到的枳椇子活性組分提取物，所述枳椇子活性組分提取物中黃酮類物質(zhì)含量＞80%。

20、本發(fā)明進(jìn)一步的提供了上述枳椇子活性組分提取物在制備治療和/或預(yù)防酒精性肝損傷的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

21、本發(fā)明制備得到的枳椇子活性組分提取物可以用于制備輔助保肝的藥品、保健食品和食品等任意形式的產(chǎn)品。本發(fā)明制備的枳椇子活性成分提取物能夠預(yù)防性保護(hù)酒精性肝損傷，降低氧化應(yīng)激反應(yīng)、降低alt和ast水平。

22、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

23、（1）本發(fā)明提供的枳椇子提取物，通過采用二維高通量分離分析技術(shù)能夠更高效獲得指定組成的活性組分；精準(zhǔn)獲得枳椇子粗提物中黃酮類成分，其中黃酮類成分的含量＞80%，提取時(shí)間縮短60%，且節(jié)省人力和試劑的使用。

24、（2）使用本發(fā)明提供的方法獲得的枳椇子活性組分的物質(zhì)組成明確，黃酮類成分的提取率高，在保肝方面具有明顯的生物活性，通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，枳椇子提取物可顯著降低細(xì)胞ros水平，提高細(xì)胞成活率，顯著降低細(xì)胞上清液中alt和ast水平。

25、（3）本發(fā)明制備得到的枳椇子活性組分提取物為開發(fā)一種治療酒精性肝病的新藥奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

技術(shù)特征：

1.一種具有保肝作用的枳椇子活性組分提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，s1中，所述乙醇溶液的體積分?jǐn)?shù)為75%；所述枳椇子和乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1:10；所述回流提取的次數(shù)為2次，每次1.5h。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，?s2中，萃取過程中，依次使用二氯甲烷、乙酸乙酯進(jìn)行萃取。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，s3中，干浸膏與甲醇的質(zhì)量體積比0.1-0.5:1；干浸膏與c4粉的質(zhì)量比為1-2:1。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的制備方法，其特征在于，s3中，所述主分離所采用的洗脫程序?yàn)椋?/p>

6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的制備方法，其特征在于，s3中，所述二級(jí)分離使用的洗脫程序?yàn)椋?/p>

7.根據(jù)權(quán)利要求1、4-6任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，s4中，冷凍干燥的操作如下：在-40～-50℃冷阱中預(yù)凍2～4小時(shí)后，再在-45～-55℃下冷凍干燥8～24小時(shí)。

8.一種利用權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的制備方法制備得到的枳椇子活性組分提取物，其特征在于，?所述枳椇子活性組分提取物中黃酮類物質(zhì)含量＞80%。

9.一種如權(quán)利要求8所述的枳椇子活性組分提取物在制備治療和/或預(yù)防酒精性肝損傷的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及枳椇子提取工藝，具體涉及一種具有保肝作用的枳椇子保肝活性組分提取物的制備方法及所得產(chǎn)品、應(yīng)用。本發(fā)明提供的枳椇子提取物，通過采用二維高通量分離分析技術(shù)能夠更高效獲得指定組成的活性組分；精準(zhǔn)獲得枳椇子粗提物中黃酮類成分，其中黃酮類成分的含量＞80%，提取時(shí)間縮短60%，且節(jié)省人力和試劑的使用。使用本發(fā)明提供的方法獲得的枳椇子活性組分的物質(zhì)組成明確，黃酮類成分的提取率高，在保肝方面具有明顯的生物活性，通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，枳椇子提取物可顯著降低細(xì)胞ROS水平，提高細(xì)胞成活率，顯著降低細(xì)胞上清液中ALT和AST水平。本發(fā)明制備得到的枳椇子活性組分提取物為開發(fā)一種治療酒精性肝病的新藥奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

技術(shù)研發(fā)人員：丁曉彥,王平,王博陽
受保護(hù)的技術(shù)使用者：山東省中醫(yī)藥研究院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30