1.玫瑰花總黃酮提取純化工藝,其特征在于:所述工藝包括以下步驟:
A、取玫瑰花干燥藥材,粉碎后,加入乙醇回流提取,提取液過(guò)濾,備用;
B、將步驟A得到的提取液除去乙醇,得到一次濃縮液,一次濃縮液加入到AB-8型大孔樹(shù)脂中,依次經(jīng)水、5~10%乙醇洗至水澄清,乙醇顏色較淺,最后用80~85%乙醇洗脫,洗脫液除去乙醇,得二次濃縮液;
C、將步驟B中得到的二次濃縮液倒入裝好的聚酰胺柱中,依次用水、5~10%乙醇洗至水澄清,乙醇顏色較淺,最后用70~75%乙醇洗脫,洗脫液濃縮至干,得玫瑰花總黃酮粗品;
D、將步驟C中得到的玫瑰花總黃酮粗品用甲醇溶解,用聚酰胺拌樣、干燥得樣品,然后將樣品干法上樣到柱層析聚酰胺為填料,二氯甲烷和甲醇為溶劑濕法裝柱的柱子上,采用二氯甲烷:甲醇為 10:1~1:1的比例進(jìn)行梯度洗脫,根據(jù)TLC點(diǎn)板收集含總黃酮的洗脫液,洗脫液濃縮至干得純化玫瑰花總黃酮;
E、將步驟D得到的純化玫瑰花總黃酮用甲醇溶解后過(guò)濾,濾液到入C18柱中,以20%~70%的甲醇溶液為溶劑,在254nm波長(zhǎng)下梯度洗脫,收集含黃酮部分洗脫液,回收甲醇并濃縮,將濃縮液用C18柱富集,然后用甲醇解析,收集甲醇解析液,解析液除去甲醇并濃縮至干得玫瑰花總黃酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玫瑰花總黃酮提取純化工藝,其特征在于:還包括將步驟E得到的玫瑰花總黃酮用甲醇溶解,用聚酰胺拌樣、干燥得樣品,然后將樣品干法上樣到柱層析聚酰胺為填料,二氯甲烷和甲醇為溶劑濕法裝柱的柱子上,采用二氯甲烷:甲醇為10:1~1:1的比例進(jìn)行梯度洗脫,根據(jù)TLC點(diǎn)板收集含黃酮的洗脫液,洗脫液濃縮至干。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玫瑰花總黃酮的提取純化工藝,其特征在于:在步驟A中,所述乙醇的加入量為玫瑰花藥材重量的5~15倍,所述乙醇的體積濃度為70~75%,回流提取2~3次,每次1.5~2小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玫瑰花總黃酮提取純化工藝,其特征在于:在步驟D中,所述柱層析聚酰胺用量為玫瑰花總黃酮粗品總重80~120倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玫瑰花總黃酮提取純化工藝,其特征在于:在步驟D中,所述濕法裝柱時(shí)用二氯甲烷和甲醇的體積比為10:1。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玫瑰花總黃酮提取純化工藝,其特征在于:在步驟D中,采用二氯甲烷:甲醇為10:1~1:1比例進(jìn)行梯度洗脫的過(guò)程為 10:1流動(dòng)相洗脫15L,8:1流動(dòng)相洗脫10L,6:1流動(dòng)相洗脫10L,3:1流動(dòng)相洗脫10L,1:1流動(dòng)相洗脫15L,TLC點(diǎn)板收集黃酮反應(yīng)的洗脫液部分。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玫瑰花總黃酮提取純化工藝,其特征在于:在步驟E中,20%~70%的甲醇溶液梯度洗脫的過(guò)程為使用二元泵梯度制備,每2min分段收集,通過(guò)TLC點(diǎn)板檢測(cè),收集黃酮反應(yīng)的洗脫液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玫瑰花總黃酮提取純化工藝,其特征在于:在步驟E中,所述解析用甲醇濃度為90%。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的玫瑰花總黃酮提取純化工藝,其特征在于:所述柱層析聚酰胺用量為玫瑰花總黃酮粗品總重80~120倍,所述濕法裝柱時(shí)用二氯甲烷和甲醇的體積比為10:1;所述采用二氯甲烷:甲醇為10:1~1:1比例進(jìn)行梯度洗脫的過(guò)程為 10:1流動(dòng)相洗脫15L,8:1流動(dòng)相洗脫10L,6:1流動(dòng)相洗脫10L,3:1流動(dòng)相洗脫10L,1:1流動(dòng)相洗脫15L,TLC點(diǎn)板收集黃酮反應(yīng)的洗脫液部分。