本發(fā)明屬于日化產(chǎn)品領(lǐng)域，具體涉及一種鐵皮石斛提取物，及其制備方法，更具體地，涉及一種銖皮石斛中生物活性多糖、氨基酸成分等的提取、純化方法。

背景技術(shù)：
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鐵皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo為蘭科石斛屬植物鐵皮石斛的莖，又名黑節(jié)草。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》列為上品，因其特殊的生存環(huán)境和卓著的滋補功效而名列“中華九大仙草”之首。《中國藥典》2010版將其單列，具有清熱利濕，解毒消腫的功效，主要用于濕熱黃疸，中暑腹瀉，石淋血淋，癰腫瘡毒，跌撲損傷等。研究表明，鐵皮石斛多糖成分與鐵皮石斛的藥效，如提高機體的免疫能力、抗腫瘤、抗衰老、抗疲勞、降血糖等有著密切的關(guān)系。

鐵皮石斛富含多糖，為其重要的功能性成分，2010年版《中國藥典》以多糖為其含量控制指標，并規(guī)定多糖含量不得低于25％。多糖是重要的生物活性大分子，是人體皮膚真皮層的重要組成成分。多糖在皮膚新陳代謝過程中具有突出的調(diào)節(jié)作用，其生物學活性和理化性質(zhì)為其在化妝品中的應(yīng)用提供了依據(jù)，能產(chǎn)生保濕、改善膚色、抗衰老和抗菌等功能，且高分子多糖無毒副作用，與常用化妝品成分配伍性好。因此，生物活性多糖作為功效型化妝品添加劑將有著廣闊的前景。

鐵皮石斛另一富含成分為氨基酸。氨基酸及其衍生物廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、添加劑、化妝品、科學研究等領(lǐng)域。人體可以通過食物或者專門的氨基酸制品攝入必需氨基酸，而氨基酸化妝品另辟蹊徑，它通過在皮膚表層涂抹、噴灑，讓皮膚或者頭發(fā)直接吸收，從而達到美容、保濕的效果。在化妝品工業(yè)中，氨基酸產(chǎn)品有護膚品、清潔用品、護發(fā)素等，應(yīng)用廣泛，氨基酸化妝品也被越來越多的人所接受和追捧。

鐵皮石斛的提取純化已有多項專利和參考文獻報道，但基本都集中于石斛多糖的提取純化方面。中國專利申請主要有許江“一種鐵皮石斛多糖的提取方法”(申請?zhí)?01410010334.7)，陳紹瑗“鐵皮石斛多糖提取工藝及所用的響應(yīng)面法優(yōu)化法”(申請?zhí)?01210080911.0)，石秀偉“一種鐵皮石斛多糖提取物、其藥物組合物和其制備方法及其應(yīng)用”(申請?zhí)?00610145677.X)，崔武衛(wèi)“一種石斛 多糖的分離純化方法”(申請?zhí)?01110365323.7)。近年報道關(guān)于鐵皮石斛的參考文獻主要有黃曉君“鐵皮石斛多糖提取工藝優(yōu)化及其成分分析”(食品科學，2013，34：21-26.)，尚喜雨“正交實驗優(yōu)選鐵皮石斛多糖提取工藝的研究”(遼寧中醫(yī)雜志，2010，37：708-709)，王培培“正交實驗法優(yōu)化鐵皮石斛多糖的提取工藝”(時珍國醫(yī)國藥，2012，23：2781-2782.)等。這些專利申請文件及文獻報道豐富了鐵皮石斛多糖的提取純化手段，但大部分專利申請及其它文獻只涉及到多糖的提取純化方法，主要為脫脂、水提、醇沉、除蛋白、干燥等步驟，醇沉方法石斛多糖得率低，除蛋白過程導致部分多糖、氨基酸等物質(zhì)的損失，整體提取工藝相對復雜，得率低，生產(chǎn)成本高。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的在于提供一種工藝簡單、制備成本低、得率較高的從鐵皮石斛中提取石斛多糖、氨基酸等活性物質(zhì)的方法，該方法以鐵皮石斛為原料，從中提取石斛多糖、氨基酸等活性物質(zhì)，提取液僅用活性炭純化，保留植物最本色生物活性成分，多糖和氨基酸提取率高。本發(fā)明的提取物可應(yīng)用于化妝品，具有保濕及營養(yǎng)皮膚等功效，無毒副作用。本發(fā)明的目的還在于提供上述方法所得到的鐵皮石斛提取物。

