本發(fā)明屬于中醫(yī)藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療真菌感染的復(fù)方外用制劑及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

淺部真菌病是由皮膚癬菌、病原酵母菌等致病真菌或條件致病真菌感染人體皮膚、毛發(fā)和甲板等淺表組織而引起的一組疾病，占皮膚感染性疾病之首。隨著廣譜抗生素、糖皮質(zhì)激素的廣泛應(yīng)用，以及人員流動(dòng)、環(huán)境變化，淺部真菌病發(fā)病率呈日益上升的趨勢，且復(fù)發(fā)率可達(dá)15％，嚴(yán)重影響人類健康及生活。

外用抗真菌藥物主要為以特比萘芬、布替萘芬為代表的丙烯胺類和以克霉唑、酮康唑、硝酸益康唑?yàn)榇淼倪蝾愃幬?。近年來由抗真菌藥物與糖皮質(zhì)激素組合制成的復(fù)方外用制劑在皮膚科領(lǐng)域面世，具有快速止癢及控制局部紅斑丘疹等促進(jìn)炎癥反應(yīng)改善的特點(diǎn)，主要針對(duì)伴有明顯炎癥反應(yīng)的急性淺部真菌感染，也適用于繼發(fā)真菌感染的皮炎濕疹類疾病，代表性藥物為曲安奈德益康唑乳膏、復(fù)方克霉唑乳膏。該軟膏劑易造成涂布不均，污染衣物，凝膠劑具有使用方便、清潔衛(wèi)生、皮膚吸收好、穩(wěn)定均一、劑型美觀的特點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

特比萘芬能抑制單一的真菌酶——角鯊烯環(huán)氧酶，從而對(duì)真菌發(fā)揮抑殺效應(yīng)，藥效學(xué)研究結(jié)果表明國產(chǎn)和進(jìn)口的特比萘芬抑菌作用相當(dāng)，均優(yōu)于酮康唑。特比萘芬通過廣泛的肝臟代謝并主要從尿中清除(約80％)，總的血漿清除率為75％/h，血漿清除半衰期是11至16小時(shí)，其藥代動(dòng)力學(xué)在老年人和年輕人中相同。糠酸莫米為局部使用的糖皮質(zhì)激素，具有抗炎、抗過敏等作用，其特點(diǎn)表現(xiàn)在作用強(qiáng)度增加而副作用不成比例地增加。鹽酸特比萘芬和糠酸莫米松聯(lián)合應(yīng)用，制備的復(fù)方外用制劑，能很快穿透角質(zhì)層，發(fā)揮抗菌、消炎作用，且不會(huì)造成皮膚和全身不良反應(yīng)，應(yīng)用較安全，值得臨床推廣使用。

本發(fā)明的目的在于公開了一種治療真菌感染的復(fù)方外用制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于公開了一種治療真菌感染的復(fù)方外用制劑在制備治療真菌感染藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第三個(gè)目的在于公開了一種治療真菌感染的復(fù)方外用制劑的制備方法。

本發(fā)明第四個(gè)目的在于公開了上述制備方法制得的復(fù)方外用制劑在制備治療真菌感染藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種治療真菌感染的復(fù)方外用制劑，其中，所述復(fù)方外用制劑中由下列重量份的物質(zhì)組成：鹽酸特比萘芬50～150份、糠酸莫米松2.5～15份、卡波姆940NF 120～150份、三乙醇胺50～80份、乙醇2850～3050份、聚乙二醇-400 950～1050份、丙二醇1950～2050份、聚山梨酯80 300～400份、二甲基亞砜450～600份、乙二胺四乙酸二鈉5～15份，蒸餾水2600～2800份。

根據(jù)上述技術(shù)方案所述的一種治療真菌感染的復(fù)方外用制劑，其中，所述復(fù)方外用制劑中由下列重量的物質(zhì)組成：鹽酸特比萘芬100g、糠酸莫米松5g、卡波姆940NF 150g、三乙醇胺80g、乙醇3000g、聚乙二醇-400 1000g、丙二醇2025g、聚山梨酯80 400g、二甲基亞砜500g、乙二胺四乙酸二鈉10g和蒸餾水2730g。

