本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。

背景技術(shù)：

引起肝損傷的原因有多個(gè)：1、病毒感染：由多種肝炎病毒引起，具有傳染性強(qiáng)，傳播途徑復(fù)雜，流行面廣泛，發(fā)病率高等特點(diǎn)。2、藥物或化學(xué)毒物：許多藥物和化學(xué)毒物都可引起肝臟損傷，發(fā)生藥物性肝炎或中毒性肝炎。3、酗酒：酒精對(duì)肝臟的損害是很嚴(yán)重的，損害的后果包括酒精性肝炎、酒精性脂肪肝、酒精性肝硬化，主要是由于酒精(乙醇)及其代謝產(chǎn)物乙醛的毒性對(duì)肝細(xì)胞直接損害造成的。4、其他原因：原發(fā)和繼發(fā)的肝臟腫瘤、心功能不全導(dǎo)致肝臟淤血、某些先天性肝臟疾病、靜脈高價(jià)營養(yǎng)等，都可以造成不同程度的肝損害，這些肝損害的早期表現(xiàn)往往是ALT(轉(zhuǎn)氨酶)或膽紅素的升高，不祛除病因，肝臟的損害會(huì)進(jìn)一步加重。目前在我國由于上述原因每年發(fā)生肝損傷的人數(shù)眾多，形勢不容樂觀。急需研發(fā)高效低毒的防治肝臟損傷藥物。

肝臟損傷的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物具有重要價(jià)值。

本發(fā)明涉及的化合物I是一個(gè)2009年發(fā)表(Sheng Yin et al.,2009.Harrisotones A–E,five novel prenylated polyketides with a rare spirocyclic skeleton from Harrisonia perforata.Tetrahedron 65(2009)1147–1152)的化合物，我們對(duì)化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對(duì)該組合物抗肝臟損傷活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其具有抗肝臟損傷活性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為10％和90％。

本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。

藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗肝臟損傷作用。本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽具有同樣的藥效。

以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí)施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1化合物Harrisotone A的制備

化合物Harrisotone A(I)的制備方法參照Sheng Yin等人發(fā)表的文獻(xiàn)(Sheng Yin et al.,2009.Harrisotones A–E,five novel prenylated polyketides with a rare spirocyclic skeleton from Harrisonia perforata.Tetrahedron 65(2009)1147–1152)的方法。

實(shí)施例2 Harrisotone A的O-溴乙基衍生物(II)的合成

將化合物I(472mg，1.00mmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨(TBAB)(0.08g)，1,2-二溴乙烷(3.760g，20.00mmol)和6mL的50％氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏度攪拌3h。3h之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然后對(duì)有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌2次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:1.5，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的黃色粉末(602mg，76％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ5.18(s,2H),4.56(s,2H),3.93(d,J＝16.7Hz,4H),3.79(s,2H),3.62(d,J＝0.9Hz,4H),3.15(s,2H),2.48(s,2H),2.41(d,J＝9.4Hz,4H),2.27(s,1H),1.95(s,1H),1.88–1.80(m,8H),1.77(d,J＝15.5Hz,7H),1.68(s,1H),1.61(s,1H),1.51(s,1H),1.25(d,J＝58.1Hz,1H),1.15–0.75(m,6H).¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.46(s),198.24(s),195.44(s),190.27(s),135.27(s),120.09(s),115.02(s),84.45(s),76.58(s),74.12(s),63.67(s),62.76(s),60.36(s),50.96(s),45.22(s),39.69(s),36.61(s),34.40(s),32.63(s),30.81(d,J＝8.9Hz),28.77(s),25.30(s),24.09(d,J＝19.2Hz),22.77(s),18.20(s).

HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd for C₃₄H₅₀Br₃O₆:793.1137；found 793.1134.

實(shí)施例3 Harrisotone A的O-(咪唑基)乙基衍生物(III)的合成

將化合物II(396mg，0.5mmol)溶于20mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg，2.5mmol)，碘化鉀(84mg，0.5mmol)和咪唑(3480mg，40mmol)，混合物加熱回流1h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:0.6，v/v)，收集淺棕色集中洗脫帶，濃縮即得到化合物III的淡棕色固體(271.4mg,72％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.85(s,3H),7.09(s,3H),6.71(s,3H),5.08(s,2H),4.48(s,2H),4.40(s,2H),4.14–4.07(m,3H),3.95(s,1H),3.85(s,2H),3.79(s,2H),3.35(s,2H),2.98(s,1H),2.45(s,1H),2.31(s,3H),2.15(s,2H),1.84(d,J＝10.9Hz,2H),1.81–1.69(m,8H),1.65(s,6H),1.62(s,1H),1.51(s,1H),1.45(s,1H),1.09(s,6H),0.93(s,1H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.45(s),198.22(s),195.43(s),190.25(s),139.82(s),135.27(s),128.86(s),120.07(s),119.48(s),115.02(s),84.42(s),76.58(s),66.07(s),62.74(s),60.34(d,J＝2.2Hz),50.94(s),45.21(s),44.01(d,J＝17.2Hz),39.66(s),36.61(s),30.78(d,J＝8.9Hz),28.77(s),25.27(s),24.09(d,J＝19.2Hz),22.74(s),18.20(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₄₃H₅₉N₆O₆:755.4496；found:755.4491。