為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

一種鐵皮石斛提取物，由下述方法制備而得：

(1)提取：將鐵皮石斛干燥、粉碎成粗粉，用水煎煮提取2次，第一次水的用量為樣品重量的40～80倍，第二次水的用量為樣品重量的20～40倍，提取時間為2小時，過濾，合并濾液；

(2)純化：向步驟(1)中得到的提取液中加入提取液重量的0.2％～0.5％的活性炭，加熱至70℃～沸騰，攪拌1小時，過濾，收集濾液；

(3)濃縮：將步驟(2)得到的濾液濃縮至比重為1.05～1.2(30℃)；

(4)干燥：將步驟(3)得到的濃縮物干燥，得鐵皮石斛提取物，提取物中的多糖含量為25-35％。

一種鐵皮石斛提取物，由下述方法制備而得：

取鐵皮石斛粗粉，用水煎煮提取2次，第一次水的用量為藥材重量的60倍，第二次水的用量為藥材重量的30倍，提取時間為2小時，過濾，合并濾液，向濾液中加入濾液重量的0.5％的活性炭，加熱至80℃，攪拌1小時，過濾，收集 濾液，將濾液濃縮至比重為1.2，30℃，得濃縮物，將濃縮物真空干燥，得提取物，折算成藥材中多糖含量計，提取物中的多糖含量為28-32％。

本發(fā)明同時提供了一種鐵皮石斛提取物的制備方法，包括下述步驟：

(1)提?。簩㈣F皮石斛干燥、粉碎成粗粉，用水煎煮提取2次，第一次水的用量為樣品重量的40～80倍，第二次水的用量為樣品重量的20～40倍，提取時間為2小時，過濾，合并濾液；

(2)純化：向步驟(1)中得到的提取液中加入提取液重量的0.2％～0.5％的活性炭，加熱至70℃～沸騰，攪拌1小時，過濾，收集濾液；

(3)濃縮：將步驟(2)得到的濾液濃縮至比重為1.05～1.2，30℃；

(4)干燥：將步驟(3)得到的濃縮物干燥，得鐵皮石斛提取物，提取物中的多糖含量為25-35％。

根據(jù)所述的方法，其中步驟(4)中的干燥方法為真空干燥、噴霧干燥和微波干燥中的一種。

根據(jù)所述的方法，其中步驟(4)中的真空干燥方法為真空度-0.06～-0.08MPa、溫度60℃～80℃。

根據(jù)所述的方法，其中步驟(4)中的噴霧干燥方法為進風溫度170～185℃，進料速度200ml/h。

根據(jù)所述的方法，其中步驟(4)中的微波干燥方法為功率400～600W，加熱溫度40～60℃，自動控溫80℃。

另外，本發(fā)明還提供了所述的鐵皮石斛提取物在制備治療或預防皮膚病的藥物中的應(yīng)用。

根據(jù)所述的鐵皮石斛提取物在制備治療或預防皮膚病的藥物或保健品中的應(yīng)用，其中所述皮膚病為皮膚炎癥、過敏、水腫、紅班病、干性皮膚、皮膚搔癢、皮膚發(fā)炎、紅斑、皮膚過敏、瘙癢癥、蜘蛛血管、雀斑、老年斑、老年性紫癜、角化癥、黑斑病、疙瘩、細紋或皺紋、結(jié)節(jié)、皮膚太陽損傷、牛皮癬、毛囊炎、紅斑痤瘡、痤瘡、膿胞病、丹毒、紅癬、濕疹、日光灼傷、皮膚燒傷、開放性傷口、感染性皮膚病，和它們的任意組合。

