本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術領域：
，具體涉及一種供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物及該制劑的制備方法。
背景技術：
：雙氯芬酸鈉(diclofenacsodium)屬于苯乙酸類衍生物，為第三代強效非甾體抗炎鎮(zhèn)痛藥，又名雙氯滅痛、服他林、阿米雷爾，為白色結晶性粉末，無臭，易溶于丙酮，溶于甲醇和乙醇，微溶于水，有引濕性，其分子式為c14h10cl2nnao2，分子量為318。雙氯芬酸鈉結構式如下：雙氯芬酸鈉主要作用機制為抑制環(huán)氧化酶活性，從而阻斷花生四烯酸轉化為前列腺素。同時，也能促進花生四烯酸與甘油三酯結合，降低胞內(nèi)游離的花生四烯酸濃度而間接抑制白三烯的合成，從而達到鎮(zhèn)痛和消炎的目的。其臨床解熱鎮(zhèn)痛療效確切，廣泛應用于風濕類風濕、腰椎間盤突出、頸椎痛、牙痛等領域。目前市售雙氯芬酸鈉的劑型主要為片劑、膠囊劑等常用口服劑型，擦劑、栓劑、凝膠劑等局部用藥以及注射液，尚未見雙氯芬酸鈉的注射用凍干制劑上市。上述市售雙氯芬酸鈉制劑均存在著明顯不足：口服和局部用藥劑型在生物利用度和起效速率等方面還不是很理想，而且給藥常會引起較嚴重的胃腸道反應及首過效應。雙氯芬酸鈉注射液可克服上述不足，但由于雙氯芬酸鈉在水中溶解度較低(一般在9mg/ml，25℃)，達不到制劑濃度要求，且雙氯芬酸鈉的結構中含有易被氧化的基團，將其制備成注射液后藥物的穩(wěn)定性下降。目前，諾華制藥公司開發(fā)的雙氯芬酸鈉注射液(voltarol，75mg/3ml)，其給藥方式為肌肉注射或靜脈滴注，制劑中以丙二醇和苯甲醇作為增溶劑， 對血管有較強刺激性，給藥時病人疼痛感強，長期應用易引起靜脈炎癥，臨用前，必須稀釋、用碳酸氫鈉緩沖，靜脈滴注前必須針對每位病人重新配液，并且需要長時間(120-240min)緩慢滴注以降低靜脈炎副作用的發(fā)生率。雙氯芬酸鈉環(huán)糊精包合注射液(dyloject，75mg/2ml)經(jīng)shimodabiotech公司許可，由javelin制藥公司采用環(huán)糊精技術開發(fā)而成，于2007年12月在英國上市，用于治療急性疼痛，可以肌肉注射或靜脈注射兩種方式給藥。該劑型用羥丙基-β-環(huán)糊精包合雙氯芬酸鈉，有效地解決了主成分溶解度差的問題，并使用了硫代甘油作為抗氧劑防止藥物的氧化降解。但2010年5月，該制劑由于某些批次的制劑瓶內(nèi)發(fā)現(xiàn)不明白色顆粒而被全部召回從而暫時撤出英國市場，這與環(huán)糊精水溶液對雙氯芬酸鈉包合長期放置穩(wěn)定性不佳，藥物泄漏析出結晶有關。2014年12月fda批準hospira公司37.5mg/ml規(guī)格dyloject上市，用于治療輕、中、重度疼痛，給藥方式為靜脈給藥，該制劑處方與75mg/2ml規(guī)格相同，使用羥丙基-β-環(huán)糊精提高藥物溶解度(333mg/ml)，使用硫代甘油為抗氧劑(5mg/ml)，注射時間需大于15s，同樣存在長期放置穩(wěn)定性的問題，在其fda說明書中劑量和用法項下明確規(guī)定在使用前應觀察是否有肉眼可見微粒和變色情況，如有微?；蜃兩闆r出現(xiàn)則不能使用，說明制劑存在藥物析晶和氧化降解的風險。現(xiàn)有公知技術多選擇將供注射用雙氯芬酸鈉制備成注射液的制劑形式，并在其中加入一定量的表面活性劑、抗氧劑等添加劑，不能解決制劑的刺激性或析晶和氧化降解問題，同時制劑中羥丙基-β-環(huán)糊精等増溶物質(zhì)用量較大，長期應用毒副作用大。專利cn94118042公開了一種包含雙氯芬酸或其鹽和2-羥丙基-β-環(huán)糊精的可注射藥物組合物或獸用組合物，該組合物制備時需對水溶液進行酸化，未添加ph緩沖劑，組合物ph值下限偏酸性，且未對組合物長期放置穩(wěn)定性進行研究；該組合物中雙氯芬酸鈉最高濃度僅為25mg/ml，此外溶液中還含有偏亞硫酸氫鈉、氯丁醇等防腐劑。中國專利cn1711996a公開了一種含有雙氯芬酸鈉和β-環(huán)糊精的可注射藥物組合物，該組合物為水溶液形式，含有雙氯芬酸鈉、β-環(huán)糊精和聚山梨醇酯，僅適合于皮下和肌肉給藥。中國專利cn200410024064公開了一種含有雙氯芬酸鹽和利多卡因的凍干制劑及其制備方法，該發(fā)明通過雙氯芬酸鹽和利多卡因兩種具有藥理活性的成分發(fā)揮作用，該技術采用表面活性劑吐溫80作為增溶劑，在處方中加入防腐劑，對病人的刺激性和毒副作用較大，未考慮藥物的氧化降解問題。 專利cn101244278a公開了一種可供靜脈注射的雙氯芬酸鈉注射用制劑及其制備方法，該技術采用羥丙基-β-環(huán)糊精對雙氯芬酸鈉進行包合，在制劑中加入抗氧劑，未考慮制劑穩(wěn)定性和毒副作用問題，該制劑與市售dyloject相比無明顯改進。專利cn101123957a公開了一種雙氯芬酸及其藥學上可接受鹽的注射劑，該制劑為溶液形式，含醇類共溶劑、抗氧劑、防腐劑等大量添加劑，具有較大副作用，且只能用于肌注和緩慢靜脈推注。技術實現(xiàn)要素：[技術問題]為了克服現(xiàn)有供注射用雙氯芬酸鈉制劑的長期穩(wěn)定性差、易發(fā)生析晶和降解、毒副作用大的問題，本發(fā)明采用特定的雙氯芬酸鈉藥物組合物和制備方法，從而獲得了穩(wěn)定安全、質(zhì)量可靠、毒副作用小的供注射用雙氯芬酸鈉的藥物組合物。