本申請要求2015年8月21日向韓國專利局提交的韓國專利申請No.10-2015-0118267的權(quán)益，其通過提述完整并入本文。

發(fā)明背景

1.領(lǐng)域

本公開涉及用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中與神經(jīng)細(xì)胞的脫髓鞘有關(guān)的疾病的組合物，用于促進(jìn)哺乳動(dòng)物中神經(jīng)細(xì)胞的髓鞘再生或抑制脫髓鞘的組合物，用于降低哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中PMP22表達(dá)的組合物，預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中神經(jīng)細(xì)胞的脫髓鞘有關(guān)的疾病的方法，促進(jìn)哺乳動(dòng)物中神經(jīng)細(xì)胞的髓鞘再生或抑制脫髓鞘的方法，和降低哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中PMP22表達(dá)的方法。

2.相關(guān)領(lǐng)域說明

脫髓鞘疾病(demyelinating disease)是神經(jīng)系統(tǒng)的疾病，其中神經(jīng)元的髓鞘受損。該損傷損害受影響神經(jīng)元中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，繼而，根據(jù)受影響的是哪些神經(jīng)，導(dǎo)致感覺、運(yùn)動(dòng)、認(rèn)知或其他功能中的缺陷。脫髓鞘疾病可以包括影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的疾病。周圍神經(jīng)系統(tǒng)的脫髓鞘疾病包括格-巴二氏綜合征(Guillain-Barre Syndrome)和夏-馬-圖三氏(Charcot Marie Tooth,CMT)病。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的脫髓鞘疾病包括多發(fā)性硬化。已顯示抗壞血酸在動(dòng)物模型中針對周圍神經(jīng)病是有效的；然而，該化合物在臨床測試中失敗。因此，需要用于脫髓鞘疾病的基礎(chǔ)性治療的藥物。

發(fā)明概述

提供了用于預(yù)防或治療與哺乳動(dòng)物中神經(jīng)細(xì)胞的脫髓鞘有關(guān)的疾病的組合物，該組合物包含2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物。

提供了用于促進(jìn)哺乳動(dòng)物中神經(jīng)細(xì)胞的髓鞘再生或抑制脫髓鞘的組合物，所述組合物包含2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物。

提供了用于降低哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中周圍髓磷脂蛋白22(PMP22)表達(dá)的組合物，所述組合物包含2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物。

提供了預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中與神經(jīng)細(xì)胞的脫髓鞘有關(guān)的疾病的方法，所述方法包括對該哺乳動(dòng)物施用有效量的2,5-二羥基苯磺酸或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物，從而預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中與神經(jīng)細(xì)胞的脫髓鞘有關(guān)的疾病。

提供了促進(jìn)哺乳動(dòng)物中神經(jīng)細(xì)胞的髓鞘再生或抑制脫髓鞘的方法，所述方法包括對該哺乳動(dòng)物施用有效量的2,5-二羥基苯磺酸或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物，從而促進(jìn)哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中的髓鞘再生或抑制脫髓鞘。

提供了降低哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中PMP22表達(dá)的方法，該方法包括對哺乳動(dòng)物施用有效量的2,5-二羥基苯磺酸或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物，由此降低該哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中PMP22的表達(dá)。

另外的方面部分將在以下說明書中列出，部分從說明書將是明顯的或可通過實(shí)踐所呈現(xiàn)的例示性實(shí)施方案而知悉的。

附圖簡述

從對例示性實(shí)施方案的以下說明連同所附附圖，這些和/或其它方面將變得明顯和更容易領(lǐng)會(huì)的。

圖1例示了通過大鼠施旺(Schwann)細(xì)胞的Western印跡的PMP22基因表達(dá)分析的結(jié)果，包括在存在以不同濃度(小圖A)和暴露時(shí)間(小圖B)的酚磺乙胺(ES)的情況下過表達(dá)的PMP22；

圖2提供使用共聚焦激光顯微鏡獲得的斑馬魚(Mbp:gal4；UAS:nfsB(NTR,毒素)::UAS:gfp)的顯微鏡圖像，和用于髓鞘形成、脫髓鞘和髓鞘再生的實(shí)驗(yàn)規(guī)程的示意圖(小圖A-D)；

圖3例示了在不同條件下(小圖A-D)孵育的斑馬魚(Mbp:gal4::UAS:nfsB(NTR,毒素)::UAS:gfp)的后側(cè)線神經(jīng)(PLL)軸突周圍的髓磷脂上使用共聚焦激光顯微鏡的綠色熒光蛋白(GFP)--熒光顯微術(shù)的結(jié)果；

圖4例示了在不同條件下(小圖A-C)孵育的斑馬魚(Claudink:gal4::UAS:nfsB(NTR,毒素)::UAS:gfp)的周圍神經(jīng)系統(tǒng)的髓磷脂上使用共聚焦激光顯微鏡的GFP-熒光(綠色)顯微術(shù)和使用乙酰化-微管蛋白染色(紅色熒光)的免疫熒光顯微術(shù)的結(jié)果；

圖5例示了從圖4中熒光圖像的熒光強(qiáng)度獲得的有髓鞘軸突對總軸突的比率；

圖6例示了在不同條件下(小圖A-C)孵育的斑馬魚(Claudink:gal4::UAS:nfsB(NTR,毒素)::UAS:gfp)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中Mauthner軸突和髓磷脂的切片上使用共聚焦激光顯微鏡的源自GFP的熒光顯微術(shù)和使用特異于軸突表達(dá)的乙?；?微管蛋白的免疫染色的紅色熒光顯微術(shù)的結(jié)果；