所述的鐵皮石斛提取物在制備保濕、營養(yǎng)皮膚的化妝品或保健品中的應(yīng)用。

所述的鐵皮石斛提取物在制備麻醉劑、抗真菌劑、抗炎劑、抗氧化劑、防腐劑、螯合劑、著色劑、脫色劑、軟化劑、乳化劑、脫落劑、成膜劑、芳香劑、 濕潤劑、驅(qū)蟲劑、潤滑劑、增濕劑、藥劑、光穩(wěn)定劑、防腐劑、皮膚保護劑、皮膚滲透增強劑、防曬劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑、增稠劑、粘度調(diào)節(jié)劑、維生素中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

本發(fā)明采用水提、脫色及干燥的方式獲取鐵皮石斛提取物，既保留了多糖類、氨基酸等成分，同時還保留礦物質(zhì)、黏液質(zhì)等水溶性活性成分，這兩組成分均為化妝品的功能性成分。提取液經(jīng)活性炭純化后未改變植物本色成分配比，有效保留石斛的生物活性物質(zhì)，提取純化過程未使用任何有機溶劑，保證了其安全性，安全環(huán)保，工藝簡單，技術(shù)路線簡明，流水化程度高，適合工業(yè)化生產(chǎn)。提取物各組分均為化妝品的常用添加物，常應(yīng)用于化妝品，具有保濕、營養(yǎng)皮膚等功效，且安全無毒副作用。本發(fā)明提取物經(jīng)試驗證明具有較好保濕活性，經(jīng)家兔皮膚刺激性試驗和豚鼠皮膚過敏性試驗證明鐵皮石斛提取物對皮膚無刺激性和過敏性反應(yīng)，無毒副作用，使用安全。

具體實施方式：

下面用本發(fā)明的實施例來進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此來限定本發(fā)明。

實施例1：

鐵皮石斛提取物的制備：

用粉碎機將干燥的鐵皮石斛樣品進行粉碎，過2號篩，取鐵皮石斛粗粉300g，煎煮法提取2次，第一次加樣品重量的60倍量水，第二次加樣品重量的30倍量水，提取時間為2小時，合并濾液，加入0.5％的活性炭，加熱至80℃，攪拌1小時，過濾，收集濾液，將濾液濃縮至比重為1.2(30℃)，真空干燥(真空度為-0.07MPa，溫度為80℃)，即得。

干燥后得鐵皮石斛提取物158.6g，照《中國藥典》2010版第一部鐵皮石斛項下多糖含量測定方法，多糖含量為30.75％(折算成藥材中多糖含量計)，提取率為92.9％。

實施例2：

鐵皮石斛提取物的制備：

用粉碎機將干燥的鐵皮石斛樣品進行粉碎，過2號篩，取鐵皮石斛粗粉200g，煎煮法提取2次，第一次加樣品重量的80倍量水，第二次加樣品重量的20倍量 水，提取時間為2小時，合并濾液，加入0.2％的活性炭，加熱至沸騰，攪拌1小時，過濾，收集濾液，將濾液濃縮至比重為1.1(30℃)，微波干燥(功率600W，加熱溫度50℃，自動控溫80℃)，即得。

干燥后得鐵皮石斛提取物108.7g，照《中國藥典》2010版第一部鐵皮石斛項下多糖含量測定方法，多糖含量為28.92％，提取率為87.4％。

實施例3：

鐵皮石斛提取物的制備：

用粉碎機將干燥的鐵皮石斛樣品進行粉碎，過2號篩，取鐵皮石斛粗粉400g，煎煮法提取2次，第一次加樣品重量的40倍量水，第二次加樣品重量的40倍量水，提取時間為2小時，合并濾液，加0.3％的活性炭，加熱至70℃，攪拌1小時，過濾，收集濾液，將濾液濃縮至比重為1.05(30℃)，將濃縮物噴霧干燥(進風溫度180℃，進料速度200ml/h)，即得。

