本發(fā)明涉及一種中藥提取物及其藥物制劑和制備方法，尤其涉及一種小兒蒲地藍消炎糖漿及其制備方法。
背景技術(shù)：
流行性腮腺炎、急性咽炎和扁桃體炎為兒童常見疾病，流行性腮腺炎屬于感染性疾病，多見細菌性和病毒性。中醫(yī)上稱為痄腮；胡詠梅在“中國2010-2012年流行性腮腺炎流行性病學(xué)特征分析”中總結(jié)出流行性腮腺炎發(fā)病率連續(xù)3年內(nèi)分別為22.3963/10萬、33.8363/10萬、35.5897/10萬，其中15歲以下年齡分別占當(dāng)年總病例數(shù)的91.58％、90.93％、90.27％。扁桃體炎屬上呼吸道感染，由于小兒呼吸系統(tǒng)發(fā)育尚不成熟，機體免疫系統(tǒng)還不完善，抵抗力較成年人偏低。目前急性上呼吸道感染是小兒感染性疾病的首位，而急性扁桃體炎的發(fā)病率最高，以病毒感染最為常見，中醫(yī)上屬于“乳蛾”的范疇，是由于外邪侵襲，上犯咽喉或者肺胃熱盛，上攻咽喉所引起的，小兒癥狀較成人重，常伴有高熱。咽炎亦屬上呼吸道感染，在兒童中發(fā)病率也較高，尤其是急性咽炎，是咽黏膜、黏膜下組織的急性炎癥。中醫(yī)學(xué)認為急性咽炎屬于急喉痹范疇，起因與急性扁桃體炎類似，主要病變臟腑在肺、胃，臨床以風(fēng)熱癥證、肺胃熱盛證常見。
目前，西醫(yī)在治療此類病癥多以抗生素治療，隨著抗生素耐藥性日益嚴重，使得中醫(yī)藥對此類病癥的治療日顯優(yōu)勢?？股刂委熾m確實有效，但副作用較大，易復(fù)發(fā)。中醫(yī)認為治療此類病癥宜清熱解毒，消腫利咽，療法療效安全可靠，副作用少，推廣價值大。蒲地藍消炎口服液為已上市品種，具有清熱解毒，消腫利咽。用于癤腫、腮腺炎、咽炎、扁桃體炎。多年臨床顯示，該品種在兒科同樣有較好的市場，但蒲地藍消炎口服液在用法用量上未具體提及小兒用法用量，只提到小兒酌減。在臨床使用過程中發(fā)現(xiàn)，口服液對于小兒而言，口感較差，小兒服用較為困難，因此，在此基礎(chǔ)上開發(fā)一種適合于小兒服用的新的藥物制劑尤為重要。糖漿劑為含有藥物或芳香物質(zhì)的濃蔗糖水溶液，供口服使用，蔗糖及芳香劑等能掩蓋藥物的不良氣味，改善口味，尤其受兒童歡迎。糖漿劑易被微生物污染，糖漿劑中的主要附加劑為防腐劑，兒童、孕婦等處于身體發(fā)育特殊時期的敏感人群，不宜食用那些過多使用防腐劑的食品。同時蒲地藍消炎口服液工藝中黃芩需要單獨提取，工藝較為復(fù)雜。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的一個目的在于提供一種具有消炎作用的蒲地藍提取物及其制備方法，該方法為全組方水提，工藝簡單，利于生產(chǎn)。
本發(fā)明的另一個目的在于提供一種小兒蒲地藍消炎糖漿及其制備方法，該糖漿劑口感好、穩(wěn)定性好、生物利用度高。
本發(fā)明還有一個目的在于提供上述小兒蒲地藍消炎糖漿藥物的用途。
本發(fā)明的一個技術(shù)方案為，提供一種具有消炎作用的蒲地藍提取物的制備方法，該方法包括以下步驟：
1)水提：將按重量份計的原料藥蒲公英3.0-5.0份、板藍根1.0-2.0份、苦地丁0.5-1.5份和黃芩1.0-2.0份水提，其中蒲公英、板藍根、苦地丁在水中煮沸后，將黃芩投入，水提得到水提液；
2)醇沉：濃縮水提液至相對密度60-70℃熱測1.10-1.15，加入無水乙醇，使?jié)饪s的水提液中乙醇的體積含量為60％，濾去不溶物，除去濾液中的溶劑得到提取物。
優(yōu)選地，其中所述的原料藥為蒲公英4份、板藍根1.5份、苦地丁1.0份和黃芩1.5份
本發(fā)明中為全組方水提，全組方水提為將配方中的四種原料藥：蒲公英、板藍根、苦地丁和黃芩一次性水提，不需要將黃芩單獨水提。