圖7是將g比率定義為軸突對神經(jīng)纖維的直徑比的示意圖；和

圖8是從圖6的結(jié)果獲得的g比率的圖。

發(fā)明詳述

現(xiàn)將對例示性的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)提述，其例子例示在附圖中，其中相似的參照編號(hào)從頭到尾指相似的要素。在此方面，目前的例示性實(shí)施方案可能具有不同形式且不應(yīng)理解為受限于本文中陳述的說明。因此，下文僅通過參照附圖描述了例示性實(shí)施方案以解釋各方面。如本文中使用的，術(shù)語“和/或”包括一個(gè)/種或多個(gè)/種所列關(guān)聯(lián)項(xiàng)的任意和所有組合。表述如“至少一個(gè)/種”在置于一組要素之前時(shí)修飾整組要素而不修飾該組的單個(gè)要素。

根據(jù)本公開的第一方面，提供用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中與神經(jīng)細(xì)胞的脫髓鞘有關(guān)的疾病的組合物，所述組合物包含2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物。

根據(jù)本公開的第二方面，提供用于促進(jìn)哺乳動(dòng)物中神經(jīng)細(xì)胞的髓鞘再生或抑制脫髓鞘的組合物，所述組合物包含2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物。

根據(jù)本公開的第三方面，提供用于降低哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中周圍髓磷脂蛋白22(PMP22)表達(dá)的組合物，所述組合物包含2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物。

在根據(jù)本公開的第一、第二和第三方面的組合物中，所述2,5-二羥基苯磺酸可以可以為其藥學(xué)可接受的鹽的形式。藥學(xué)可接受的鹽的例子可以包括通常用于制藥領(lǐng)域的酸加成鹽，例如源自無機(jī)酸如鹽酸、溴酸、硫酸、氨基磺酸(sulfamic acid)、磷酸或硝酸的鹽；和源自有機(jī)酸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、檸檬酸、馬來酸、丙二酸、甲磺酸、酒石酸、蘋果酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、2-乙酰氧基苯甲酸(2-acetoxybenzoic acid)、富馬酸、甲苯磺酸、草酸、或三氟乙酸的鹽。藥學(xué)可接受的鹽的例子可以包括堿加成鹽，例如源自堿如銨、二甲胺、一甲胺、一乙胺或二乙胺的鹽。藥學(xué)可接受的鹽的例子可以包括常見金屬鹽，例如源自金屬如鋰、鈉、鉀、鎂或鈣的鹽。上述酸加成鹽、堿加成鹽和金屬鹽可以根據(jù)本領(lǐng)域中常見的方法制備。例如，堿加成鹽或金屬鹽可以通過使2,5-二羥基苯磺酸的離子形式，即2,5-二羥基苯磺酸根/鹽與適宜堿(例如二乙胺)或金屬離子(例如鈣、鎂或鈉離子)反應(yīng)而獲得。例如，所得堿加成鹽可以是2,5-二羥基苯磺酸二乙銨鹽(下文中的“酚磺乙胺(ethamsylate)”)。

2，5-二羥基苯磺酸的藥學(xué)可接受的鹽可以具有式1的結(jié)構(gòu)。

在式1中，M可以是[NH_4-xR_x]⁺，其中x可以是0,1,2,3或4；且當(dāng)x>1時(shí)，R(s)可以彼此相同或不同，例如，可以是分支或不分支的C_1-4-烷基(alkyl-radical)。

2,5-二羥基苯磺酸可以為其溶劑合物的形式。術(shù)語“溶劑合物”指包含或組成為至少一種溶質(zhì)分子(即由式1代表的化合物或該化合物的藥學(xué)可接受鹽)；和至少一種溶劑分子的復(fù)合物或聚集物。溶劑合物可以是例如與水、甲醇、乙醇、異丙醇或乙酸形成的復(fù)合物或聚集物。

2,5-二羥基苯磺酸可以為化合物的立體異構(gòu)體的形式。立體異構(gòu)體的例子包括所有類型的立體異構(gòu)體如對映異構(gòu)體(enantiomer)和非對映異構(gòu)體(diastereomer)。2,5-二羥基苯磺酸化合物可以為一種立體異構(gòu)體的立體異構(gòu)上純的形式或至少兩種立體異構(gòu)體的混合物，例如外消旋混合物?？墒褂帽绢I(lǐng)域中已知的方法之一來實(shí)施特定立體異構(gòu)體的分離。

2,5-二羥基苯磺酸可以是化學(xué)合成或商業(yè)購買的。

在本公開的第一、第二和第三方面中，所述組合物可以是藥物組合物。所述組合物可進(jìn)一步包含藥學(xué)可接受的載體。如本文使用的，術(shù)語“藥學(xué)可接受的載體”指與活性成分組合使用的材料，其一般為惰性材料，以幫助活性成分的應(yīng)用。藥學(xué)可接受的載體的例子通常可包括，藥學(xué)可接受的賦形劑、添加劑或稀釋劑。藥學(xué)可接受的載體的例子可包括選自下組的至少一種：填充劑、粘合劑、崩解劑、緩沖劑、防腐劑、抗氧化劑、滑潤劑、調(diào)味劑、稠化劑、增色劑、乳化劑、懸浮劑、穩(wěn)定劑和等滲劑。

所述組合物可以以“治療有效的量”包含2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物。在組合物中，術(shù)語“治療有效的量”如用于本文指在對需要治療的受試者施用時(shí)產(chǎn)生治療效果的充足量。術(shù)語“治療/處理”如用于本文指治療受試者，如哺乳動(dòng)物(包括人)的疾病或醫(yī)學(xué)狀況，例如與脫髓鞘有關(guān)的疾病，且治療的含義如下：(a)改善疾病或醫(yī)學(xué)狀況，如通過消除患者的疾病或醫(yī)學(xué)狀況或?qū)е缕湎耍?b)抑制疾病或醫(yī)學(xué)狀況，如通過延緩或阻止患者的疾病或醫(yī)學(xué)狀況的進(jìn)展；或(c)以任意程度減輕患者的疾病或醫(yī)學(xué)狀況的癥狀。所述組合物還可以用于疾病或醫(yī)學(xué)狀況的預(yù)防性(防護(hù)性)治療/處理。

