本發(fā)明涉及一種化合物4-吲哚-6-苯基哌啶4-Iodo-6-phenylpyrimidine的新用途，特別是在制備治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)復(fù)雜性及神經(jīng)元死亡后的不可替代性決定了在所有神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療的終極目標(biāo)都是盡可能的挽救神經(jīng)元的存活，其直接關(guān)系到臨床療效和病人長期生存的質(zhì)量。目前，缺血性中風(fēng)，神經(jīng)退行性病的發(fā)病率很高，常會(huì)嚴(yán)重剝奪患者的勞動(dòng)和生活自理能力，已成為困擾國民生活和國家醫(yī)療財(cái)政的重大健康問題。在這些神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生和進(jìn)展中神經(jīng)元死亡無疑是重要的病理改變。因此目前對(duì)于神經(jīng)元死亡的分子機(jī)制的研究是國內(nèi)外研究的一個(gè)熱點(diǎn)， 同時(shí)研究如何阻止神經(jīng)元的死亡也是治療上述疾病的重要手段。缺血性中風(fēng)和神經(jīng)退行性疾病是兩大類主要致死和致殘性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，前者治療的關(guān)鍵是挽救缺血-再灌注損傷區(qū)域的神經(jīng)元，后者亦是阻止新病灶的發(fā)展并以挽救神經(jīng)元為最終目的。目前發(fā)現(xiàn)腦缺血再灌注損傷,谷氨酸興奮性毒性及各種炎性反應(yīng)導(dǎo)致的神經(jīng)死亡的主要原因之一是由聚腺苷酸二磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶-1（PARP-1）過度激活介導(dǎo)的區(qū)別于凋亡和壞死的細(xì)胞死亡，又稱Parthanatos（PARP-1依賴性細(xì)胞死亡）。發(fā)生在神經(jīng)細(xì)胞的parthanatos，可以用DNA 烷化劑甲基硝基亞硝基胍（N-Methyl-N′-nitro-N-nitrosoguanidine，MNNG) 處理腫瘤細(xì)胞Hela 細(xì)胞得到相同的結(jié)果，所有的細(xì)胞都通過PARP-1 的過度激活而造成parthanatos 死亡。我們利用這個(gè)細(xì)胞模型篩選化合物庫發(fā)現(xiàn)化合物4-Iodo-6-phenylpyrimidine可以阻止MNNG處理的Hela的死亡, 化合物4-Iodo-6-phenylpyrimidine的分子式為C₁₀H₇IN₂，英文縮寫為4-IPP。進(jìn)而我們發(fā)現(xiàn)其同樣能阻止神經(jīng)細(xì)胞的死亡，因?yàn)镹MDA（N-methyl-D-aspartic acid，N-甲基-D-天冬氨酸）處理神經(jīng)細(xì)胞可以在培養(yǎng)細(xì)胞水平上模擬缺血性中風(fēng)及神經(jīng)退行性病神經(jīng)細(xì)胞死亡的過程，而500uM的NMDA處理不能殺死加了化合物4-IPP的神經(jīng)細(xì)胞。因此化合物4-IPP可以通過阻止缺血性中風(fēng)、神經(jīng)退行性疾病等疾病中的parthanatos 細(xì)胞死亡來治療這些神經(jīng)系統(tǒng)疾病。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的之一在于提供化合物4-Iodo-6-phenylpyrimidine在制備治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的之二在于提供化合物4-Iodo-6-phenylpyrimidine在制備神經(jīng)退行性疾病藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的之三在于提供化合物4-Iodo-6-phenylpyrimidine在制備阻止神經(jīng)細(xì)胞的parthanatos死亡藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的之四在于提供化合物4-Iodo-6-phenylpyrimidine作為神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑在制備治療缺血性中風(fēng)藥物中的應(yīng)用。

試驗(yàn)表明，該化合物4-Iodo-6-phenylpyrimidine 具有明顯的保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞在各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病損害情況下的存活作用。因此，可以用于制備治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物。所制備的藥物可以是以該化合物為活性成分，且含有藥學(xué)上可以接受的載體的組合物，活性成分的重量含量為0.1-99.95％。藥物劑型可以是片劑、粉劑、粒劑和注射劑等。

附圖說明

圖1，MNNG處理不能殺死加了化合物4-IPP的Hela細(xì)胞。(A) 20倍相差顯微鏡下典型圖片顯示加了50uM的化合物4-IPP的Hela細(xì)胞經(jīng)50uM MNNG處理15分鐘再培養(yǎng)24小時(shí)后細(xì)胞基本不死（右上圖），對(duì)照組的Hela細(xì)胞經(jīng)同樣條件處理后細(xì)胞完全死亡（右下圖）。（B）柱狀統(tǒng)計(jì)圖說明經(jīng)4次重復(fù)實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)經(jīng)50uM MNNG處理15分鐘再培養(yǎng)24小時(shí)后，加了50uM的化合物4-IPP的Hela細(xì)胞與對(duì)照組的存活率，差異極其顯著，Mean±SEM, P<0.001。