實(shí)施例4 Harrisotone A的O-(苯并咪唑基)乙基衍生物的合成

將化合物II(396mg，0.5mmol)溶于25mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg，5.0mmol)，碘化鉀(252mg，1.5mmol)和苯并咪唑(4720mg，40mmol)，混合物加熱回流2h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:0.6，v/v)，收集淡棕色集中洗脫帶即得到化合物IV的棕色固體(244.1mg,54％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)8.22(s,3H),7.60(d,J＝25.0Hz,6H),7.24(s,3H),7.14(s,3H),5.11(s,2H),4.47(s,2H),4.44(s,2H),4.07(dd,J＝23.9,7.8Hz,4H),3.88(d,J＝14.6Hz,4H),3.12(s,2H),2.93(s,1H),2.61(s,2H),2.33(s,3H),1.89(s,1H),1.86(s,1H),1.75(d,J＝5.0Hz,7H),1.72–1.63(m,8H),1.59(s,1H),1.53(d,J＝8.5Hz,2H),1.42(s,1H),1.10(s,6H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.13(s),197.89(s),195.11(s),189.92(s),146.30(s),139.65(s),134.94(s),133.50(s),123.95(s),123.38(s),119.74(s),118.56(s),114.69(s),110.87(s),84.10(s),76.25(s),65.35(s),62.41(s),60.06(d,J＝7.3Hz),50.61(s),44.91(d,J＝5.4Hz),44.65(s),39.34(s),36.28(s),30.46(d,J＝8.9Hz),28.44(s),24.95(s),23.76(d,J＝19.2Hz),22.62(s),17.87(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₅₅H₆₅N₆O₆:905.4966；found:905.4963。

實(shí)施例5組合物防治肝損傷的作用

(一)組合物對(duì)D-氨基半乳糖胺(D-galactosamine，D-GalN)誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的防護(hù)作用

組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的10mg化合物III的粉末和研磨之后過200目網(wǎng)的90mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物，使用時(shí)用水溶解這100mg的組合物即得到組合物的溶液。

小鼠分5組。對(duì)照組以生理鹽水灌胃(0.3mL·d^-1)，連續(xù)7d；且于第7d還要腹腔注射生理鹽水(0.15mL·10g^-1)，腹腔注射16h后取血，測AST及ALT活力。D-GalN組、組合物3.0mg·kg^-1組、化合物III組和化合物IV組分別以生理鹽水、組合物、化合物III和化合物IV灌胃(0.3mL·d^-1)，連續(xù)7d；且于第7d還要腹腔注射D-GalN(800mg·kg^-1，0.15mL·10g^-1)，腹腔注射16h后取血，測AST及ALT活力。

表1組合物對(duì)D-GalN誘導(dǎo)的急性肝損傷的防護(hù)作用

注：¹⁾p<0.01vs對(duì)照組，²⁾p<0.01vs D-GalN組

由表1可知，組合物能有效抑制D-GalN引起的小鼠AST及ALT活性的顯著上升。化合物III和化合物IV無此作用。

(二)組合物對(duì)CCl₄誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的防護(hù)作用

小鼠分5組，對(duì)照組以生理鹽水灌胃(0.3mL·d^-1)，連續(xù)5d，第6d腹腔注射植物油每只0.1mL·10g^-1；CCl₄組及組合物、化合物III和化合物IV給藥組(3.0mg·kg^-1)分別以生理鹽水及組合物、化合物III和化合物IV灌胃(0.3mL·d^-1)，連續(xù)5d，于第6d腹腔注射0.1％CCl₄ 0.1mL·10g^-1。24h后處死動(dòng)物，取血清測AST及ALT活力。

表2組合物對(duì)CCl₄誘導(dǎo)的急性肝損傷的防護(hù)作用

注：¹⁾p<0.01vs對(duì)照組，²⁾p<0.01vs CCl₄組

由表2可知，組合物能抑制CCl₄引起的小鼠AST及ALT活性的顯著上升。化合物III和化合物IV無此作用。

結(jié)論：組合物能有效保護(hù)D-GalN引起的小鼠肝損傷，組合物能有效保護(hù)CCl₄引起的小鼠肝損傷，可以用來制備抗肝損傷藥物?；衔颕II和化合物IV不能有效保護(hù)D-GalN引起的小鼠肝損傷，不能有效保護(hù)CCl₄引起的小鼠肝損傷，不可以用來制備抗肝損傷藥物。

實(shí)施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備

取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。

實(shí)施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備

取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。