本發(fā)明屬于化學(xué)產(chǎn)品用途技術(shù)領(lǐng)域，具體為單寧酸在殺滅和預(yù)防水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
單寧酸，又名鞣酸，存在于許多樹(shù)木和果實(shí)中，其結(jié)構(gòu)式為：
單寧酸的用途比較廣泛，在醫(yī)藥上曾用于治療咽喉炎、扁桃腺炎、痔瘡和皮膚皰癥等，內(nèi)用可制止腹瀉、腸出血等。單寧酸能與金屬、生物堿和糖苷(見(jiàn)苷)等生成沉淀，對(duì)這些物質(zhì)具有解毒作用。單寧酸可用于鞣革、墨水制造、紙張和絲綢上膠、鍋爐除垢等，還可作媒染劑、啤酒和葡萄酒的澄明劑、橡膠的凝結(jié)劑等，但是對(duì)寄生蟲(chóng)的殺滅作用卻還沒(méi)有報(bào)道。
小瓜蟲(chóng)是幾乎可以感染所有淡水和海水魚(yú)類的重要體外寄生蟲(chóng)，給水產(chǎn)業(yè)造成了巨大的危害。而治療這種寄生蟲(chóng)最有效的藥物是硝酸亞汞和孔雀石綠，而這兩種藥物均具有致癌等作用，故而已被禁用。隨著這兩種藥物的禁用，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)這種寄生蟲(chóng)的防治主要采用甲醛、硫酸銅、高錳酸鉀、溴硝醇等，但是這些藥物對(duì)小瓜蟲(chóng)沒(méi)有顯著的療效，同時(shí)長(zhǎng)期使用帶來(lái)了藥物殘留、環(huán)境污染、耐藥性等問(wèn)題，因而急需對(duì)小瓜蟲(chóng)有特效的藥物。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供單寧酸的新用途，即在殺滅和預(yù)防水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)中的應(yīng)用。
進(jìn)一步，單寧酸在殺滅和預(yù)防水產(chǎn)動(dòng)物體外淡水小瓜蟲(chóng)和海水刺激隱核蟲(chóng)中的應(yīng)用。
更進(jìn)一步，在殺滅和預(yù)防淡水魚(yú)類體外小瓜蟲(chóng)和海水魚(yú)類刺激隱核蟲(chóng)中的應(yīng)用。
進(jìn)一步，單寧酸在制備殺滅和預(yù)防水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)藥物中的應(yīng)用。
進(jìn)一步，單寧酸在制備殺滅和預(yù)防水產(chǎn)動(dòng)物體外小瓜蟲(chóng)和海水魚(yú)類刺激隱核蟲(chóng)藥物中的應(yīng)用。
進(jìn)一步，含單寧酸或以單寧酸為主成分的藥物在殺滅和預(yù)防水產(chǎn)動(dòng)物體外的小瓜蟲(chóng)和刺激隱核蟲(chóng)中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一目的是提供一種殺滅水產(chǎn)動(dòng)物體外小瓜蟲(chóng)的殺蟲(chóng)劑，包括下列重量百分比的原料：?jiǎn)螌幩?5-30％，表面活性劑5-10%，滲透劑5-10%，增效劑5-10%，其余為水。
作為優(yōu)選，所述溶解劑為水或二甲基亞砜或n,n-二甲基甲酰胺。
作為優(yōu)選，所述表面活性劑為吐溫-20或吐溫-80。
作為優(yōu)選，所述殺蟲(chóng)劑中還加入有甲殼素。
甲殼素的加入，有利于提高單寧酸的作用效果，延長(zhǎng)殺蟲(chóng)劑的作用時(shí)長(zhǎng)。