本發(fā)明所述的水提用水重量是煎煮原料藥的10倍，共煎煮3次，每次1.5h，合并各次煎出液。
本發(fā)明所述的醇沉步驟中加入乙醇后放置的時間優(yōu)選為24h。
本發(fā)明提供了一種具有消炎作用的蒲地藍提取物，其由上述方法制備。
本發(fā)明提供的另一個技術(shù)方案是，提供一種蒲地藍消炎藥物，其由作為活性成分的上述方法制備的提取物和藥學(xué)上可接受的輔料組成。
本發(fā)明的蒲地藍消炎藥物，其為糖漿劑，即蒲地藍消炎糖漿。
本發(fā)明的蒲地藍消炎糖漿中包含的甜味劑為蔗糖、甜菊糖苷和三氯蔗糖中的一種或多種；
優(yōu)選地，蒲地藍消炎糖漿中包含的甜味劑為蔗糖、甜菊糖苷和三氯蔗糖；
更優(yōu)選地，蒲地藍消炎糖漿中的甜味劑的含量為蔗糖45％(g/ml)、甜菊糖苷0.2％(g/ml)和三氯蔗糖0.1％(g/ml)。
本發(fā)明的蒲地藍消炎藥物糖漿還包含香精；
優(yōu)選地，香精為桔子香精；
更優(yōu)選地，蒲地藍糖漿包含桔子香精0.15％(g/ml)。
本發(fā)明中的蒲地藍消炎糖漿，由蒲公英500g，板藍根188g，苦地丁125g，黃芩188g制備而成，制備方法包括下述步驟：
1)水提：蒲公英、板藍根、苦地丁在水中煮沸后，將黃芩投入，水提得到水提液；
2)醇沉：提取液濃縮至相對密度60～70℃熱測1.10～1.15的清膏，加入無水乙醇，使?jié)饪s的水提液中乙醇的體積含量為60％，靜置24h，過濾，上清液除去乙醇至相對密度60～70℃熱測1.15～1.20的浸膏；
3)向浸膏中加水至700ml，冷藏48h，過濾，上清液用氫氧化鈉溶液調(diào)ph值至6.5，加入蔗糖450g、甜菊糖苷2g、三氯蔗糖1g，煮沸，過濾，加入1.5g桔子香精，加水至1000ml。
本發(fā)明制備的蒲地藍消炎糖漿不添加穩(wěn)定劑及防腐劑，制備的蒲地藍消炎糖漿澄清、穩(wěn)定性好、生物利用度高。
本發(fā)明制備的蒲地藍消炎糖漿口感良好，提高了小兒的順應(yīng)性，適合小兒服用。
菊苣酸的穩(wěn)定性受多種因素影響，如ph值、溫度等，而黃芩苷溶于堿溶液，但是在堿溶液中不穩(wěn)定，漸變暗棕色，本發(fā)明提供的蒲地藍消炎糖漿，其活性成分菊苣酸和黃芩苷能夠穩(wěn)定存在，且口感良好。
本發(fā)明制備的提取物作為制備治療小兒流行性腮腺炎、急性咽炎或急性扁桃體炎藥物的應(yīng)用。
本發(fā)明提取物的制備方法為全組方水提，工藝簡單，利于生產(chǎn)，由提取物制備的小兒蒲地藍消炎糖漿具有良好的穩(wěn)定性、澄清透明、口感好、生物利用度高，制備工藝穩(wěn)定、綠色節(jié)能。
附圖說明
圖1為咽部病理組織學(xué)觀察圖片。
具體實施方式
通過下面給出的本發(fā)明的具體實施例以及比較實施例可以進一步清楚地了解本發(fā)明。但它們不是對本發(fā)明的限定。
實施例1
1藥材水提工藝優(yōu)選
1.1正交優(yōu)選水提工藝
對加水量、提取時間、提取次數(shù)按三因素三水平進行l(wèi)9(34)正交設(shè)計優(yōu)選出最佳水提工藝條件。
表1水提正交試驗因素水平表
取蒲公英50g、板藍根18.8g、苦地丁12.5g、黃芩18.8g各9份，按l9(34)正交表進行試驗，以黃芩苷和菊苣酸的含量為指標優(yōu)選最佳水提工藝，結(jié)果見表2～4。
表2正交試驗設(shè)計及結(jié)果表
表3水提黃芩苷方差分析表
表4水提菊苣酸方差分析表
