本發(fā)明涉及從微生物生長培養(yǎng)基上生長的微生物生態(tài)系統(tǒng)(＝微生物群)中分離微生物和固體(例如，纖維)物質(zhì)后得到的生化組合物及其用于治療和預(yù)防疾病的用途。
用于本發(fā)明的培養(yǎng)微生物群可以來自任意多細(xì)胞動物，包括哺乳動物和人。
現(xiàn)有技術(shù)
胃腸道包含多個復(fù)雜的微生態(tài)系統(tǒng)，其中微生物相互作用與“溝通”，并通過與腸上皮相互作用與宿主生物體相互作用和“溝通”。
構(gòu)成腸道微生物群的微生物之間的自然生態(tài)平衡可能受到外部和內(nèi)部物理、化學(xué)和生物因素或藥劑的干擾，其結(jié)果可能是嚴(yán)重的感染和/或代謝和器官功能受到干擾。
如果腸道微生物群的生態(tài)平衡受到破壞可導(dǎo)致生命危險的腹瀉，艱難梭菌感染就是嚴(yán)重細(xì)菌感染的一個例子。在約1/3個世紀(jì)之前首次提出了艱難梭菌相關(guān)性腹瀉(cdad)。盡管在pubmed上有數(shù)以千計的關(guān)于發(fā)病機制，流行病學(xué)，臨床診斷和各種治療方法的出版物，cdad仍然是引起傳染性衛(wèi)生保健相關(guān)胃腸道疾病的代價高的、主要的原因，并且發(fā)病率急劇上升。過去10年來，cdad在歐洲、美國、加拿大發(fā)生了十倍的增長。
已經(jīng)報道了越來越多的甲硝唑和萬古霉素治療失敗。新的抗生素，如非達霉素(fidaxomicin)、奧利萬星、硝唑尼特、rep3123和nvb303，正在進入市場以解決這一令人震驚的疾病問題。必須認(rèn)識到，即使之前使用過這些藥物，一定數(shù)量的艱難梭菌也降低了對新抗生素的敏感性。因此，這些細(xì)菌將在含有新抗生素的環(huán)境中占主導(dǎo)地位，抗生素將不可避免地逐漸喪失功效。另外，無論臨床療效如何，使用它們肯定是昂貴的。
許多cdad患者在完成和重復(fù)抗生素治療后會經(jīng)歷復(fù)發(fā)性腹瀉。因此，多年來人們一直關(guān)注其他治療方法。最有效的治療方法，即糞便微生物群移植(fmt)，包括通過從健康的供體，大部分是近親屬，移植新鮮的糞便以引入有益的微生物群。
fmt通常通過胃腸道輸注液體糞便懸浮液進行。微生物群移植還通過口服攝入包封的糞便制劑進行，用于治療胃腸道疾病。
fmt不是沒有風(fēng)險。一個主要問題是攜帶抗生素抗性基因的細(xì)菌的傳播風(fēng)險。這種基因的轉(zhuǎn)移在將來需要抗生素治療時可能給患者帶來嚴(yán)重后果。fmt的另一個主要問題是傳播供體糞便中存在的潛在傳染性藥物的風(fēng)險。為了減少這種風(fēng)險，供體必須進行仔細(xì)的健康檢查，糞便樣品必須經(jīng)受全面、耗時和昂貴的實驗室檢測。此外這種類型的治療還被許多醫(yī)生和患者認(rèn)為是非常不理智的。
下面是描述fmt現(xiàn)有技術(shù)的出版物中的一部分：
johans.bakken.faecalbacteriotherapyforrecurrentclostridiumdifficileinfection.anaerobe15(2009)285-289.
vannoode,vriezea,nieuwdorpm,etal.duodenalinfusionofdonorfecesforrecurrentclostridiumdifficile.nengljmed.2013；368(5):407-415.
austinm,mellowm,tierneywm.fecalmicrobiotatransplantationinthetreatmentofclostridiumdifficileinfections.amjmed.2014；127(6):479-483.
youngsteri,saukj,pindarc,etal.fecalmicrobiotatransplantforrelapsingclostridiumdifficileinfectionusingafrozeninoculumfromunrelateddonors:arandomized,open-label,controlledpilotstudy.clininfectdis.2014；58(11):1515-1522.
