本發(fā)明屬于保健食品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種具有抗氧化功能的保健食品組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
自由基是指含有未配對的電子的原子、分子或基團(tuán)，由于自由基中含有未成對電子，具有配對的傾向，狀況不穩(wěn)定，具有高度的活性。自由基若要穩(wěn)定必須向鄰近的原子或分子奪取電子而使自己的電子成對，但也因此使得電子被奪的那個原子或分子成為新的自由基，引發(fā)連鎖反應(yīng)。這個過程就是“氧化”。
在正常情況下，人體內(nèi)的自由基是處于不斷產(chǎn)生與清除的動態(tài)平衡之中。自由基產(chǎn)生過多或清除過慢，它通過攻擊生命大分子物質(zhì)及各種細(xì)胞，會造成機(jī)體在分子水平、細(xì)胞水平及組織器官水平的各種損傷，加速機(jī)體的衰老進(jìn)程并誘發(fā)各種疾病。當(dāng)今社會化學(xué)制劑的大量使用、汽車尾氣和工業(yè)生產(chǎn)廢氣的增加等，令環(huán)境污染日趨嚴(yán)重，自由基與日俱增；而人們每天處于電視屏幕、電腦屏幕、復(fù)印機(jī)、手機(jī)等現(xiàn)代化工具的大量輻射中，射線可加速細(xì)胞的氧化，使自由基在體內(nèi)亂竄，加速老化。除此之外，吸煙、酗酒、運(yùn)動過度、壓力過大、食用過多的加工食品，過度攝取油脂等也會誘導(dǎo)過多自由基產(chǎn)生。這些驟然增加的自由基超過了生命所能正常保持平衡的標(biāo)準(zhǔn)，令人體應(yīng)接不暇，皮膚可能出現(xiàn)皺紋、斑點(diǎn)等老化現(xiàn)象，而內(nèi)臟器官與血管也會因過度氧化而產(chǎn)生老化與功能衰退，這是引起心腦血管疾病、高血壓、糖尿病等退化性疾病的主要因素。研究證實(shí)，至少有70種以上的疾病與自由基有關(guān)?？梢哉f，自由基是“萬病之源”。
要減少、減緩這種氧化過程對人體的損傷，就涉及到了抗氧化物的研究與使用。抗氧化物是以低濃度存在就能有效抑制自由基的氧化反應(yīng)的物質(zhì)，可以是直接作用在自由基，或是間接消耗掉容易生成自由基的物質(zhì)，防止發(fā)生進(jìn)一步反應(yīng)。
因此，開發(fā)具有抗氧化功能的保健食品，對于提高人們的生命質(zhì)量，達(dá)到真正健康，滿足市場需求都具有重大的意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
基于上述原因，申請人經(jīng)過多年臨床研究基礎(chǔ)上，以傳統(tǒng)中醫(yī)為基礎(chǔ)，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和營養(yǎng)學(xué)研究，將葡萄籽提取物、人參提取物和葛根提取物進(jìn)行組合，獲得一種具有抗氧化功能的新的組合物。
發(fā)明的目的在于公開一種保健食品組合物及其制備方法。
本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種保健食品組合物,由以下重量份的原料組成：葡萄籽提取物2～60、人參提取物1～15、葛根提取物2～65。
優(yōu)選重量份的原料為：葡萄籽提取物10～22、人參提取物2～8、葛根提取物12～24。
進(jìn)一步優(yōu)選重量份的原料為：葡萄籽提取物16、人參提取物5、葛根提取物18。
制備所述一種保健食品組合物的方法，取凈選后的葡萄籽、人參、葛根三種原料，常溫下，分別用70％乙醇回流提取三次，每次2小時，第一次加7倍量70％乙醇，第二次加5倍量70％乙醇，第三次加3倍量70％乙醇，三次所得提取液合并濾過，濾液濃縮至60℃相對密度1.15-1.25，常規(guī)噴粉干燥方法，粉碎，即得到粉狀的葡萄籽提取物、人參提取物、葛根提取物；所得三種提取物分別過80目篩后，投入混合機(jī)混合30分鐘，得混合粉。該混合粉加入輔料制成硬膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑等口服制劑。
本發(fā)明的組合物通過實(shí)驗(yàn)表明具有抗氧化功能。中老年人食用，能夠起到延緩衰老的效果。組合物中的人參中含有多種抗氧化物質(zhì)，有抗脂質(zhì)過氧化作用，是抗衰老作用的基礎(chǔ)。葡萄籽提取物原花青素是廣泛存在于植物界屬于雙黃酮衍生物天然多酚化合物，具有強(qiáng)抗氧化功效。葛根提取物中的葛根素具有強(qiáng)抗自由基抗氧化性作用。三者科學(xué)揉合在一起，能夠起到很好的協(xié)同增效作用。
實(shí)驗(yàn)例：
以下是本發(fā)明組合物抗氧化功能的實(shí)驗(yàn)，該試驗(yàn)是在多次試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)本發(fā)明所要保護(hù)的技術(shù)方案進(jìn)行的結(jié)論性試驗(yàn)。
1、實(shí)驗(yàn)動物：KM小鼠，SPF級，雌性，體重25-28g。遼寧長生生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證：SCXK(遼)-2015-0001。動物合格證：211002300012577。