根據(jù)上述技術(shù)方案所述的一種治療真菌感染的復(fù)方外用制劑的在制備治療真菌感染藥物中的應(yīng)用。

一種治療真菌感染的復(fù)方外用制劑的制備方法，其特征在于：所述制備方法包括以下步驟：

(1)、稱取上述技術(shù)方案所述的原料；

(2)、將聚乙二醇-400、丙二醇依次加入到卡波姆940NF中，攪勻；

(3)、將聚山梨酯80溶于2400ml蒸餾水中，混勻，并加至步驟(2)得到的液體中，攪拌均勻，溶脹過夜；

(4)、將三乙醇胺及乙二胺四乙酸二鈉溶于330ml蒸餾水中加入步驟(3)得到的液體，攪勻，即得凝膠基質(zhì)，備用；

(5)、稱取乙醇重量份的30％的乙醇；將鹽酸特比萘芬溶于重量為30％的乙醇中，逐漸加入步驟(4)得到的凝膠基質(zhì)中，攪勻；

(6)、稱取乙醇重量份的70％的乙醇；將糠酸莫米松溶于重量為70％的乙醇和二甲基亞砜中，逐漸加入步驟(5)得到的產(chǎn)物中攪勻，即得一種治療真菌感染的復(fù)方外用制劑。

根據(jù)上述技術(shù)方案所述的制備方法制得的復(fù)方外用制劑在制備治療真菌感染藥物中的應(yīng)用。

使用方法：局部外用，取本品適量涂敷于患處及其周圍，一日2次。體、股癬連續(xù)使用2-4周；手癬、足癬、花斑癬連續(xù)用藥4-6周。

本發(fā)明具有以下有益效果：

1、本發(fā)明的復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠為抗真菌藥物與糖皮質(zhì)激素組合制成的復(fù)方外用制劑，能很快穿透角質(zhì)層，發(fā)揮抗菌、消炎作用，具有快速止癢及控制局部紅斑丘疹等促進(jìn)炎癥反應(yīng)改善的特點(diǎn)，主要針對(duì)伴有明顯炎癥反應(yīng)的急性淺部真菌感染，也適用于繼發(fā)真菌感染的皮炎濕疹類疾病，且不會(huì)造成皮膚和全身不良反應(yīng)，應(yīng)用較安全，解決了臨床聯(lián)合用藥的問題。

2、本發(fā)明的復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠為水溶性凝膠，形態(tài)為透明至半透明狀的半固體狀制劑，能迅速作用于病灶，具有透皮吸收好，清潔衛(wèi)生等優(yōu)點(diǎn)，解決了市售該類復(fù)方乳膏制劑不宜涂抹均勻、污染衣物等問題。

具體實(shí)施方式：

為使本發(fā)明的技術(shù)方案便于理解，以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明一種治療真菌感染的復(fù)方外用制劑(以下稱：復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠)的制備方法作進(jìn)一步的說明。

實(shí)施例1：一種治療真菌感染的復(fù)方外用制劑的制備：

(1)、稱取下列重量的原料藥，其中：鹽酸特比萘芬100g、糠酸莫米松5g、卡波姆940NF 150g、三乙醇胺80g、乙醇3000g、聚乙二醇-400 1000g、丙二醇2025g、聚山梨酯80 400g、二甲基亞砜500g、乙二胺四乙酸二鈉10g，蒸餾水2730g；

(2)、將聚乙二醇-400(PEG-400)、丙二醇(PG)依次加入到卡波姆940NF中，攪勻；

(3)、將聚山梨酯80(Tween-80)溶于2400ml蒸餾水中，混勻，并加至步驟(2)得到的液體中，攪拌均勻，溶脹過夜；

(4)、將三乙醇胺(TEOA)及乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)溶于330ml蒸餾水中加入步驟(3)得到的液體，攪勻，即得凝膠基質(zhì)，備用；