在所有關(guān)于fmt的文獻中，有一個常見且普遍接受的關(guān)于這種治療療法的解釋超過了其他各種理由，即通過重新引入腸道細(xì)菌來恢復(fù)患者的腸道微生物群的生態(tài)平衡。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，在實驗室培養(yǎng)中人工生長的腸道微生物也具有與那些fmt相當(dāng)?shù)闹委熜Ч?。這在以下出版物中有所描述：
c.jorup-ronstrom,ahakansson,a-kperson,tmidtvedt,enorin.feceskulturframgangsrikterapividclostridiumdifficile-diarre.lakartidningennr462006volym103,3603-3605.
a.gustafsson,a.berstad,s.
a.gustavsson,s.
faecalshort-chainfattyacidsinpatientswithantibiotic-associated
diarrhoea,beforeandafterfaecalenematreatment.scandjgastroenterol1998；33:721-727.
wo2011/033310也應(yīng)屬于現(xiàn)有技術(shù)之列。該發(fā)明涉及包含厭氧培養(yǎng)的人腸道微生物群的厭氧微生態(tài)系統(tǒng)及其作為功能性播種培養(yǎng)物用于使受擾人微生物群和胃腸功能恢復(fù)正常的用途。它還涉及使用該組合物預(yù)防和治療疾病以及制備該組合物的方法。
移植人工培養(yǎng)的微生物群的治療效果歸因于活體移植的細(xì)菌，如fmt。
應(yīng)該注意的是，根據(jù)wo2011/033310，fmt和人造腸細(xì)菌移植的治療潛力遠遠超過cdad。干擾腸道微生物群是影響全世界數(shù)百萬人的許多疾病的根本原因，主要是在西方社會。疾病如糖尿病(1型和2型)，代謝綜合征，病態(tài)肥胖，腸易激綜合征(ibs)，炎癥性腸病(克羅恩病，潰瘍性結(jié)腸炎)，神經(jīng)和行為障礙(慢性疲勞綜合征，自閉癥譜系障礙，adhd，帕金森病)，炎性和免疫學(xué)疾病(哮喘和過敏)和抗生素相關(guān)性腹瀉(aad)，都與腸道微生物群的生態(tài)失衡有關(guān)。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，從生長有腸道微生物群和/或糞便的培養(yǎng)基中移除細(xì)菌制備的組合物可以用于治療或預(yù)防疾病，并立即緩解遭受胃腸道感染的患者的疼痛。
與fmt的情況不同，本發(fā)明的一個優(yōu)點是沒有細(xì)菌從供體轉(zhuǎn)移，因此顯著降低了細(xì)菌基因轉(zhuǎn)移可能對人或動物接受者的健康帶來負(fù)面影響的風(fēng)險。
這種非常意外的發(fā)現(xiàn)的治療意義已經(jīng)在例如身患嚴(yán)重腸易激綜合征(ibs)和慢性疲勞綜合征/me的人類患者的許多疾病中得到證實。通過胃鏡將本發(fā)明的組合物輸注入十二指腸后，患者腹痛迅速減輕并且腹瀉明顯減少，并且大便更堅硬。
本發(fā)明的組合物含有在人造生長培養(yǎng)基上的完整的微生物群中的所有微生物生長過程中產(chǎn)生的組分的組合物。這些微生物群衍生組分也存在于健康人和動物結(jié)腸內(nèi)，可包括脂肪酸、硫化氫、氨和許多不同的揮發(fā)性和非揮發(fā)性發(fā)酵產(chǎn)物。盡管這些組分中的一些可以單獨地影響腸功能，但是它們都沒有被證明具有任何治療潛力，不管是單獨使用還是與特定的發(fā)酵產(chǎn)物的預(yù)定組合。
與現(xiàn)有技術(shù)中由腸道細(xì)菌產(chǎn)生的特定發(fā)酵產(chǎn)物或這些產(chǎn)物的組合對健康的影響截然不同，本發(fā)明涉及一種組合物，其通過所含有的成分的協(xié)同作用，提供治療和預(yù)防功效。
作為本發(fā)明的邏輯結(jié)果，本文描述的組合物可以與其它許多物質(zhì)或試劑結(jié)合并組合使用，以改善效果和實際使用情況。該組合物是由構(gòu)成一個腸道微生物群復(fù)雜生態(tài)系統(tǒng)的大量微生物之間的協(xié)同作用和相互影響而產(chǎn)生的所有產(chǎn)物的生化包。因此，該組合物可作為單一產(chǎn)品用于改善腸道健康，以及作為益生元制劑來促進由fmt或由培養(yǎng)的腸道微生物群引入的微生物群的生態(tài)相互作用的穩(wěn)定。
