本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及蒲公英提取物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

癌癥是一種嚴(yán)重威脅人類健康和生命的常見病和多發(fā)病，是世界各國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)領(lǐng)域中的重要科研課題，目前尚無(wú)滿意的治療措施。人類因癌癥而引起的死亡居所有疾病死亡率的第二位，僅次于心腦血管疾病，在我國(guó)癌癥的死亡率已躍居首位，給社會(huì)、家庭和個(gè)人帶來(lái)極大的負(fù)擔(dān)和痛苦。中醫(yī)治療腫瘤以“虛”立論，治法強(qiáng)調(diào)“扶正祛邪”，增強(qiáng)人體精、津、氣、血的周流而“邪正相安”。而中藥在癌癥治療過(guò)程中有著十分重要的地位。歷代醫(yī)家們?cè)谂c癌痛斗爭(zhēng)中留下許多寶貴經(jīng)驗(yàn)，如地骨皮，首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，言其“味苦寒，主五內(nèi)邪氣，熱中消渴，周痹”；元代吳瑞《日用本草》已明確記載“止齒血；治骨槽風(fēng)”等?，F(xiàn)代癌癥綜合治療中，中藥同樣不可或缺。

蒲公英為菊科多年生草本植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.及其多種同屬植物的干燥全草，全國(guó)大部分地區(qū)均有分布。作為我國(guó)傳統(tǒng)中藥，蒲公英具有清熱解毒、消癰散結(jié)、利尿通淋等功效，臨床多用于治療乳癰、療瘡腫毒、咽痛、目赤、濕熱黃疽、熱淋澀痛等癥。蒲公英含有多種活性成分，如有機(jī)酸類、黃酮類、皂普類、多糖等。

目前關(guān)于蒲公英的抗癌作用的相關(guān)報(bào)道很少。CN201380007584.9公開了一種制備用于治療或預(yù)防癌癥的包括蒲公英屬根部提取物的藥物的改善方法，CN201610317216.X公開了一種抗乳腺癌的中藥組合物及其制備方法與應(yīng)用，所述中藥組合物其活性成分由夏枯草與蒲公英組成?，F(xiàn)有技術(shù)中將蒲公英提取物用于抗癌用途時(shí)都存在抗癌作用不明確和效果一般的缺陷。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，對(duì)蒲公英提取物的制備工藝進(jìn)行優(yōu)化，提供一種抗癌效果得到顯著提高的蒲公英提取物。

本發(fā)明解決該技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)手段是：

一種蒲公英提取物，所述蒲公英提取物通過(guò)以下方法制備而成：將蒲公英藥材用50％乙醇回流提取2次，50％乙醇的加入量為每次8-12倍量，每次提取1-2h，濃縮回收乙醇后過(guò)AB-8大孔樹脂，先用水洗，然后用30-90％乙醇洗脫，回收洗脫液，濃縮，凍干，即得。

所述乙醇洗脫的濃度優(yōu)選為30％、60％或90％乙醇。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述蒲公英提取物的制備方法為：將蒲公英藥材用50％乙醇回流提取2次，50％乙醇的加入量為每次10倍量，每次提取1.5h，濃縮回收乙醇后過(guò)AB-8大孔樹脂，先用水洗，然后依次用30％乙醇和60％乙醇洗脫，回收合并各洗脫液，濃縮，凍干，即得。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述蒲公英提取物的制備方法為：將蒲公英藥材用50％乙醇回流提取2次，50％乙醇的加入量為每次10倍量，每次提取1.5h，濃縮回收乙醇后過(guò)AB-8大孔樹脂，先用水洗，然后用60％乙醇洗脫，回收各洗脫液，濃縮，凍干，即得。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述蒲公英提取物的制備方法為：將蒲公英藥材用50％乙醇回流提取2次，50％乙醇的加入量為每次10倍量，每次提取1.5h，濃縮回收乙醇后過(guò)AB-8大孔樹脂，先用水洗，后用30％乙醇洗脫，回收各洗脫液，濃縮，凍干，即得。進(jìn)一步地，所述提取物中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量為1.3-1.6％，木犀草素的含量為3.8-4.3％，槲皮素的含量為1.6-1.9％、10，15-十八碳二烯酸的含量為2.1-2.3％、9，10，11-三羥基-(12Z)-十八碳烯酸的含量為2.2-2.4％，以及苦樹素苷F的含量為3.1-3.4％。