以黃芩苷、菊苣酸含量為指標直觀分析結(jié)果因素影響大小順序均為c>b>a；黃芩苷方差分析結(jié)果，因素c有極顯著性影響，最佳提取工藝為a2b3c3即加10倍量水，提取三次，每次2h。菊苣酸方差分析結(jié)果，因素c有顯著性差異，最佳提取工藝為a3b3c3即加12倍量水，提取三次，每次2h。由于b3與b2黃芩苷含量差異較??；a3與a2，b3與b2菊苣酸含量差異均較小。綜合考慮，確定最佳工藝為：a2b2c3，即加10倍量水提取3次，每次1.5h。
1.2水提驗證工藝
分別取蒲公英250g、板藍根94g、苦地丁62.5g、黃芩94g，按照正交試驗優(yōu)選的最佳方案進行3次驗證試驗。
表5水提驗證試驗結(jié)果
從上述結(jié)果可知，3次驗證黃芩苷平均含量為87.0mg/g-生藥、rsd為0.78％，菊苣酸平均含量為0.899mg/g-生藥、rsd為2.47％，說明優(yōu)選的水提工藝穩(wěn)定可行。
實施例2
1水提液醇沉工藝優(yōu)選
1.1正交優(yōu)化醇沉工藝
對浸膏相對密度、醇沉濃度及醇沉?xí)r間按三因素三水平進行l(wèi)9(34)正交設(shè)計優(yōu)選出最佳醇沉工藝。
表6醇沉正交試驗因素水平表
將水提驗證的提取液過濾，合并，濃縮至相對密度1.05～1.10后平均分成3份：第一份再平均分成3份；第二份繼續(xù)濃縮至相對密度1.10～1.15后再平均分成3份；第三份繼續(xù)濃縮至相對密度1.15～1.20后再平均分成3份。按l9(34)正交試驗表進行醇沉試驗，以黃芩苷和菊苣酸含量為考察指標進行直觀分析與方差分析，結(jié)果見表7～9。
表7醇沉正交試驗表
表8醇沉黃芩苷方差分析表
表9醇沉菊苣酸方差分析表
以黃芩苷、菊苣酸含量為指標直觀分析結(jié)果因素影響大小順序均為b>a>c；黃芩苷方差分析結(jié)果，因素b有顯著性影響，因素a、c無影響，最佳醇沉工藝為a1b1c2即浸膏相對密度1.05-1.10，醇沉濃度為60％，醇沉24h。菊苣酸方差分析結(jié)果，因素b有極顯著性差異，因素a、c無影響，最佳醇沉工藝為a2b1c3即浸膏相對密度1.10-1.15，醇沉濃度為60％，醇沉48h。由于a1對醇沉過程影響較大，沉淀不結(jié)實，較難過濾，綜合考慮，最終確定醇沉工藝為a2b1c2，即浸膏相對密度1.10-1.15，醇沉濃度為60％，醇沉24h。
1.2醇沉驗證工藝
取蒲公英300g、板藍根112.8g、苦地丁75g、黃芩112.8g各3份按照最佳水提工藝提取，再根據(jù)醇沉正交試驗優(yōu)選的最佳方案進行3次醇沉驗證試驗。
表10醇沉驗證試驗結(jié)果
從上述結(jié)果可知，3次醇沉驗證黃芩苷平均含量為52.74mg/g、rsd為1.24％，菊苣酸平均含量為0.652mg/g、rsd為0.94％，表明醇沉優(yōu)選的工藝穩(wěn)定可行。
實施例3
1.冷藏時間篩選
在預(yù)實驗的基礎(chǔ)上，取一定量醇沉上清液，濃縮至相對密度為1.15～1.20，平均分成四份，分別加水至處方量的70％，分別冷藏放置24h、36h、48h、72h，進行黃芩苷和菊苣酸含量比較，并同時考察樣品澄清度。
表11冷藏時間篩選結(jié)果
從上述結(jié)果可知，隨著冷藏時間的增加，黃芩苷和菊苣酸的含量逐漸降低，但樣品澄清度尚不理想，當(dāng)冷藏時間為48h以上時，樣品澄清度稍有所改善，故選擇冷藏時間為48h，欲在此基礎(chǔ)上優(yōu)化澄清度。
實施例4
1.調(diào)整ph工藝優(yōu)選
對冷藏后的樣液進行ph的篩選，因黃芩苷在堿性條件下不穩(wěn)定，故考察ph≤7時不同值對制劑結(jié)果的影響。取等量5份冷藏后樣液，將其ph分別調(diào)至5.0、5.5、6.0、6.5、7.0，分別加入50％蔗糖、煮沸，過濾，加水至處方量，灌裝、滅菌，分別測定滅菌前與滅菌后樣品的黃芩苷和菊苣酸含量，以及測定滅菌后樣品的ph，并觀察樣品的澄清度，確定最佳ph值。