(5)、從3000g乙醇中稱取900g乙醇；將鹽酸特比萘芬溶于900g乙醇中，逐漸加入步驟(4)得到的凝膠基質(zhì)中，攪勻；

(6)、從3000g乙醇中稱取2100g；將糠酸莫米松溶于2100g乙醇和二甲基亞砜(DMSO)中，逐漸加入步驟(5)得到的產(chǎn)物中攪勻；即得一種治療真菌感染的復(fù)方外用制劑，重量為10000g。

本發(fā)明復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠使用時(shí)將實(shí)施例1制備所得的復(fù)方外用制劑用鋁管灌裝1000支，即可使用。

實(shí)施例2：復(fù)方制劑中兩種原料藥最佳的組成比例的確定：

步驟(一)、鹽酸特比萘芬(TBNF)組份比例不變，考察糠酸莫米松(MF)不同的組份比例，對(duì)療效的影響。

據(jù)文獻(xiàn)及市售類似藥品，鹽酸特比萘芬在不同劑型中的組份比例均為1％，故先暫定鹽酸特比萘芬的組份比例為1％，考察復(fù)方凝膠制劑中糠酸莫米松的組份比例。為了確定糠酸莫米松在制劑中的組份比例及作用，同時(shí)增設(shè)鹽酸特比萘芬凝膠組。其各組主要含糠酸莫米松的組份比例為0.125％、0.1％、0.05％、0.025％、0％，用于治療須癬毛癬菌感染的豚鼠皮膚真菌病，結(jié)果見表1。

表1不同組份比例糠酸莫米松的復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠治療須癬毛癬菌感染動(dòng)物的療效評(píng)價(jià)(n＝9)

注：與C組相比，^△表示兩組療效評(píng)分比較，具有顯著性差異，P<0.05；^△△表示兩組療效評(píng)分比較，具有極顯著性差異，P<0.01。

結(jié)論：不同組份比例糠酸莫米松的復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠對(duì)豚鼠局部感染須癬毛癬菌治療結(jié)果表明，1％：0.05％組與1％：0.1％組療效優(yōu)于其他組，且兩組間無顯著性差異，考慮到糖皮質(zhì)激素長期應(yīng)用的安全性，優(yōu)選1％：0.05％組。

步驟(二)、由上述實(shí)驗(yàn)確定糠酸莫米松組份比例為0.05％，進(jìn)一步考察鹽酸特比萘芬不同組份比例對(duì)療效的影響。其各組主要含鹽酸特比萘芬的組份比例為1.5％、1％、0.5％，用于治療須癬毛癬菌感染的豚鼠皮膚真菌病，結(jié)果見表2。

表2不同組份比例鹽酸特比萘芬的復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠治療須癬毛癬菌感染動(dòng)物的療效評(píng)價(jià)(n＝9)

注：與C組相比，^△表示兩組療效評(píng)分比較，具有顯著性差異，P<0.05；^△△表示兩組療效評(píng)分比較，具有極顯著性差異，P<0.01。

結(jié)論：不同組份比例鹽酸特比萘芬的復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠對(duì)豚鼠局部感染須癬毛癬菌治療結(jié)果表明，E組(1.5％：0.05％)與C組(1％：0.05％)療效評(píng)分比較無顯著性差異，考慮到抗真菌藥的副作用，優(yōu)選1％：0.05％組。

由上述試驗(yàn)確定本品原料藥的最佳組成比例為：每克含鹽酸特比萘芬10mg，糠酸莫米松0.5mg。

實(shí)施例3：制備工藝的確定：

(一)、主藥的溶劑工藝選擇

我院研制的鹽酸特比萘芬凝膠按中國藥典2015年版四部通則(0114)凝膠劑項(xiàng)下屬于水性均一型半固體制劑，我院根據(jù)該處方及制劑類型，又根據(jù)鹽酸特比萘芬在乙醇中易溶，在水中微溶，在乙醚中幾乎不溶，糠酸莫米松在二氯甲烷、丙酮中溶解，在乙醇中微溶，在水中不溶的特性，判定處方中增添二甲基亞砜作為鹽酸特比萘芬和糠酸莫米松的溶劑，在工藝研究過程中，處方量的乙醇和二甲基亞砜可以滿足處方量鹽酸特比萘芬、糠酸莫米松的溶解，故選擇乙醇和二甲基亞砜作為藥物的溶劑。