本發(fā)明提供的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物復溶后可直接靜脈注射，可用于治療輕、中、重度的疼痛，其中環(huán)糊精衍生物用量低，少量溶劑復溶后與人體血液等滲，可明顯減輕注射位點的疼痛，加快藥物注射時間(5～10s)，提高鎮(zhèn)痛效果；此外，處方中無需添加抗氧劑，還可避免注射液在放置過程中析出結晶的風險，顯著增加了制劑穩(wěn)定性，提高了臨床應用的安全性，增加了病人給藥的順應性，創(chuàng)造了更高的臨床治療效益。[技術方案]因此，本發(fā)明的一個目的在于提供一種穩(wěn)定性好、有效安全的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物，該藥物組合物含有雙氯芬酸鈉、水溶性環(huán)糊精衍生物、穩(wěn)定劑。本發(fā)明的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物，是一種凍干粉針劑，由包含雙氯芬酸鈉、水溶性環(huán)糊精衍生物、穩(wěn)定劑、注射用水的配方配制的溶液經(jīng)冷凍干燥工藝制成，其中所述溶液含有下列組分或優(yōu)選由下列組分組成：其中，由所述配方配置的溶液經(jīng)過濾、冷凍干燥制備凍干粉針劑時，將 殘氧量控制為低于2％，溶氧量控制為低于1mg/l。優(yōu)選地，所述配方含有下列組分或優(yōu)選由下列組分組成：所述水溶性環(huán)糊精衍生物可以是選自羥丙基-β-環(huán)糊精、磺丁基-β-環(huán)糊精和葡糖基-β-環(huán)糊精中的至少一種的可注射用的水溶性環(huán)糊精衍生物，優(yōu)選為羥丙基-β-環(huán)糊精。本發(fā)明是通過水溶性環(huán)糊精衍生物對雙氯芬酸鈉的包合形成包合物以提高雙氯芬酸鈉的溶解度，其中，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，將雙氯芬酸鈉與水溶性環(huán)糊精衍生物加水溶解后，在雙氯芬酸鈉濃度為37.5mg/ml的溶液中，維持體系ph范圍為7-10，可顯著提高雙氯芬酸鈉的包合程度，這可能是因為堿性環(huán)境可影響包合物的立體結構，增加環(huán)糊精提供的空洞數(shù)，從而促進對雙氯芬酸鈉的包合。其中，溶液的堿性越強，雙氯芬酸鈉的包合作用越強，綜合考慮最終制劑的刺激性，故而選擇維持溶液ph值至7.0-10.0范圍內(nèi)，優(yōu)選ph值為8.0-9.0。所述穩(wěn)定劑為藥學上可接受的可注射用鹽類，例如，各類緩沖鹽體系(如氨丁三醇、磷酸鹽(如磷酸氫二鈉)、檸檬酸-檸檬酸鈉等)，或所述緩沖鹽體系與氫氧化鈉、鹽酸等的組合。優(yōu)選地，所述穩(wěn)定劑為氨丁三醇或磷酸鹽緩沖體系，或它們與氫氧化鈉的組合。本發(fā)明的包含雙氯芬酸鈉的處方中，水溶性環(huán)糊精衍生物與雙氯芬酸鈉的包合作用呈動態(tài)平衡，該平衡受多種因素影響。其中，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)采用具有緩沖能力的所述穩(wěn)定劑，可減少或避免制得的凍干制劑再溶解后的析晶現(xiàn)象，并顯著提高包合物穩(wěn)定性。包合物析晶現(xiàn)象的發(fā)生可能與凍干制劑再溶解后的溶液放置過程中ph值下降，從而破壞包合物動態(tài)平衡有關，動態(tài)平衡被破壞后水溶性環(huán)糊精衍生物無法完全包合雙氯芬酸鈉，使得包和物穩(wěn)定性差，進而導致藥物析晶。采用根據(jù)本發(fā)明的穩(wěn)定劑控制處方的ph范圍，可避免體系ph值發(fā)生顯著變化，維持包合物的動態(tài)平衡狀態(tài)，減少或避免上述析晶現(xiàn)象，提高包合物穩(wěn)定性，同時緩沖鹽還可與凍干制劑中殘留的水分子結合，避免水分子與雙氯芬酸鈉競爭性結合環(huán)糊精衍生物范德華 (vanderwaals)力作用位點。本發(fā)明的另一個目的在于提供一種便于工業(yè)化大批量生產(chǎn)、工藝簡單的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物的制備方法，其包括以下步驟：1)根據(jù)上述配方制備溶液：將水溶性環(huán)糊精衍生物溶于部分的注射用水中，再加入雙氯芬酸鈉，攪拌至完全溶解，加入穩(wěn)定劑攪拌溶解，補加剩余量的注射用水；2)加入活性炭，繼續(xù)攪拌15-30min，過濾，制得中間溶液；3)測定所述中間溶液中雙氯芬酸鈉的含量；4)根據(jù)步驟3)所述雙氯芬酸鈉含量的測定結果，向瓶中充入惰性氣體，將殘氧量控制為低于2％，溶氧量控制為低于1mg/l，按制劑單位灌裝(分裝)入各個所述瓶中，半加塞；5)將步驟4)得到的藥液冷凍干燥、壓塞，在無菌條件下壓蓋，密封，即得雙氯芬酸鈉藥物組合物。所述步驟1)中，攪拌時間優(yōu)選為1-3h，從而完成水溶性環(huán)糊精衍生物對雙氯芬酸鈉的包合，提高雙氯芬酸鈉的溶解度。