本發(fā)明同時(shí)提供了上述蒲公英提取物在制備抗癌藥物中的用途，所述抗癌藥物為抗肺癌藥物和為抗乳腺癌藥物。

本發(fā)明的有益效果：現(xiàn)有技術(shù)中將蒲公英用于抗癌用途時(shí)，通常是采用水提取物，其效果不明確，作用一般，本發(fā)明通過(guò)在乳腺癌和肺癌細(xì)胞上比較了蒲公英的水提取物和50％乙醇提取物的抗癌效果，發(fā)現(xiàn)50％乙醇提取物的效果要優(yōu)于水提取物，進(jìn)一步的，本發(fā)明接著對(duì)50％乙醇提取物用大孔樹脂進(jìn)行了分段，意外的發(fā)現(xiàn)30％和60％乙醇洗脫部位效果更好，其中以30％乙醇洗脫部位效果最好。

附圖說(shuō)明

圖1顯示蒲公英30％乙醇、60％乙醇、90％乙醇和總醇(30％+60％)洗脫提取物對(duì)H1299細(xì)胞的作用。

圖2顯示蒲公英30％乙醇、60％乙醇、90％乙醇和總醇(30％+60％)洗脫提取物對(duì)PC-9細(xì)胞的作用。

圖3顯示蒲公英30％乙醇、60％乙醇、90％乙醇和總醇(30％+60％)洗脫提取物對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的作用。

圖4顯示蒲公英30％乙醇、60％乙醇、90％乙醇和總醇(30％+60％)洗脫提取物對(duì)Hs578t細(xì)胞的作用。

圖5顯示蒲公英30％乙醇洗脫提取物的HPLC圖譜，圖中峰1為香莢蘭酸、峰2為單咖啡酰酒石酸、峰3為對(duì)羥基苯甲酸、峰4為七葉內(nèi)酯、峰5為咖啡酸、峰6為橙皮苷、峰7為丁香酸、峰8為對(duì)香豆酸、峰9為木犀草素-7-O-β-D-蕓香糖苷、峰10為異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷、峰11為木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、峰12為綠原酸、峰13為阿魏酸、峰14為木犀草素、峰15為槲皮素、峰16為10，15-十八碳二烯酸、峰17為9，10，11-三羥基-(12Z)-十八碳烯酸、峰18為9，10，11-三羥基-9，11-十八碳二烯酸、峰19為9-羥基-10，12，15-十八碳三烯酸、峰20為苦樹素苷F。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則所有的百分?jǐn)?shù)、比率、比例或份數(shù)按重量計(jì)。

除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。

實(shí)施例1蒲公英50％乙醇提取物的制備

將蒲公英藥材用50％乙醇回流提取2次，50％乙醇的加入量為每次10倍量，每次提取1.5h，過(guò)濾合并濾液，將濾液濃縮回收乙醇后，凍干，即得。

對(duì)比例1蒲公英水提取物和90％醇提物的制備

將蒲公英藥材加水10倍量浸泡過(guò)夜，煎煮3次，每次1.5h，過(guò)濾合并濾液，減壓濃縮，凍干，即得蒲公英水提取物。

將蒲公英藥材以10倍量90％乙醇回流提取二次，每次1.5h，過(guò)濾合并濾液，減壓濃縮，凍干，即得蒲公英90％乙醇提取物。

試驗(yàn)例一 蒲公英50％乙醇提取物、90％乙醇提取物和蒲公英水提取物的腫瘤細(xì)胞試驗(yàn)

將實(shí)施例1制備的蒲公英50％乙醇提取物、對(duì)比例1制備的90％乙醇提取物和蒲公英水提取物分別在肺癌H1299，PC-9，H1650，H520，A549，H460細(xì)胞，乳腺癌MDA-MB-231和Hs578t細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)，具體是將上述細(xì)胞系鋪于96孔板中，將上述提取物以不同終濃度加入各腫瘤細(xì)胞系中，采用MTT法測(cè)定細(xì)胞活性以及不同提取物的抑制活性，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合計(jì)算IC₅₀，其IC₅₀結(jié)果如表1所示：

表1蒲公英50％乙醇提取物、30％乙醇洗脫提取物和蒲公英水提取物在各類細(xì)胞的IC₅₀值

結(jié)果顯示，蒲公英50％乙醇提取物的效果要顯著優(yōu)于蒲公英其他提取物。為了進(jìn)一步了解蒲公英50％乙醇提取物的抗癌活性，本發(fā)明又進(jìn)一步進(jìn)行了如下嘗試：

實(shí)施例2蒲公英30％乙醇洗脫提取物的制備

將實(shí)施例1制備的蒲公英50％乙醇提取物過(guò)AB-8大孔樹脂，先用水洗去除雜質(zhì)，然后用30％乙醇洗脫，回收30％乙醇的洗脫液，減壓濃縮，凍干，即得。