所述組合物可包含“用于促進(jìn)哺乳動(dòng)物中神經(jīng)細(xì)胞的髓鞘再生的有效量的2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物”或“用于降低哺乳動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞中PMP22表達(dá)的有效量的2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物”?！坝行Я俊笨梢允怯杀绢I(lǐng)域普通技術(shù)人員適宜選擇的。例如，“有效量”可以在約0.01mg至約10,000mg、約0.1mg至約1000mg、約1mg至約100mg、約0.01mg至約1000mg、約0.01mg至約100mg、約0.01mg至約10mg、或約0.01mg至約1mg的范圍內(nèi)。

所述組合物可包含2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物作為活性成分。術(shù)語“活性成分”指實(shí)現(xiàn)如上文描述的組合物的功能的成分，但排除其中活性成分量過少以致于表現(xiàn)如同雜質(zhì)的情況。

所述組合物可以制備用于口服施用或胃腸外施用，包括靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、直腸和局部施用。如此，組合物可以配制為多種形式，如片劑、膠囊劑、水性溶液、或懸浮劑。在用于口服施用的片劑的情況中，一般可向其添加賦形劑如乳糖或玉米淀粉和滑潤劑如硬脂酸鎂。在用于口服施用的膠囊劑的情況中，乳糖和/或干玉米淀粉可以用作稀釋劑。當(dāng)需要用于口服施用的水性懸浮劑時(shí)，活性成分可以附著于乳化劑和/或懸浮劑。若需要，可將預(yù)確定的甜味劑和/或調(diào)味劑添加到組合物中。在神經(jīng)內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下和靜脈內(nèi)施用的情況中，通常制備活性成分的無菌溶液，其中需要適宜地調(diào)整無菌溶液的pH和將溶液緩沖。對于靜脈內(nèi)施用，需要控制溶質(zhì)的總濃度以使得配制的組合物等滲。組合物可配制成水性溶液的形式，其包含藥學(xué)可接受的載體，如pH 7.4的鹽水。水性溶液可以通過局部推注注射施用至患者的肌內(nèi)或神經(jīng)內(nèi)血流中。

2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物可以抑制脫髓鞘或通過使神經(jīng)元髓鞘再生來恢復(fù)脫髓鞘的神經(jīng)元。

所述組合物可以與至少一種用于治療與脫髓鞘有關(guān)的疾病的其他治療劑組合使用?；蛘?，組合物可以包含2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物，而沒有用于治療與脫髓鞘有關(guān)的疾病的任何其他活性成分。

所述組合物可以用于治療與哺乳動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞中的脫髓鞘有關(guān)的疾病。與神經(jīng)元脫髓鞘有關(guān)的疾病(下文亦稱為“脫髓鞘疾病”)指神經(jīng)系統(tǒng)疾病，其中神經(jīng)元的髓鞘受損。神經(jīng)元的髓鞘損傷可以包括降低神經(jīng)元中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的任何損傷，包括結(jié)合神經(jīng)元的髓磷脂的分離，或髓磷脂的量減少或結(jié)構(gòu)變形。該損傷損害受影響神經(jīng)中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，繼而根據(jù)涉及的神經(jīng)是哪些神經(jīng)，其導(dǎo)致感覺、運(yùn)動(dòng)、認(rèn)知或其他功能中的缺陷。該疾病可以包括影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)(亦稱為“中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病”)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)(亦稱為“周圍神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病”)的疾病。中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病可以包括：多發(fā)性硬化、德維克病(Devic’s disease)、炎性脫髓鞘疾病；中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)病如由維生素B12缺乏所引起的那些；脊髓病如脊髓癆(Tabes dorsalis)，腦白質(zhì)病(leukoencephalopathies)如進(jìn)行性多灶性白質(zhì)腦病(progressive multifocal leukoencephalopathy)，腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(leukodystrophies)；格-巴二氏綜合征；和慢性炎性脫髓鞘多神經(jīng)病，其為格-巴二氏綜合征對應(yīng)的慢性??；或其組合。周圍神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病可以包括抗MAG周圍神經(jīng)病、夏-馬-圖三氏(CMT)病、銅缺乏(copper deficiency)、進(jìn)行性炎性神經(jīng)病、或其組合。例如，與神經(jīng)元脫髓鞘有關(guān)的疾病可以是多發(fā)性硬化、格-巴二氏綜合征、CMT病、或其組合。CMT病可以是CMT1A亞型、CMT1E亞型或CMT3亞型。

在所述組合物的一些實(shí)施方案中，與神經(jīng)元脫髓鞘有關(guān)的疾病可以由PMP22的過表達(dá)導(dǎo)致。PMP22是在人中由PMP22基因編碼的蛋白質(zhì)。該基因編碼的整合膜蛋白是主要在施旺細(xì)胞中表達(dá)的疏水性四分子交聯(lián)體(tetraspan)糖蛋白且是周圍神經(jīng)系統(tǒng)中緊湊的髓磷脂的主要組分。盡管PMP22是周圍神經(jīng)系統(tǒng)中緊湊的髓磷脂的主要組分，但根據(jù)如上文描述的實(shí)施方案的組合物可以不僅對于周圍神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)細(xì)胞，而且對于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)細(xì)胞也有效。已知PMP22與髓磷脂蛋白zero相互作用。該基因的多種突變是CMT1A、代-索二氏病(Dejerine-Sottas)、和易感于壓迫性麻痹的遺傳性神經(jīng)病(HNPP)的起因。CMT1A是該病的最常見形式，所有CMT患者的至少60％屬于CMT1A。CMT1A由17號(hào)染色體上PMP22基因的重復(fù)導(dǎo)致。該CMT病不僅可以由具有基因的兩個(gè)拷貝導(dǎo)致，而且可以由具有基因的三個(gè)拷貝(包括在一條染色體上的兩個(gè)拷貝在另一條染色體上的一個(gè)拷貝)所導(dǎo)致。