研究發(fā)現(xiàn)，溶液的堿性越強，水溶性環(huán)糊精衍生物對藥物的包合増溶能力越強，綜合考慮給藥刺激性等因素，所述步驟1)中，優(yōu)選地，加入所述穩(wěn)定劑以使得在將所述供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物加水復溶為雙氯芬酸鈉濃度為37.5mg/ml的溶液時，所述穩(wěn)定劑可將溶液的ph值范圍控制為7-10，優(yōu)選8.0-9.0。所述步驟1)中，所述穩(wěn)定劑為藥學上可接受的可注射用鹽類，例如，各類緩沖鹽體系(如氨丁三醇、磷酸鹽(如磷酸氫二鈉)、檸檬酸-檸檬酸鈉等)，或所述緩沖鹽體系與氫氧化鈉、鹽酸等的組合。優(yōu)選地，所穩(wěn)定劑為氨丁三醇或磷酸鹽緩沖體系，或它們與氫氧化鈉的組合。在這里，具有緩沖能力的偏堿性穩(wěn)定劑有利于確保藥物的穩(wěn)定包合和保證產(chǎn)品穩(wěn)定性。所述步驟2)中，活性炭用量優(yōu)選為步驟1)所述處方溶液總重的0.02％-0.1％，活性炭用量太少，將不能完全將溶液脫色、去熱原和除雜質(zhì)，用量過多，則會吸附溶液中的活性成分，所以活性炭的用量應控制在合理范圍內(nèi)。所述步驟4)中，充入惰性氣體可用于控制殘氧量和溶氧量，保護雙氯芬酸不發(fā)生氧化降解，提高產(chǎn)品穩(wěn)定性，所述惰性氣體優(yōu)選為氮氣。所述步驟5)中，所述冷凍干燥工藝為本領域的常規(guī)凍干工藝，例如，所述凍干工藝可優(yōu)選為：將已分裝好的瓶放至凍干箱中，降溫至-40℃，于-40℃恒溫預凍1-3h，然后抽真空；升溫至-29℃，保持3-5h；升溫至-10℃，保持4-6h；升溫至0℃，保持1h；升溫至25℃，保持5-8h。但本發(fā)明并不僅限于此。所述步驟5)中，壓塞前可選擇真空壓塞或充入一定壓力的惰性氣體后壓塞，上述兩種條件的壓塞使得瓶中均無氧存在，這可避免制得的產(chǎn)品在放置過程中發(fā)生氧化降解反應。在這里，不能選擇充入無菌空氣后壓塞，氧氣的引入會影響本品穩(wěn)定性。通過長期和加速6月穩(wěn)定性研究表明產(chǎn)品穩(wěn)定性良好，氧化降解雜質(zhì)未增加，組合物外觀未發(fā)生由氧化反應引起的顏色變化。所述供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物中活性藥物雙氯芬酸鈉的含量為75mg每瓶或37.5mg每瓶。所述供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物加水復溶制成含活性藥物雙氯芬酸鈉37.5mg/ml的溶液時，ph范圍為7.0-10.0，優(yōu)選8.0-9.0。本發(fā)明的另一個目的在于提供一種穩(wěn)定性好、有效安全的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物，所述雙氯芬酸鈉藥物組合物是一種凍干粉針劑，其由以上方法制備。本發(fā)明的另一個目的在于提供一種用于制備所述的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物的溶液，其中，所述溶液包含如下組分：雙氯芬酸鈉；水溶性環(huán)糊精衍生物；穩(wěn)定劑；和注射用水。本發(fā)明的另一目的在于提供所述供注射用的雙氯芬酸鈉藥物組合物用于治療輕、中、重度的疼痛的用途。[有益效果]本發(fā)明的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物及其制備方法，具有如下優(yōu)點：1、安全性高，環(huán)糊精用量較現(xiàn)有市售品dyloject顯著降低，從而降低腎毒性和溶血等毒副作用；處方溶液中無需使用抗氧劑，降低了安全隱患。制劑中輔料的種類和用量較少，降低了對人體的損害，其安全性符合國家相關法規(guī)的要求；2、所述藥物組合物加水復溶后所得的37.5mg/ml雙氯芬酸鈉濃度的注射液與人體血液等滲，與生理鹽水的滲透壓摩爾濃度比為0.9～1.1，可直接靜脈注射，并可減少注射液對血管的刺激性和病人的疼痛感，而現(xiàn)有市售品 dyloject(75mg/2ml)與人體不等滲；3、穩(wěn)定性好，凍干粉針的制劑形式可避免注射液在長期放置過程中析出晶體沉淀的風險；采用特殊的緩沖體系控制制劑ph值，增強水溶性環(huán)糊精衍生物對雙氯芬酸鈉的包合作用；控制殘氧量，氧化反應發(fā)生可能性低；凍干制劑中的雜質(zhì)低于0.2％，顯著增加制劑穩(wěn)定性，使其質(zhì)量可靠；4、療效及病人順應性良好，復溶后的注射液具有與dyloject相同的醫(yī)藥性質(zhì)，且相比于dyloject需大于15s的注射時間，可進一步加快藥物的注射時間(5～10s)，顯著加快藥物起效時間，可用于治療輕、中、重度疼痛，快速減輕病人的疼痛，此外還減輕注射位點的疼痛不適感，增加病人給藥的順應性；5、運輸攜帶和臨床應用方便，制備成凍干制劑后，運輸更加便捷和安全，減少了損失，降低了運輸成本，攜帶方便，使用便捷；6、成本低廉，本發(fā)明制得的藥物組合物中輔料種類少、用量低，制得的凍干制劑卻能達到甚至超過其它同類型的藥物，充分證明了本發(fā)明所述藥物的突出優(yōu)勢；7、本發(fā)明的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物的制備方法工藝簡單、高效，成本低廉，適宜工業(yè)化應用。附圖說明圖1是顯示了根據(jù)本發(fā)明的制備實施例1的處方(除注射用水外)簡單混合的物理混合物的x-射線衍射圖。