本發(fā)明還提供一種殺滅水產(chǎn)動(dòng)物體外小瓜蟲(chóng)的殺蟲(chóng)劑的制備方法，其特征在于，
1）按所述重量份稱取單寧酸、表面活性劑、增效劑、滲透劑、溶解劑，備用；
2）將溶解劑加入單寧酸中，并攪拌至單寧酸完全溶解；
3）將表面活性劑加入步驟2）所得的混合溶液中攪拌均勻；
4）將增效劑、滲透劑和溶劑加入到步驟3）所得的混合溶液中，攪拌均勻，即得殺蟲(chóng)劑。
上述殺蟲(chóng)劑的使用方法及使用量：用水稀釋后潑灑于養(yǎng)殖塘中，使用劑量為2.0-4.0ml/m3。
本發(fā)明采用單寧酸，毒性小，對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物無(wú)毒害、殘留少；利用特定溶解劑及溶劑，溶解效果好，并且溶解劑可以協(xié)助殺蟲(chóng)劑進(jìn)入小瓜蟲(chóng)體內(nèi)，對(duì)小瓜蟲(chóng)的殺滅效果顯著；殺蟲(chóng)劑的制備簡(jiǎn)單、使用方便，生產(chǎn)成本低。
附圖說(shuō)明
附圖1中：a為單寧酸處理6小時(shí)后的小瓜蟲(chóng)包囊；b為正常分裂的包囊。
具體實(shí)施方式
為了更清楚的理解本發(fā)明以及本發(fā)明藥劑的藥效，以下通過(guò)發(fā)明人給出的依本發(fā)明技術(shù)方案所完成的具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述，這些僅是本發(fā)明較好的實(shí)施例，但不限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例1：
稱取單寧酸25g，在水中攪拌溶解，稱取表面活性劑吐溫-2010g，稱取滲透劑10g，稱取增效劑5克，加入剩余量的水混合攪拌均勻即得殺蟲(chóng)劑。
實(shí)施例2：
稱取單寧酸30g，在水中攪拌溶解，稱取表面活性劑吐溫-205g，稱取滲透劑10g，稱取增效劑5克，加入剩余量的水混合攪拌均勻即得殺蟲(chóng)劑。
實(shí)施例3：
稱取單寧酸28g，在水中攪拌溶解，稱取表面活性劑吐溫-2010g，稱取滲透劑10g，稱取增效劑5克，加入剩余量的水混合攪拌均勻即得殺蟲(chóng)劑。
實(shí)施例4：
稱取單寧酸25g，在30毫升二甲基亞砜中攪拌溶解，稱取表面活性劑吐溫-2010g，稱取滲透劑10g，稱取增效劑5克，甲殼素0.1克，加入剩余量的水混合攪拌均勻即得殺蟲(chóng)劑。
上述實(shí)施例可以列舉很多，再此不一一列舉，從申請(qǐng)人所做的大量實(shí)驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)證明，只要是按照本發(fā)明的技術(shù)方案的參數(shù)范圍選擇，即可制備出達(dá)到本發(fā)明目的的水產(chǎn)動(dòng)物小瓜蟲(chóng)和刺激隱核蟲(chóng)的殺蟲(chóng)劑。
上述殺蟲(chóng)劑可直接潑灑于池塘中，以池塘水量為參考，使用劑量為2.0-4.0ml/m3均可。
以下是本發(fā)明的藥效分別對(duì)小瓜蟲(chóng)的試驗(yàn)：
1材料與方法
1.1試驗(yàn)魚(yú)
嚴(yán)重感染小瓜蟲(chóng)的金魚(yú)（來(lái)自浙江省淡水水產(chǎn)研究所苗種基地。隨機(jī)選取10尾魚(yú)，取全鰓鏡檢觀察統(tǒng)計(jì)鰓上小瓜蟲(chóng)數(shù)量，試驗(yàn)魚(yú)小瓜蟲(chóng)感染率為100%，每尾魚(yú)平均感染小瓜蟲(chóng)約110個(gè)。