表12調(diào)整ph工藝實驗結(jié)果
從上述結(jié)果可知：調(diào)ph5.0、5.5樣品，滅菌后仍有少量沉淀；調(diào)ph6.0以上時，樣品澄清度逐漸變好，但隨著ph值調(diào)節(jié)的增高，其樣品中ph下降幅度逐漸增大，且黃芩苷、菊苣酸含量逐漸降低，綜合考慮，確定ph調(diào)節(jié)工藝為調(diào)至6.5。
實施例5
1.1甜味劑種類篩選
目前市場上常用的甜味劑主要有蔗糖、甜蜜素、甜菊糖苷和三氯蔗糖。其中甜菊糖苷的甜度是蔗糖的200～300倍，熱值僅為蔗糖的1/300。甜蜜素的甜度是蔗糖的30～40倍。三氯蔗糖的甜度約為蔗糖的600倍，甜味純正，甜味特性與甜味質(zhì)量和蔗糖十分相似。
《中國藥典》對糖漿劑的規(guī)定為：含蔗糖量應(yīng)不低于45％(g/ml)。由于甜蜜素的甜度較低，因此，本實驗對蔗糖、甜菊糖苷和三氯蔗糖進行比較研究，以口感作為考察指標，確定甜味劑類型。
表13甜味劑種類篩選結(jié)果
試驗結(jié)果表明：只加入蔗糖的糖漿口感很差；在加入蔗糖的基礎(chǔ)上再加一種甜味劑，其口感也較差；同時加入蔗糖、甜菊糖苷和三氯蔗糖制備的糖漿劑，其口感比較好。
1.2甜味劑用量篩選
對上述甜味劑的用量進行篩選，以口感作為考察指標，確定甜味劑的用量。
表14甜味劑用量篩選結(jié)果
試驗結(jié)果表明：甜菊糖苷、三氯蔗糖和蔗糖的用量分別為0.2％(g/ml)、0.1％(g/ml)和45％(g/ml)時，糖漿劑的口感甜味適中，相對較好，因此確定三種甜味劑的用量分別為蔗糖45％(g/ml)、甜菊糖苷0.2％(g/ml)、三氯蔗糖0.1％(g/ml)。
實施例6
1.1香精種類篩選
為進一步改善制劑的氣味和口感，欲在在制劑中添加少量香精。本實驗對桔子香精、草莓香精、蘋果香精、檸檬香精、巧克力香精和奶油香精進行比較研究，以口感作為考察指標，確定香精的類型和用量。
表15香精種類篩選結(jié)果
試驗結(jié)果表明：桔子香精的口感比較清新且能掩蓋糖漿劑一定的苦味，比其他香精口感好，因此選用桔子香精。
1.2香精用量篩選
在確定香精種類的基礎(chǔ)上，對香精的用量進行篩選，以口感作為考察指標，確定香精的用量。
表16香精用量結(jié)果
試驗結(jié)果表明：桔子香精的用量為0.15％(g/ml)時口感較好。
實施例7
1.糖漿劑的制備
蒲公英500g，板藍根188g，苦地丁125g，黃芩188g，黃芩在水煮沸后加入，加10倍重量水煎煮三次，每次1.5h，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度為60～70℃熱測1.10～1.15的清膏，加乙醇使其體積含量為60％，放置24h，過濾，濾液回收乙醇至相對密度60～70℃熱測1.15～1.20，加水至700ml，冷藏48h，過濾，濾液用10％氫氧化鈉溶液調(diào)ph值至6.5，加入450g蔗糖、2g的甜菊糖苷、1g三氯蔗糖，煮沸，過濾，加入1.5g桔子香精，加水至1000ml，攪拌，分裝，滅菌30min，即得。
按上述制備工藝進行了3批中試規(guī)模放大驗證，投料3批，批號分別為150621、150622、150623，生產(chǎn)工藝中試數(shù)據(jù)見表17。
表17大生產(chǎn)數(shù)據(jù)
*注：150621批樣品，提取批量為300倍處方，其中100倍處方浸膏供藥理毒理試驗用；200倍處方浸膏配液供質(zhì)量研究，穩(wěn)定性試驗用。150622、150623批樣品供穩(wěn)定性試驗用。