實(shí)施例3蒲公英60％乙醇洗脫提取物的制備

將實(shí)施例1制備的蒲公英60％乙醇提取物過(guò)AB-8大孔樹脂，先用水洗去除雜質(zhì)，然后用60％乙醇洗脫，收集60％乙醇的洗脫液，減壓濃縮，凍干，即得。

實(shí)施例4蒲公英90％乙醇洗脫提取物的制備

將實(shí)施例1制備的蒲公英90％乙醇提取物過(guò)AB-8大孔樹脂，先用水洗去除雜質(zhì)，然后用90％乙醇洗脫，收集90％乙醇的洗脫液，減壓濃縮，凍干，即得。

實(shí)施例5蒲公英30％和60％乙醇洗脫提取物的制備(總醇洗脫物)

將實(shí)施例1制備的蒲公英90％乙醇提取物過(guò)AB-8大孔樹脂，先用水洗去除雜質(zhì)，然后依次用30％和60％乙醇洗脫，收集合并30％和60％乙醇的脫液，減壓濃縮，凍干，即得。

試驗(yàn)例二 蒲公英30％乙醇、60％乙醇、90％乙醇和總醇(30％+60％)洗脫提取物的腫瘤細(xì)胞試驗(yàn)

將實(shí)施例2-5制備的蒲公英30％乙醇洗脫提取物、蒲公英60％乙醇洗脫提取物、蒲公英90％乙醇洗脫提取物和蒲公英30％和60％乙醇洗脫提取物分別在肺癌H1299和PC-9細(xì)胞，乳腺癌MDA-MB-231和Hs578t細(xì)胞進(jìn)行比較，其結(jié)果如圖1-圖4所示。

結(jié)果顯示，蒲公英30％乙醇洗脫提取物和蒲公英60％乙醇洗脫提取物要優(yōu)于蒲公英90％乙醇洗脫提取物和蒲公英總醇(30％和60％乙醇)洗脫提取物，而蒲公英30％乙醇洗脫提取物要優(yōu)于蒲公英60％乙醇洗脫提取物，效果最好。

試驗(yàn)例三 蒲公英30％乙醇、60％乙醇、90％乙醇和總醇(30％+60％)洗脫提取物的抗腫瘤效果

選擇純系小鼠(裸鼠)130只，隨機(jī)分為15組，每組10只，分別為三組對(duì)照組(生理鹽水20ml/kg)，H1299實(shí)施例2-5組(分別使用實(shí)施例2-5的濃度為250μg/ml的提取物2.5mg/kg)，PC-9實(shí)施例2-5組(分別使用實(shí)施例2-5的濃度為250μg/ml的提取物2.5mg/kg)，MDA-MB-231實(shí)施例2-5組(分別使用實(shí)施例2-5的濃度為250μg/ml的提取物2.5mg/kg)，分別于小鼠右側(cè)腋窩皮下接種腫瘤，在接種腫瘤第4天后開始給藥，以腹腔注射方式給藥，每天一次，連用6次，稱取瘤重，按照常規(guī)觀察方法測(cè)定生命延長(zhǎng)率和瘤重抑制率，結(jié)果如表2所示。

表2實(shí)施例2-5的蒲公英提取物的抗腫瘤效果

結(jié)果顯示，本發(fā)明實(shí)施例2的蒲公英30％乙醇洗脫提取物和實(shí)施例3的蒲公英60％乙醇洗脫提取物的抗腫瘤效果要優(yōu)于實(shí)施例4的蒲公英90％乙醇洗脫提取物和實(shí)施例5的蒲公英總醇(30％和60％乙醇)洗脫提取物，其中實(shí)施例2的蒲公英30％乙醇洗脫提取物的抗腫瘤效果最好。

鑒于蒲公英30％乙醇洗脫提取物的優(yōu)越活性，本發(fā)明HPLC技術(shù)對(duì)其成分進(jìn)行分析并對(duì)其中主要成分進(jìn)行了定量，HPLC圖譜參見附圖5，結(jié)果表明，蒲公英30％乙醇洗脫提取物中活性成分的重量百分比含量為：木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量為1.3-1.6％，木犀草素的含量為3.8-4.3％，槲皮素的含量為1.6-1.9％、10，15-十八碳二烯酸的含量為2.1-2.3％、9，10，11-三羥基-(12Z)-十八碳烯酸的含量為2.2-2.4％，以及苦樹素苷F的含量為3.1-3.4％。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非用以限定本發(fā)明的實(shí)質(zhì)技術(shù)內(nèi)容范圍，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)技術(shù)內(nèi)容是廣義地定義于申請(qǐng)的權(quán)利要求范圍中，任何他人完成的技術(shù)實(shí)體或方法，若是與申請(qǐng)的權(quán)利要求范圍所定義的完全相同，也或是一種等效的變更，均將被視為涵蓋于該權(quán)利要求范圍之中。