2、計量選擇及受試物給予方式：
試驗(yàn)藥物：取葡萄籽提取物150g、人參提取物60g、葛根提取物180g，加入硬脂酸鎂10g，混合均勻，制粒，裝入膠囊，制成1000粒硬膠囊劑，0.4g/粒。
按推薦人體日攝入量的30倍、10倍、5倍設(shè)計，試驗(yàn)設(shè)0.80g/kgBW、0.27g/kgBW、0.13g/kgBW高劑量、中劑量、低劑量3個實(shí)驗(yàn)組、模型對照組和空白對照組。
3、主要儀器與試劑：儀器：電子天平(型號：FA2204B；型號：DT100)；計時器；722分光光度計；高速冷凍離心機(jī)(型號：HC-3618R)；紫外分光光度計(型號:UV-2800)。
試劑：無水乙醇，北京化工廠，批號：20130920；丙二醛測試盒，南京建成生物工程研究所，批號：20160521；蛋白質(zhì)羰基測試盒，南京建成生物工程研究所，批號：20160524；超氧化物歧化酶測試盒，南京建成生物工程研究所，批號：20160518；還原型谷胱甘肽測試盒，南京建成生物工程研究所，批號：20160528；蛋白質(zhì)測試盒，南京建成生物工程研究所，批號：20160427。
4、試驗(yàn)方法：
⑴乙醇氧化損傷模型的建立
選25－30g健康成年雌性小鼠，隨機(jī)分為5個組，每組12只。1個空白對照組，1個模型對照組和3個受試樣品劑量組。3個劑量組給予不同濃度受試樣品，空白對照組和模型對照組給予同體積蒸餾水，連續(xù)灌胃30天，末次灌胃后，模型組對照組和3個劑量組禁食16小時(過夜)，然后1次性灌胃給予50％乙醇12ml/kgBW，6小時后取材(空白對照組不作處理，不禁食取材)。解剖小鼠摘取肝臟組織立即投入液氮中冷凍，低溫冰箱保存。精確稱量100mg肝臟組織加0.9ml生理鹽水，冰水浴條件下，機(jī)械勻漿，制備成10％的勻漿液，3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，取上清液進(jìn)行測定。測肝臟組織中脂質(zhì)氧化產(chǎn)物含量、蛋白質(zhì)羰基含量、還原性谷胱甘肽含量、抗氧化酶活力。
⑵脂質(zhì)氧化產(chǎn)物測定
丙二醛(MDA)測定：取肝組織勻漿上清液，采用MDA測試盒方法，按說明書操作，于722型光柵分光光度計532mn處測吸光度值。計算MDA含量。
⑶蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物測定
蛋白質(zhì)羰基測定：取肝組織勻漿上清液，采用蛋白質(zhì)羰基測試盒方法，按說明書方法操作于370nm處測定各管吸光度值。計算蛋白質(zhì)羰基含量。
⑷抗氧化酶活力測定
超氧化物歧化酶(SOD)活力測定：取肝組織勻漿上清液，采用SOD測試盒方法，按說明書方法操作于550nm處，比色。計算SOD活力。
⑸抗氧化物質(zhì)測定
還原型谷胱甘肽(GSH)測定：取肝組織勻漿上清液，采用還原型谷胱甘肽(GSH)測試盒方法，按說明書操作于420nm處，測吸光度值。計算GSH含量。
5、試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計：
采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實(shí)驗(yàn)組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計。對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計。
6、檢驗(yàn)指標(biāo)：
⑴小鼠體重
⑵脂質(zhì)氧化產(chǎn)物：丙二醛
⑶蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物：蛋白質(zhì)羰基
⑷抗氧化酶：超氧化物歧化酶
⑸抗氧化物質(zhì)：還原性谷胱甘肽
7、結(jié)果判定：
脂質(zhì)氧化產(chǎn)物、蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物、抗氧化酶、抗氧化物質(zhì)四項(xiàng)指標(biāo)中三項(xiàng)陽性，可判定該受試樣品抗氧化功能動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。
8、結(jié)果
⑴對小鼠體重的影響
表1對小鼠體重的影響
由表1可見，受試樣品三個劑量組在給予受試樣品期間，對小鼠體重增長無明顯影響，與空白對照組比較無顯著性差異。
⑵對肝臟組織中丙二醛含量的影響
表2對肝臟組織中丙二醛含量的影響
注：p1為與空白對照組，p2為與模型對照組比較。與空白對照組比較##p<0.01；與模型對照組比較*p<0.05。
由表2可見，模型對照組丙二醛含量明顯高于空白對照組，有非常顯著性差異；與模型對照組比較0.80g/kgBW劑量組明顯降低，有顯著性差異。表明在本實(shí)驗(yàn)條件下，該受試樣品有降低脂質(zhì)過氧化作用，該項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果陽性。