具體實施方式
在本申請中用語“微生物群”是指通常棲息在胃腸系統(tǒng)中的微生物。
本發(fā)明涉及一種組合物，其通過從生長培養(yǎng)基中移出微生物群，并從微生物群中去除培養(yǎng)基而獲得，在所述生長培養(yǎng)基中，腸道微生物群已在生理學(xué)可接受的介質(zhì)中被培養(yǎng)。
本發(fā)明的第一方面是一種組合物，其含有通過在培養(yǎng)基中培養(yǎng)腸道微生物群并通過離心或過濾來除去微生物群而獲得的上清液。
根據(jù)一個實施方案，根據(jù)wo2013/053836a1，其以引用的方式并入本文，本發(fā)明中的廢(spent)生長培養(yǎng)基是在人造實驗室培養(yǎng)基上生長完整的微生物生態(tài)系統(tǒng)之后收集的培養(yǎng)濾液。
在厭氧條件下可以生成數(shù)百種不同細(xì)菌種類的完整生態(tài)系統(tǒng)，以保持微生物的多樣性。可以使用嚴(yán)格的厭氧條件。
使用這種無菌非糞便制劑的目的不是重設(shè)缺失的微生物(fmt(＝糞便微生物群移植)的目的)，而是利用從細(xì)菌中分開和分離的生長培養(yǎng)基。
令人驚奇并且意外的是，人們發(fā)現(xiàn)在生態(tài)穩(wěn)定性下大量細(xì)菌物種厭氧生長后剩余的大量“生態(tài)穩(wěn)定化”產(chǎn)物，有許多臨床效應(yīng)，例如對實施例4所述的ibs。
根據(jù)一個實施方案，糞便漿液在生理學(xué)上可接受的培養(yǎng)基中制備，例如，在生理鹽水中。這可以通過切碎糞便，例如，通過培養(yǎng)基中的攪拌器，來完成。培養(yǎng)基可以通過過濾從糞便物質(zhì)中除去，或通過在與其接觸最多四天，例如，1-3天，2-14小時，1-60分鐘，如10-60分鐘后離心后獲得上清液。溫度可以在15至40℃之間，優(yōu)選室溫。整個程序可以在嚴(yán)格的無氧條件下進行。
用于本發(fā)明的腸道微生物群可衍生自任何動物(例如，牛，馬，貓，狗，羊，山羊，雞，鴨，鵝)的胃腸系統(tǒng)的任何部分。根據(jù)一個實施方案，腸道微生物群來自人類胃腸系統(tǒng)的任何部分，例如，胃，十二指腸，小腸，盲腸或結(jié)腸。
糞便和/或微生物群可以衍生自任何物種，并且從固體物質(zhì)和細(xì)胞中脫離的組合物或上清液可以是任意物種。根據(jù)一個實施方案，糞便和/或微生物群來源于-并且組合物或上清液可以是-相同的物種。
微生物群可以在細(xì)菌生長培養(yǎng)基上培養(yǎng)，優(yōu)選厭氧培養(yǎng)，也可以在充足的氧和其它代謝電子受體的存在下培養(yǎng)，以允許兼性厭氧和微好氧微生物的生長。
在與其接觸最多四天后，例如，1-3天，2-14小時，1-60分鐘，如10-60分鐘，培養(yǎng)基可以從微生物群中移出，溫度可以在15至40℃之間，優(yōu)選室溫。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，厭氧培養(yǎng)的人腸道微生物群被用來生產(chǎn)本發(fā)明的組合物。根據(jù)一個實施方案，在該培養(yǎng)物中使用的微生物群含有屬于以下四個門類中的至少三個的細(xì)菌：擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門和放線菌門。
所述培養(yǎng)基可以是包含添加膽固醇的酵母基蛋白胨，優(yōu)選動物來源的膽固醇，和數(shù)量為0.5至5％，優(yōu)選1.25％w/v(重量/體積)的冷凍干燥的蛋黃。
根據(jù)一個實施方案，使用加入1.25％(w/v)冷凍干燥的蛋黃(fresenius-kabisweden)的預(yù)先還原滅菌的細(xì)菌蛋白胨酵母基培養(yǎng)基(difco，usa)，以及使用作為厭氧指示劑的刃天青。
根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，使用含有動物來源的膽固醇和1.25％冷凍干燥的蛋黃(fresenius-kabi，sweden)的蛋白胨酵母基培養(yǎng)基(difco，usa)，以及使用作為厭氧指示劑的刃天青。