干燥后得鐵皮石斛提取物212.3g，照《中國藥典》2010版第一部鐵皮石斛項下多糖含量測定方法，多糖含量為30.42％，提取率為91.9％。

實施例4：

鐵皮石斛提取物保濕吸濕活性試驗：

鐵皮石斛提取物干燥后粉碎，準確稱取提取物粉0.5g，4份，置于直徑為25mm的稱量瓶中，稱定重量，其中2份分別加入提取物粉重量的3倍量水，充分混勻后，稱定重量后敞口放入相對濕度為RH 43％的密閉干燥器中，放置一定時間后測定水分經(jīng)時減少量與吸水量，計算其保濕率與吸濕率，以甘油、聚乙二醇400為對照。試驗結(jié)果顯示鐵皮石斛提取物具有較強的保濕活性和吸濕活性，其保濕率介于甘油和聚乙二醇400之間，24小時內(nèi)保濕率在92％以上(見表1)；鐵皮石斛提取物的吸濕活性，8小時內(nèi)石斛提取物的吸濕速率較快，8小時內(nèi)石斛提取物吸濕率達到10％以上，24小時內(nèi)吸濕率達20％以上，表現(xiàn)出較強的吸濕活性(見表2)。

表1 鐵皮石斛提取物在相對濕度RH43％下保濕率(％)

表2 鐵皮石斛提取物在相對濕度RH43％下吸濕率(％)

實施例5：

鐵皮石斛提取物家兔刺激性試驗：

為觀察鐵皮石斛提取物(濃度為17.6mg/ml)與家兔刺激性試驗，將12只家兔分為完整皮膚給藥組和破損皮膚給藥組，每只動物的背部皮膚去毛后均分為2塊：左中、右中。兩組均取生理鹽水0.5ml涂于去毛區(qū)左中部；鐵皮石斛提取物0.5ml涂于去毛區(qū)右中部，連續(xù)7天。停藥三天后先處死2/3的動物作為給藥末期動物，停藥7天后處死剩余1/3動物作為恢復期動物。試驗結(jié)果顯示完整皮膚組給藥末期及恢復期，生理鹽水對照組及鐵皮石斛提取液受試藥組家兔皮膚組織結(jié)構(gòu)清晰，被覆鱗狀上皮結(jié)構(gòu)正常，無炎性細胞浸潤及滲出，各組均未觀察到病變。破損皮膚組給藥末期及恢復期，對照組及受試藥組家兔皮膚，皮損均已經(jīng)恢復，愈合狀態(tài)較好，均無觀察到炎癥等病理情況改變。鐵皮石斛提取液對家兔完整表皮和破損表皮均無明顯的刺激作用(見表3、表4、表5)。

表3 皮膚刺激反應(yīng)評分標準

表4 家兔皮膚刺激性試驗評分表一(破損皮膚組給藥末期)

表5 家兔皮膚刺激性試驗評分表二(破損皮膚組恢復期)

實施例6：

鐵皮石斛提取物豚鼠皮膚過敏試驗：

為觀察鐵皮石斛提取物(濃度為17.6mg/ml)與豚鼠皮膚接觸后有無皮膚過敏反應(yīng)，將30只豚鼠按體重和性別隨機分為3組：空白對照組(生理鹽水)、陽性對照組(2,4-二硝基氯苯，1％為致敏濃度，0.1％為激發(fā)濃度)和鐵皮石斛提取物組，每組10只。于試驗第1、7、14天分別在背部皮膚致敏給藥，第28天在肋腹部皮膚激發(fā)給藥。結(jié)果顯示：空白對照組、鐵皮石斛提取物組在激發(fā)給藥后6、24、48、72h未見皮膚紅斑和水腫發(fā)生；陽性對照組所有動物在激發(fā)給藥后6、24、48、72h均有不同程度的皮膚紅斑、水腫反應(yīng)出現(xiàn)。與陽性對照相比，鐵皮石斛提取物與豚鼠皮膚接觸后無皮膚過敏反應(yīng)發(fā)生(見表6、表7、表8)。