三批樣品(批號150621、150622、150623)中黃芩苷及菊苣酸含量較為穩(wěn)定，表明該工藝連續(xù)生產(chǎn)穩(wěn)定性好，工藝條件易控、可行，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。
實施例8
穩(wěn)定性試驗
1.1考察項目
表18考察項目
1.2加速試驗
取小兒蒲地藍消炎糖漿大生產(chǎn)規(guī)模樣品(“樣品來源”中所有批次)置于溫度40±2℃、相對濕度75％±5％的恒溫恒濕箱內(nèi)放置6個月。于第0、1、2、3、6個月末各取樣檢測一次，根據(jù)小兒蒲地藍消炎糖漿報生產(chǎn)用質(zhì)量標準進行檢測，檢測結(jié)果與0天相比較，具體試驗結(jié)果見表19～21。
表19加速留樣考察結(jié)果(批號：150621)
表20加速留樣考察結(jié)果(批號：150622)
表21加速留樣考察結(jié)果(批號：150623)
由表19～21可見，所觀察的三批樣品，在規(guī)定的包裝條件下，經(jīng)溫度40±2℃、相對濕度75％±5％的恒溫恒濕箱內(nèi)放置6個月，與0天比較，性狀、鑒別、相對密度、ph值、微生物限度、黃芩苷含量幾乎無變化。菊苣酸的含量略有下降，由0.17mg/ml下降至約0.15mg/ml。但各項檢測結(jié)果均符合標準規(guī)定。
1.3長期試驗
長期試驗：取小兒蒲地藍消炎糖漿大生產(chǎn)規(guī)模樣品(“樣品來源”中所有批次)置于溫度25±2℃、相對濕度60％±10％的恒溫恒濕箱內(nèi)放置18個月。于第0、3、6、9、12、18個月末各取樣一次，根據(jù)小兒蒲地藍消炎糖漿報臨床用質(zhì)量標準進行檢測，檢測結(jié)果與0天相比較，具體試驗結(jié)果見表22～24。
表22長期留樣考察結(jié)果(批號：150621)
表23長期留樣考察結(jié)果(批號：150622)
表24長期留樣考察結(jié)果(批號：150623)
由表22～24可見，所觀察的三批樣品，在規(guī)定的包裝條件下，經(jīng)溫度25±2℃、相對濕度60％±10％的恒溫恒濕箱內(nèi)放置18個月，與0天比較，性狀、鑒別、相對密度、ph值、微生物限度、黃芩苷含量、菊苣酸含量基本無變化，各項檢測結(jié)果均符合標準規(guī)定。
實施例9
本實施例中的統(tǒng)計學(xué)方法：
數(shù)據(jù)結(jié)果用均數(shù)±標準差(mean±sd)表示，各組間的差異比較采用graphpadprism5軟件的one-wayanova分析方法，組間比較采用dunnett’s檢驗，p＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。
本實施例中的受試藥物及陽性藥：
小兒蒲地藍糖漿藥效用浸膏，由濟川藥業(yè)集團有限公司提供，批號：150621。1g浸膏相當(dāng)于3.5g生藥。成品小兒日服用生藥總量為：15g生藥/人/天。
阿司匹林腸溶片(拜阿司匹林)，bayerhealthcaremanufacturings.r.l，規(guī)格：100mg/片，批號：bj22790。
枸櫞酸噴托維林片(咳必清)，醫(yī)藥集團容生制藥有限公司，規(guī)格：25mg/片，100片/瓶，批號：14061722。
1.蒲地藍糖漿劑量設(shè)計
表25大鼠劑量
表26小鼠劑量
表27豚鼠劑量
2.蒲地藍糖漿對氨水致大鼠急性咽炎的影響
2.1實驗動物
sd大鼠，spf級，體重120-150g，72只，雌性各半，購自浙江省實驗動物中心，實驗動物生產(chǎn)許可證號：scxk(浙)2014-0001。大鼠分籠飼養(yǎng)，飼喂顆粒飼料，室溫22±2℃，濕度50％-67％，自由飲水，光照適度，適應(yīng)性喂養(yǎng)后備用。