圖2是顯示了根據(jù)本發(fā)明的制備實施例1制備的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物0個月的x-射線衍射圖。圖3是顯示了根據(jù)本發(fā)明的制備實施例1制備的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物加速6個月的x-射線衍射圖。圖4是顯示了根據(jù)本發(fā)明的制備實施例1制備的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物長期24個月的x-射線衍射圖。圖5是采用根據(jù)本發(fā)明的制備實施例4制備的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物和對比實施例1制備的雙氯芬酸鈉藥物注射液對犬靜脈注射給藥后的藥時曲線圖。圖6是圖5所示的藥時曲線圖中前2h的局部放大圖。具體實施方式下面結合具體的實施例，進一步闡述本發(fā)明。應當理解的是，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。在以下實施例中，未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公知的常規(guī)方法。以下實施例中：雙氯芬酸鈉(安陽九州藥業(yè)有限責任公司)；羥丙基-β-環(huán)糊精(羅蓋特(中國)精細化工有限公司)；磺丁基-β-環(huán)糊精(美國captisol公司)；氫氧化鈉(湖南爾康制藥股份有限公司)；氨丁三醇(武漢頂輝化工有限公司)；磷酸氫二鈉(湖南九典制藥有限公司)；注射用水(自制)；以及常規(guī)未標注試劑購自國藥集團化學試劑有限公司。制備實施例制備實施例1制備方法為：1)將羥丙基-β-環(huán)糊精溶于部分的注射用水中，再加入雙氯芬酸鈉，攪拌至完全溶解，加入氨丁三醇和氫氧化鈉攪拌溶解，補加剩余量的注射用水；2)加入0.1％的活性炭，攪拌15min，以鈦棒過濾器脫炭，再以0.22μm濾膜過濾除菌，制得中間溶液；3)以hplc法檢測所述中間溶液中雙氯芬酸鈉含量；4)向玻璃瓶中充入氮氣，控制殘氧量1.7％，溶氧量0.7mg/l，根據(jù)所述雙氯芬酸鈉含量的測定結果，將所得藥液按制劑單位分裝入各個玻璃瓶中，半加塞；5)將已灌裝好的玻璃瓶放至凍干箱中，降溫至-40℃，于-40℃恒溫預凍2h，然后抽真空；升溫至-29℃，保持3h；升溫至-10℃，保持4h；升溫至0℃，保持1h；升溫至25℃，保持5h。充氮氣至-0.08mpa后壓塞。在無菌條件下壓蓋，鋁封，即得供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物。制備實施例2制備方法為：1)將磺丁基-β-環(huán)糊精溶于部分的注射用水中，再加入雙氯芬酸鈉，攪拌至完全溶解，加入氨丁三醇攪拌溶解，補加剩余量的注射用水；2)加入0.05％的活性炭，攪拌20min，以鈦棒過濾器脫炭，再以0.22μm濾膜過濾除菌，制得中間溶液；3)以hplc法檢測所述中間溶液中雙氯芬酸鈉含量；4)向玻璃瓶中充入氮氣，控制殘氧量1.6％，溶氧量0.6mg/l，根據(jù)所述雙氯芬酸鈉含量的測定結果，將所得藥液按制劑單位分裝入各個玻璃瓶中，半加塞；5)將已灌裝好的玻璃瓶放至凍干箱中，降溫至-40℃，于-40℃恒溫預凍3h然后抽真空；升溫至-29℃，保持5h；升溫至-10℃，保持6h；升溫至0℃，保持1h；升溫至25℃，保持8h。充氮氣至-0.06mpa后壓塞。在無菌條件下壓蓋，鋁封，即得供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物。制備實施例3制備方法為：1)將葡糖基-β-環(huán)糊精溶于部分的注射用水中，再加入雙氯芬酸鈉，攪拌至完全溶解，加入磷酸氫二鈉攪拌溶解，補加剩余量的注射用水；2)加入0.05％的活性炭，攪拌30min，以鈦棒過濾器脫炭，再以0.22μm濾膜過濾除菌，制得中間溶液；3)以hplc法檢測所述中間溶液中雙氯芬酸鈉含量；4)向玻璃瓶中充入氮氣，控制殘氧量1.5％，溶氧量0.5mg/l，根據(jù)所 述雙氯芬酸鈉含量的測定結果，將所得藥液按制劑單位分裝入各個玻璃瓶中，半加塞；5)將已灌裝好的玻璃瓶放至凍干箱中，降溫至-40℃，于-40℃恒溫預凍2h，然后抽真空；升溫至-29℃，保持4h；升溫至-10℃，保持5h；升溫至0℃，保持1h；升溫至25℃，保持5h。在真空條件下壓塞。在無菌條件下壓蓋，鋁封，即得供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物。制備實施例4制備方法為：1)將羥丙基-β-環(huán)糊精溶于部分的注射用水中，再加入雙氯芬酸鈉，攪拌至完全溶解，加入磷酸氫二鈉和氫氧化鈉攪拌溶解，補加剩余量的注射用水；2)加入0.1％的活性炭，攪拌15min，以鈦棒過濾器脫炭，再以0.22μm濾膜過濾除菌，制得中間溶液；3)以hplc法檢測所述中間溶液中雙氯芬酸鈉含量；4)向玻璃瓶中充入氮氣，控制殘氧量1.6％，溶氧量0.5mg/l，根據(jù)所述雙氯芬酸鈉含量的測定結果，將所得藥液按制劑單位分裝入各個玻璃瓶中，半加塞；5)將已灌裝好的玻璃瓶放至凍干箱中，降溫至-40℃，于-40℃恒溫預凍2h，然后抽真空；升溫至-29℃，保持3h；升溫至-10℃，保持4h；升溫至0℃，保持1h；升溫至25℃，保持5h。