抑制myd88基因的寡聚核酸及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了抑制MYD88基因的寡聚核酸，所述寡聚核酸為雙鏈RNA，所述寡聚核酸的堿基組成為：所述寡聚核酸的堿基組成為：包括有(1)含有SEQ.ID NO.12所示的70％以上同源的反義鏈；(2)含有與(1)所述反義鏈反向互補(bǔ)配對(duì)的寡聚核酸的50％以上序列同源的正義鏈；且(3)所述正義鏈和所述反義鏈經(jīng)過退火后能形成雙鏈結(jié)構(gòu)。并公開了含有上述寡聚核酸的DNA、載體、組合物及其應(yīng)用。本發(fā)明提供了一類對(duì)MYD88有顯著抑制作用的寡聚核酸，該寡聚核酸能在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中實(shí)現(xiàn)抑制炎癥作用，顯著降低多種炎癥因子，是一種十分有前景的炎癥治療藥物。
【專利說明】抑制MYD88基因的寡聚核酸及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體是涉及一類抑制MYD88基因的寡聚核酸及其應(yīng) 用。

【背景技術(shù)】
[0002] 骨關(guān)節(jié)炎（OA)是世界上致殘的重要原因之一，大約多于10%的老年人有骨關(guān)節(jié) 炎的癥狀。風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA)是一個(gè)慢性炎癥疾病，影響著世界上約0.5%到1%的成年 人，通常導(dǎo)致關(guān)節(jié)損壞并危及生活質(zhì)量。多種炎性細(xì)胞因子如TNF-a、IL-1、IL_6等參與了 RA和OA的發(fā)病和進(jìn)展，其通過激活免疫細(xì)胞及誘導(dǎo)金屬蛋白酶產(chǎn)生而促進(jìn)關(guān)節(jié)破壞、滑膜 炎、血管增生等。
[0003] MYD88是一種胞質(zhì)可溶性蛋白，其由TLRs (TLR3除外）激活，是TLRs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路 中最主要的接頭蛋白。現(xiàn)有研宄顯示TLRs在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病及進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，而 髓樣分化因子MYD88作為TLRs通路中的核心蛋白，其在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病中的作用也日漸 突出。研宄表明MYD88不但在促進(jìn)炎性細(xì)胞因子過表達(dá)中發(fā)揮重要作用，也能促進(jìn)T細(xì)胞 增殖和啟動(dòng)先天性免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答。
[0004] 在過去的20多年里，大多數(shù)新型治療方法的研發(fā)工作是關(guān)于疾病緩解的抗關(guān)節(jié) 炎藥物（DMARDs)和疾病緩解的抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物（DMOADs)。到目前為止，制藥業(yè)在研 制有效安全的疾病緩和性藥物（DMOADs)上并不成功，致使成千上萬的病人仍受到該嚴(yán)重 致殘性疾病所帶來的痛苦。隨著新途徑和給藥方法的應(yīng)用，在該治療領(lǐng)域預(yù)期將有更多的 發(fā)展，開發(fā)出可阻斷、逆轉(zhuǎn)疾病過程并緩和疾病的藥物。
[0005] 1998年克雷格?梅洛和安德魯?法爾發(fā)現(xiàn)了基因沉默現(xiàn)象，隨后Tuschl和他的同 事在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)化學(xué)合成的19 一 25個(gè)堿基的小干擾RNA(siRNA)，可特異高效的 沉默靶mRNA。從此siRNA被廣泛用于基因功能研宄，疾病治療。siRNA可特異的同序列互 補(bǔ)的靶mRNA結(jié)合，并使其降解。長(zhǎng)片段的雙鏈RNA被Dicer酶切割成21 - 23個(gè)堿基長(zhǎng)度 短片段RNA。兩條鏈中同靶mRNA結(jié)合的鏈稱為反義鏈，另一條鏈稱為正義鏈或信使鏈。體 外化學(xué)合成的siRNA進(jìn)入細(xì)胞后同樣發(fā)揮RNA干擾作用，而且有效降低了長(zhǎng)鏈RNA引起的 免疫反應(yīng)。但針對(duì)同一基因不同片段位置可設(shè)計(jì)出多種siRNA，沉默效果有明顯差異。