(二)、主藥加入方式選擇

本發(fā)明在制備過程中發(fā)現(xiàn)，如果將主藥的乙醇溶液先加入卡波姆，再用三乙醇胺調(diào)節(jié)pH值時(shí)，主藥有時(shí)會(huì)出現(xiàn)析出現(xiàn)象，可能是因?yàn)榧尤肴掖及?中強(qiáng)度堿)調(diào)節(jié)pH值時(shí)可能與主藥間發(fā)生一定反應(yīng)；但如果采用先用三乙醇胺調(diào)節(jié)pH值后加入主藥的乙醇溶液，仍出現(xiàn)主藥析出的現(xiàn)象，可能是因?yàn)榭匪崮姿晌⑷苡谝掖嫉木壒剩虼吮景l(fā)明采用將糠酸莫米松溶于處方量的二甲基亞砜和70％處方量的乙醇中、鹽酸特比萘芬溶于30％處方量的乙醇中，依次緩慢的加入凝膠基質(zhì)中的方式，以制備復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠。

經(jīng)過影響因素試驗(yàn)、加速、長期試驗(yàn)結(jié)果表明：本品按照空軍總醫(yī)院的處方及按我院的工藝生產(chǎn)的樣品穩(wěn)定，與我院的鹽酸特比萘芬凝膠樣性狀基本相同。

參考中國藥典2015年版四部的規(guī)定，對(duì)本品進(jìn)行加速試驗(yàn)和長期試驗(yàn)，以便為藥品的生產(chǎn)、包裝、貯存、運(yùn)輸條件提供依據(jù)，同時(shí)通過試驗(yàn)確定藥品的有效期。

(三)、加速試驗(yàn)：

將上述包裝好的樣品，置于40℃±2℃、相對(duì)濕度75％±5％條件下放置6個(gè)月。分別于第0、1、2、3、6月末取樣進(jìn)行各項(xiàng)檢查。

結(jié)果：本品三批放大樣品經(jīng)加速試驗(yàn)考察6個(gè)月，樣品的外觀性狀、均勻性、有關(guān)物質(zhì)和含量等均無明顯變化，微生物限度檢查均符合規(guī)定，見表3。加速試驗(yàn)和長期試驗(yàn)說明本品穩(wěn)定性良好。

檢測項(xiàng)目：性狀、有關(guān)物質(zhì)、含量測定和微生物限度。

表3加速試驗(yàn)結(jié)果

(四)、長期試驗(yàn)：

將上述包裝好的樣品，置于25℃±2℃、相對(duì)濕度60％±10％條件下放置36個(gè)月。于第0、3、6、9、12、18、24、36個(gè)月末取樣進(jìn)行各項(xiàng)檢查。結(jié)果：本品三批放大樣品經(jīng)長期試驗(yàn)考察24個(gè)月，樣品的外觀性狀、均勻性、有關(guān)物質(zhì)和含量等均無明顯變化，微生物限度檢查均符合規(guī)定。說明本品穩(wěn)定性良好。結(jié)果見表4。

表4長期穩(wěn)定性試驗(yàn)

加速試驗(yàn)表明本品在上市包裝條件下，于40℃、相對(duì)濕度75％條件下放置6個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。長期試驗(yàn)表明，本品在長期試驗(yàn)條件下放置24個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)基本不變。

以下通過本發(fā)明實(shí)施例1制備所得的一種治療真菌感染的復(fù)方外用制劑的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)來說明本發(fā)明所具有的有益效果：