圖2，500uM的NMDA處理不能殺死加了化合物4-IPP的神經(jīng)細(xì)胞。

(A) PI/Hochest活細(xì)胞染色典型圖片顯示加了50uM的化合物4-IPP的神經(jīng)細(xì)胞經(jīng)500uM NMDA處理15分鐘再培養(yǎng)24小時(shí)后細(xì)胞死亡率相對(duì)于照組大大減少，對(duì)照組（加DMSO組）的神經(jīng)細(xì)胞經(jīng)同樣條件處理后細(xì)胞大部分完全死亡，顯示為PI染色細(xì)胞增多。（B）柱狀統(tǒng)計(jì)圖說明經(jīng)4次重復(fù)實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)經(jīng)500uM NMDA處理15分鐘再培養(yǎng)24小時(shí)后，加了50uM的化合物4-IPP的神經(jīng)細(xì)胞與對(duì)照組的存活率，差異極其顯著，Mean±SEM, P<0.001。

具體實(shí)施方式

下面的實(shí)施例可以使本專業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。

實(shí)施例1：Hela細(xì)胞的培養(yǎng)及MNNG的處理

Hela細(xì)胞用含10%胎牛血清的DMEM正常傳代培養(yǎng)，待其長到90%融合度時(shí)，用50uM MNNG 37度細(xì)胞培養(yǎng)箱中處理15分鐘（對(duì)照組加等體積二甲基亞砜DMSO，篩選組或處理組加溶于DMSO的化合物），換回正常培養(yǎng)基再培養(yǎng)24小時(shí)后，對(duì)照組100%的細(xì)胞都已經(jīng)死亡并懸浮在培養(yǎng)基中。

實(shí)施例2：神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng)

C57BL6小鼠，胎鼠（E12-14）取出大腦皮層組織，在解剖液中先剪碎，用0.125%胰蛋白酶在37℃孵育30min，移入接種液（MEM含1%谷氨酰胺，另加入10%馬血清），停止消化，并洗去胰蛋白酶液，用細(xì)口吸管吹打細(xì)胞懸液，使其充分分散，如此多次，待沉淀后吸出上層細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，預(yù)置細(xì)胞密度，移入接種液接種于預(yù)先涂有多聚賴氨酸的康寧12孔培養(yǎng)板，隔夜換維持培養(yǎng)液（MEM中含5%馬血清，1%谷氨酰胺）每周換液兩次，每次換1/2。培養(yǎng)3-5天后，用阿糖胞苷，或5-FU抑制神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的生長。

實(shí)施例3： 神經(jīng)細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)

具體實(shí)驗(yàn)過程為：取實(shí)施例2中的小鼠神經(jīng)細(xì)胞，培養(yǎng)兩周后，用500uM NMDA 37度細(xì)胞培養(yǎng)箱中處理15分鐘（對(duì)照組加等體積二甲基亞砜DMSO，處理組加溶于DMSO的化合物），換回正常培養(yǎng)基再培養(yǎng)24-48小時(shí)。

實(shí)施例4：Hoechst/PI雙染檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞壞死

因?yàn)閴乃兰?xì)胞細(xì)胞膜的完整性被破壞，細(xì)胞膜的通透性增強(qiáng)，因此進(jìn)入壞死細(xì)胞中的Hoechst 33342與PI染料比正常細(xì)胞的多。而PI等染料是不能進(jìn)入細(xì)胞膜完整的活細(xì)胞中，即正常細(xì)胞在不經(jīng)固定的情況下對(duì)這些染料是拒染，壞死細(xì)胞由于膜完整性在早期即已破損，可被這些染料染色。根據(jù)這些特性，用Hoechst 33342結(jié)合PI等染料對(duì)壞死細(xì)胞進(jìn)行雙染色，就可在熒光顯微鏡上將正常細(xì)胞和壞死細(xì)胞區(qū)別開來，并可以標(biāo)定細(xì)胞總數(shù)目與壞死細(xì)胞數(shù)目。正常細(xì)胞為高藍(lán)色/低紅色（Hoechst 33342+/PI-），壞死細(xì)胞為高藍(lán)色/高紅色（Hoechst 33342+/PI++）。通過這種方法對(duì)壞死神經(jīng)細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，并統(tǒng)計(jì)存活率。

具體實(shí)驗(yàn)過程為：取實(shí)施例3中的小鼠神經(jīng)細(xì)胞，使用凱基生物的“KGA-212熒光Hoechst33342/PI雙染檢測(cè)試劑盒。終止培養(yǎng)后吸除培養(yǎng)液，用冷Buffer A洗滌細(xì)胞二次，滴加150 μlhoechst33342工作液和75ulPI工作液(原液稀釋10倍)，室溫避光染色10 min，在相應(yīng)波長激發(fā)熒光倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞核形態(tài)。