技術領域：
本發(fā)明涉及一種中藥制劑及其制備方法，特別涉及一種滋補強壯、鎮(zhèn)靜安神的中藥制劑腦心舒口服液及其制備方法。
背景技術：
：
腦心舒口服液為一種已經上市的滋補強壯、鎮(zhèn)靜安神的中成藥制劑。用于身體虛弱，心神不安，失眠多夢，神經衰弱，頭痛眩暈，屬上述證候者，其配方如下：
(1000ml處方量)
其制備方法如下：
蜜環(huán)菌濃縮液工藝：
將60％體積的培養(yǎng)基置發(fā)酵罐中，隔水加熱滅菌30分鐘，用壓差法接三級種子于種子罐中，26-28℃培養(yǎng)4-6天，轉入發(fā)酵罐中，26-28℃繼續(xù)培養(yǎng)6-7天，待發(fā)酵液變?yōu)樽虾稚沙碜兿?，部分菌絲開始自溶，菌絲顆粒變碎，ph值降至5.20-5.60，罐內亮度開始減弱，即可出罐。將經過發(fā)酵的蜜環(huán)菌發(fā)酵培養(yǎng)液繼續(xù)濃縮至相對密度1.030-1.035(20℃)，即得蜜環(huán)菌濃縮液。
60l種子罐培養(yǎng)基：食用麥麩200g、食用大豆粕200g、淀粉100g、蔗糖100g、蛋白胨100g、果葡糖漿100g、大豆油100ml、硫酸鎂20g、磷酸二氫鉀20g。取食用麥麩和食用大豆粕加5倍量水浸泡30-60分鐘，加熱煮沸1小時，過濾，冷卻備用。在食用麥麩和食用大豆粕提取液里加其他原料。其他按比例增加。
發(fā)酵培養(yǎng)條件控制：通入壓縮空氣，通氣量為1:0.3-1:0.5v/v.min，培養(yǎng)溫度為26-28℃，培養(yǎng)周期為4-6天。隨時檢查罐內壓力(0.4-0.5×105pa)、溫度(26-28℃)、酸堿度(60lph值為6.20-6.60、200lph值為5.80-6.20、2000lph值為5.20-5.60)
成藥工藝：
取蜂蜜450g加熱煉制(90-100℃)，濾過，放冷，與研磨好的蜂王漿混勻，再加入蜜環(huán)菌濃縮液、苯甲酸鈉3g及香精的乙醇液，混勻，調整總量至1000ml，攪勻，濾過，即得。
現有技術制備的蜜環(huán)菌濃縮液，發(fā)酵收率低，含有多種多肽類雜質成分難以去除，如果去除，會損耗大量資源，造成成本升高，資源浪費。本發(fā)明對蜜環(huán)菌濃縮液的制備方法進行了研究，得到一種新的制備方法，經過檢測，其中多肽雜質成分下降，有效成分n6-(5-羥基-2-吡啶基甲基氨基)-9-β-嘌呤核苷的含量大大提高。
技術實現要素：
本方提供一種蜜環(huán)菌新的發(fā)酵提取方法，所述方法包括如下步驟：
步驟1，一級發(fā)酵
培養(yǎng)基配方：食用麥麩200g、食用大豆粕200g、淀粉100g、蔗糖100g、蛋白胨100g、果葡糖漿100g、大豆油100ml、磷酸二氫鉀40g、硫酸鎂20g，海藻酸鈉5g；
培養(yǎng)基的制備：食用麥麩和食用大豆粕加5倍量水浸泡30-60分鐘，加熱煮沸1小時，過濾，冷卻，加入上述其他原料，攪拌均勻；
培養(yǎng)方法：加水37l-39l于0.1-0.2mpa、121℃滅菌40分鐘，壓差法將蜜環(huán)菌接種于60l種子罐中；通入空氣，通氣量為1:0.3-1:0.5v/v.min，持續(xù)4-6天，壓力0.4-0.5×105pa、溫度26-28℃、ph值為6.20-6.60；得到蜜環(huán)菌一級發(fā)酵培養(yǎng)液；
步驟2，二級發(fā)酵
培養(yǎng)基配方：食用麥麩600g、食用大豆粕600g、淀粉300g、蔗糖300g、蛋白胨300g、果葡糖漿300g、大豆油300ml、磷酸二氫鉀120g、硫酸鎂60g、海藻酸鈉15g；
培養(yǎng)基的制備：食用麥麩和食用大豆粕加5倍量水浸泡30-60分鐘，加熱煮沸1小時，過濾，冷卻，加入上述其他原料，攪拌均勻；