充氮氣至-0.08mpa后壓塞。在無菌條件下壓蓋，鋁封，即得供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物。對比實施例對比實施例1(dyloject制劑)制備方法為：將羥丙基-β-環(huán)糊精溶于部分(約90％)的注射用水中，再加入雙氯芬酸鈉，攪拌至完全溶解，加入氫氧化鈉攪拌溶解，補加剩余量(約10％)的注射用水；再以0.22μm濾膜過濾除菌，按1ml/瓶灌裝、加塞、壓蓋，于116℃滅菌15min，即得雙氯芬酸鈉注射液。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，采用市售dyloject處方制備的雙氯芬酸鈉注射液，在高溫滅菌步驟時制劑產(chǎn)生大量降解物質(zhì)(由0.05％增至1.27％)，表明本品對高溫敏感。本發(fā)明的制備方法無需注射液的高溫滅菌步驟，可顯著減少本品的雜質(zhì)量，提高穩(wěn)定性。對比實施例2制備方法為：1)將羥丙基-β-環(huán)糊精溶于部分(約90％)的注射用水中，再加入雙氯芬酸鈉，攪拌至完全溶解，加入氫氧化鈉攪拌溶解，補加剩余量(約10％)的注射用水；2)加入0.05％的活性炭，攪拌15min，以鈦棒過濾器脫炭，再以0.22μm濾膜過濾除菌，制得中間溶液；3)以hplc法檢測所述中間溶液中雙氯芬酸鈉含量；4)向玻璃瓶中充入氮氣，控制殘氧量1.7％，溶氧量0.7mg/l，根據(jù)所述雙氯芬酸鈉含量的測定結果，將所得藥液按制劑單位分裝入各個玻璃瓶中，半加塞；5)將已灌裝好的玻璃瓶放至凍干箱中，降溫至-40℃，于-40℃恒溫預凍1h，然后抽真空；升溫至-29℃，保持3h；升溫至-10℃，保持4h；升溫至0℃，保持1h；升溫至25℃，保持5h。充氮氣至-0.08mpa后壓塞。在無菌 條件下壓蓋，鋁封，即得。對比實施例3制備方法為：1)將羥丙基-β-環(huán)糊精溶于部分的注射用水中，再加入雙氯芬酸鈉，攪拌至完全溶解，加入磷酸氫二鈉攪拌溶解，補加剩余量的注射用水；2)加入0.05％的活性炭，攪拌15min，以鈦棒過濾器脫炭，再以0.22μm濾膜過濾除菌，制得中間溶液；3)以hplc法檢測所述中間溶液中雙氯芬酸鈉含量；4)根據(jù)所述雙氯芬酸鈉含量的測定結果，將所得藥液按制劑單位分裝入各個玻璃瓶中，半加塞；5)將已灌裝好的玻璃瓶放至凍干箱中，降溫至-40℃，于-40℃恒溫預凍1h，然后抽真空；升溫至-29℃，保持3h；升溫至-10℃，保持4h；升溫至0℃，保持1h；升溫至25℃，保持5h。充無菌空氣至-0.08mpa后壓塞。在無菌條件下壓蓋，鋁封，即得。實驗實施例實驗實施例1(復溶穩(wěn)定性)取制備實施例1所得的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物若干瓶，每瓶加1ml水復溶，考察制劑的復溶穩(wěn)定性?？疾鞎r間為0h、2h、4h、8h、12h、24h，考察指標為澄清度、堿度、含量、有關物質(zhì)、可見異物和不溶性微粒，測定結果見表1。表1供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物復溶穩(wěn)定性考察結果試驗結果表明：本發(fā)明的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物復溶后24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。實驗實施例2(制劑穩(wěn)定性)按照國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的化學藥物(原料藥和制劑)穩(wěn)定性研究技術指導原則進行穩(wěn)定性試驗，取制備實施例1、制備實施例2制備的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物和對比實施例1制得的雙氯芬酸鈉注射液(與市售dyloject處方相同)、對比實施例2、對比實施例3制得的雙氯芬酸鈉凍干制劑，進行加速(40℃±2℃/75％rh±5％rh)6個月和長期(25℃±2℃/60％rh±5％rh)24個月試驗研究，對樣品的關鍵指標：性狀、澄清度、堿度(加注射用水復溶制成含雙氯芬酸鈉37.5mg/ml的溶液)、可見異物、不溶性微粒、有關物質(zhì)及含量進行檢驗，檢測結果見表2。表2供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物穩(wěn)定性考察結果由結果可見，制備實施例1和2制備的產(chǎn)品在加速、長期試驗中各項關鍵指標無明顯變化，樣品外觀未發(fā)生任何顏色變化，復溶后可見異物和不溶性微粒均符合規(guī)定，復溶后樣品24h內(nèi)穩(wěn)定性良好，未出現(xiàn)任何析晶現(xiàn)象，雜質(zhì)未出現(xiàn)顯著增加；而對比實施例1制備的雙氯芬酸鈉注射液在放置過程中出現(xiàn)ph下降、有關物質(zhì)顯著增加的現(xiàn)象，加速條件樣品出現(xiàn)析出物、顏色發(fā)生顯著變化；對比實施例2的未加穩(wěn)定劑的雙氯芬酸鈉凍干制劑在放置過程中出現(xiàn)ph下降、有關物質(zhì)顯著增加的現(xiàn)象，加速條件下樣品復溶后可見異物，從而不符合規(guī)定；以及對比實施例3的未進行溶氧、殘氧控制且未在惰性氣體或真空條件下壓塞的雙氯芬酸鈉凍干制劑在放置過程中出現(xiàn)ph下降、有關物質(zhì)顯著增加的現(xiàn)象，加速條件下樣品復溶后可見異物，從而不符合規(guī)定?？