本發(fā)明涉及醫(yī)藥、食品、試劑等技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是涉及一種環(huán)二核苷酸cGAMP用于制備抗缺血性腦血管疾病產(chǎn)品的新用途。
背景技術(shù)：
缺血性腦血管病（缺血性腦卒中）是世界上發(fā)病率、死亡率、致殘率最高的疾病之一，極大威脅著人類、特別是老年人的健康和生活質(zhì)量，已經(jīng)成為全球社會健康資源的巨大負(fù)擔(dān)。臨床上，缺血性腦卒中死亡率和致殘率已在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中占首位。目前國內(nèi)外應(yīng)用于治療缺血性腦血管病的有效藥物很少。因此，深入開展缺血性腦血管病的藥物防治研究具有重要意義。
最近有研究表明，環(huán)二核苷酸合成酶（cGAS）在結(jié)合DNA 后的活化條件下催化cGAMP 的合成，進(jìn)一步通過STING介導(dǎo)IRF-3 的活化，進(jìn)而促進(jìn)IFN-β的合成。重組cGAS在DNA 結(jié)合條件下促進(jìn)環(huán)二核苷酸cGAMP的生成，發(fā)揮抗病毒、增強免疫的作用。也有專利報道，體外合成的環(huán)二核苷酸cGAMP 具有抗腫瘤的應(yīng)用。
目前，尚沒有文獻(xiàn)報道環(huán)二核苷酸用于缺血性腦血管病，而我們研究發(fā)現(xiàn)，cGAMP具有明顯的腦缺血保護(hù)作用，有望用于制備治療缺血性腦血管病的藥物。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)現(xiàn)所需要解決的技術(shù)問題是公開了cGAMP的新用途，即cGAMP具有抗缺血性腦血管疾病的新作用，能夠用于制備抗缺血性腦血管疾病的產(chǎn)品，為抗缺血性腦血管疾病的預(yù)防、保護(hù)和治療提供更有效的產(chǎn)品。
所述的用于制備抗缺血性腦血管疾病產(chǎn)品的cGAMP為環(huán)化-鳥嘌呤核苷酸 - 腺嘌呤核苷酸。
所述的抗缺血性腦血管疾病產(chǎn)品是指醫(yī)藥、食品或試劑等技術(shù)領(lǐng)域中，用于預(yù)防、保護(hù)、治療缺血性腦血管疾病及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，是包括藥物、試劑、食品或保健品等類型中的一種或多種。
本發(fā)明提供cGAMP在制備防治缺血性腦血管疾病中的應(yīng)用。
本發(fā)明經(jīng)小鼠的腦缺血再灌注模型藥理試驗，結(jié)果表明， cGAMP能顯著減少小鼠局部腦缺血引起的腦梗死比例，并顯著改善小鼠缺血后的神經(jīng)行為。與目前在臨床使用的治療腦缺血的藥物依達(dá)拉奉相比，cGAMP腦缺血保護(hù)作用強；而且由于分子量小，易于通透血腦屏障，具有顯著的腦通透性優(yōu)勢。
本發(fā)明的cGAMP可以按常規(guī)藥劑學(xué)制備成各種劑型，包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑或注射劑等。
本發(fā)明的cGAMP可以采取口服或注射（包括靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一種或多種）等中的一種或多種給藥途徑進(jìn)行缺血性腦血管疾病及其直接相關(guān)疾病的預(yù)防、保護(hù)或治療。
本發(fā)明提供的cGAMP在制備防治缺血性腦血管疾病中具有良好的應(yīng)用前景。
具體實施方式
下面通過實施例證具體說明本發(fā)明的內(nèi)容。在本發(fā)明中，以下所述的實施例是為了更好地闡述本發(fā)明，并不是用來限制本發(fā)明的范圍。
實施例1：cGAMP的制備方法
cGAMP（環(huán)化-鳥嘌呤核苷酸-腺嘌呤核苷酸）按文獻(xiàn)方法在結(jié)合DNA 后的活化條件下，由環(huán)化二核苷酸合成酶（cGAS）催化合成，純度在98％以上。（Pingwei Li，et al., Immunity, 2013, 39(6), 1019-1031.）
實施例2：cGAMP用于治療缺血性腦血管病的動物實驗
小鼠線栓法制作局部腦缺血模型的藥理實驗是驗證藥物具有防治缺血性腦血管病作用常用的動物實驗，因此用其驗證cGAMP對實驗性動物腦缺血的保護(hù)作用。
1、動物