在所述組合物的一些實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物可以是人。哺乳動(dòng)物可以具有脫髓鞘的神經(jīng)元和/或與脫髓鞘有關(guān)的疾病。

在所述組合物的一些實(shí)施方案中，神經(jīng)細(xì)胞中PMP22的過表達(dá)可以處于進(jìn)展中或完成中。神經(jīng)細(xì)胞可以處于由PMP22過表達(dá)導(dǎo)致的脫髓鞘的進(jìn)展中或完成中。神經(jīng)細(xì)胞可以在周圍神經(jīng)系統(tǒng)和/或中樞神經(jīng)系統(tǒng)中。神經(jīng)細(xì)胞可以體內(nèi)或體外存在或存活。在一個(gè)實(shí)施方案中，神經(jīng)細(xì)胞是體外細(xì)胞系，例如購自美國典型培養(yǎng)物中心(ATCC)的施旺細(xì)胞。

根據(jù)本公開的另一個(gè)方面，提供預(yù)防或治療與哺乳動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞中PMP22過表達(dá)有關(guān)的疾病的組合物，該組合物包含2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物。如本文使用的，“PMP22的過表達(dá)”指相比于無髓鞘損傷的正常神經(jīng)細(xì)胞(例如正常、健康受試者的神經(jīng)細(xì)胞)增加的PMP22表達(dá)。PMP22的表達(dá)可以在mRNA水平或蛋白水平測量。mRNA水平可以通過使用RNA分離、核酸擴(kuò)增方法如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(包括RT-PCR)等測量。蛋白水平可以通過使用層析如離子交換、大小排阻、親和層析等、過濾、鹽析等分離蛋白來測量。蛋白水平可以通過使用檢測方法來測量。例如，可以使用特異于PMP22的抗體的檢測方法如酶聯(lián)免疫吸附測定法?！癙MP22的過表達(dá)”指相比于正常神經(jīng)細(xì)胞的，增加了例如5％或更多、10％或更多、50％或更多、100％或更多、5％至100％、10％至100％、20％至100％、5％至80％、5％至50％、10％至50％的PMP22表達(dá)。

根據(jù)本公開的另一個(gè)方面，提供了上文定義的2,5-二羥基苯磺酸或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物在治療與脫髓鞘有關(guān)的疾病中的用途。

根據(jù)本公開的另一個(gè)方面，提供了上文定義的2,5-二羥基苯磺酸或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物在制備用于治療與脫髓鞘有關(guān)的疾病的藥物中的用途；上文定義的2,5-二羥基苯磺酸或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物在制備用于促進(jìn)哺乳動(dòng)物中神經(jīng)細(xì)胞的髓鞘再生或抑制脫髓鞘的藥物中的用途；和上文定義的2,5-二羥基苯磺酸或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物在制備用于降低哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中PMP22的表達(dá)的藥物中的用途。根據(jù)本公開的另一個(gè)方面，提供了能夠降低PMP22表達(dá)的化合物用于治療與脫髓鞘有關(guān)的疾病或促進(jìn)髓鞘再生的用途；和另外，能夠降低PMP22表達(dá)的化合物在制備用于治療與脫髓鞘有關(guān)的疾病或促進(jìn)髓鞘再生的藥物中的用途。

根據(jù)本公開的第四方面，提供了預(yù)防或治療與哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中脫髓鞘有關(guān)的疾病的方法，該方法包括對該哺乳動(dòng)物施用有效量的2,5-二羥基苯磺酸或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物，從而預(yù)防或治療與哺乳動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞的脫髓鞘有關(guān)的疾病。

根據(jù)本公開的第五方面，提供了促進(jìn)哺乳動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞的髓鞘再生或抑制脫髓鞘的方法，該方法包括對該哺乳動(dòng)物施用有效量的2,5-二羥基苯磺酸或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物，從而促進(jìn)哺乳動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞的髓鞘再生或抑制脫髓鞘。

根據(jù)本公開的第六方面，提供了降低哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中PMP22表達(dá)的方法，該方法包括對該哺乳動(dòng)物施用有效量的2,5-二羥基苯磺酸或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物，由此降低該哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中PMP22的表達(dá)。

在本公開的第四、第五和第六方面中，除非另外定義，與關(guān)于本公開第一、第二和第三方面使用的那些相同的術(shù)語理解為具有與在第一、第二和第三方面中描述的相同的含義。

在本公開的第四方面中，脫髓鞘可以發(fā)生在中樞神經(jīng)系統(tǒng)或周圍神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)細(xì)胞中。脫髓鞘可由PMP22過表達(dá)導(dǎo)致。與哺乳動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞中的脫髓鞘有關(guān)的疾病可以是CMT病、代-索二氏病、易感于壓迫性麻痹的遺傳性神經(jīng)病(HNPP)、多發(fā)性硬化、或格-巴二氏綜合征。

在本公開的第五方面中，可以通過促進(jìn)哺乳動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞的髓鞘再生或抑制脫髓鞘來治療與脫髓鞘有關(guān)的疾病。所述神經(jīng)細(xì)胞可以處于由PMP22過表達(dá)所致的脫髓鞘的進(jìn)展中或完成中。脫髓鞘可以發(fā)生在中樞神經(jīng)系統(tǒng)或周圍神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)細(xì)胞中。

