本發(fā)明涉及藥物組合物領(lǐng)域，具體涉及一種用于治療艾滋病的輔助用藥的藥物組合物及其制備方法。

背景技術(shù)：

艾滋病是一種危害性極大的傳染病，由感染艾滋病病毒(hiv病毒)引起。hiv是一種能攻擊人體免疫系統(tǒng)的病毒。它把人體免疫系統(tǒng)中最重要的cd4t淋巴細(xì)胞作為主要攻擊目標(biāo)，大量破壞該細(xì)胞，使人體喪失免疫功能。因此，人體易于感染各種疾病，并可發(fā)生惡性腫瘤，病死率較高。目前的現(xiàn)有醫(yī)藥中，缺乏可維持、提高或重建艾滋病患者的免疫系統(tǒng)的藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種用于治療艾滋病的輔助用藥的藥物組合物(以下，有時(shí)稱作“本發(fā)明的藥物組合物”)，本發(fā)明的藥物組合物具有提高對(duì)hiv的免疫能力、重建機(jī)體免疫系統(tǒng)的功效。

本發(fā)明的用于治療艾滋病的輔助用藥的藥物組合物，該藥物組合物含有下述成分：

如上所述的藥物組合物，優(yōu)選含有下述重量份的各成分：

進(jìn)一步優(yōu)選含有下述重量份的各成分：

還優(yōu)選含有下述重量份的各成分：

還優(yōu)選含有下述重量份的各成分：

如上所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、沖劑或口服液體制劑。

如上所述的用于治療艾滋病的輔助用藥的藥物組合物的制備方法，其特征在于，將各成分的中藥材經(jīng)水提或醇提后制成浸膏干粉，再加入藥物可接受的輔料，制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、沖劑或口服液體制劑。

如上所述的制備方法，其特征在于，所述水提是將各成分的中藥材用10-35倍量的水煎煮2-4次，每次1-6小時(shí)；所述醇提是將各成的中藥材用5-15倍量的濃度為30～90wt％的乙醇煎煮2-4次，每次1-6小時(shí)。

如上所述的制備方法，其特征在于，所述藥物可接受的輔料包括粘合劑、崩解劑、助流劑、增塑劑和/或稀釋劑。

如上所述的用于治療艾滋病的輔助用藥的藥物組合物的制備方法，其特征在于，

(1)將除靈芝以外的所述中藥材浸泡30-120分鐘備用；

(2)將除靈芝以外的所述已浸泡中藥材經(jīng)水提或醇提后制成提取液，30-90℃減壓濃縮至相對(duì)密度為1.10-1.58的浸膏；

(3)將靈芝粉碎成細(xì)粉，所述細(xì)粉為全部能通過(guò)五號(hào)篩并且能夠通過(guò)六號(hào)篩的粉末不少于95％；

(4)將步驟(3)得到的靈芝細(xì)粉加入到步驟(2)的浸膏中，再加入藥物可接受的輔料，制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、沖劑或口服液體制劑。

如上所述的制備方法，其特征在于，所述水提是將各成分的中藥材用10-35倍量的水煎煮2-4次，每次1-6小時(shí)；所述醇提是將各成的中藥材用5-15倍量的濃度為30～90wt％的乙醇煎煮2-4次，每次1-6小時(shí)。

如上所述的制備方法，其特征在于，所述藥物可接受的輔料包括粘合劑、崩解劑、助流劑、矯味劑、增塑劑和/或稀釋劑。

本發(fā)明還提供一種用于治療艾滋病的輔助用藥的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其采用高效液相色譜法測(cè)定待測(cè)試樣品中黃芩苷的含量。

如上所述的質(zhì)量控制方法，高效液相色譜法測(cè)定待測(cè)試樣品中黃芩苷的含量的色譜條件為：以體積比為30:70的乙腈-0.05％磷酸溶液為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。

如上所述的質(zhì)量控制方法，其具體包括下述步驟：

(1)取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，制成黃芩苷對(duì)照品溶液；

(2)取待測(cè)的治療艾滋病輔助用藥的藥物組合物適量，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置100ml的容量瓶中，加甲醇40ml，稱定重量，超聲提取30min，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，制成供試品溶液；