[0006] 在本發(fā)明中，我們提供一種全新的SiRNA作為關(guān)節(jié)炎及相關(guān)炎癥的治療藥物；一 種通過骨關(guān)節(jié)腔局部注射siRNA及其制劑抑制炎癥因子表達(dá)的方法，實(shí)現(xiàn)了對(duì)關(guān)節(jié)炎及相 關(guān)炎癥的治療作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明目的旨在提供一類抑制MYD88基因表達(dá)的寡聚核酸。
[0008] 實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下。
[0009] 一類抑制MYD88基因的寡聚核酸，所述寡聚核酸為雙鏈RNA，所述寡聚核酸的堿基 組成為：
[0010] 包括有⑴含有SEQ. ID NO. 12組成的70%以上同源的反義鏈；（2)含有與⑴所 述反義鏈反向互補(bǔ)配對(duì)的寡聚核酸的50%以上序列同源的正義鏈；且 [0011] (3)所述正義鏈和所述反義鏈經(jīng)過退火后能形成雙鏈結(jié)構(gòu)。
[0012] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述寡聚核酸包括有（1)由SEQ. ID NO. 12堿基序列所示的 反義鏈；（2)含有SEQ. ID NO. 11所示至少50%序列同源構(gòu)成的正義鏈；且（3)所述正義鏈 和所述反義鏈經(jīng)過退火后能形成雙鏈結(jié)構(gòu)。
[0013] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述寡聚核酸包括有（1)含有SEQ. ID NO. 12所示至少70% 序列同源構(gòu)成的反義鏈；（2)由SEQ. ID NO. 11堿基序列所示的正義鏈；且（3)所述正義鏈 和所述反義鏈經(jīng)過退火后能形成雙鏈結(jié)構(gòu)。
[0014] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述寡聚核酸包括有（1)含有SEQ. ID NO. 12所示至少70% 序列同源構(gòu)成的反義鏈；（2)含有SEQ. ID NO. 11所示至少70%序列同源構(gòu)成的正義鏈；且 (3)所述正義鏈和所述反義鏈經(jīng)過退火后能形成雙鏈結(jié)構(gòu)。
[0015] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述寡聚核酸由堿基組成如SEQ. IDNO. 12所示的反義鏈以 及堿基組成如SEQ. IDNO. 11所示的正義鏈組成。
[0016] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述寡聚核酸由堿基組成如siRNA-M8-42, siRNA-M8-40， siRNA-M8-41，siRNA-M8-39, siRNA-M8-36, siRNA-M8-28 所示。
[0017] 本發(fā)明提供寡聚核酸是雙鏈RNA，其中所述雙鏈RNA中的特征為：反義鏈含有核苷 酸序列為"3' GCXUCXUCUACCUGAAA⑶5' "如序列表中序列12,或與其具有至少70%以上同 源性的同源序列；正義鏈含有與反義鏈反向互補(bǔ)鏈具有50%同源性以上的核苷酸序列。上 述寡聚核酸可為經(jīng)過（1)-(4)中任一項(xiàng)或多項(xiàng)修飾得到的寡聚核酸：
[0018] 1)對(duì)所述寡聚核酸的連接核苷酸的磷酸二酯鍵進(jìn)行修飾，優(yōu)選將所述磷酸二酯鍵 的氧用硫取代；
[0019] 2)對(duì)所述寡聚核酸的所含核糖進(jìn)行修飾，優(yōu)選將核糖2'-0H用甲氧基或氟取代或 者對(duì)所述2' -0H進(jìn)行脫氧修飾，或以開環(huán)核酸（UNA)進(jìn)行修飾；
[0020] 3)對(duì)所述寡聚核酸的核苷酸堿基的修飾，優(yōu)選胞嘧啶5位甲基修飾、5-乙炔基尿 嘧啶、吲哚修飾；
[0021] 4)對(duì)所述寡聚核酸末端修飾，優(yōu)選末端連接膽固醇、多肽、熒光、糖、抗體分子、磷 酸化修飾；
[0022] 5)本發(fā)明所述寡聚核酸在3'末端可以添加懸掛堿基，優(yōu)選懸掛堿基為dT。
[0023] 本發(fā)明的另一目的還在于提供一種有抑制MYD88基因表達(dá)功能的DNA。
[0024] 具體技術(shù)方案如下。
[0025] 可表達(dá)上述任一種寡聚核酸且具有抑制MYD88基因表達(dá)功能的DNA。