試驗(yàn)用藥為按照實(shí)施例1的殺蟲(chóng)劑。
1.2體外殺蟲(chóng)試驗(yàn)
將嚴(yán)重感染小瓜蟲(chóng)的金魚(yú)放入燒杯中，待小瓜蟲(chóng)游出后，用吸管將成熟小瓜蟲(chóng)收集放入平皿中，一部分蟲(chóng)體用于小瓜蟲(chóng)幼蟲(chóng)的培養(yǎng)，一部分用于包囊的收集。
1.2.1對(duì)小瓜蟲(chóng)幼體的體外殺蟲(chóng)試驗(yàn)
試驗(yàn)在24孔細(xì)胞培養(yǎng)板上進(jìn)行，于每個(gè)細(xì)胞孔中加入約2ml不同濃度的殺蟲(chóng)劑（0.5、1.0、1.5、2.0和2.5ml/m3）和約100個(gè)小瓜蟲(chóng)幼蟲(chóng)，于用藥后15min、1h、2h、3h、4h鏡檢觀察一次，4h后統(tǒng)計(jì)各孔的小瓜蟲(chóng)死亡率。試驗(yàn)設(shè)置和充分暴氣自然水對(duì)照組，每組試驗(yàn)重復(fù)三次。
小瓜蟲(chóng)死亡判斷標(biāo)準(zhǔn)：蟲(chóng)體纖毛不運(yùn)動(dòng)，胞質(zhì)不流動(dòng)，胞膜破裂，細(xì)胞核破碎。
1.2.2對(duì)小瓜蟲(chóng)包囊的體外殺蟲(chóng)試驗(yàn)
試驗(yàn)在24孔細(xì)胞培養(yǎng)板上進(jìn)行，于每個(gè)細(xì)胞孔中加入約2ml不同濃度的殺蟲(chóng)劑（2.0、2.5、3.0、3.5、4.0和4.5ml/m3）和30個(gè)小瓜蟲(chóng)包囊，于用藥后4h鏡檢觀察一次，4h后統(tǒng)計(jì)各孔的小瓜蟲(chóng)包囊死亡率。試驗(yàn)設(shè)置充分暴氣自然水對(duì)照組，每組試驗(yàn)重復(fù)三次。
小瓜蟲(chóng)包囊死亡判斷標(biāo)準(zhǔn)：包囊未分裂或包囊未孵出幼蟲(chóng)。
1.3體內(nèi)殺滅小瓜蟲(chóng)試驗(yàn)
在一個(gè)體積為1m3的水泥池中放入120尾健康未感染任何寄生蟲(chóng)的草魚(yú)，暫養(yǎng)一周后，放入600000個(gè)小瓜蟲(chóng)幼蟲(chóng)進(jìn)行感染，感染24h后，將感染有小瓜蟲(chóng)的草魚(yú)進(jìn)行分組，每組10尾魚(yú)，并放入100l的魚(yú)缸中。根據(jù)體外殺蟲(chóng)試驗(yàn)設(shè)置殺蟲(chóng)劑的殺蟲(chóng)試驗(yàn)濃度2.0、4.0和6.0ml/m3。于體積為80cm×60cm×40cm的玻璃缸內(nèi)盛入充分曝氣的自然水，ph7.0～7.5，水溫25±1℃。按照設(shè)定好的濃度向水體中加入不同濃度的殺蟲(chóng)劑，并攪拌均勻，并在第3天和第5天，每個(gè)試驗(yàn)組重新加換新的殺蟲(chóng)劑。
試驗(yàn)第5天時(shí)，每個(gè)濃度組取出3尾草魚(yú)，并放入燒杯中，按照體外殺蟲(chóng)試驗(yàn)的方法收集包囊，并觀察包囊的死亡和分裂情況。
試驗(yàn)第10天，將所有組內(nèi)的草魚(yú)取出，全鰓制片、鏡檢，統(tǒng)計(jì)每尾草魚(yú)在鰓部小瓜蟲(chóng)存活數(shù)量，計(jì)算平均殺蟲(chóng)率。
殺蟲(chóng)率(%)=(對(duì)照組的小瓜蟲(chóng)平均存活數(shù)量－試驗(yàn)組的小瓜蟲(chóng)平均存活數(shù)量)/對(duì)照組的小瓜蟲(chóng)平均存活數(shù)量×100%