(3)另取適量缺少黃芩的陰性對(duì)照藥材，精密稱定，置100ml的容量瓶中，加甲醇40ml，稱定重量，超聲提取30min，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，制成缺黃芩的陰性對(duì)照溶液；

(4)以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以體積比為30:70的乙腈-0.05％的磷酸溶液為流動(dòng)相，設(shè)定流速為0.8ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，柱溫為28℃，理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)不低于2500；取黃芩苷對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μl，在280nm波長(zhǎng)下檢測(cè)。

本發(fā)明的藥物組合物，是在金元醫(yī)家李東垣《脾胃論》中所載補(bǔ)中益氣湯基礎(chǔ)上，根據(jù)艾滋病的病因、病機(jī)和臨床證候，結(jié)合現(xiàn)代中醫(yī)藥研究成果，按照中醫(yī)理法方藥的組方原則，篩選組合而成。本發(fā)明的藥物組合物用黃芪補(bǔ)中益氣，扶正培本，康艾強(qiáng)身，以為主藥；輔以靈芝益精補(bǔ)血，強(qiáng)健筋骨，固本強(qiáng)身。配黨參養(yǎng)陰生津，補(bǔ)氣益血；佐以魚腥草清熱化毒，祛毒除邪。合天花粉滋陰生津，瀉火排毒。伍黃芩清熱燥濕，涼血解毒。配柴胡疏理肝氣，透邪解郁；使以甘草益氣補(bǔ)中，清熱解毒，協(xié)調(diào)藥性。全方諸藥為伍，則氣、血雙補(bǔ)，毒、熱俱解，正氣得復(fù)，元?dú)獬溆?，而艾邪必袪。組方中黃芪、黨參、靈芝具有增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬能力，對(duì)機(jī)體各系統(tǒng)均具有正向調(diào)節(jié)和保護(hù)修復(fù)作用；魚腥草、天花粉、黃芩、柴胡、甘草具有較佳的抗病毒和抗菌作用，并可增強(qiáng)機(jī)體對(duì)hiv的免疫能力。該組方多年來(lái)在蘭州市肺科醫(yī)院感染科使用，作為艾滋病的輔助用藥，具有清熱祛邪、扶正固本之效，能夠在抑制hiv的同時(shí)，重建機(jī)體免疫體系。此外，顆粒劑具有吸收快，顯效迅速；劑量小，口感好；生產(chǎn)設(shè)備簡(jiǎn)單易操作；服用、攜帶、貯藏和運(yùn)輸方便的特點(diǎn)，中藥相對(duì)于西藥在安全性、經(jīng)濟(jì)性等方面具有優(yōu)勢(shì)。

附圖說(shuō)明

圖1是對(duì)照品溶液高效液相色譜圖。

圖2是供試品溶液高效液相色譜圖。

圖3是陰性對(duì)照溶液高效液相色譜圖。

具體實(shí)施方式

以下對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說(shuō)明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

一、用于治療艾滋病的輔助用藥的藥物組合物的制備及質(zhì)量控制

實(shí)施例1

稱量下述重量的各成分：黃芪30g、靈芝15g、黨參15g、魚腥草12g、天花粉12g、黃芩12g、柴胡12g、甘草9g。

將上述靈芝藥材粉碎，粉粹成可全部通過(guò)五號(hào)篩并且能夠通過(guò)六號(hào)篩的粉末不少于95％的細(xì)粉；其余黃芪等藥材加水浸泡1小時(shí)，分別以10倍、8倍、8倍水加熱回流提取三次，第一次1小時(shí)，第二次1小時(shí)，第三次0.5小時(shí)，合并濾液，60℃減壓濃縮成相對(duì)密度為1.20的浸膏，將其與靈芝細(xì)粉混勻，加入適量可溶性淀粉，制粒，干燥，整粒，制成顆粒劑。

