本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥，尤其涉及一種預(yù)防宮腔粘連的自愈性水凝膠及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、宮腔粘連(iua)又稱asherman綜合征，是由于子宮內(nèi)膜損傷導(dǎo)致宮腔部分或全部閉塞，從而導(dǎo)致月經(jīng)異常、不孕與反復(fù)流產(chǎn)，其發(fā)生與創(chuàng)傷、妊娠、感染等因素有關(guān)。中重度宮腔粘連的患者子宮內(nèi)膜基底層破壞較嚴(yán)重，子宮內(nèi)膜及腺體的再生能力低下且子宮內(nèi)膜的容受性差，臨床預(yù)后差。

2、目前，宮腔粘連的主要治療方式是宮腔鏡下宮腔粘連分離術(shù)，但這種手術(shù)存在爭(zhēng)議，因?yàn)樗鼉H能分離纖維疤痕組織，可能導(dǎo)致殘存子宮內(nèi)膜的再次損傷。因此，如何預(yù)防宮腔粘連的發(fā)生和恢復(fù)正常的子宮內(nèi)膜功能是生殖科醫(yī)生面臨的重要挑戰(zhàn)。

3、大多數(shù)緩釋系統(tǒng)是通過(guò)將外泌體與生物活性材料直接混合來(lái)構(gòu)建的。然而，納米級(jí)的外泌體主要依靠擴(kuò)散機(jī)制，很容易從水凝膠網(wǎng)絡(luò)中擴(kuò)散出去，導(dǎo)致突釋現(xiàn)象，釋放時(shí)間不可控，且保留時(shí)間減少。此外，現(xiàn)有的水凝膠并未針對(duì)宮腔的特殊結(jié)構(gòu)以及術(shù)后出血或滲液的特殊環(huán)境進(jìn)行優(yōu)化，缺乏自愈性和濕組織粘附性等特性，這些問(wèn)題限制了其在臨床中的應(yīng)用和療效。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于此，本發(fā)明的目的是提供一種預(yù)防宮腔粘連的自愈性水凝膠及其制備方法和應(yīng)用，該預(yù)防宮腔粘連的自愈性水凝膠dahash側(cè)鏈sh能夠與ag+離子ag-s動(dòng)態(tài)配位交聯(lián)形成具有自愈特性的水凝膠，適用于宮腔特殊結(jié)構(gòu)，dahash水凝膠中的da基團(tuán)能夠與子宮內(nèi)膜組織形成共價(jià)鍵和非共價(jià)鍵，從而將水凝膠錨定在子宮創(chuàng)面上，黏附于子宮內(nèi)膜；巰基(sh)基團(tuán)則通過(guò)與工程化外泌體smexo的表面sh基團(tuán)進(jìn)行配位結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對(duì)工程化smexo的控制性釋放，為子宮內(nèi)膜長(zhǎng)期修復(fù)創(chuàng)造良好條件。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供的一種預(yù)防宮腔粘連的自愈性水凝膠的制備方法，其包括以下步驟：

4、s1.將透明質(zhì)酸(ha)溶于超純水后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(edc)和n-羥基硫代琥珀酰亞胺(nhs)，調(diào)節(jié)ph后加入半胱胺鹽酸鹽(csh)，反應(yīng)結(jié)束后透析，冷凍干燥得到巰基改性的透明質(zhì)酸，記為hash；

5、s2.將所述hash溶于超純水后加1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(edc)和n-羥基硫代琥珀酰亞胺(nhs)，調(diào)節(jié)ph后加入鹽酸多巴胺(da)，反應(yīng)結(jié)束后透析，冷凍干燥得到巰基和多巴胺改性的透明質(zhì)酸，記為dahash；

