本發(fā)明涉及胚胎移植，尤其涉及一種羊非手術(shù)采胚方法。

背景技術(shù)：

1、胚胎移植技術(shù)是現(xiàn)代羊產(chǎn)業(yè)中最具科技水平的快速繁殖技術(shù)，近年來(lái)該技術(shù)主要用于對(duì)那些珍貴、稀有品種的繁育上，它在快速擴(kuò)繁那些由國(guó)際上引進(jìn)的優(yōu)良品種方面發(fā)揮了極大的作用。目前的常規(guī)胚胎移植需要通過(guò)外科手術(shù)采集胚胎，而外科手術(shù)采集胚胎可能會(huì)造成供體羊的損傷，使胚胎移植技術(shù)應(yīng)用的風(fēng)險(xiǎn)較大，使得該技術(shù)在實(shí)際生產(chǎn)上的推廣程度并不高。外科手術(shù)采胚往往對(duì)種羊生殖系統(tǒng)組織的損傷是不可逆的，直接后果就是喪失繁殖能力，同時(shí)對(duì)昂貴的種羊的損傷會(huì)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，也是牧場(chǎng)主難以承受的，從而大大地抑制了該技術(shù)的廣泛應(yīng)用。

2、當(dāng)前羊胚胎移植技術(shù)主要是采用外科手術(shù)法采集胚胎，基本過(guò)程是：麻醉、腹部剃毛、消毒、手術(shù)刀在腹部切開(kāi)3-5公分、用手指伸進(jìn)腹部摸到子宮角、拉出兩個(gè)子宮角(甚至卵巢)、在子宮角分叉上2-3公分處的一側(cè)子宮角上用小型止血鉗頭通捅入造成一個(gè)直徑3-5mm的小洞，再插入沖卵管，給沖卵管頭部的氣球充氣3-5ml以便堵住子宮角內(nèi)管道；在該側(cè)子宮角較細(xì)端插進(jìn)套管針注入沖卵液，由沖卵管回收沖卵液，再以同法重復(fù)另一側(cè)子宮角的采胚，采胚完畢后將子宮角送回腹腔，縫合腹腔腹膜、肌肉及皮膚。這一系列的動(dòng)作都會(huì)因?yàn)槌鲅愇?、感染等原因造成羊生殖器官和腹腔的組織粘連，這種粘連和其它操作不當(dāng)?shù)膿p傷直接結(jié)果就是羊的繁殖能力下降，受孕難，如重復(fù)采胚手術(shù)會(huì)出現(xiàn)未受精卵，即使受精胚胎也會(huì)出現(xiàn)胚胎質(zhì)量嚴(yán)重退化，從而使受胎率明顯下降。使用手術(shù)采胚技術(shù)的最大風(fēng)險(xiǎn)就是供體羊的損傷，往往供體都是貴重的種羊，比如一只進(jìn)口種羊的費(fèi)用目前由1.5萬(wàn)到幾萬(wàn)不等甚至更高，目前我國(guó)能夠?qū)嵤┻@項(xiàng)技術(shù)團(tuán)隊(duì)的種羊損傷率一般在10-30％之間，這是造成這項(xiàng)技術(shù)使用成本過(guò)高和不能大量應(yīng)用的主要原因。

3、供體羊損傷率在被養(yǎng)殖企業(yè)逐漸認(rèn)識(shí)后基本拒絕這種技術(shù)的實(shí)施。人們開(kāi)始對(duì)減少手術(shù)創(chuàng)傷的辦法進(jìn)行積極研究，目前已經(jīng)有人設(shè)法利用腹腔內(nèi)窺鏡檢查建立的非手術(shù)胚胎回收技術(shù)來(lái)防止采胚后出現(xiàn)術(shù)后粘連，但這種技術(shù)仍然存在很多問(wèn)題：一是該操作仍需要外科手術(shù)，而且比現(xiàn)有常規(guī)手術(shù)更難、二是胚胎回收率下降。實(shí)質(zhì)上這種方法仍舊離不開(kāi)外科手術(shù)，只是創(chuàng)口小點(diǎn)，并沒(méi)有從根本上解決種羊損傷的問(wèn)題，加之由于沒(méi)有開(kāi)發(fā)出相應(yīng)的商業(yè)化器械，嚴(yán)重限制了其標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程，所以短時(shí)間內(nèi)不太可能大規(guī)模應(yīng)用，手術(shù)法收集胚胎仍占主導(dǎo)地位。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明的主要目的在于提供一種羊非手術(shù)采胚方法,可以解決現(xiàn)有技術(shù)中采胚過(guò)程對(duì)羊的損傷問(wèn)題。

2、為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

3、一種羊非手術(shù)采胚方法，包括以下步驟：

4、s1.準(zhǔn)備工作；

5、s2.胚胎采集：

6、s21.用帶有鋼芯的沖卵管通過(guò)陰道插入供體羊子宮頸口，慢慢試探性穿過(guò)子宮頸，進(jìn)入子宮體后，偏向一側(cè)使沖卵管進(jìn)入一側(cè)子宮角，繼續(xù)插入深度約2-3cm，在感到阻力增大后，抽出沖卵管中的鋼芯；

7、s22.通過(guò)沖卵管注入100ml沖卵液，隨即打開(kāi)沖卵管回流閥接入胚胎篩，回收沖卵液；

8、s23.重復(fù)s22步驟2-3次；

9、s24.輕輕回抽沖卵管，退出一側(cè)子宮角，然后將鋼芯插入沖卵管，將沖卵管再插入另一側(cè)子宮角，重復(fù)進(jìn)行s22步驟和s23步驟。

10、s3.胚胎采集后處理；

11、s4.胚胎處理。

12、優(yōu)選地，s1準(zhǔn)備工作包括：

13、s11.按胚胎移植程序?qū)w羊進(jìn)行同期、超排、配種處理，在采胚前一日，停水停食24h；

14、s12.采胚當(dāng)天對(duì)供體羊常規(guī)麻醉、將羊置于常規(guī)胚胎移植手術(shù)車(chē)上以側(cè)臥體態(tài)綁定、用可固定的陰道開(kāi)膣器插入陰道固定并露出陰道及子宮頸口。