2.2方法
2.2.1大鼠急性咽炎模型的建立
spf級sd大鼠，雌雄各半，用喉頭噴霧器于大鼠咽部噴體積分數(shù)15％氨水，每次噴3撳，每天上、下午各1次，連續(xù)4d，造成急性咽炎模型；每日觀察記錄各組動物外觀狀態(tài)，并觀察動物咽部情況，包括黏膜形態(tài)、色澤等。
2.2.2動物分組及給藥方案
sd大鼠72只，雌雄各半，按體重隨機分為6組，每組12只，分別為空白組，模型組，陽性藥組，蒲地藍0.45g/kg、1.35g/kg、4.05g/kg。各組大鼠于d1開始灌胃給予相應(yīng)劑量藥物，空白組與模型組給予相同體積的生理鹽水，每天1次，連續(xù)7天。除空白組外，d5-d7采用體積分數(shù)15％氨水噴霧復(fù)制sd大鼠急性咽炎模型，空白組噴等體積生理鹽水，每日兩次。
2.3實驗結(jié)果
2.3.1大鼠行為學(xué)觀察
對大鼠噴氨水后，大多數(shù)大鼠出現(xiàn)搔抓口部，口腔分泌物增多，飲水增多，食量下降，自發(fā)性活動減少等現(xiàn)象。氨水造模4天后，模型組大鼠咽部出現(xiàn)充血，呈暗紅色，微腫脹，給藥組大鼠癥狀較模型組不同程度減輕。
2.3.2血常規(guī)檢測結(jié)果
與空白組相比，模型組單核細胞和中性粒細胞百分含量有所增加，淋巴細胞有所下降，而嗜酸性粒細胞百分含量無明顯變化。蒲地藍糖漿不同劑量組能不同程度減少單核細胞及中性粒細胞百分含量，增加淋巴細胞百分含量，但各組間均無顯著差異；藥物對嗜酸性粒細胞百分含量無明顯影響。
表28血常規(guī)檢測結(jié)果
2.3.3咽部組織中il-6的表達水平
經(jīng)氨水喉部噴霧后，大鼠咽部粘膜組織中il-6表達水平較空白組顯著升高，蒲地藍糖漿0.45g/kg能明顯減低il-6含量。
表29咽部組織中il-6的表達水平
注：與空白組比較，##p<0.01；與模型組比較，*p<0.05，*p<0.05。
2.3.4咽部病理組織學(xué)觀察
正常大鼠咽部黏膜表被復(fù)層鱗狀上皮，上皮下有薄層結(jié)締組織，可見黏液腺或混合腺，黏膜上皮細胞無變性、壞死，上皮內(nèi)和上皮下無炎細胞浸潤。模型組多數(shù)咽壁組織輕度充血，咽部黏膜上皮細胞輕度或中度變性、壞死，上皮內(nèi)或咽壁有輕度或中度炎細胞浸潤，炎細胞類型以中性粒細胞為主。蒲地藍糖漿4.05g/kg能使大鼠咽部黏膜病變程度明顯減輕。
表30大鼠咽部病變評分結(jié)果(mean±sd)
注：與空白組比較，##p<0.01；與模型組比較，*p<0.05。
從大鼠行為學(xué)觀察、血常規(guī)檢測結(jié)果、咽部組織中il-6的表達水平和咽部病理組織學(xué)觀察可知蒲地藍口服液對大鼠急性咽炎具有一定干預(yù)作用。
3.蒲地藍糖漿對枸櫞酸致豚鼠咳嗽的影響
3.1實驗材料
3.1.1陽性藥
枸櫞酸噴托維林片(咳必清)，醫(yī)藥集團容生制藥有限公司，規(guī)格：25mg/片，100片/瓶，批號：14061722。
3.1.2實驗動物
幼年豚鼠(8周齡)，普通級，雌雄各半，體重210-260g，南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖場，許可證號：scxk(蘇)2012-0008。
豚鼠分籠飼養(yǎng)，飼喂顆粒飼料，室溫22±2℃，濕度50％-67％，自由飲水，光照適度，適應(yīng)性喂養(yǎng)后備用。
3.2實驗方法及給藥方案