6、s3.將mexo表面巰基化處理，得到工程化外泌體，記為smexo；

7、s4.將所述dahash、所述smexo、硝酸銀分別溶于超純水后混合，得到外泌體-水凝膠體系，記為dahash@smexo。

8、本發(fā)明通過(guò)在透明質(zhì)酸(hyaluronic?acid，ha)中引入巰基(sh)和多巴胺基團(tuán)(da)合成巰基和多巴胺改性的透明質(zhì)酸dahash，通過(guò)與smexo物理混合得到dahash@smexo水凝膠，dahash側(cè)鏈sh能夠與ag+離子ag-s動(dòng)態(tài)配位交聯(lián)形成具有自愈特性的水凝膠，適用于宮腔特殊結(jié)構(gòu)；同時(shí)，dahash水凝膠中的da基團(tuán)能夠與子宮內(nèi)膜組織形成共價(jià)鍵和非共價(jià)鍵，從而將水凝膠錨定在子宮創(chuàng)面上，黏附于子宮內(nèi)膜；巰基(sh)基團(tuán)則通過(guò)與工程化外泌體smexo的表面sh基團(tuán)進(jìn)行配位結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對(duì)工程化smexo的控制性釋放，為子宮內(nèi)膜長(zhǎng)期修復(fù)創(chuàng)造良好條件。

9、作為本發(fā)明上述方案的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟s1中，透明質(zhì)酸、edc、nhs、半胖胺鹽酸鹽的摩爾比為1:0.5:0.5:(0.2-0.4)。

10、作為本發(fā)明上述方案的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟s1中，所述調(diào)節(jié)ph是將溶液ph調(diào)節(jié)至5。

11、作為本發(fā)明上述方案的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟s1中，所述反應(yīng)是在常溫下反應(yīng)過(guò)夜；

12、和/或，步驟s1中，所述透析是將hash反應(yīng)溶液放入3500da的透析袋中，進(jìn)行3天的避光透析，以去除未反應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)和副產(chǎn)物。。

13、作為本發(fā)明上述方案的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟s2中，hash、edc、nhs、鹽酸多巴胺的摩爾比為1:0.4:0.4:(0.1-0.2)。

14、作為本發(fā)明上述方案的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟s2中，所述調(diào)節(jié)ph是將溶液ph調(diào)節(jié)至5。

15、作為本發(fā)明上述方案的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟s2中，所述反應(yīng)是在常溫、惰性氣氛下反應(yīng)12h；

16、和/或，步驟s2中，所述透析是將dahash反應(yīng)溶液放入分子量為3500da的透析袋中，進(jìn)行3天的避光透析，以去除未反應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)和副產(chǎn)物。。

17、作為本發(fā)明上述方案的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟s3中，所述mexo表面巰基化處理的方法為：將mexo溶于三(2-氯乙基)磷酸鹽中在37℃下處理30-50min，所述三(2-氯乙基)磷酸鹽的濃度為0.5-2mm；

18、和/或，步驟s4中，dahash的濃度為40mg/ml，smexo的濃度為20μg/ml，硝酸銀的濃度為45mm。

19、本發(fā)明提供的一種預(yù)防宮腔粘連的水凝膠，其采用如前所述的預(yù)防宮腔粘連的水凝膠的制備方法制備得到的。

20、本發(fā)明提供的一種如前所述的制備方法制備得到的預(yù)防宮腔粘連的水凝膠在制備可遞送活性物質(zhì)的生物修復(fù)支架或子宮內(nèi)膜修復(fù)藥物或治療宮腔粘連藥物中的應(yīng)用。