15、優(yōu)選地，所述s3胚胎采集后處理包括：

16、s31.回收完沖卵液后，輕輕抽出沖卵管；

17、s32.撤掉陰道開(kāi)膣器，松綁供體羊，注射醒麻藥，采胚結(jié)束。

18、優(yōu)選地，所述s4胚胎處理包括：

19、s41.將沖卵管中回收的沖卵液接入胚胎篩；

20、s42.通過(guò)胚胎篩放掉多余液體，剩余液體15-20ml,將含有胚胎的液體轉(zhuǎn)入撿胚杯；

21、s43.將撿卵杯置于顯微鏡下搜尋胚胎，用吸胚管將胚胎轉(zhuǎn)入盛有培養(yǎng)液的集卵杯中；

22、s44.評(píng)價(jià)胚胎質(zhì)量，選有效胚胎給受體羊移植。

23、優(yōu)選地，所述步驟s11包括：

24、s111.供體羊同期發(fā)情：在供體羊陰道放置陰道栓；

25、s112.供體羊超排：采用遞減法分8次注射fsh400iu；在注射第7次fsh時(shí)，撤栓；

26、s113.供體羊配種：可采用本交或人工授精方式；

27、s114.供體羊采胚前一天停水停食；

28、s115.供體羊采胚時(shí)間：配種后第6天，胚胎發(fā)育階段處在桑葚胚期，進(jìn)行沖卵和采集胚胎。

29、優(yōu)選地，沖卵管為直徑3mm的8#型號(hào)。

30、優(yōu)選地，沖卵管為直徑3.5mm的9#型號(hào)。

31、優(yōu)選地，沖卵管為直徑4mm的10#型號(hào)。

32、優(yōu)選地，沖卵管為直徑4.5mm的11#型號(hào)。

33、優(yōu)選地，所述沖卵管鋼芯直徑為2mm。

34、本發(fā)明的一種羊非手術(shù)采胚方法，具有如下有益效果：

35、(1)通過(guò)陰道進(jìn)行非手術(shù)采胚，一改腹部常規(guī)手術(shù)采胚。

36、(2)不再采用外科手術(shù)，使沖卵管通過(guò)陰道穿過(guò)子宮頸口進(jìn)入子宮體內(nèi)，最后到達(dá)子宮角，用沖卵液沖洗和回收胚胎，不會(huì)產(chǎn)生像手術(shù)采胚那樣的腹部和生殖器官的粘連，也不會(huì)產(chǎn)生傷口感染、傷口不愈合、腹膜縫合不佳常出現(xiàn)的腸瘺等弊端，不會(huì)產(chǎn)生應(yīng)激，供體羊采胚后快速恢復(fù)，并能在短時(shí)間后再次重復(fù)采胚。且可降低外科器械、抗菌藥品、縫合線和外科輔料的使用成本，最大的好處是對(duì)貴重供體種羊的零損傷，同時(shí)也降低胚胎移植技術(shù)實(shí)施難度，加快了優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)珍貴品種羊的擴(kuò)繁速度。

37、(3)在采胚過(guò)程中，可以通過(guò)供體羊的子宮頸口的松緊度選擇不同型號(hào)的沖卵管，可避免對(duì)子宮頸口的損傷，使沖卵管準(zhǔn)確進(jìn)入兩側(cè)子宮角。

技術(shù)特征：

1.一種羊非手術(shù)采胚方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羊非手術(shù)采胚方法，其特征在于，所述s1準(zhǔn)備工作包括：

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羊非手術(shù)采胚方法，其特征在于，所述s3胚胎采集后處理包括：

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羊非手術(shù)采胚方法，其特征在于，所述s4胚胎處理包括：

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的羊非手術(shù)采胚方法，其特征在于，所述步驟s11包括：

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羊非手術(shù)采胚方法，其特征在于，沖卵管為直徑3mm的8#型號(hào)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羊非手術(shù)采胚方法，其特征在于，沖卵管為直徑3.5mm的9#型號(hào)。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羊非手術(shù)采胚方法，其特征在于，沖卵管為直徑4mm的10#型號(hào)。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羊非手術(shù)采胚方法，其特征在于，沖卵管為直徑4.5mm的11#型號(hào)。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羊非手術(shù)采胚方法，其特征在于，所述沖卵管鋼芯直徑為2mm。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種羊非手術(shù)采胚方法，主要包括以下步驟：準(zhǔn)備工作，胚胎采集，收尾工作；其中，胚胎采集是將沖卵管通過(guò)陰道穿過(guò)子宮頸，進(jìn)入子宮并到達(dá)一側(cè)子宮角，進(jìn)行沖卵。本申請(qǐng)所公開(kāi)的羊非手術(shù)采胚方法，不同于目前使用的常規(guī)外科手術(shù)從腹部開(kāi)口采卵，而是通過(guò)陰道進(jìn)入子宮體內(nèi)沖卵和回收胚胎，可避免對(duì)供體羊的損傷，且通過(guò)供體羊的子宮頸口的松緊度選擇不同型號(hào)的沖卵管，可避免對(duì)子宮頸口的損傷，使沖卵管準(zhǔn)確進(jìn)入兩側(cè)子宮角。

技術(shù)研發(fā)人員：楊崢,楊永祥,李拴軍,胡合琴
受保護(hù)的技術(shù)使用者：西安艾捷思生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6