實(shí)施例2

稱量下述重量的各成分：黃芪15g、靈芝10g、黨參10g、魚腥草8g、天花粉8g、黃芩7g、柴胡6g、甘草5g。

將上述靈芝藥材粉碎，粉粹成可全部通過(guò)五號(hào)篩并且能夠通過(guò)六號(hào)篩的粉末不少于95％的細(xì)粉；其余黃芪等藥材加水浸泡1小時(shí)，以15倍、10倍、10倍水加熱回流提取三次，第一次1小時(shí)，第二次2小時(shí)，第三次3小時(shí)，合并濾液，60℃減壓濃縮成相對(duì)密度為1.38的浸膏，將其與靈芝細(xì)粉混勻，加入適量可溶性淀粉，制粒，干燥，整粒，制成膠囊劑。

實(shí)施例3：

稱量下述重量的各成分：黃芪45g、靈芝20g、黨參20g、魚腥草18g、天花粉16g、黃芩17g、柴胡18g、甘草14g。

將上述靈芝藥材粉碎，粉粹成可全部通過(guò)五號(hào)篩并且能夠通過(guò)六號(hào)篩的粉末不少于95％的細(xì)粉；其余黃芪等藥材加水浸泡1小時(shí)，以3倍、5倍、5倍水加熱回流提取三次，第一次1小時(shí)，第二次1小時(shí)，第三次1小時(shí)，合并濾液，60℃減壓濃縮成相對(duì)密度為1.58的浸膏，將其與靈芝細(xì)粉混勻，干燥得到浸膏干粉，加入適量可溶性淀粉，硬脂酸鎂0.8g、滑石粉5g，制成片劑。

實(shí)施例4：

稱量下述重量的各成分：黃芪16g、靈芝16g、黨參16g、魚腥草13g、天花粉11g、黃芩13g、柴胡14g、甘草10g。

將上述八味中藥材粉碎成粗粉，過(guò)篩，混勻，用5倍量的乙醇(濃度70wt％)，煎煮2次，每次1小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮干燥得到浸膏干粉。加入蔗糖30g、香精20g，加水制成1000ml并調(diào)節(jié)ph值至7，搖勻，靜置12小時(shí)，過(guò)濾，灌裝，滅菌，制成口服液。

實(shí)施例5：

稱量下述重量的各成分：黃芪20g、靈芝15g、黨參20g、魚腥草15g、天花粉9g、黃芩9g、柴胡10g、甘草9g。

將上述八味中藥材粉碎成粗粉，過(guò)篩，混勻，用15倍量的水，煎煮3次，每次3小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液濃縮至適量，干燥得到浸膏干粉。浸膏干粉溶于純化水中，加單糖漿至1000ml，制成糖漿。

實(shí)施例6：對(duì)上述實(shí)施例1-5中制備得到的用于治療艾滋病的輔助用藥藥物組合物進(jìn)行質(zhì)量控制，該檢測(cè)步驟如下：

(1)取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，制成黃芩苷對(duì)照品溶液。

(2)取待測(cè)治療艾滋病的輔助用藥的藥物適量，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置100ml的容量瓶中，加甲醇40ml，稱定重量，超聲提取30min，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，制成供試品溶液；

(3)另取適量缺少黃芩的陰性對(duì)照藥材，精密稱定，置100ml的容量瓶中，加甲醇40ml，稱定重量，超聲提取30min，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，制成缺黃芩的陰性對(duì)照溶液；

(4)以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以體積比為30:70的乙腈-0.05％的磷酸溶液為流動(dòng)相，設(shè)定流速為0.8ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，柱溫為28℃，理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)不低于2500；取黃芩苷對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μl，在280nm波長(zhǎng)下檢測(cè)。

具體請(qǐng)參見圖1-圖3，其中，圖1是對(duì)照品溶液高效液相色譜圖。圖2是供試品(實(shí)施例1制得的藥物組合物)溶液高效液相色譜圖。圖3是陰性對(duì)照溶液高效液相色譜圖。

結(jié)果表明，陰性對(duì)照在與黃芩苷對(duì)照品保留時(shí)間相同位置上無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明其它藥材對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)影響，同時(shí)上述實(shí)施例1-5中制備得到的用于治療艾滋病的輔助用藥藥物組合物中黃芩苷的含量測(cè)定結(jié)果的范圍為5.31-5.82mg/g之間，該藥物組合物具有質(zhì)量可控性。