梢姳景l(fā)明制得的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物具有質(zhì)量保證，且穩(wěn)定性良好。實驗實施例3取制備實施例1所制得的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物0個月、加速6個月和長期24個月的穩(wěn)定性樣品以及按制備實施例1的處方(除注射用水外)簡單混合的物理混合物粉末，進行x-射線衍射檢測，考察羥丙基-β-環(huán)糊精對藥物的包合情況。檢測條件為3.0～40.0°，0.01°/秒，加速電壓：40kv，電流40ma。檢測結果見圖1～圖4。結果表明，制備實施例1中雙氯芬酸鈉均以無定型形式存在，羥丙基-β-環(huán)糊精對雙氯芬酸鈉包合完全，藥物放置過程中穩(wěn)定性良好。實驗實施例4取本發(fā)明的制備方法獲得的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物進行特殊安全性試驗：溶血性試驗、刺激性試驗和過敏性試驗。具體操作為：取本發(fā)明制備實施例4制得的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物每瓶加1ml注射用水復溶，制得濃度為37.5mg/ml的受試液，進行動物溶血性、刺激性和過敏性試驗。以對比實施例1制得的雙氯芬酸鈉注射液為對照制劑。1、溶血性試驗2％兔紅細胞混懸液制備：取試驗兔(動物：家兔，來源：上海藥物研究所實驗動物中心)一只，清醒狀態(tài)下心室內(nèi)取血約20ml，用棉簽攪拌約10分鐘以除去纖維蛋白原，再倒入試管中加約10倍量的0.9％氯化鈉注射液搖 勻，1,500轉/分鐘離心15分鐘，除去上清液，沉淀的紅細胞再用0.9％氯化鈉注射液洗滌離心3次以上，至上清液不呈紅色為止。將所得紅細胞用0.9％氯化鈉注射液配成2％紅細胞混懸液，供試驗用。取二批清潔試管各7支，按表3配比量依次加入2％紅細胞混懸液、0.9％氯化鈉注射液或蒸餾水和37.5mg/ml受試液，混勻后置于37℃±0.5℃的恒溫水浴箱中進行溫育，開始時每隔15分鐘觀察1次，1小時后每隔1小時觀察1次，觀察3個小時內(nèi)各試管溶液有無溶血及紅細胞凝聚作用，判斷標準見表4。表3供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物的溶血性試驗表4溶血判斷標準如出現(xiàn)紅細胞凝聚現(xiàn)象，可按下法進一步判定是真凝聚還是假凝聚。若凝聚物在振蕩后以能均勻分散，或將凝聚物放在載玻片上，在蓋玻片邊緣加2滴0.9％氯化鈉溶液，置顯微鏡下觀察，凝聚紅細胞能被沖散者為假凝聚，相反，凝聚物不被搖散或在玻片上不被沖散者為真凝聚。結果判斷：當6號試管(陰性對照管)無溶血和凝聚現(xiàn)象，7號試管(陽性對照管)有溶血現(xiàn)象時，若1-5號試管中溶液在3小時內(nèi)不發(fā)生溶血和凝聚現(xiàn)象，則試驗藥物可供注射使用；若1-5號試管中溶液在3小時內(nèi)發(fā)生溶血和凝聚現(xiàn)象，則試驗藥物不可供注射使用。溶血試驗結果為：7號試管加入蒸餾水后即刻呈紅色澄明，管底無紅細胞殘留，表明全部溶血。1-6號試管溶液15min時紅細胞開始下沉，隨時間延 長則下沉紅細胞逐漸增多，上清液逐漸增多，上清液呈淡黃色澄明，表明受試液和對照品氯化鈉注射液均無溶血作用，3小時后振搖各試管，1-6號試管紅細胞均可均勻散開，無紅細胞凝聚現(xiàn)象。具體試驗結果見表5。表5供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物的溶血試驗結果結果表明本發(fā)明的供注射用氯芬酸鈉藥物組合物在試管內(nèi)的最高終濃度為37.5mg/ml時對兔紅細胞無溶血或凝聚現(xiàn)象。2、刺激性試驗劑量設計：雙氯芬酸鈉臨床推薦劑量為37.5mg/次，折算為兔用劑量為1.9mg/kg，因此兔試驗劑量確定為2mg/kg。取試驗兔(動物：家兔，來源：上海藥物研究所實驗動物中心)8只，分為實驗組和對照組2組，4只/組，雌雄各半，分別用兔固定箱固定，左右耳緣去毛，酒精消毒，從耳緣靜脈最遠心端開始進針，試驗組左右兩側耳緣靜脈分別靜脈注射0.9％氯化鈉注射液(對照側)和本發(fā)明的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物的受試液(給藥側)，靜脈注射量為2mg/kg體重，注射速度約為5～10s內(nèi)完成注射；對照組左右兩側耳緣靜脈分別靜脈注射0.9％氯化鈉注射液(對照側)和對比實施例1制得的雙氯芬酸鈉對照制劑(給藥側)，靜脈注射量為2mg/kg體重，注射速度約為大于15s完成注射。各組每日進針一次，連續(xù)5天，每日給藥部位由耳緣靜脈遠心端向近心端逐次前移，肉眼觀察兔耳緣靜脈反應，包括血管是否清晰，有無血管擴張或收縮，血管內(nèi)是否有淤血，血管周圍組織有無水腫等。