本發(fā)明的組合物包含屬于上述門類的細(xì)菌的生長期間產(chǎn)生的產(chǎn)物。已經(jīng)從中除去細(xì)菌的這種組合物，意外的顯示出在治療或預(yù)防疾病中有用。
可以通過本發(fā)明治療或預(yù)防的疾病為例如抗生素治療后的腹瀉(抗生素相關(guān)性腹瀉)，特別是由艱難梭菌引起的腹瀉，其可以持續(xù)非常長時間并且難以通過常規(guī)方法治療，并且在極少數(shù)情況下會導(dǎo)致死亡。其他治療領(lǐng)域是腸易激綜合征(ibs)，腹腔疾病和炎癥性腸病，例如潰瘍性結(jié)腸炎，克羅恩病，顯微結(jié)腸炎和結(jié)腸袋炎(pauchitis)。另一個治療領(lǐng)域是腸道微生物組織的醫(yī)源性干擾/異常，例如，接受放射治療，化學(xué)療法以及與移植相關(guān)。可以用本發(fā)明治療或預(yù)防的其它疾病的實例有：神經(jīng)系統(tǒng)疾病，例如帕金森病，阿爾茨海默病，盧伽雷氏病(lou-gehrig'sdisease)，als-肌萎縮性側(cè)索硬化癥，多發(fā)性硬化癥；行為/精神疾病，例如自閉癥，阿斯伯格綜合征，注意缺陷多動障礙(adhd)和抑郁癥；風(fēng)濕病，例如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；和全身/代謝紊亂，例如：高血壓，肥胖癥和2型糖尿病，以及胃腸道腫瘤(neoplastic)/腫塊(tumour)疾病。本發(fā)明也可用于治療慢性疲勞綜合征。本發(fā)明還可用于治療皮膚病，例如尋常痤瘡。
培養(yǎng)來自動物或人的微生物群直到形成成熟的微生物群時獲得的濾液，可用于治療和預(yù)防那些在其發(fā)展的初期由于缺乏微生物群或其濾液中特定的組合物的病癥。這種疾病的例子有：自閉癥，孤獨癥譜系障礙，近視，1型糖尿病，過敏性，特應(yīng)性濕疹和哮喘。
除了人類以外，本發(fā)明的組合物可以施用于任何動物如家畜，例如，牛，豬，馬，貓，狗，羊，山羊，雞，鴨，鵝和水產(chǎn)養(yǎng)殖中的動物，例如，魚和蝦。
本發(fā)明的組合物可以通過選自鼻-十二指腸管，胃鏡，結(jié)腸/乙狀結(jié)腸鏡和灌腸劑的裝置，或通過冷凍干燥的形式以合適的蓋倫制劑，例如，耐胃酸膠囊，納米膠囊或栓劑，施用于動物或人類。
在一個實施方式中，所述組合物還可以包含其他的添加劑或因子，包括對疾病有活性的載體材料和信號傳導(dǎo)物質(zhì)。
所述組合物可以作為：a)新鮮制備的液體培養(yǎng)物濾液或離心上清液；b)在施用于患者之前需解凍的冷凍制劑；c)干燥或冷凍干燥的液體培養(yǎng)物濾液或離心上清液；d)含有液體或干燥產(chǎn)物的膠囊：e)片劑和顆粒被提供。
日劑量應(yīng)調(diào)整為與1-100ml新鮮制備的組合物的含量相對應(yīng)的活性物質(zhì)的量，優(yōu)選為20-40ml。
本發(fā)明可以在一年中的數(shù)天內(nèi)每天至少一次施用于胃腸道，例如，1-365天，具體取決于問題的性質(zhì)、原因和嚴(yán)重程度。
該產(chǎn)物可優(yōu)選地根據(jù)以下非限制性實例給藥：以溶液的形式通過，例如鼻-十二指腸管，胃鏡，結(jié)腸/乙狀結(jié)腸鏡，灌腸或通過冷凍干燥的形式以合適的蓋倫制劑，例如，耐胃酸膠囊，納米膠囊或栓劑。
可以向組合物中加入利于施用或支持本發(fā)明效果的其它物質(zhì)和組分，例如β-葡聚糖，類囊體，細(xì)菌和藻類制劑。
所述組合物可以包含藥學(xué)上可接受的賦形劑。
如本文所用的，用語“藥學(xué)上可接受的賦形劑”，包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何生理學(xué)惰性的，藥理學(xué)惰性的材料，其與所述組合物的物理和化學(xué)特性相容。藥學(xué)上可接受的賦形劑包括，但不限于，溶劑，助溶劑，緩沖體系，表面活性劑，防腐劑，甜味劑，調(diào)味劑，藥用級染料或顏料，粘度劑，等滲劑，舒緩劑，防腐劑，抗氧化劑，和著色劑。
所述組合物包含通過構(gòu)成腸道微生物群的復(fù)雜生態(tài)系統(tǒng)的微生物的協(xié)同作用得到的產(chǎn)物的組合物，因此所述組合物邏輯上在益生元部門有用，并且作為一種制劑，在消化系統(tǒng)中預(yù)處理微生物環(huán)境以成功的建立由fmt或通過人工培養(yǎng)的微生物群引入的腸道微生物群。所述組合物也可用于動物和人類的膳食配方。
