本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及dim、或dfmo、或dim與dfmo聯(lián)合使用在制備預防和治療癌癥（尤其是食管癌）藥物中的應(yīng)用，尤其是在食管癌的預防及臨床治療中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

癌癥已成為中國首位死亡原因，是嚴重的公共衛(wèi)生問題。據(jù)統(tǒng)計結(jié)果顯示，中國食管癌也是最常見的癌癥類型，也是最多見的癌癥死亡原因。食管癌是常見的一種惡性腫瘤疾病，據(jù)相關(guān)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計表明，食管癌的死亡率位居我國惡性腫瘤死亡率的第二位，其中河北省的食管癌比較嚴重，位居惡性腫瘤死亡率第一位。

癌癥是由環(huán)境、飲食以及生活方式與遺傳因素協(xié)同作用的結(jié)果，由致癌物作用結(jié)合細胞遺傳因素導致細胞遺傳基因突變而逐漸發(fā)展為癌。癌癥早期的臨床癥狀不明顯，當臨床癥狀較為突出時，患者的病情已經(jīng)處于中期或者晚期。因此，選擇安全有效的預防和治療癌癥的藥物和方法對于改善患者的預后及生活質(zhì)量都具有重要意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種dim、或dfmo、或dim與dfmo聯(lián)合使用在制備預防和治療癌癥（尤其是食管癌）藥物中的應(yīng)用，用于癌癥的臨床預防和治療、及輔助治療。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了dim、或dfmo、或dim與dfmo聯(lián)合使用在制備預防和治療癌癥藥物中的應(yīng)用。

進一步的，本發(fā)明提供了dim和/或dfmo在制備預防和治療食管癌藥物中的應(yīng)用。即本發(fā)明提供了dim、或dfmo、或dim與dfmo聯(lián)合用藥在食管癌的預防、術(shù)后復發(fā)的預防及臨床治療中的應(yīng)用。

目前，未曾見dim、或dfmo、或dim+dfmo聯(lián)合用于臨床治療腫瘤的相關(guān)報道。通過本發(fā)明的相關(guān)實驗可證明：dim與dfmo聯(lián)合使用時，可增強癌癥的治療效果。具體的，dim的劑量范圍為50-200mg/kg，dfmo劑量范圍為0.5-4%（w/v）。其中，進一步優(yōu)選，dim的劑量范圍為100mg/kg，dfmo劑量范圍為2%（w/v）。

dim（化學名稱：3，3'-二吲哚甲烷，3,3'-diindolylmethane，二聚吲哚）分子式：c17h14n2，分子量：246.3。dfmo（化學名稱：依氟鳥氨酸、二氟甲基鳥氨酸；eflornithine）分子式：c6h12f2n2o2，分子量：182.2。均可直接購買普通市售產(chǎn)品。

dim（cox2選擇性抑制劑）存在于十字花科植物，為indole-3-carbinol(i3c)的二聚體形式。研究表明在體內(nèi)體外dim均可以引起蛋白酶體介導的hdac1、2、3、8的降解，從而使p21和p27表達增加，最終引起g2期阻滯和凋亡。dim被報導可以通過影響egfr--nf-kb--cox2--pge2信號通路的活性，進而發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)。dfmo可以通過抑制鳥氨酸脫羧酶（odc），引起癌細胞內(nèi)rna和dna的合成受阻，進而發(fā)揮抗腫瘤作用。目前還未有研究涉及dim或dfmo或dim與dfmo聯(lián)合用于臨床治療食管癌腫瘤的相關(guān)報道。

本發(fā)明使用的pdx（patientderivedxenograft）模型是利用癌癥患者的癌組織在免疫缺陷小鼠身上建立的皮下移植瘤模型，依靠小鼠提供的微環(huán)境進行生長。該模型生物學穩(wěn)定，保持了原代腫瘤的特點，異種移植的模型可能是最接近目前人類癌癥特點。pdx模型減少了體外處理過程，能更好地保持患者臨床腫瘤組織的原有生物學特性和組織學特征，并且pdx模型取材于不同的患者，保留了患者腫瘤的異質(zhì)性，不僅可以檢測治療功效，也是符合癌癥生物學治療基本原則的一種工具和手段，還可以幫助測試新的抗腫瘤藥物的療效，同時也為腫瘤發(fā)生發(fā)展的機制研究提供了新的方法，為一對一的個體化抗癌治療提供了可能。