在本公開的第六方面，可以通過降低哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中PMP22表達(dá)來治療與脫髓鞘有關(guān)的疾病。所述神經(jīng)細(xì)胞可以處于由PMP22過表達(dá)所致的脫髓鞘的進(jìn)展中或完成中。脫髓鞘可以發(fā)生在中樞神經(jīng)系統(tǒng)或周圍神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)細(xì)胞中。

在根據(jù)本公開的第四、第五和第六方面的方法中，施用路徑可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員適宜地選擇。例如，施用路徑可以是口服、胃腸外、或局部(local)或局部(topical)施用。局部施用可施用至神經(jīng)系統(tǒng)，例如腦。

施用量可根據(jù)患者的狀況、施用路徑和醫(yī)師的決定而變化。可以基于經(jīng)由體外或動(dòng)物模型測試獲得的劑量-應(yīng)答曲線獲得有效施用量。根據(jù)上文所述任一個(gè)實(shí)施方案的組合物中的化合物，即2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物的比率和/或濃度可根據(jù)化學(xué)屬性、施用路徑、和治療有效量來確定。對受試者施用量可以是，例如約1μg/kg至約1g/kg每日，或約0.1mg/kg至約500mg/kg每日的有效量。量可以根據(jù)受試者的年齡、重量、敏感性或癥狀而改變。

在本公開的第四、第五和第六方面中，所述方法可進(jìn)一步包括在施用前收集關(guān)于受試者中神經(jīng)細(xì)胞脫髓鞘的相關(guān)信息。關(guān)于脫髓鞘的相關(guān)信息可包括脫髓鞘水平、脫髓鞘速率、脫髓鞘類型等。關(guān)于脫髓鞘的相關(guān)信息可通過用光學(xué)或熒光顯微鏡或通過使用髓鞘特異性標(biāo)志物觀察神經(jīng)細(xì)胞獲得。因此，在本公開的第四、第五和第六方面中，所述方法可進(jìn)一步包括測量神經(jīng)細(xì)胞的脫髓鞘。所述神經(jīng)細(xì)胞可以源自懷疑患有與脫髓鞘有關(guān)的疾病或潛在患有該病的受試者。所述方法還可以進(jìn)一步包括基于收集的關(guān)于脫髓鞘的相關(guān)信息，確定脫髓鞘是否處于比對照組中更快的進(jìn)展或完成態(tài)中。對照組可以具有與源自沒有脫髓鞘疾病的受試者的正常神經(jīng)細(xì)胞或正常受試者的正常神經(jīng)細(xì)胞的相似的髓鞘形成水平。所述方法可包括對受試者施用2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物，所述受試者即在確定步驟中確定的處于比對照組中更多的脫髓鞘進(jìn)展或完成的哺乳動(dòng)物。

在本公開的第四、第五和第六方面中，所述方法可進(jìn)一步包括在施用前測量受試者中或受試者的神經(jīng)細(xì)胞中PMP22的表達(dá)水平。PMP22的表達(dá)水平可以在mRNA水平或蛋白水平測量。PMP22的表達(dá)可以通過擴(kuò)增(例如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR))、Southern印跡、或使用mRNA特異性引物核苷酸的序列分析，或通過分離PMP22表達(dá)蛋白、Western印跡等來測量。神經(jīng)細(xì)胞可以源自患有與脫髓鞘有關(guān)的疾病或潛在具有該病風(fēng)險(xiǎn)的受試者。所述方法可進(jìn)一步包括確定在測量步驟中獲得的PMP22的測量的表達(dá)水平是否高于對照組中的表達(dá)水平。對照組可以具有與源自沒有脫髓鞘疾病的受試者的正常神經(jīng)細(xì)胞或正常健康受試者的正常神經(jīng)細(xì)胞的相似的髓鞘形成水平。所述方法可以包括對受試者施用2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物，所述受試者即在確定步驟中確定為具有比對照組中的高的PMP22表達(dá)水平的哺乳動(dòng)物。PMP22的高出的表達(dá)水平可以是至少約1％、約5％、約10％、約20％、約50％、約100％、約200％、約500％、約1000％、約1至約1000％、約5至約1000％、約10至約1000％、約20至約1000％、約50至約1000％、約100至約1000％、約200至約1000％、或約500至約1000％。

根據(jù)本公開的另一個(gè)方面，提供了促進(jìn)哺乳動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞的髓鞘再生或抑制脫髓鞘的方法，該方法包括使哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞與有效量的2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物接觸，從而促進(jìn)哺乳動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞的髓鞘再生或抑制脫髓鞘。所述神經(jīng)細(xì)胞可以是從受試者分離的神經(jīng)細(xì)胞或體外存活的神經(jīng)細(xì)胞。

根據(jù)本公開的另一個(gè)方面，提供了降低哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中PMP22表達(dá)的方法，該方法包括使哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞與有效量的2,5-二羥基苯磺酸、或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物接觸，由此降低該哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中PMP22的表達(dá)。神經(jīng)細(xì)胞可以是從受試者分離的神經(jīng)細(xì)胞或體外存活的神經(jīng)細(xì)胞。神經(jīng)細(xì)胞可以是體外培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞株系且所述方法在體外系統(tǒng)中進(jìn)行。

在根據(jù)本公開的上述方面的方法中，所述接觸可以在液體培養(yǎng)基，例如神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng)基或緩沖液中實(shí)施。

現(xiàn)將參照以下實(shí)施例更詳細(xì)地描述本公開的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案。然而，這些實(shí)施例僅用于例示性目的且不意圖限制本公開的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案的范圍。