培養(yǎng)方法：加水70l-80l于0.1-0.2mpa、121℃滅菌40分鐘，壓差法將蜜環(huán)菌接種于200l發(fā)酵罐中；通入空氣，通氣量1:0.3-1:0.5v/v.min，持續(xù)4-6天，壓力0.4-0.5×105pa、溫度26-28℃、ph值為5.80-6.20；得到蜜環(huán)菌二級發(fā)酵培養(yǎng)液；
步驟3，三級發(fā)酵
培養(yǎng)基配方：食用麥麩7.50kg、食用大豆粕7.50kg、淀粉3.75kg、蔗糖3.75kg、蛋白胨3.75kg、果葡糖漿3.75kg、大豆油3750ml、磷酸二氫鉀1500g、硫酸鎂750g、海藻酸鈉200g；
培養(yǎng)基的制備：食用麥麩和食用大豆粕加5倍量水浸泡30-60分鐘，加熱煮沸1小時，過濾，冷卻，加入上述其他原料，攪拌均勻；
培養(yǎng)方法：加水1000l-1100l于0.1-0.2mpa、121℃滅菌40分鐘，壓差法將步驟2得到的蜜環(huán)菌二級發(fā)酵培養(yǎng)液接種于2000l發(fā)酵罐，通氣量1:0.3-1:0.5v/v.min，溫度為26-28℃，持續(xù)6-8天，壓力0.4-0.5×105pa、ph值為5.20-5.60，待發(fā)酵液變?yōu)樽虾稚?，由稠變稀，部分菌絲開始自溶，菌絲顆粒變碎，ph值降至5.20左右，罐內亮度開始減弱，即可進行下一步；
步驟4，發(fā)酵液的處理
滅活：121℃0.10-0.12mpa滅活40分鐘；
濃縮過濾：發(fā)酵液濃縮至相對密度為1.030—1.035﹙20℃檢測﹚，濃縮時間為1-2小時，過濾，即得蜜環(huán)菌三級發(fā)酵濃縮液；
步驟5，取蜂蜜450g加熱煉制，濾過，放冷，與研磨好的蜂王漿混勻，再加入步驟4得到的蜜環(huán)菌濃縮液600g,苯甲酸鈉3g及香精的乙醇液，混勻，調整總量至1000ml，攪勻，濾過，即得。
以下通過試驗數據進一步說明本發(fā)明的有益效果：
1、鎮(zhèn)痛作用
考察大鼠對熱板所致疼痛的影響即表現為舔足次數。分別取相同周齡、體重約為300g大鼠40只，隨機分為4組，分別為空白組(飲用水)、陽性對照組(口服阿司匹林)及本發(fā)明實施例1組，現有技術組。連續(xù)給藥五天，每日兩次。末次給藥后利用熱板測痛儀60℃分別測量小鼠給藥后舔后足的次數，結果如下：
大鼠對熱板所致疼痛的影響
從上表可知本發(fā)明組可明顯減少大鼠舔后足的次數，具有顯著的鎮(zhèn)痛作用,并且其作用優(yōu)于現有技術組。
2、防治腦缺血作用：
考察小鼠對腦缺血的影響，分別取相同周齡、體重約為50g小鼠40只，隨機分為4組，分別為空白組(飲用水)、陽性對照組(口服血塞通)及本發(fā)明實施例1組，現有技術組。連續(xù)給藥十天，每日一次。末次給藥2小時后將小鼠斷頭，記錄小鼠自斷頭后張嘴次數，結果如下：
小鼠斷頭后張嘴次數
從上表可知本發(fā)明組明顯增加小鼠斷頭后張嘴喘息次數，延長其存活時間,并且其作用優(yōu)于現有技術組。
3、蜜環(huán)菌濃縮液成分比較：
本發(fā)明的優(yōu)點如下：
1、本發(fā)明采用三級發(fā)酵法，確保菌株復蘇得到單一純化、穩(wěn)定生命力旺盛的菌株；
2、本發(fā)明采用三級發(fā)酵法制備高產量蜜環(huán)菌濃縮液，明確了培養(yǎng)基的組成及比例。三級發(fā)酵法每一級發(fā)酵培養(yǎng)基量及所控制ph值均不同，菌株接種量為15％，生成菌株發(fā)酵液的同時能最優(yōu)化培養(yǎng)基量節(jié)約成本；