在上述測(cè)定過(guò)程中，對(duì)于系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)包括如下步驟：

(1)線性關(guān)系的考察

取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含1.06mg的溶液，搖勻，作為儲(chǔ)備液。精密吸取上述儲(chǔ)備溶液0.2ml、0.6ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml、1.6ml、2.0ml至10ml容量瓶中，用乙腈-0.05％磷酸水(30:70)稀釋至刻度，微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，各進(jìn)樣10μl，測(cè)定峰面積，以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)(y)，濃度為橫坐標(biāo)(x)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程y＝9e+07x–29273(r＝0.9996)，線性范圍為0.212～2.12μg。

(2)精密度試驗(yàn)精密吸取同一對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定色譜峰的峰面積，黃芩苷的rsd為0.31％，結(jié)果表明，精密度良好。

(3)穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一對(duì)照品溶液10μl，分別于0、2、4、6、12小時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定色譜峰的峰面積，得黃芩苷峰面積的rsd值為0.82％，結(jié)果表明在0～12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

(4)重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)待測(cè)治療艾滋病的輔助用藥藥物組合物適量，研細(xì)，取約0.5g的5份樣品，分別精密稱定，按照樣品制備方法進(jìn)行樣品處理，分別進(jìn)樣測(cè)定，得到黃芩苷的rsd為1.45％，結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性較好。

(5)回收率試驗(yàn)取已知含量的同一批號(hào)待測(cè)治療艾滋病的輔助用藥藥物組合物適量，研細(xì)，取約0.25g，精密稱定，加入一定量的黃芩苷對(duì)照品，依法測(cè)定，根據(jù)色譜峰峰面積值，計(jì)算回收率，得到rsd為1.19％，見表5。結(jié)果表明，本法回收率良好。

表5回收率結(jié)果

(6)樣品的測(cè)定

取實(shí)施例1-3待測(cè)治療艾滋病的輔助用藥藥物組合物適量，研細(xì)，各取約0.5g，精密稱定，置100ml的容量瓶中，加甲醇40ml，稱定重量，超聲提取30min，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，制成供試品溶液，精密吸取續(xù)濾液10μl進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定黃芩苷的含量，結(jié)果見表6。

表6樣品含量測(cè)定結(jié)果(n＝3)

二、藥效實(shí)驗(yàn)

增強(qiáng)免疫力藥效設(shè)計(jì)

(一)本發(fā)明藥物組合物對(duì)抗運(yùn)動(dòng)性疲勞作用的實(shí)驗(yàn)研究

1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康成年昆明種小鼠48只，體重18～22g，雌雄不限。

2方法與結(jié)果

2.1實(shí)驗(yàn)方法

2.1.1動(dòng)物分組

將48只小鼠隨機(jī)分為三組，實(shí)驗(yàn)組、陽(yáng)性對(duì)照組、空白對(duì)照組，每組16只。實(shí)驗(yàn)組灌胃本發(fā)明藥物組合物3.93g/(kg·d)，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃紅景天口服液(北京紅景天技術(shù)開發(fā)有限公司)1ml/d，空白對(duì)照組灌胃蒸餾水10ml/(kg·d)。每組連續(xù)給藥28天。

2.1.2對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響：末次灌胃0.5h后，將分組后的小鼠尾根部負(fù)荷5％體重的鉛塊，按組別放入泳池中游泳(水深30cm,溫度(25±1.0)℃，記錄小鼠入水游泳至沉入水底不再浮起所需的時(shí)間。

2.1.3對(duì)小鼠常壓缺氧能力的影響：按照上述分組要求，同樣選取三組小鼠，末次灌胃0.5h后，將小鼠置于加有5％鈉石灰的250ml的磨口瓶中，瓶口用凡士林涂封，記錄小鼠自進(jìn)瓶開始至死亡所經(jīng)歷的時(shí)間。

2.1.4對(duì)小鼠hb含量的影響：按照以上分組要求，選取三組小鼠，末次灌胃0.5h后，摘取小鼠眼球采血，應(yīng)用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀(邁瑞bc-5000，廣東)測(cè)定每只小鼠hb含量。