健康雄性ICR小鼠，體重18～20g，每組10只/籠群養(yǎng)，共分10組。購于上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司，質(zhì)量合格證號（動物合格證號：SCXK（滬）2007-0005）。飼養(yǎng)于清潔級動物房。
2、藥物
將實驗小鼠進(jìn)行分組：
假手術(shù)組：給予與藥物實驗組等量的生理鹽水，不進(jìn)行腦缺血手術(shù)
陰性對照組：給予與藥物實驗組等量的生理鹽水進(jìn)行腦缺血手術(shù)。
陽性對照組：給予依達(dá)拉奉注射液 5.0mg/kg（南京先聲東元制藥有限公司生產(chǎn)）
藥物1組：給予cGAMP 5.0mg/kg。
藥物2組：給予cGAMP 10.0mg/kg。
3、實驗方法
實驗小鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，頸正中切口，分離并結(jié)扎右側(cè)頸總動脈近心段、頸外動脈及其分支血管。分離右側(cè)頸內(nèi)動脈，沿著頸內(nèi)動脈向下分離翼顎動脈，根部結(jié)扎該分支。在頸內(nèi)動脈近端備線、遠(yuǎn)端放置動脈夾，頸總動脈分叉處切口，扎入4-0尼龍線，栓線進(jìn)入頸內(nèi)動脈，入顱至大腦前動脈，阻斷大腦中動脈所有血流來源。撤去動脈夾，扎緊備線，縫合皮膚，術(shù)后回籠飼養(yǎng)。以上過程均在室溫恒定情況下進(jìn)行，以利于評價腦缺血程度。缺血2小時后尾靜脈給藥，拔出尼龍線進(jìn)行再灌注，再灌注8小時后再給一次藥。
術(shù)后24小時進(jìn)行行為學(xué)評分，評分采用單盲法，評分參考Zea Longa的5分制評分標(biāo)準(zhǔn)，方法為：0分，小鼠正常，無神經(jīng)損傷癥狀；1分，不能完全伸展對側(cè)前爪；2分，向外側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分，向?qū)?cè)傾倒；4分，不能自發(fā)行走，意識喪失。
評分后，斷頭取腦，將大腦平均冠狀分為5片，放于TTC溶液中，37℃溫育10～15min染色。梗死區(qū)不著色，正常腦組織染成紅色。用圖像分析軟件測出各區(qū)面積，計算梗死區(qū)面積占全腦面積的百分比。
所有的數(shù)據(jù)均用±s表示，統(tǒng)計學(xué)分析采用t檢驗。
（1）藥物對小鼠腦缺血模型行為學(xué)評分的影響
結(jié)果顯示，cGAMP 5 mg/kg和10 mg/kg靜脈注射給藥均能改善局部性腦缺血小鼠行為學(xué)評分；陽性對照藥依達(dá)拉奉5mg/kg靜脈注射給藥也可顯著降低模型小鼠的行為學(xué)評分（p<0.05，與陰性對照組相比）。見表1。
表1實驗各組小鼠腦缺血后的行為學(xué)評分（±s）
*p<0.05，**p<0.01，與陰性對照組比較
（2）藥物對小鼠腦缺血模型腦梗塞百分率的影響
結(jié)果顯示，cGAMP 5 mg/kg和10 mg/kg靜脈注射給藥對局部性腦缺血模型小鼠的腦梗死百分率有非常顯著的降低作用（p<0.01，與陰性對照組相比）；陽性對照藥依達(dá)拉奉5mg/kg靜脈注射給藥可顯著降低模型小鼠的腦壞死百分率（p<0.05，與陰性對照組相比）。見表2。
表2 實驗各組小鼠腦缺血后的腦梗塞百分率（± s）
*p<0.05，**p<0.01，與陰性對照組比較
上述實驗結(jié)果表明，cGAMP（5mg/kg和10mg/kg）對小鼠線栓法致局腦缺血有明顯治療作用，能改善小鼠的行為學(xué)缺陷，降低腦壞死百分率。因此，cGAMP可用于制備防治缺血性腦血管疾病藥物。
實施例3、cGAMP在制備防治缺血性腦血管疾病藥物產(chǎn)品方面的劑型
1 cGAMP注射劑的制備
取cGAMP 10g，加入新鮮注射用水配成10000ml，加熱至約40℃，加入活性炭5 g，充分?jǐn)嚢?，調(diào)節(jié)pH5.5-7.5，經(jīng)砂芯減壓過濾，微孔濾膜精濾。半成品檢查合格后灌封，滅菌，即得。每支注射劑（2ml）含cGAMP 20mg。
2 cGAMP片劑的制備
取cGAMP 30 g、淀粉6 g、乳糖8g粉碎過80目篩，混勻。加入適量50%乙醇拌勻，制成顆粒，60℃以下干燥，整粒，加入適量硬脂酸鎂混勻，壓片?？芍瞥?000 片（每片含30mg cGAMP）的片劑。
3 cGAMP膠囊的制備
取處方量cGAMP 30g，粉碎過80目篩，加入處方量的淀粉14g、微粉硅膠1g中，混勻，直接裝入膠囊，可制成1000 粒。每粒含30mg cGAMP。