21、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

22、本發(fā)明通過(guò)在透明質(zhì)酸(hyaluronic?acid，ha)中引入巰基(sh)和多巴胺基團(tuán)(da)合成巰基和多巴胺改性的透明質(zhì)酸dahash，通過(guò)與smexo物理混合得到dahash@smexo水凝膠，dahash側(cè)鏈sh能夠與ag+離子ag-s動(dòng)態(tài)配位交聯(lián)形成具有自愈特性的水凝膠，適用于宮腔特殊結(jié)構(gòu)；同時(shí)，dahash水凝膠中的da基團(tuán)能夠與子宮內(nèi)膜組織形成共價(jià)鍵和非共價(jià)鍵，從而將水凝膠錨定在子宮創(chuàng)面上，黏附于子宮內(nèi)膜；巰基(sh)基團(tuán)則通過(guò)與工程化外泌體smexo的表面sh基團(tuán)進(jìn)行配位結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對(duì)工程化smexo的控制性釋放，為子宮內(nèi)膜長(zhǎng)期修復(fù)創(chuàng)造良好條件。

技術(shù)特征：

1.一種預(yù)防宮腔粘連的自愈性水凝膠的制備方法，其特征在于，其包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防宮腔粘連的自愈性水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟s1中，透明質(zhì)酸、edc、nhs、半胖胺鹽酸鹽的摩爾比為1:0.5:0.5:(0.2-0.4)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防宮腔粘連的自愈性水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟s1中，所述調(diào)節(jié)ph是將溶液ph穩(wěn)定至5。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防宮腔粘連的自愈性水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟s1中，所述反應(yīng)是在常溫下反應(yīng)過(guò)夜；

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防宮腔粘連的自愈性水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟s2中，hash、edc、nhs、鹽酸多巴胺的摩爾比為1:0.4:0.4:(0.1-0.2)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防宮腔粘連的水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟s2中，所述調(diào)節(jié)ph是將溶液ph穩(wěn)定至5。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防宮腔粘連的自愈性水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟s2中，所述反應(yīng)是在常溫、惰性氣氛下反應(yīng)12h；

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防宮腔粘連的自愈性水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟s3中，所述mexo表面巰基化處理的方法為：將mexo溶于三(2-氯乙基)磷酸鹽中在37℃下處理30-50min，所述三(2-氯乙基)磷酸鹽的濃度為0.5-2mm；

9.一種預(yù)防宮腔粘連的自愈性水凝膠，其特征在于，其采用如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的預(yù)防宮腔粘連的自愈性水凝膠的制備方法制備得到的。

10.一種如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的制備方法制備得到的預(yù)防宮腔粘連的自愈性水凝膠在制備可遞送活性物質(zhì)的生物修復(fù)支架或子宮內(nèi)膜修復(fù)藥物或治療宮腔粘連藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種預(yù)防宮腔粘連的自愈性水凝膠及其制備方法和應(yīng)用，所述制備方法包括以下步驟：將透明質(zhì)酸溶于超純水后加入EDC和NHS，調(diào)節(jié)PH后加入半胱胺鹽酸鹽，反應(yīng)結(jié)束后透析，冷凍干燥得到巰基改性的透明質(zhì)酸，記為HASH；將所述HASH溶于超純水后加入EDC和NHS，調(diào)節(jié)PH后加入鹽酸多巴胺，反應(yīng)結(jié)束后透析，冷凍干燥得到巰基和多巴胺改性的透明質(zhì)酸，記為DAHASH；將mEXO表面巰基化處理，得到工程化外泌體，記為SmEXO；將所述DAHASH、所述SmEXO、硝酸銀分別溶于超純水后混合，得到外泌體?水凝膠體系，記為DAHASH@SmEXO。本發(fā)明的預(yù)防宮腔粘連的水凝膠具有自愈特性，適用于宮腔特殊結(jié)構(gòu)，能夠錨定在子宮創(chuàng)面上，持續(xù)黏附于子宮內(nèi)膜緩釋SmEXO，為子宮內(nèi)膜長(zhǎng)期修復(fù)創(chuàng)造良好條件。

技術(shù)研發(fā)人員：王嘉偉,吳麗敏,余志成,金琪,水麗君,劉然,劉程,劉聰慧,陶媛媛
受保護(hù)的技術(shù)使用者：安徽省立醫(yī)院（中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)附屬第一醫(yī)院）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2