實(shí)施例

實(shí)施例1：酚磺乙胺對神經(jīng)細(xì)胞中髓鞘再生的影響

(1)酚磺乙胺對神經(jīng)細(xì)胞中PMP22表達(dá)的影響

將大鼠施旺細(xì)胞以約10⁵細(xì)胞/mL的濃度接種到12孔板的每個(gè)孔中，該孔中包含含有10％胎牛血清(FBS)、100單位/mL的青霉素、和100單位/mL的鏈霉素的2mL Dulbecco's Modified Eagle's培養(yǎng)基(DMEM)，并在5％-CO₂培養(yǎng)箱中在約37℃溫育至細(xì)胞密度為約60％至約65％。然后，將酚磺乙胺(二乙基銨2,5-二羥基苯磺酸(“ES”)，可從Selleckchem,TX獲得)以不同濃度添加到孔中，接著在相同條件下溫育約24小時(shí)。大鼠施旺細(xì)胞經(jīng)常用在體外模型中用于神經(jīng)元功能和分化。本文使用的大鼠施旺細(xì)胞是經(jīng)過修飾以一致地過表達(dá)人PMP22基因的，其通過慢病毒介導(dǎo)將PMP22整合到染色體中，并選擇性使用嘌呤霉素抗性標(biāo)志物，從而構(gòu)建新的大鼠施旺PMP22細(xì)胞模型。該大鼠施旺細(xì)胞(ATCC編號(hào)；CRL-2768)購自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)。

在除去2mL培養(yǎng)基后，將所得大鼠施旺細(xì)胞用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌，接著向其添加含有溶于PBS中的0.5％triton X-100的裂解溶液，使用刮刀收集細(xì)胞，將細(xì)胞留置冰上約30分鐘，然后破壞細(xì)胞。使用二喹啉甲酸(BCA)蛋白測定法，將每份樣品中的蛋白量標(biāo)準(zhǔn)化至1ug/uL，繼之以十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE,Invitrogen)和使用兔抗PMP22(Novus biological)和兔抗肌動(dòng)蛋白(Sigma)一抗以及綴合辣根過氧化物酶(HRP)的抗兔二抗的Western印跡。

圖1例示了通過Western印跡，對包含在存在酚磺乙胺情況下過表達(dá)的PMP22的大鼠施旺細(xì)胞的PMP22基因表達(dá)分析的結(jié)果。在圖1中，A和B均為Western印跡圖像，其中小圖A顯示在用溶于二甲亞砜(DMSO)中的0.1μM,1μM,10μM和100μM的酚磺乙胺處理約24小時(shí)的細(xì)胞中的PMP22蛋白表達(dá)。在圖1的小圖A中，“C”指對照組，包含作為溶劑的DMSO而不包含酚磺乙胺。實(shí)驗(yàn)重復(fù)4次(n＝4)。圖1的小圖B顯示在用10μM的酚磺乙胺處理0,0.5,1,12,24和48小時(shí)的細(xì)胞中的PMP22蛋白表達(dá)，其中“0小時(shí)”指不添加酚磺乙胺的對照組。

如圖1的小圖A中顯示的，增加濃度的酚磺乙胺導(dǎo)致表達(dá)的PMP22蛋白的量降低。還發(fā)現(xiàn)在含有10μM酚磺乙胺的培養(yǎng)基中溫育0.5,1,12,24和48小時(shí)后PMP22蛋白的表達(dá)水平相比于對照組降低(圖1中的小圖B)。

(2)酚磺乙胺對體內(nèi)PMP22表達(dá)的影響

通過用分別編碼Mbp:EGFP融合蛋白和Claudink:EGFP融合蛋白的基因轉(zhuǎn)化斑馬魚細(xì)胞來準(zhǔn)備經(jīng)轉(zhuǎn)化的斑馬魚(Danio rerio)，其中通過使用髓磷脂堿性蛋白(MBP)基因和Claudink基因的啟動(dòng)子表達(dá)在髓磷脂中特異性表達(dá)并發(fā)射熒光的分別編碼Mbp:EGFP融合蛋白和Claudink:EGFP融合蛋白的基因。具體地，NfsB毒性基因編碼酶硝基還原酶(NTR)。NTR在典型的斑馬魚中不導(dǎo)致任何細(xì)胞毒性。然而，但向細(xì)胞添加甲硝噠唑(MTZ)時(shí)，細(xì)胞通過使用NTR將MTZ轉(zhuǎn)化成細(xì)胞毒性材料，其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。通過使用mbp和claudink基因的啟動(dòng)子(在分化的髓磷脂中特異性運(yùn)行以表達(dá)結(jié)合髓磷脂的髓磷脂特異性基因和使用Gal4-UAS反式激活物系統(tǒng)，制備遺傳工程化的斑馬魚，即在分化的少突膠質(zhì)細(xì)胞和施旺細(xì)胞中特異性表達(dá)NfsB毒性基因的經(jīng)轉(zhuǎn)化的斑馬魚。接著，確認(rèn)NfsB毒性基因在轉(zhuǎn)化的斑馬魚中髓磷脂特異性表達(dá)。