2.1.5對(duì)運(yùn)動(dòng)后小鼠血乳酸含量的影響：選取三組小鼠，末次灌胃0.5h后，采血(在眼內(nèi)眥靜脈叢處)20μl，應(yīng)用血乳酸分析儀(ysi1500sport，美國(guó))測(cè)定血乳酸含量。然后在不負(fù)重的情況下，放入泳池中游泳[水溫(30±1.0)℃]，10min后取出，立即采血測(cè)定血乳酸含量，休息20min后再次采血測(cè)定血乳酸含量。對(duì)比三組實(shí)驗(yàn)小鼠運(yùn)動(dòng)前、運(yùn)動(dòng)后即刻和運(yùn)動(dòng)結(jié)束20min后體內(nèi)血乳酸含量的變化。

2.1.6對(duì)小鼠血bun的影響：選取三組小鼠，末次灌胃0.5h后，放入泳池中游泳[水溫(30±1.0)℃]，90min后取出，立即摘取小鼠眼球采血，離心血清，測(cè)定bun含量。

2.2統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)。采用spss16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。進(jìn)行單因素方差分析，方差具有齊性時(shí)用lsd檢驗(yàn)，方差不齊用dunnett，st3檢驗(yàn)進(jìn)行各組間比較。p<0.05表示差異有顯著性。

2.3結(jié)果

2.3.1對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間及常壓缺氧耐力的影響：經(jīng)本藥物組合物灌胃后的小鼠與空白對(duì)照組相比，負(fù)重游泳時(shí)間延長(zhǎng)118.9％(p<0.01)，與灌胃紅景天口服液的陽(yáng)性對(duì)照組比較也有明顯延長(zhǎng)(p<0.01)；實(shí)驗(yàn)組小鼠的缺氧耐力也有顯著提高40.2％(p<0.01)，但與陽(yáng)性對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性(p>0.05，n＝16)(見表1)。

表1本發(fā)明藥物組合物對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間及常壓缺氧耐力的影響(min，)

注：與陽(yáng)性對(duì)照組比較，*p<0.05，**p<0.01；

與空白對(duì)照組比較，#p<0.05，##p<0.01

2.3.2對(duì)小鼠hb含量和運(yùn)動(dòng)后血bun的影響：結(jié)果顯示，服用本藥物28天后，小鼠hb含量升高34％(p<0.01)，與陽(yáng)性對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性(p>0.05，n＝16)，服用本藥物小鼠運(yùn)動(dòng)后血清bun含量下降25％(p<0.01)，與陽(yáng)性對(duì)照組相比減少12％(p<0.01，n＝16)(見表2)。

表2本發(fā)明藥物對(duì)小鼠hb和bun的影響

注：與陽(yáng)性對(duì)照組比較，*p<0.05，**p<0.01；

與空白對(duì)照組比較，#p<0.05，##p<0.01

2.3.3對(duì)小鼠血乳酸值的影響：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各組小鼠運(yùn)動(dòng)前血乳酸值差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。游泳后即刻，各組小鼠血乳酸值均有明顯增高(p<0.05)；與空白對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組和陽(yáng)性對(duì)照組均有明顯差異(p<0.01)，即服用紅景天口服液和服用該藥物的小鼠血乳酸值升高水平均明顯低于空白對(duì)照組，而陽(yáng)性組和實(shí)驗(yàn)組之間無(wú)明顯差異(p<0.05)。休息20分鐘后，各組血乳酸值均有明顯降低(p<0.05)；實(shí)驗(yàn)組和陽(yáng)性對(duì)照組血乳酸值均低于空白對(duì)照組(p<0.01)，而實(shí)驗(yàn)組與陽(yáng)性對(duì)照組之間也存在差異(p<0.01，n＝16)(見表3)。

表3本發(fā)明藥物組合物對(duì)小鼠乳酸值的影響(mmol/l，)