取40只體重210-260g幼年豚鼠(8周齡)，雌雄各半，置于500ml的觀察室內(nèi)，以恒定壓力噴入17.5％的枸櫞酸，噴霧1min，觀察并記錄豚鼠在5min之內(nèi)的咳嗽潛伏期和咳嗽次數(shù)，將咳嗽潛伏期≤10s或≥120s，以及5min內(nèi)咳嗽次數(shù)≤10次或者≥50次的豚鼠全部剔除。預(yù)選合格的豚鼠經(jīng)體重分層隨機分為5組，即模型組、咳必清組、小兒蒲地藍糖漿低、中、高劑量組(0.39g/kg、1.16g/kg、3.49g/kg)，每組6只。各組連續(xù)灌胃給藥7天，每天一次，模型組豚鼠灌以等體積蒸餾水。末次給藥后1h，按上述篩選條件引咳豚鼠，觀察并記錄豚鼠咳嗽潛伏期及5min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。
3.3結(jié)果
與模型組相比，小兒蒲地藍糖漿低、中、高劑量能不同程度延長引咳豚鼠的咳嗽潛伏期(p<0.05，p<0.01)，以3.49g/kg劑量組最佳；此外，小兒蒲地藍糖漿各劑量組均能減少引咳豚鼠的咳嗽次數(shù)(p<0.001)。
表31小兒蒲地藍糖漿對枸櫞酸引起豚鼠咳嗽的影響
注：與模型組比較*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
通過豚鼠引咳實驗考察蒲地藍糖漿的止咳作用，該實驗中糖漿各劑量組均能不同程度延長咳嗽潛伏期，減少枸櫞酸致幼年豚鼠的咳嗽次數(shù)，說明小兒蒲地藍糖漿具有明顯的止咳作用。
4.蒲地藍糖漿對氨水誘發(fā)小鼠咳嗽的影響
4.1實驗材料
4.1.1陽性藥
枸櫞酸噴托維林片(咳必清)，國藥集團容生制藥有限公司，規(guī)格：25mg/片，100片/瓶，批號：14042721。
4.1.2實驗動物
icr小鼠，清潔級，雌雄各半，體重18-22g，揚州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心，許可證號：scxk(蘇)2012-0004。
小鼠分籠飼養(yǎng)，飼喂顆粒飼料，室溫22±2℃，濕度50％-67％，自由飲水，光照適度，適應(yīng)性喂養(yǎng)后備用。
4.2實驗方法及給藥方案
18-22gicr小鼠60只，雌雄各半，按體重隨機分為5組，即模型組、咳必清組、蒲地藍糖漿低、中、高劑量組(0.65g/kg、1.95g/kg、5.85g/kg)。各組連續(xù)灌胃給藥7天，每天一次，模型組小鼠灌以等體積蒸餾水。末次給藥后1h，將小鼠置于一倒置的容積為2l，內(nèi)置一棉球的燒杯中，在向棉球上滴加0.5ml25％濃氨水時開始計時，觀察并記錄小鼠咳嗽潛伏期和3min內(nèi)咳嗽次數(shù)。
與模型組相比，蒲地藍糖漿低中高劑量均能顯著減少小鼠3min內(nèi)咳嗽次數(shù)(p<0.05、p＜0.01、p<0.001)，且5.85g/kg劑量時能明顯延長咳嗽潛伏期(p<0.05)。
表32小兒蒲地藍糖漿對氨水引起小鼠咳嗽的影響
注：各組均與模型組比較，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
通過小鼠引咳實驗考察蒲地藍糖漿的止咳作用。研究結(jié)果顯示，在氨水誘導(dǎo)的小鼠咳嗽實驗中，糖漿5.85g/kg可顯著降低小鼠咳嗽次數(shù)，并延長咳嗽的潛伏期，提示蒲地藍糖漿具有明顯的止咳作用。
5.蒲地藍糖漿對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響
5.1實驗動物
icr小鼠，清潔級，雌雄各半，體重18-22g，揚州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心，許可證號：scxk(蘇)2012-0004。
5.2實驗方法及給藥方案