當(dāng)將MTZ底物添加到在少突膠質(zhì)細(xì)胞和施旺細(xì)胞中特異性表達(dá)NfsB毒性基因的該轉(zhuǎn)化的斑馬魚的培養(yǎng)基中時(shí)，發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)化的斑馬魚的少突膠質(zhì)細(xì)胞和施旺細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，在該斑馬魚中mbp和claudink基因的啟動(dòng)子特異性運(yùn)行，且相應(yīng)地誘導(dǎo)脫髓鞘。結(jié)果，建立了在存在MTZ的情況下誘導(dǎo)的脫髓鞘的動(dòng)物模型。下文中，該動(dòng)物模型也稱為斑馬魚(Mbp(或claudink):gal4::UAS:nfsB(NTR,毒素)::UAS:gfp)。在從培養(yǎng)基除去添加的MTZ底物后，接著在沒有MTZ的培養(yǎng)基中培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的斑馬魚1天，之后是恢復(fù)期。該研究(在下文更詳細(xì)描述)確認(rèn)了脫髓鞘的中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)生天然髓鞘再生，以及ES藥物具有促進(jìn)髓鞘再生的效果。

在含有1L水的約28.5°℃的水浴中，將100個(gè)斑馬魚溫育于卵水(egg water)或胚胎培養(yǎng)基(EM)(包含15mM NaCl，0.5mM KCl，1mM CaCl₂，1mM MgSO₄，0.15mM KH₂PO₄，0.05mM NH₂PO₄和0.7mM NaHCO₃)中達(dá)出生日起4.5dpf(受精后天數(shù))，然后向其添加溶解于包含0.2％DMSO的EM的10mM MTZ(Sigma)以脫髓鞘36小時(shí)。斑馬魚被轉(zhuǎn)移到含有不同藥物的96孔板的孔中并在約28.5℃溫育(圖2小圖B)。一些斑馬魚通過在出生日起6dpf后用新EM將脫髓鞘的斑馬魚清洗3次以除去EM中的MTZ來允許髓鞘再生(圖2小圖C)。另一組斑馬魚在與小圖C相同的條件下溫育，只不過添加10μM ES(圖2小圖D，其中“化學(xué)處理”指ES處理)。在相同條件下溫育對照組，只不過添加0.2％DMSO而非MTZ。

圖2提供了使用共聚焦激光顯微鏡獲得的斑馬魚(Mbp:gal4::UAS:nfsB(NTR,毒素)::UAS:gfp)的顯微鏡圖。在圖2的顯微鏡圖中，白色虛線框劃定了監(jiān)測中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘再生的髓磷脂區(qū)域。中央最亮區(qū)域?qū)?yīng)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，而在中樞神經(jīng)系統(tǒng)區(qū)域下面的相對暗的區(qū)域?qū)?yīng)于周圍神經(jīng)系統(tǒng)。在圖2中，在共聚焦激光顯微鏡圖像下面的小圖A-D提供了實(shí)驗(yàn)過程的示意圖，即從出生日起3dpf的髓鞘形成(A)，在4.5dpf添加MTZ(B)，在6dpf洗掉或除去MTZ(下文中也稱為“恢復(fù)第1天”)(C)，和添加10μM的ES(D)。實(shí)施實(shí)驗(yàn)直至7dpf，以一式18份進(jìn)行(The test was performed by a multiple of 18)(n＝18)。在圖2中，指示“Zebrafish(Mbp(claudink):gal4::UAS:nfsB(NTR,毒素)::UAS:gfp)”中的“Mbp(claudink)”意指"Mbp"或"claudink"啟動(dòng)子可以等同地用于轉(zhuǎn)化的斑馬魚中。

圖3例示了在不同條件下孵育的斑馬魚(Mbp:gal4::UAS:nfsB(NTR,毒素)::UAS:gfp)的后側(cè)線神經(jīng)(PLL)軸突周圍的髓磷脂上使用共聚焦激光顯微鏡的綠色熒光蛋白(GFP)--熒光顯微術(shù)的結(jié)果。圖3，小圖A,B,C和D例示了如上文關(guān)于圖2中A,B,C和D和實(shí)驗(yàn)過程描述的實(shí)施的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。當(dāng)如圖3小圖A中的在不存在MTZ和酚磺乙胺的情況下孵育斑馬魚時(shí)，在斑馬魚的周圍神經(jīng)系統(tǒng)中存在充足的髓磷脂(圖3小圖A)。當(dāng)在存在MTZ的情況下從約4.5dpf至7dpf(達(dá)約2.5天)培養(yǎng)斑馬魚時(shí)，幾乎沒有觀察到GFP熒光，表明大部分髓磷脂被除去(圖3小圖B)。當(dāng)將在存在MTZ的情況下從4.5dpf至6dpf培養(yǎng)的斑馬魚進(jìn)一步在通過洗滌從培養(yǎng)基除去MTZ后未添加ES的培養(yǎng)基中從6dpf溫育至7dpf(達(dá)約1天)時(shí)，周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的髓磷脂仍然部分未形成髓鞘(見圖3小圖C中的白色虛線區(qū))。在另一方面，當(dāng)在存在MTZ的情況下從4.5dpf至6dpf培養(yǎng)的斑馬魚進(jìn)一步在通過洗滌從培養(yǎng)基除去MTZ后添加ES的培養(yǎng)基中從6dpf溫育至7dpf(達(dá)約1天)時(shí)，周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的髓磷脂完全髓鞘再生，從而在所有區(qū)域中均觀察到GFP來源的綠色熒光(圖3小圖D)。在圖3中，綠色熒光的強(qiáng)度與髓鞘形成的程度成比例。