3、本發(fā)明培養(yǎng)基用蛋白胨為菌株生長所需最好的氮源，其他成分如麥麩、食用大豆粕、淀粉等來源廣泛，價格低廉環(huán)保的同時大大降低了生產成本，以此得到含量更高，多肽雜質少，藥效作用更為顯著的濃縮液；
4、液體發(fā)酵相比于固體發(fā)酵液體發(fā)酵具有周期短,成本低、產量大、適于工廠化生產等顯著優(yōu)點。
具體實施方式：
以下通過實施例進一步說明本發(fā)明。
實施例1、
一種蜜環(huán)菌新的發(fā)酵提取方法，所述方法包括如下步驟：
步驟1，一級發(fā)酵
培養(yǎng)基配方：食用麥麩200g、食用大豆粕200g、淀粉100g、蔗糖100g、蛋白胨100g、果葡糖漿100g、大豆油100ml、磷酸二氫鉀40g、硫酸鎂20g，海藻酸鈉5g；
培養(yǎng)基的制備：食用麥麩和食用大豆粕加5倍量水浸泡30-60分鐘，加熱煮沸1小時，過濾，冷卻，加入上述其他原料，攪拌均勻；
培養(yǎng)方法：加水37l-39l于0.1-0.2mpa、121℃滅菌40分鐘，壓差法將蜜環(huán)菌接種于60l種子罐中；通入空氣，通氣量1:0.3-1:0.5v/v.min，持續(xù)4-6天，壓力0.4-0.5×105pa、溫度26-28℃、ph值為6.20-6.60；得到蜜環(huán)菌一級發(fā)酵培養(yǎng)液；
步驟2，二級發(fā)酵
培養(yǎng)基配方：食用麥麩600g、食用大豆粕600g、淀粉300g、蔗糖300g、蛋白胨300g、果葡糖漿300g、大豆油300ml、磷酸二氫鉀120g、硫酸鎂60g、海藻酸鈉15g；
培養(yǎng)基的制備：食用麥麩和食用大豆粕加5倍量水浸泡30-60分鐘，加熱煮沸1小時，過濾，冷卻，加入上述其他原料，攪拌均勻；
培養(yǎng)方法：加水70l-80l于0.1-0.2mpa、121℃滅菌40分鐘，壓差法將蜜環(huán)菌接種于200l發(fā)酵罐中；通入空氣，通氣量1:0.3-1:0.5v/v.min，持續(xù)4-6天，壓力0.4-0.5×105pa、溫度26-28℃、ph值為5.80-6.20；得到蜜環(huán)菌二級發(fā)酵培養(yǎng)液；
步驟3，三級發(fā)酵
培養(yǎng)基配方：食用麥麩7.50kg、食用大豆粕7.50kg、淀粉3.75kg、蔗糖3.75kg、蛋白胨3.75kg、果葡糖漿3.75kg、大豆油3750ml、磷酸二氫鉀1500g、硫酸鎂750g、海藻酸鈉200g；
培養(yǎng)基的制備：食用麥麩和食用大豆粕加5倍量水浸泡30-60分鐘，加熱煮沸1小時，過濾，冷卻，加入上述其他原料，攪拌均勻；
培養(yǎng)方法：加水1000l-1100l于0.1-0.2mpa、121℃滅菌40分鐘，壓差法將步驟2得到的蜜環(huán)菌二級發(fā)酵培養(yǎng)液接種于2000l發(fā)酵罐，通氣量1:0.3-1:0.5v/v.min，溫度為26-28℃，持續(xù)6-8天。壓力0.4-0.5×105pa、ph值為5.20-5.60，待發(fā)酵液變?yōu)樽虾稚?，由稠變稀，部分菌絲開始自溶，菌絲顆粒變碎，ph值降5.20左右，罐內亮度開始減弱，即可進行下一步；
步驟4，發(fā)酵液的處理
滅活：121℃0.10-0.12mpa滅活40分鐘；
濃縮過濾：發(fā)酵液濃縮至相對密度為1.030-1.035﹙20℃檢測﹚，濃縮時間為1-2小時，過濾，即得蜜環(huán)菌三級發(fā)酵濃縮液。
實施例2
腦心舒口服液的制備：
取蜂蜜450g加熱煉制(90-100℃)，濾過，放冷，與研磨好的蜂王漿混勻，再加入蜜環(huán)菌濃縮液、苯甲酸鈉3g及香精的乙醇液，混勻，調整總量至1000ml，攪勻，濾過，即得。