實(shí)驗(yàn)例1：藥效試驗(yàn)數(shù)據(jù)：

綜上試驗(yàn)結(jié)果，優(yōu)選復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠組份為每克含鹽酸特比萘芬10mg，含糠酸莫米松0.5mg。分別用復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠、鹽酸特比萘芬凝膠、曲安奈德益康唑乳膏、糠酸莫米松凝膠治療皮膚癬菌感染豚鼠模型，每感染區(qū)用藥量0.2g，2次/天，連續(xù)3周。每日觀察皮損，并在治療第0、8、14、18、21天進(jìn)行評(píng)估。評(píng)估內(nèi)容分為皮膚病變和真菌學(xué)檢查，取皮膚組織做病理檢測及培養(yǎng)。停藥一周計(jì)算復(fù)發(fā)率。

表5復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠對(duì)豚鼠皮膚感染須癬毛癬菌和犬小孢子菌真菌學(xué)治愈率

表6復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠對(duì)治療須癬毛癬菌感染動(dòng)物的療效評(píng)價(jià)(n＝9)

注：H組為復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠，K組為曲安奈德益康唑乳膏，L組為鹽酸特比萘芬凝膠，M組0.05％糠酸莫米松凝膠，N組為賦形劑組，O組為空白對(duì)照組

表6中與H組相比，△表示兩組療效評(píng)分比較，具有顯著性差異，P<0.05；△△表示兩組療效評(píng)分比較，具有極顯著性差異，P<0.01。與N組相比，#表示P>0.05。

由表5和表6可知，在治療須癬毛癬菌感染豚鼠的皮膚真菌病方面，復(fù)方鹽酸特比萘芬的療效優(yōu)于鹽酸特比萘芬凝膠(P<0.05)、曲安奈德益康唑乳膏(P<0.01)。

表7復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠對(duì)治療犬小孢子菌感染動(dòng)物的療效評(píng)價(jià)(n＝9)

注：(P)為復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠組，(Q)為鹽酸特比萘芬凝膠，(R)為曲安奈德益康唑乳膏，(S)0.05％糠酸莫米松凝膠

表7中與P組相比，△表示兩組療效評(píng)分比較，具有顯著性差異，P<0.05；△△表示兩組療效評(píng)分比較，具有極顯著性差異，P<0.01。與Q組相比，▼表示P<0.05。

由表7可知，在治療犬小孢子菌感染豚鼠的皮膚真菌病方面，復(fù)方鹽酸特比萘芬的療效最優(yōu)。

小結(jié)：復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠對(duì)豚鼠皮膚局部感染須癬毛癬菌、犬小孢子菌治療結(jié)果表明，其1-3周療效明顯優(yōu)于曲安奈德益康唑乳膏、糠酸莫米松凝膠(P<0.01)，且停藥一周復(fù)發(fā)率低。

復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠組與鹽酸特比萘芬凝膠組相比，在表觀療效評(píng)價(jià)方面，復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠在治療須癬毛癬菌感染豚鼠皮膚真菌病時(shí)，在8-18天療效較優(yōu)(P<0.05)，在治療犬小孢子菌感染豚鼠皮膚真菌病時(shí)，在14天及18天療效較優(yōu)(P<0.05)。在病理療效評(píng)價(jià)方面，結(jié)果見表8、表9。

表8豚鼠皮膚感染須癬毛癬菌給藥3周病理結(jié)果

表9豚鼠皮膚感染須癬毛癬菌給藥3周病理結(jié)果

綜上所述：在治療須癬毛癬菌和犬小孢子菌局部感染豚鼠真菌病上，復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠的療效明顯優(yōu)于鹽酸特比萘芬凝膠。

結(jié)論：復(fù)方鹽酸特比萘芬凝膠在治療須癬毛癬菌和犬小孢子菌局部感染豚鼠真菌病上，療效最佳。

以上所述，僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并非對(duì)本發(fā)明作任何形式上和實(shí)質(zhì)上的限制，凡熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明技術(shù)方案范圍內(nèi)，當(dāng)可利用以上所揭示的技術(shù)內(nèi)容，而作出的些許更動(dòng)、修飾與演變的等同變化，均為本發(fā)明的等效實(shí)施例；同時(shí)，凡依據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)技術(shù)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何等同變化的更動(dòng)、修飾與演變，均仍屬于本發(fā)明的技術(shù)方案的范圍內(nèi)。