本發(fā)明驗證了dim，dfmo，dim+dfmo在利用人新鮮腫瘤組織接種于免疫缺陷scid小鼠皮下建立的人源化移植瘤模型（pdx）上有顯著的抗腫瘤生長效果，尤其是在預防和治療食管癌方面具有顯著的效果，能夠起到預防食管癌復發(fā)的效果。發(fā)明人通過dim，dfmo，dim+dfmo分別處理人源性食管癌腫瘤小鼠，當對照組腫瘤體積達到1500立方毫米以上，結(jié)束實驗時，發(fā)現(xiàn)dim，dfmo，dim+dfmo處理組小鼠的腫瘤體積與對照組比較明顯變小，具有顯著的統(tǒng)計學差異，且兩者聯(lián)合使用增效顯著，從而顯示了dim，dfmo，dim+dfmo在預防和治療食管癌上的顯著效果。通過給患者服用dim或dfmo或dim+dfmo聯(lián)合用藥在臨床上可有效預防和治療食管癌，在臨床預防及治療食管癌方面具有潛在應(yīng)用價值。

附圖說明

圖1至圖4為dim，dfmo，dim+dfmo在食管癌（編號：eg37p6）pdx小鼠模型上的腫瘤生長治療效果；其中，圖1為給藥期間小鼠體重變化趨勢圖；圖2為給藥期間小鼠腫瘤體積變化趨勢圖；圖3為實驗結(jié)束后處死小鼠，稱量出的腫瘤重量；圖4為對照組與給藥組的腫瘤圖片；

圖5至圖8為dim，dfmo，dim+dfmo在食管癌（編號：eg30p7）pdx小鼠模型上的腫瘤生長治療效果；其中，圖5為給藥期間小鼠體重變化趨勢圖；圖6為給藥期間小鼠腫瘤體積變化趨勢圖；圖7為實驗結(jié)束后處死小鼠，稱量出的腫瘤重量；圖8為對照組與給藥組的腫瘤圖片。

具體實施方式

以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步地詳細介紹，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此。

dim為環(huán)氧化酶-2（cyclooxygenase-2）cox-2抑制劑，dfmo為odc抑制劑，目前，未有研究表明dim，dfmo，dim+dfmo聯(lián)合應(yīng)用在治療食管癌上有效果。本發(fā)明主要特點在與使用了人源性異種移植模型。該模型保留了固有的基因和表型，是一種更接近人體腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程的模型，對個體化治療非常有意義的模型。本發(fā)明使用了兩例pdx模型，試驗結(jié)果表明dim，dfmo，dim+dfmo可以預防和治療人食管癌的異種腫瘤移植模型鼠上腫瘤的生長。

實施例

材料與方法。

1.材料。

1.1腫瘤組織

本發(fā)明使用了兩例人食管癌組織標本。兩種模型編號分別為eg37和eg30。eg37來源于河南省鄭州大學第一附屬醫(yī)院，男性，69歲。術(shù)后病理切片提示為：低分化，淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移，病理分期：t2n0m0iia。eg30來源于河南省鄭州大學第一附屬醫(yī)院，男性，73歲，病理分期：t3n0m0iia。本發(fā)明使用的eg37模型為第6代，eg30為第7代。

1.2實驗動物

本實施例中cb-17scid免疫缺陷小鼠購于北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司。許可證編號為：scxk(京)2012-0001。spf級，5-6周齡，體重17-19g。小鼠飼料購于北京科澳協(xié)力飼料有限公司。實驗動物飼養(yǎng)于中美（河南）荷美爾腫瘤研究院的動物設(shè)施內(nèi)，在恒溫（21-27℃）、恒濕（45%-50%）、新鮮空氣、除塵除菌的無特殊病原菌（spf級）飼養(yǎng)室條件下飼養(yǎng)，動物先放于有機塑料盒（蘇州市馮氏實驗動物設(shè)備有限公司）內(nèi)，再置于ivc系統(tǒng)飼養(yǎng)，每個飼養(yǎng)盒內(nèi)飼養(yǎng)3-4只動物，經(jīng)無菌處理的飼料供動物自由攝入，高溫消毒的墊料每三天更換一次，籠具及飲水每三天紫外線消毒一次，飲用無菌蒸餾水。更換飼養(yǎng)用品時嚴格遵循無菌原則操作。將實驗動物在12:12小時光照/黑暗循環(huán)下飼養(yǎng)，可以自由接近食物和水，環(huán)境溫度控制在21-27℃。

1.3試劑

實驗用0.4%戊巴比妥鈉（國藥集團化學試劑有限公司）：稱量0.2g戊巴比妥鈉溶解于50ml無菌蒸餾水中過濾。雙抗：青霉素和鏈霉素（華北制藥股份有限公司），兩者濃度均為500u/ml。生理鹽水500ml一瓶（辰欣藥業(yè)股份有限公司）。dim（sigma）。dfmo（武漢大華偉業(yè)醫(yī)藥化工有限公司）。