表6 皮膚過敏反應(yīng)程度的評分標準

表7 皮膚過敏性評價標準

表8 豚鼠皮膚過敏試驗過敏評分結(jié)果

實施例7：

按實施例1-3制得鐵皮石斛提取物，按提取物與賦形劑重量比1:1的比例加入賦形劑，制粒壓片。

實施例8：

按實施例1制得鐵皮石斛提取物，按提取物與賦形劑重量比1:2的比例加入賦形劑，制粒壓片。

實施例9：

按實施例1制得鐵皮石斛提取物，按常規(guī)膠囊制劑方法制成膠囊。

實施例10：

先按實施例1制得鐵皮石斛提取物，再按下述方法制成片劑：

實施例11：

膠囊劑：鐵皮石斛提取物 100mg

淀粉 適量

硬脂酸鎂 適量

制備方法：將鐵皮石斛提取物與淀粉、硬脂酸鎂混合，過篩，在合適的容器中均勻混合，把得到的混合物裝入硬明膠膠囊。

實施例12：

制備方法：攪拌下于適當體積的重蒸餾水中每次加入一種成分，直至完全深解，然后再加入另一種成分。加水至2ml后，將該溶液在無菌過濾器上過濾，裝入瓶中并按照適當?shù)膭┝糠指簟?/p>

實施例13：

滴丸：鐵皮石斛提取物 1g

聚乙二醇6000 9g

制法：鐵皮石斛提取物6000熔融液的制備：按上述處方量稱取鐵皮石斛提取物，加入適量無水乙醇，微熱溶解后，加入處方量的聚乙二醇熔融液中(60℃水浴保溫)，攪拌混合均勻，直至乙醇揮盡為止，靜置于60℃水浴中保溫30分鐘，待氣泡除盡，然后將除盡氣泡的上述混勻熔融液轉(zhuǎn)入貯液筒內(nèi)，在保溫80-85℃的條件下，控制滴速，一滴滴地滴入冷凝液中，等冷凝完全，傾去冷凝液，收集滴丸，瀝凈和用濾紙除去丸上的冷凝液，放置硅膠干燥器中或自然干燥即可。

實施例14：

片劑：實施例1所得鐵皮石斛提取物10mg，乳糖180mg，淀粉55mg，硬脂酸鎂5mg；

制備方法：將提取物、乳糖和淀粉混合，用水均勻濕潤，把濕潤后的混合物過篩并干燥，再過篩，加入硬脂酸鎂，然后將混合物壓片，每片重250mg，化合物含量為10mg。

實施例15：

安瓿劑：實施例1所得鐵皮石斛提取物2mg，氯化鈉10mg；

制備方法：將鐵皮石斛提取物和氯化鈉溶解于適量的注射用水中，過濾所得溶液，在無菌條件下裝入安瓿瓶中。

實施例16：

膠囊劑：實施例1所得鐵皮石斛提取物10mg，乳糖187mg，硬脂酸鎂3mg；

制備方法：將鐵皮石斛提取物與助劑混合，過篩，均勻混合，把得到的混合物裝入硬明膠膠囊，每個膠囊重200mg，活性成分含量為10mg。

實施例17：

含有鐵皮石斛提取物的美白霜配方(W％)：

按常規(guī)制作化妝品的方法制得本發(fā)明上述配方的化妝品。

實施例18：

含有鐵皮石斛提取物的乳劑配方(W％)：

按常規(guī)制作化妝品的方法制得本發(fā)明上述配方的化妝品。

前述的實施例應(yīng)當理解為僅僅是說明本發(fā)明。各種選擇和修正可由本領(lǐng)域熟練人員不背離本發(fā)明而設(shè)計。從而，本發(fā)明意圖包括所有落入以下權(quán)利要求范圍內(nèi)的這種選擇和修正以及變化。