圖4例示了在不同條件下孵育的斑馬魚(Claudink:gal4::UAS:nfsB(NTR,毒素)::UAS:gfp)的周圍神經(jīng)系統(tǒng)的髓磷脂上使用共聚焦激光顯微鏡的GFP-熒光(綠色)顯微術(shù)和使用乙?；?微管蛋白染色(紅色熒光)的免疫熒光顯微術(shù)的結(jié)果。比Mbp啟動(dòng)子更特異性地作用于髓磷脂的Claudink啟動(dòng)子可以用于更定量地觀察神經(jīng)細(xì)胞中的脫髓鞘和髓鞘再生。在圖4中，“claudink”和“ac-微管蛋白”分別指示通過claudink啟動(dòng)子由在髓磷脂中特異性表達(dá)的GFP產(chǎn)生的綠色熒光圖像和利用在軸突中特異性表達(dá)的乙酰化微管蛋白的免疫染色產(chǎn)生的紅色熒光圖像，且"merge"指示兩個(gè)圖像的融合圖像。乙酰化微管蛋白的免疫染色使用抗小鼠乙?；⒐艿鞍滓豢购途Y合Alexa647的抗小鼠二抗實(shí)施以測量藍(lán)色熒光，接著是藍(lán)色到紅色轉(zhuǎn)化以用于相對于綠色熒光的高對比度成像。下文中，乙酰化微管蛋白的免疫染色以與此處描述的相同方式實(shí)施。在圖4中，"PLL髓磷脂"指示PLL的軸突周圍的髓磷脂。如圖4中顯示的，發(fā)現(xiàn)ES促進(jìn)髓鞘再生。圖4小圖A,B和C分別指示在相同條件下與圖2的A,B和D相同的實(shí)驗(yàn)過程。

圖5例示了從圖4中熒光圖像的熒光強(qiáng)度獲得的有髓鞘軸突對總軸突的比率。在圖5中，"Cont","MTZ"和"酚磺乙胺"分別指示來自圖4的小圖A,B和C的結(jié)果。有髓鞘軸突對總軸突的比率表示為圖4中顯示的通過claudink啟動(dòng)子由在髓磷脂中特異性表達(dá)的GFP產(chǎn)生的綠色熒光強(qiáng)度相對于通過在軸突中特異性表達(dá)的乙?；⒐艿鞍椎拿庖呷旧a(chǎn)生的紅色熒光強(qiáng)度的比率。

如圖4和5中顯示的，有髓鞘軸突對總軸突的比率在存在ES的情況下顯著高于用MTZ處理的樣品，表明ES促進(jìn)脫髓鞘的神經(jīng)細(xì)胞中的髓鞘形成。

圖6例示了在不同條件下孵育的斑馬魚(Claudink:gal4::UAS:nfsB(NTR,毒素)::UAS:gfp)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中Mauthner軸突和髓磷脂的切片上使用共聚焦激光顯微鏡的源自GFP的熒光顯微術(shù)和使用特異于軸突表達(dá)的乙?；?微管蛋白的免疫染色的紅色熒光顯微術(shù)的結(jié)果。圖6，小圖A,B和C分別指示來自在相同條件下，與圖2和3中的小圖A,B和D相同的實(shí)驗(yàn)過程的結(jié)果。在圖6中，小圖A指在既不包含MTZ也不包含ES的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的對照組。通過用Image J程序從源自GFP的熒光和紅色軸突熒光的強(qiáng)度計(jì)算直徑而獲得軸突和纖維直徑。

圖7是將g比率定義為軸突對神經(jīng)纖維的直徑比的示意圖。

圖8是從圖6的結(jié)果獲得的g比率的圖。在圖8中，“Cont”,“MTZ”和“酚磺乙胺"分別指示來自圖6的A,B和C的結(jié)果。如圖8中顯示的，酚磺乙胺處理組相比于MTZ處理組具有顯著降低的g比率，表明軸突的髓磷脂層在酚磺乙胺處理組中變得顯著更厚。如圖6和8中顯示的，在存在MTZ的情況下溫育的斑馬魚的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中損壞或脫髓鞘的神經(jīng)細(xì)胞在酚磺乙胺的存在下溫育時(shí)比其他情況以顯著更高的效率再生或髓鞘再生。

如上文實(shí)施方案中描述的，根據(jù)所述一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案，用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中與神經(jīng)細(xì)胞的脫髓鞘有關(guān)的疾病的組合物可以預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中與神經(jīng)細(xì)胞的脫髓鞘有關(guān)的疾病。用于促進(jìn)哺乳動(dòng)物中神經(jīng)細(xì)胞的髓鞘再生或抑制脫髓鞘的組合物，如上文實(shí)施方案中描述的，可以促進(jìn)哺乳動(dòng)物中神經(jīng)細(xì)胞的髓鞘再生或抑制脫髓鞘。用于降低哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中PMP22表達(dá)的組合物，如上文實(shí)施方案中描述的，可以降低哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中PMP22表達(dá)。預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中與神經(jīng)細(xì)胞的脫髓鞘有關(guān)的疾病的方法，如上文實(shí)施方案中描述的，可以有效預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中與神經(jīng)細(xì)胞的脫髓鞘有關(guān)的疾病。促進(jìn)哺乳動(dòng)物中神經(jīng)細(xì)胞的髓鞘再生或抑制脫髓鞘的方法，如上文實(shí)施方案中描述的，可以有效促進(jìn)哺乳動(dòng)物中神經(jīng)細(xì)胞的髓鞘再生或抑制脫髓鞘。降低哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中PMP22表達(dá)的方法，如上文實(shí)施方案中描述的，可以降低哺乳動(dòng)物的神經(jīng)細(xì)胞中PMP22表達(dá)。

應(yīng)理解本文中描述的例示性實(shí)施方案應(yīng)僅以描述性含義考慮，而不是用于限制目的。在每個(gè)例示實(shí)施方案中的特征或方面的描述通常應(yīng)視為可用于其他例示實(shí)施方案中的其他類似特征或方面。

雖然已參照附圖描述了一個(gè)或多個(gè)例示性實(shí)施方案，但本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)理解可在其中進(jìn)行形式和細(xì)節(jié)的多種變化而不背離由權(quán)利要求限定的精神和范圍。