現(xiàn)在將通過以下非限制性實施例描述本發(fā)明。
實施例
實施例1：微生物群的培養(yǎng)
根據(jù)本發(fā)明的微生物群在1995年之前從健康單一供體的糞便樣品獲得。供體和糞便都經(jīng)過徹底的檢查。我們發(fā)現(xiàn)供體腸道微生物群的機能狀態(tài)具有正辛醇，尿蛋白，粘蛋白，糞便30胰蛋白酶活性，短鏈脂肪酸和β-天冬氨酰甘氨酸的正常功能值。肝炎病毒a、b和c，巨細(xì)胞病毒，愛潑斯坦-巴爾病毒，人類免疫缺陷病毒(hiv)，杯狀病毒和輪狀病毒的測試均為陰性。
此外，篩選糞便是否存在沙門氏菌，志賀氏菌，彎曲桿菌，耶爾森菌，艱難梭菌和原生動物囊腫，所有這些檢查均為陰性。
從上述健康供體中取出糞便樣品(布里斯托2型)內(nèi)部的糞便樣品，并立即懸浮于30ml預(yù)先還原滅菌的蛋白胨酵母基培養(yǎng)基(difco，usa)中，并加入1.25％(w/v)冷凍干燥的蛋黃(費森尤斯卡比瑞典)和作為厭氧指示劑的刃天青。所述組合物每隔一周在氮氣流下再培養(yǎng)。培養(yǎng)物的細(xì)菌含量為>109每ml培養(yǎng)基。加入10％甘油后，所述組合物可以儲存在-80℃。
所述產(chǎn)品含有以下物種：
細(xì)菌；“放線菌”；放線菌；紅蝽菌亞綱(coriobacteridae)；紅蝽菌目(coriobacteriales)；“紅蝽菌亞目(coriobacterineae)”；紅蝽菌科；柯林斯菌(collinsella)，
細(xì)菌；“放線菌”；放線菌；紅蝽菌亞綱(coriobacteridae)；紅蝽菌目(coriobacteriales)；“紅蝽菌亞目(coriobacterineae)”；紅蝽菌科；遲緩埃格特菌(eggerthella)，
細(xì)菌；“放線菌”；放線菌；紅蝽菌亞綱(coriobacteridae)；紅蝽菌目(coriobacteriales)；“紅蝽菌亞目(coriobacterineae)”；紅蝽菌科；olsenella，
細(xì)菌；“擬桿菌”；“擬桿菌屬(bacteroidia)”；“擬桿菌目(bacteroidales)”；“紫單胞菌科(porphyromonadaceae)”；parabacteroides，
細(xì)菌；“擬桿菌”；“擬桿菌屬(bacteroidia)”；“擬桿菌目(bacteroidales)”；“普雷沃氏菌科”；普氏菌，
細(xì)菌；“擬桿菌”；“擬桿菌屬(bacteroidia)”；“擬桿菌目(bacteroidales)”；“理研菌科”，alistipes，
細(xì)菌；“擬桿菌”；“擬桿菌屬(bacteroidia)”；“擬桿菌目(bacteroidales)”；擬桿菌科；擬桿菌，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“芽孢桿菌”；“乳桿菌”；“腸球菌科”；腸球菌，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”；梭菌；“真桿菌科”；真桿菌，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”；梭菌；“真桿菌科”；未分類的“真桿菌科”，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；“毛螺菌科”；anaerostipes，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；“毛螺菌科”；dorea，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；“毛螺菌科”；羅斯氏(roseburia)，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；“毛螺菌科”；未分類的“毛螺菌科”，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；“消化鏈球菌科”，sporacetigenium，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；“消化鏈球菌科”，未分類的“消化鏈球菌科”，