⑶對肝臟組織中蛋白質(zhì)羰基含量的影響
表3對肝臟組織中蛋白質(zhì)羰基含量的影響
由表3可見，模型對照組蛋白質(zhì)羰基含量高于空白對照組，但無顯著性差異；與模型對照組比較各劑量組無顯著性差異。表明在本實(shí)驗(yàn)條件下，該受試樣品無明顯降低蛋白質(zhì)過氧化作用，該項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果陰性。
⑷對肝臟組織中超氧化物歧化酶含量的影響
表4對肝臟組織中超氧化物歧化酶含量的影響
注：與空白對照組比較##p<0.01，###p<0.001；與模型對照組比較**p<0.01。
由表4可見，模型對照組SOD含量明顯低于空白對照組，有非常顯著性差異；與模型對照組比較0.80g/kgBW劑量組明顯增高，有非常顯著性差異。表明在本實(shí)驗(yàn)條件下，該受試樣品有升高抗氧化酶活力作用，該項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果陽性。
⑸對肝臟組織中還原型谷胱甘肽含量的影響
表5對肝臟組織中還原型谷胱甘肽含量的影響
注：與空白對照組比較###p<0.001；與模型對照組比較*p<0.05。
由表5可見，模型對照組GHS含量明顯低于空白對照組，有非常顯著性差異；與模型對照組比較0.80g/kgBW劑量組明顯增高，有顯著性差異。表明在本實(shí)驗(yàn)條件下，該受試樣品有升高抗氧化物質(zhì)GSH作用，該項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果陽性。
9、小結(jié)
受試樣品0.80g/kgBW、0.27g/kgBW、0.13g/kgBW三個劑量組每天灌胃給予小鼠一次，灌胃體積20ml/kgBW，空白對照組和模型對照組給同體積蒸餾水，連續(xù)給予30天。在本實(shí)驗(yàn)條件下，與乙醇氧化損傷模型對照組比較，該受試樣品能明顯降低小鼠肝臟組織中丙二醛含量(p<0.05)，該受試樣品有降低脂質(zhì)過氧化作用，脂質(zhì)氧化產(chǎn)物測試結(jié)果陽性；對蛋白質(zhì)羰基含量無明顯影響(p>0.05)，該受試樣品無明顯降低脂質(zhì)過氧化作用，蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物測試結(jié)果陰性；能明顯升高超氧化物歧化酶活力(p<0.01)，該受試樣品有升高抗氧化酶活力作用，抗氧化酶活性測試結(jié)果陽性；能明顯升高還原型谷胱甘肽含量(p<0.05)，該受試樣品有升高抗氧化物質(zhì)GSH作用，抗氧化物質(zhì)GSH測試結(jié)果陽性；對動物體重增長無明顯影響(p<0.05)。
根據(jù)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，判定受試樣品具有抗氧化功能。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1：取凈選后的葡萄籽、人參、葛根原料，分別用70％乙醇回流提取3次，每次2小時，第一次加7倍量70％乙醇，第二次加5倍量70％乙醇，第三次加3倍量70％乙醇，3次所得提取液合并濾過，濾液濃縮至60℃相對密度1.15-1.25，常規(guī)噴粉干燥法，粉碎，即分別得到粉狀的葡萄籽提取物、人參提取物、葛根提取物,分別過80目篩后，取16kg葡萄籽提取物、5kg人參提取物、18kg葛根提取物，投入混合機(jī)混合30分鐘，得混合粉，該混合粉加入輔料1kg硬脂酸鎂，混合均勻，制成硬膠囊劑，每粒膠囊中有效成分為0.3-0.5g，也可制成片劑、顆粒劑、散劑等口服制劑。
實(shí)施例2：取20kg葡萄籽提取物、8kg人參提取物、11kg葛根提取物，加入1kg硬脂酸鎂，混合均勻，制粒，填裝膠囊，即得膠囊劑。其他過程與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例3：取10kg葡萄籽提取物、5kg人參提取物、24kg葛根提取物，加入1kg硬脂酸鎂，混合均勻，制粒，填裝膠囊，即得膠囊劑。其他過程與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例4：取16kg葡萄籽提取物、5kg人參提取物、18kg葛根提取物，加入4kg糊精、2.5kg淀粉、0.5kg微晶纖維素，混合均勻，制粒，整粒，壓片，即得片劑。其他過程與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例5：取16kg葡萄籽提取物、5kg人參提取物、18kg葛根提取物，加入30kg糊精、10kg糖粉，混合均勻，制粒，即得顆粒劑。其他過程與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例6：取2kg葡萄籽提取物、15kg人參提取物、65kg葛根提取物，混合均勻，制粒，即得膠囊劑。其他過程與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例7：取60kg葡萄籽提取物、1kg人參提取物、1kg葛根提取物，混合均勻，制粒，即得膠囊劑。其他過程與實(shí)施例1相同。