魚(yú)平均死亡率(%)=(投放的魚(yú)數(shù)量-鏡檢時(shí)的魚(yú)存活數(shù)量)/投放的魚(yú)數(shù)量×100%
1.4.單寧酸殺蟲(chóng)劑對(duì)草魚(yú)的急性毒性試驗(yàn)
試驗(yàn)在體積為80l的玻璃缸中進(jìn)行，每個(gè)缸中放置健康的草魚(yú)10尾，并加入濃度為20.0、25.0、30.0、35.0、40.0和45.0ml/m3殺蟲(chóng)劑，48h后統(tǒng)計(jì)草魚(yú)死亡數(shù)量，并計(jì)算單寧酸對(duì)草魚(yú)的半致死濃度。每個(gè)濃度組做3個(gè)重復(fù)，試驗(yàn)設(shè)置一個(gè)對(duì)照組。
2結(jié)果
試驗(yàn)數(shù)據(jù)用spss16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，所有參數(shù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±sd)表示。
2.1體外殺小瓜蟲(chóng)試驗(yàn)
單寧酸殺蟲(chóng)劑對(duì)小瓜蟲(chóng)幼蟲(chóng)的體外殺滅作用見(jiàn)附圖1，由附圖1可知：?jiǎn)螌幩嶙饔?小時(shí)后，包囊基本無(wú)分裂，嚴(yán)重影響包囊孵化。
單寧酸殺蟲(chóng)劑對(duì)小瓜蟲(chóng)包囊的體外殺滅作用見(jiàn)表1，由表1可知：?jiǎn)螌幩釟⑾x(chóng)劑在濃度為4.5ml/m3包囊未分裂，也未孵出幼蟲(chóng)，其對(duì)包囊的殺蟲(chóng)率為100%。其濃度為4.0、3.5、3.0及2.5ml/m3時(shí)對(duì)包囊的殺滅率分別為93.3%、83.3%和53.3%，而2.0ml/m3濃度組對(duì)包囊基本沒(méi)有作用，全部包囊均孵化出來(lái)。
2.2單寧酸殺蟲(chóng)劑的體內(nèi)殺蟲(chóng)試驗(yàn)
單寧酸殺蟲(chóng)劑對(duì)寄生于草魚(yú)上的體內(nèi)殺蟲(chóng)試驗(yàn)結(jié)果如表2，由表2可知：?jiǎn)螌幩釟⑾x(chóng)劑對(duì)小瓜蟲(chóng)具有較強(qiáng)的殺滅作用，使用藥物后，草魚(yú)體表和鰓上的小瓜蟲(chóng)數(shù)量明顯減少，且其掉落后的包囊的幼蟲(chóng)孵化率明顯減少。當(dāng)其濃度為6.0ml/m3時(shí)，草魚(yú)的死亡率為30.0%，其鰓上和鰭條的小瓜蟲(chóng)數(shù)為163.5±44.6。而對(duì)照組的草魚(yú)死亡率為100%，鰓和鰭條上小瓜蟲(chóng)的數(shù)量為895.6±187.6。結(jié)果表明單寧酸殺蟲(chóng)劑對(duì)感染有小瓜蟲(chóng)的試驗(yàn)魚(yú)具有較強(qiáng)的保護(hù)作用。
2.3單寧酸殺蟲(chóng)劑對(duì)草魚(yú)的急性毒性試驗(yàn)
濃度為20.0mgl-1單寧酸殺蟲(chóng)劑用藥48h后草魚(yú)死亡率為0，且草魚(yú)活性正常，也未見(jiàn)異常反應(yīng)。濃度為45.0mgl-1單寧酸殺蟲(chóng)劑用藥4h后草魚(yú)即出現(xiàn)呼吸急促，跳躍等異常反應(yīng)，48h后草魚(yú)全部死亡。單寧酸殺蟲(chóng)劑對(duì)草魚(yú)的48hld50為28.6ml/m3（其95%置信區(qū)間為26.5-30.1ml/m3）。