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；“疣微菌科”；厭氧細(xì)桿菌(anaerofilum)，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；“疣微菌科”；anaerotruncus，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；“疣微菌科”；顫桿菌克，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；“疣微菌科”；未分類的“疣微菌科”，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；梭菌科；“梭菌科1”；梭菌，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；梭菌科；“梭菌科1”；未分類的“梭菌科1”，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；螺旋藻xi；anaerococcus，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；螺旋藻xi；finegoldia，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；螺旋藻xi；peptoniphilus，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；螺旋藻xi；未分類的-螺旋藻xi，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；螺旋藻xiii；anaerovorax，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；螺旋藻xiii；mogibacterium，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；螺旋藻xiv；blautia,
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；未分類的梭菌，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“梭狀芽胞桿菌”梭菌；韋榮氏球菌科；韋榮球菌，
細(xì)菌；“厚壁菌門”；“產(chǎn)芽胞菌(erysipelotrichi)”，“erysipelotrichales”；erysipelotrichaceae；holdemania，和
細(xì)菌；“變形菌”；β-變形菌；伯克氏菌目；產(chǎn)堿桿菌科(alcaligenaceae)；parasutterella，
加入10％甘油后，所述組合物可以儲存在-80℃。
實施例2通過從微生物培養(yǎng)物中除去細(xì)菌和纖維物質(zhì)來制備組合物
將含有根據(jù)實施例1制得的培養(yǎng)的微生物群的離心管以對應(yīng)于1000g的旋轉(zhuǎn)速度離心30分鐘。除去脂質(zhì)材料的泡沫表面層，傾析液相，然后在1000g下再離心30分鐘以沉淀剩余的細(xì)菌和纖維狀物質(zhì)。然后將傾析的液體通過0.25微米的微過濾器進行超濾，以確保所述組合物無菌。
實施例3家禽微生物群的培養(yǎng)
使用生活在傳統(tǒng)的小型養(yǎng)雞場在生態(tài)條件下生長的健康的母雞的新鮮糞便作為家禽微生物群的厭氧培養(yǎng)來源，除了培養(yǎng)溫度為41℃之外，在實施例1所述的條件下進行厭氧培養(yǎng)。在這些厭氧生長條件下培養(yǎng)7天后細(xì)菌的產(chǎn)量在109-1010之間。根據(jù)本發(fā)明，將所述濾液施予新孵出的小雞以促進健康的微生物腸道菌群的定植。
實施例4治療效果
2015年1月19日，一名36歲的女士使用實施例2制備的本發(fā)明的組合物在挪威醫(yī)院接受治療。她多年來一直患有腸易激綜合征、肌肉骨骼疼痛和疲勞。在治療時，她患有強烈的腹部疼痛，并且慢性疲勞評分與me診斷等級i一致。以20ml液體溶液的形式將本發(fā)明的組合物通過胃鏡在患者的十二指腸中遠端施用。8天后，病人描述說介入后她的腹部疼痛幾乎立即消失，并且無痛狀態(tài)持續(xù)至少3天。她還描述說相比治療之前腹瀉減少。