注：與陽(yáng)性組比較，*p<0.05，**p<0.01

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：本藥物能夠明顯延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳運(yùn)動(dòng)時(shí)間，說(shuō)明其具有較強(qiáng)的延緩疲勞的作用，能夠有效地提高運(yùn)動(dòng)耐力；能有效增強(qiáng)機(jī)體對(duì)缺氧環(huán)境的耐受能力；能夠顯著提高h(yuǎn)b含量；能夠減少運(yùn)動(dòng)后bun的含量，其減少幅度較紅景天更明顯；能明顯減少小鼠運(yùn)動(dòng)后體內(nèi)血乳酸的堆積。這表明無(wú)氧糖酵解受到抑制，細(xì)胞有氧利用率得到提高，從而增強(qiáng)了機(jī)體的有氧代謝和能量供應(yīng)；休息20min后，血乳酸值大大減少，疲勞得到明顯緩解。

(二)本發(fā)明藥物組合物增強(qiáng)機(jī)體增強(qiáng)非特異性免疫功能的實(shí)驗(yàn)研究

環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide，ctx)作為一種細(xì)胞毒化療藥物，同時(shí)也屬于烷化劑類免疫抑制劑，其作用主要是破壞dna的結(jié)構(gòu)，從而阻斷其復(fù)制，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。而在免疫毒理學(xué)中，環(huán)磷酰胺是制備免疫抑制模型的常用藥物。

1材料

試劑、器械及藥物

環(huán)磷酰胺(sigma公司)，按60mg/kg體重(周劑量)，用蒸餾水配制，每日經(jīng)口給予；電子便攜式天平(型號(hào)：jm5102，余姚市紀(jì)銘稱重校驗(yàn)設(shè)備有限公司，精密度0.1g)；注射器(規(guī)格：1ml)；注射針頭；灌胃針頭；干濕溫度計(jì)；棕色試劑瓶；陽(yáng)性對(duì)照組：陽(yáng)性對(duì)照藥:鯊肝醇，不做任何處理，僅用飼料喂養(yǎng)；受試組：本發(fā)明藥物組。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

balb/c小鼠72只，雌性，6～8周齡，體重18～22g。

2方法與結(jié)果

2.1對(duì)環(huán)磷酰胺模型小鼠的升高白細(xì)胞作用

取小鼠36只，隨機(jī)分為3組，空白對(duì)照組每日灌胃蒸餾水10ml/kg·d，其余組每日灌胃60mg/kg環(huán)磷酰胺，周期為30天。實(shí)驗(yàn)組灌胃本發(fā)明藥物組合物1.0g/(kg·d)，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃鯊肝醇10ml/kg.d，每組連續(xù)給藥28天。末次給藥1小時(shí)后，小鼠眼眶取血測(cè)白細(xì)胞數(shù)。結(jié)果顯示：環(huán)磷酰胺可使小鼠血白細(xì)胞數(shù)明顯下降(p<0.01)，本發(fā)明藥物可對(duì)抗環(huán)磷酰胺所致小鼠白細(xì)胞下降的作用，見表4。

表4本發(fā)明藥物組合物對(duì)環(huán)磷酰胺所致小鼠白細(xì)胞減少的影響

注：與陽(yáng)性對(duì)照組比較，*p<0.05，**p<0.01

與空白對(duì)照組比較，△p<0.05，△△p<0.01

2.2對(duì)環(huán)磷酰胺模型小鼠免疫器官的影響

取小鼠36只，隨機(jī)分為3組，實(shí)驗(yàn)方法同上。于末次給藥1小時(shí)后，解剖取小鼠胸腺、脾臟，稱重并計(jì)算臟器指數(shù)。結(jié)果顯示：環(huán)磷酰胺可造成小鼠胸腺、脾臟萎縮，器官臟器指數(shù)顯著減輕，而本發(fā)明藥物組合物有對(duì)抗環(huán)磷酰胺抑制免疫器官的作用，對(duì)非特異性疫功能有一定促進(jìn)作用，見表5。

表5本發(fā)明藥物組合物對(duì)環(huán)磷酰胺所致小鼠的胸腺、脾臟重量減輕的影響

注：與陽(yáng)性對(duì)照組比較，*p<0.05，**p<0.01

與空白對(duì)照組比較，△p<0.05，△△p<0.01。