每組試驗兔于末次給藥后48小時將二只試驗兔放血處死，取下兩耳，在 末次注射部位的近心端附近(距末次注射部位約1cm，a段)和近心端遠側(距末次注射部位約3cm，b段)各取一段標本，首先進行肉眼觀察，判斷藥物對血管壁有無刺激性，觀察標準見表6，判斷標準見表7。然后用4％甲醛固定，進行組織病理學檢查，檢查標準見表8，判斷標準見表9。末次給藥后96小時將每組一只試驗兔放血處死，按上述方法進行檢查。末次給藥后14天將每組最后一只試驗兔放血處死，按上述方法進行檢查。表6血管刺激性試驗肉眼目檢觀察評分標準表7血管刺激性試驗肉眼目檢刺激強度判斷標準表8血管刺激性試驗顯微鏡檢查評分標準表9血管刺激性試驗顯微鏡檢查刺激強度判斷標準給藥期間，每天給藥后1小時觀察，實驗組的試驗兔給藥側耳緣靜脈血管紋路清晰，無血管擴張或收縮，血管內(nèi)無明顯淤血，血管周圍組織無水腫，較對照側耳緣靜脈有明顯改善。選取兔耳緣靜脈標本前觀察，實驗組的試驗兔給藥側耳緣靜脈均未見明顯充血、水腫癥狀，評分值均為0，較對照側耳緣靜脈有明顯改進。結果見表10。表10血管刺激性試驗肉眼目檢觀察結果組織切片檢查結果表明，實驗組末次給藥后48小時、96小時及14天，試驗兔給藥側耳緣靜脈a、b段血管結構均基本正常，無明顯血管擴張充血現(xiàn)象，無明顯血栓形成，血管內(nèi)皮細胞基本正常，無腫脹、壞死脫落等現(xiàn)象，血管周圍組織無水腫，無炎細胞浸潤，平均分值均為0，與對照側比較無明顯差異。對照組末次給藥后48小時、96小時及14天，試驗兔給藥側耳緣靜脈a、b段血管結構均基本正常，部分出現(xiàn)血管擴張充血現(xiàn)象，無明顯血栓形成，血管內(nèi)皮細胞基本正常，無腫脹、壞死脫落等現(xiàn)象，血管周圍組織部分出現(xiàn)水腫，無炎細胞浸潤，平均分值均為0.75，表現(xiàn)出輕度刺激性。上述試驗結果表明，制備實施例4制備的雙氯芬酸鈉受試液37.5mg/ml耳緣靜脈注射，每日一次，連續(xù)5天，對兔耳緣靜脈未見明顯局部刺激反應。 按市售處方制備的對比實施例1的對照制劑37.5mg/ml耳緣靜脈注射，每日一次，連續(xù)5天，對兔耳緣靜脈表現(xiàn)出輕度刺激反應?？梢?，本發(fā)明的雙氯芬酸鈉藥物組合物對刺激性有顯著改善，安全性良好。3、主動過敏性試驗劑量設計：雙氯芬酸鈉臨床推薦劑量為37.5mg/次，折算為豚鼠用劑量為2.9mg/kg，因此豚鼠全身主動過敏試驗劑量低劑量確定為3.0mg/kg，高劑量確定為6.0mg/kg。豚鼠(動物：豚鼠，來源：上海藥物研究所實驗動物中心)24只，按體重性別隨機分為4組，每組6只，雌雄各半。第一組作為陰性對照組，腹腔注射0.9％氯化鈉注射液0.2ml/100g，隔日注射一次，共3次。第二組作為陽性對照組，腹腔注射5％新鮮雞蛋清溶液0.2ml/100g，隔日注射一次，共3次。第三組作為低劑量給藥組，腹腔注射雙氯芬酸鈉試驗制劑低劑量溶液(取37.5mg/ml雙氯芬酸鈉受試液1ml置于25ml容量瓶中，加0.9％氯化鈉注射液溶解定容)0.2ml/100g，隔日注射一次，共3次。第四組作為高劑量給藥組，腹腔注射雙氯芬酸鈉試驗制劑高劑量溶液(取37.5mg/ml雙氯芬酸鈉受試液2ml置于25ml容量瓶中，加0.9％氯化鈉注射液溶解定容)0.2ml/100g，隔日注射一次，共3次。各組豚鼠在末次致敏后第14天及第21天各取3只豚鼠分別自足跖靜脈或耳靜脈注射2倍量的原藥液進行激發(fā)，觀察3小時內(nèi)豚鼠是否有抓鼻、噴嚏、豎毛、抽搐等過敏癥狀，按表11、表12標準判斷過敏反應發(fā)生程度，計算過敏反應發(fā)生率。激發(fā)注射后，若發(fā)現(xiàn)過敏反應癥狀時，可取健康未致敏豚鼠2只，自靜脈注射激發(fā)劑量藥物，觀察有無由于受試藥物作用引起的類似過敏反應癥狀。表11豚鼠過敏反應癥狀0正常7呼吸急促14步態(tài)不穩(wěn)1躁動8排尿15跳躍2豎毛9排糞16喘息3顫抖10流淚17痙攣4搔鼻11呼吸困難18旋轉5噴嚏12哮鳴音19潮式呼吸6咳嗽13紫癜20死亡表12主動全身過敏性評價標準0-過敏反應陰性1-4癥狀+過敏反應弱陽性5-10癥狀++過敏反應陽性11-19癥狀+++過敏反應強陽性20++++過敏反應極強陽性首次致敏、末次致敏及激發(fā)當日各組豚鼠體重比較均無明顯差異，結果見表13。激發(fā)給藥后3小時內(nèi)，陰性對照組、低劑量給藥組、高劑量給藥組均未見明顯過敏癥狀，反應均為陰性；陽性對照組豚鼠于激發(fā)注射后迅速出現(xiàn)躁動、豎毛、顫抖、搔鼻、噴嚏、咳嗽、呼吸急促、步態(tài)不穩(wěn)、喘息、痙攣、排尿、排糞、潮式呼吸等明顯過敏反應甚至死亡，死亡時間均在激發(fā)注射后3分鐘內(nèi)，致敏率為100％，反應為極強陽性(結果見表14)。表13豚鼠平均體重(n＝6)表14主動全身過敏反應試驗結果上述試驗結果表明，在本試驗條件下，本發(fā)明的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物對豚鼠無明顯主動全身致敏作用。4、被動過敏試驗抗血清制備：取豚鼠8只，按體重性別隨機分為4組，每組2只，雌雄各半。第一組作為陰性對照組，腹腔注射0.9％氯化鈉注射液0.2ml/100g，隔 日注射一次，共5次。第二組作為陽性對照組，腹腔注射2mg/kg卵蛋白溶液0.2ml/100g，隔日注射一次，共5次。第三組作為低劑量給藥組，腹腔注射上述雙氯芬酸鈉試驗制劑低劑量溶液0.2ml/100g，隔日注射一次，共5次。