1.4儀器與器材：

海爾醫(yī)用低溫保存箱（青島海爾特種電器有限公司）；電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；thermo超凈工作臺；ivc飼養(yǎng)系統(tǒng)（蘇州市馮氏實驗動物設(shè)備有限公司）；眼科剪，手術(shù)鑷，無菌培養(yǎng)皿，手術(shù)刀，溶藥針，1ml注射器。

2.人食管癌免疫缺陷鼠種植瘤模型的建立

將新鮮腫瘤組織剔除壞死組織，剪切成體積為3立方毫米左右，移植于雌性小鼠的背部皮下。將小鼠放入小鼠ivc系統(tǒng)飼養(yǎng)。待腫瘤形成約15mm左右，無菌切除皮下腫瘤，選擇實性腫塊，取材剪成3立方毫米小塊，移植于另外小鼠即為傳代。頸椎脫臼處死小鼠，腫瘤周圍皮膚用75%酒精消毒。用溶藥針扎開一個小口，用鑷子撐開后取出腫瘤放到小鼠皮下。

用上述方法進行腫瘤傳代，至第三代小鼠，小鼠皮下移植瘤均出現(xiàn)且腫瘤大小差異不大。再移植至免疫缺陷小鼠皮下，傳三代。

分別記錄每一次皮下移植瘤小鼠腫瘤生長情況及成瘤率，皮下移植瘤等待腫瘤長到1.5mm時，取第四代小鼠皮下移植瘤標本，將組織10%甲醛固定，石蠟包埋，切片he染色。

3.實驗動物的治療研究

3.1dim，dfmo，dim+dfmo聯(lián)合應(yīng)用抑制人食管癌異種移植小鼠腫瘤生長；

接種后兩周后，小鼠背部腫瘤結(jié)節(jié)長到200立方毫米左右時開始分組，即按照腫瘤體積大小均勻分配小鼠至每組，每組分10只，分別是：溶劑對照組，dim組，dfmo組，dim+dfmo組，各組小鼠分別按照下述劑量自由飲用。每周兩次記錄小鼠體重以及腫瘤體積。當對照組小鼠腫瘤長到3000立方毫米左右時，終止實驗，取出腫瘤組織，稱量腫瘤重量以及拍照；

溶劑對照組：飲用無菌蒸餾水；

dim組：每天以100mg/kg灌胃dim；

dfmo組：每天以2%（w/v）dfmo自由飲用；

dim+dfmo組：每天以100mg/kg灌胃dim、2%（w/v）dfmo自由飲用。

實驗結(jié)果。

圖1至8為dim，dfmo，dim+dfmo聯(lián)合應(yīng)用在人食管癌pdx模型上對腫瘤的治療效果。

圖1顯示：與飲用蒸餾水的對照組相比，dim組，dfmo組，dim+dfmo組的小鼠體重從給藥第6天起有較明顯的下降。圖2顯示：dim組，dfmo組和dim+dfmo組抑制腫瘤生長效果明顯，dim+dfmo組在給藥第47天起小鼠腫瘤體積較對照組比有顯著差異p<0.05，第52天起dim+dfmo組與對照組相比較差異p<0.01；第57天起dim組，dfmo組較對照組比有顯著差異p<0.05。圖3可觀察到dim組，dfmo組和dim+dfmo組的腫瘤重量和對照組相比得到更明顯的抑制作用p<0.01。圖4小鼠腫瘤圖片可觀察到dim組，dfmo組，dim+dfmo組的腫瘤生長與對照組相比得到明顯抑制。由此得出dim，dfmo，dim+dfmo聯(lián)合應(yīng)用在食管癌（編號：eg37p6）pdx小鼠模型上的腫瘤生長治療效果很顯著。

圖5顯示：dim，dfmo，dim+dfmo組在給藥第21天起小鼠體重較對照組比有顯著差異p<0.01。圖6顯示：dim+dfmo組小鼠腫瘤體積在第36天及第43天起較對照組比有顯著差異p<0.05。從圖7腫瘤重量以及圖8小鼠腫瘤圖片可觀察到：dim+dfmo組與對照組相比，小鼠腫瘤生長得到抑制，p<0.05。由此得出，dim，dfmo，dim+dfmo（編號：eg30p7）對pdx小鼠模型上的腫瘤生長治療效果很顯著。

綜上可以看出：dim，dfmo，dim+dfmo聯(lián)合應(yīng)用均能夠抑制腫瘤（尤其是食管癌腫瘤）的生長，可用于臨床食管癌的預防和治療。