icr小鼠，雌雄各半，共72只，正常條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)后，按體重隨機分為6組，即空白組、模型組、阿司匹林組、蒲地藍糖漿低、中、高劑量組(0.65g/kg、1.95g/kg、5.85g/kg)。各組小鼠分別灌胃給予相應(yīng)藥物，給藥體積為0.1ml/10g，空白組及模型組給予等體積蒸餾水，每日1次，連續(xù)7d。末次給藥后1h，除空白組外，各組小鼠右耳用微量進樣器均勻涂抹二甲苯，30μm/只，致炎30min后，用測厚規(guī)量取小鼠雙耳厚度，計算左右耳耳厚差。打取耳圓片，直徑0.8cm，稱耳圓片重量，計算雙耳耳重差。
5.3蒲地藍對二甲苯致小鼠耳腫脹模型耳腫脹度的影響
模型組小鼠較空白組耳厚及耳重顯著增加(p<0.001)，蒲地藍糖漿1.95g/kg和5.85g/kg顯著減輕小鼠耳厚(p<0.001)，且5.85g/kg組亦能明顯減輕小鼠耳重(p<0.05)。
表33蒲地藍對二甲苯致小鼠耳腫脹模型耳腫脹度的影響
注：###p<0.001與空白組比較；*p<0.05，**p<0.01與模型組比較。
本實驗采用二甲苯致小鼠耳腫脹模型考察蒲地藍糖漿的抗炎作用。研究結(jié)果顯示，蒲地藍可明顯緩解模型小鼠耳腫脹程度，提示蒲地藍糖漿具有一定抗炎作用。
6.蒲地藍糖漿對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響
6.1實驗動物
icr小鼠，清潔級，雌雄各半，體重18-22g，揚州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心，許可證號：scxk(蘇)2012-0004。
小鼠分籠飼養(yǎng)，飼喂顆粒飼料，室溫22±2℃，濕度50％-67％，自由飲水，光照適度，適應(yīng)性喂養(yǎng)后備用。
6.2實驗方法及給藥方案
18-22gicr小鼠60只，雌雄各半，按體重隨機分層分為5組，即模型組、阿司匹林組(400mg/kg)、蒲地藍糖漿低、中、高劑量組(0.65g/kg、1.95g/kg、5.85g/kg)，給藥體積0.1ml/10g。各組連續(xù)灌胃給藥7天，每天一次，模型組小鼠灌以等體積蒸餾水。
末次給藥后1h，尾靜脈注射2％伊文思藍生理鹽水溶液0.1ml/10g，隨即腹腔注射0.6％醋酸生理鹽水溶液0.2ml/只，30min后處死，打開腹腔，用6ml生理鹽水洗滌腹腔，吸出洗滌液，離心取上清(3000r/min)，于590nm測定光密度od值。
6.3實驗結(jié)果
與模型組相比，蒲地藍糖漿5.85g/kg及1.95g/kg能夠抑制醋酸致小鼠毛細血管通透性的增加，且5.85g/kg劑量組和模型組相比有顯著性差異(p<0.05)。
表34蒲地藍糖漿對小鼠毛細血管通透性的影響
注：各組均與模型組比較，*p<0.05。
通過小鼠腹腔毛細血管通透性實驗考察蒲地藍糖漿對醋酸致小鼠毛細血管通透性增加的抑制作用。研究結(jié)果顯示，蒲地藍糖漿1.95g/kg和5.85g/kg可顯著降低小鼠毛細血管通透性，提示蒲地藍糖漿可以通過抑制毛細血管通透性，減少局部無菌性炎癥性滲出從而發(fā)揮抗炎作用。
藥效學(xué)試驗研究結(jié)果表明，小兒蒲地藍消炎糖漿對大鼠急性咽炎具有一定干預(yù)作用；可延長枸櫞酸致豚鼠咳嗽的潛伏期，降低豚鼠咳嗽次數(shù)；亦可延長氨水誘發(fā)小鼠咳嗽的潛伏期，具有顯著的止咳作用；對二甲苯致小鼠耳腫脹有明顯的改善作用，具有一定的抗炎作用；可通過抑制毛細血管通透性，減少局部無菌性炎癥滲出從而發(fā)揮抗炎作用。
本發(fā)明中的小兒蒲地藍消炎糖漿有一定的抗炎、止咳作用，適用于小兒流行性腮腺炎、急性咽炎、急性扁桃體炎的治療。本方配伍合理、安全、有效，工藝和質(zhì)量穩(wěn)定、可控。