第四組作為高劑量給藥組，腹腔注射上述雙氯芬酸鈉試驗制劑高劑量溶液0.2ml/100g，隔日注射一次，共5次。各組豚鼠在末次致敏后第14天股動脈取血，室溫自然凝固，2000rpm離心20min分離血清后按分組一同貯存于-18℃冰箱內(nèi)備用。被動皮膚過敏試驗：取豚鼠24只，按體重性別隨機分為4組，每組6只，雌雄各半，分別為陰性對照組、陽性對照組、低劑量給藥組、高劑量給藥組。用動物脫毛器將豚鼠背部皮膚脫毛，同時用0.9％氯化鈉注射液分別配制上述各組抗血清稀釋液(1:2、1:8、1:32，v/v)，各組豚鼠自脫毛處背部分別皮內(nèi)注射相應的抗血清稀釋液，每點注射0.1ml，二點之間間隔約2.5cm。激發(fā)注射：24小時后按致敏時同樣方法配制各組相應溶液，并與1％伊文思蘭溶液按1:1比例混合后，靜脈注射給藥0.4ml/100g。激發(fā)注射30min后放血處死豚鼠，剪取背部皮膚，用游標卡尺測定皮膚內(nèi)層的斑點直徑，不規(guī)則斑點的直徑為長徑與短徑之和的一半，直徑大于5mm者為陽性，并計算陽性反應百分率。激發(fā)給藥30min后，陰性對照組、低劑量給藥組、高劑量給藥組的豚鼠背部皮膚內(nèi)層的藍斑直徑均小于5mm，反應均為陰性；陽性對照組豚鼠激發(fā)給藥30min后，背部皮膚內(nèi)層的藍斑直徑均大于5mm，反應均為陽性，致敏率為100％，反應為極強陽性，結果見表15。表15被動皮膚過敏反應試驗結果(n＝6)上述試驗結果表明，在本試驗條件下，本發(fā)明的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物對豚鼠無明顯被動皮膚致敏作用。實驗實施例5取制備實施例4所制得的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物，每瓶加1ml水復溶，制得濃度為37.5mg/ml的供試液，在疼痛動物模型中考察藥物的鎮(zhèn)痛效果。以對比實施例1所制得的雙氯芬酸鈉注射液為對照液。分別量取供試液和對照液各1ml分別置于50ml容量瓶中，加生理鹽水定容，其濃度均被稀釋為0.75mg/ml。取健康的昆明系小鼠(動物：小鼠，來源：上海藥物研究所實驗動物中心)30只，體重20g左右，雌雄各半，隨機分為3組，按7.5mg/kg尾靜脈注射小鼠，各組小鼠于給藥后10min腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml，立即計時，觀察15min內(nèi)小鼠的扭體反應次數(shù)，計算扭體反應的抑制率。具體分組及給藥方式見表16，試驗結果見表17。表16試驗分組及處理(n＝10)表17各組小鼠扭體反應結果(n＝10)注：“*”表示與空白對照組比較p＜0.01。由試驗結果可見，制備實施例4和對比實施例1的試驗組的小鼠扭體反應與空白對照組相比均顯著減少，其中制備實施例4為根據(jù)本發(fā)明制備的溶液，對比實施例1為根據(jù)市售dyloject配制的溶液，因此，兩種雙氯芬酸鈉制劑均對小鼠疼痛反應有顯著緩解作用。實驗實施例6取制備實施例4所制得的供注射用雙氯芬酸鈉藥物組合物，每瓶加1ml水復溶，制得濃度為37.5mg/ml的供試液，以犬為動物模型考察藥物的藥代動力學行為。以對比實施例1所制得的雙氯芬酸鈉注射液為對照液。比格犬3只(動物：犬，來源：上海藥物研究所實驗動物中心)，雄性，體重10～12kg。受試動物在試驗日前3-7天應在試驗場所進行適應性飼養(yǎng)。采用自身對照交叉試驗設計，分別用制備實施例4加水復溶后的供試液和對比實施例1的注射液配制給藥溶液。給藥劑量為37.5mg/只。兩周期間間隔不少于5天。制備實施例4的給藥溶液在5～10s內(nèi)完成注射，對比實施例1的給藥溶液注射時間大于15s。給藥前(0h)及給藥后2min、5min、15min、30min、1h、2h、4h、6h、8h和12h的時間點經(jīng)四肢靜脈取靜脈血1ml，置于edta抗凝試管中，3500rpm離心10min(4℃)，分離血漿，-70℃冰箱中冷凍保存待測。以lc-ms測定血漿中藥物濃度。色譜條件：色譜柱選用agilentxdbc18(150mm×4.6mm，5μm)，流動相為乙腈-水(含4mm乙酸銨，0.08％甲酸)(75:25，v/v)，流速為0.8ml·min-1，柱溫25℃，進樣體積為5μl。質(zhì)譜條件：電噴霧離子源(esi)，氣簾氣(cur)壓力為20psi，噴霧氣(gs1)壓力為55psi，干燥氣(gs2)壓力為55psi，源噴射電壓(is)為-4000v，離子源溫度(tem)為400℃。雙氯芬酸及內(nèi)標的掃描離子反應(mrm)分別為293.6→249.9、284.9→185.9，碰撞能量(ce)分別為-14.8、-23.8v。比格犬分別靜脈注射給予37.5mg雙氯芬酸鈉的兩種不同制劑后，血漿中雙氯芬酸鈉的藥動學參數(shù)見表18，藥時曲線見圖5。表18比格犬經(jīng)靜脈注射不同制劑后的藥動學參數(shù)由試驗結果可知，與對比實施例1相比，本發(fā)明的制備實施例4制備的制劑藥物達峰時間由4min減至2min，cmax值為對比實施例1的1.28倍，auc值為對比實施例1的1.29倍。可見，根據(jù)本發(fā)明制備的雙氯芬酸鈉制劑可使藥物快速達峰，增加藥物暴露量，提高藥物鎮(zhèn)痛效果。當前第1頁12