[0026] 本發(fā)明的另一目的還在于提供一種具有抑制MYD88基因表達(dá)功能的載體。
[0027] 具體技術(shù)方案如下。
[0028] 含有上述任一種寡聚核酸或者上述DNA的載體，所述載體為脂質(zhì)體、聚合物材 料、多肽、納米材料。其中脂質(zhì)體載體材料為本領(lǐng)域常用的陽(yáng)離子脂質(zhì)體，優(yōu)選轉(zhuǎn)染試劑 lipo2000 ;聚合物載體材料優(yōu)選透明質(zhì)酸或聚賴氨酸；多肽材料優(yōu)選RGD，或含RGD序列的 多肽；納米材料優(yōu)選為殼聚糖納米粒。
[0029] 本發(fā)明的另一目的還在于提供一種具有抑制MYD88基因表達(dá)功能的組合物。具體 技術(shù)方案如下。
[0030] 一種具有抑制MYD88基因表達(dá)功能的組合物，含有上述任一種寡聚核酸或者上述 DNA，以及藥學(xué)上可接受的載體。
[0031] 本發(fā)明的另一目的還在于提供上述寡聚核酸、DNA、載體或者組合物的應(yīng)用。
[0032] 具體技術(shù)方案如下。
[0033] 上述寡聚核酸、DNA、載體或者組合物在制備調(diào)節(jié)細(xì)胞中MYD88基因表達(dá)制品中的 應(yīng)用。
[0034] 上述寡聚核酸、DNA、載體或者組合物在制備診斷MYD88相關(guān)疾病的試劑中的應(yīng) 用。
[0035] 上述寡聚核酸、DNA、載體或者組合物制備治療MYD88基因異常引發(fā)的疾病的藥物 中的應(yīng)用。
[0036] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述MYD88基因異常引發(fā)的疾病可選自炎癥、免疫性疾病、 感染性疾病、癌癥、心血管疾病。
[0037] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述MYD88基因異常引發(fā)的疾病為骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié) 炎、滑膜炎、炎性腸炎、哮喘、I型糖尿病或紅斑狼瘡。更優(yōu)選為骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或 滑膜炎。
[0038] 本發(fā)明針對(duì)MYD88基因⑶s區(qū)域內(nèi)的不同位置進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計(jì)，經(jīng)過初步的實(shí)驗(yàn)之 后，再選擇了 9對(duì)針對(duì)人與鼠同源基因的siRNA進(jìn)行篩選試驗(yàn)。最后發(fā)現(xiàn)反義鏈含有核苷酸 序列為"3' GCCUCCUCUACCUGAAACU 5' "的 siRNA-M8-04 對(duì) MYD88 基因 mRNA 表達(dá)抑制效果最 強(qiáng)，對(duì)MYD88基因的mRNA沉默效率達(dá)84% (實(shí)施例二）。在免疫印跡（western blotting)實(shí) 驗(yàn)中，與空白和陰性對(duì)照組相比加入siRNA-M8-04后，MYD88蛋白表達(dá)水平明顯下降，差異 有顯著性（P〈0.05)(實(shí)施例三）。經(jīng)IL 1-a刺激后的細(xì)胞中加入siRNA-M8-04,與加入陰 性對(duì)照寡聚核酸相比，細(xì)胞炎癥因子TNF、COX-2、IL-10含量明顯下降，表明siRNA-M8-04 具有消除炎癥效果（實(shí)施例四）。在實(shí)施例五中，本發(fā)明對(duì)序列進(jìn)行了優(yōu)化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明： 反義鏈含"3'GCCUCCUCUACCUGAAACU 5'的同源序列的雙鏈寡核酸對(duì)MYD88基因mRNA具有 抑制效果；正義鏈與反義鏈反向完全互補(bǔ)或部分僅部分互補(bǔ)對(duì)MYD88基因mRNA也具有抑制 效果，且含有與反義鏈70%同源序列的雙鏈RNA也具有抑制效果。實(shí)施例六應(yīng)用質(zhì)粒載體 表達(dá)3' GCCUCCUCUACCUGAAACU 5' "序列，在細(xì)胞中也具有良好的MYD88基因的mRNA抑制效 果。實(shí)施例七研宄了化學(xué)修飾對(duì)核酸沉默MYD88基因效果的影響，結(jié)果表明：經(jīng)適當(dāng)?shù)男揎?后的寡聚核酸對(duì)MYD88基因具有良好的抑制作用。
[0039] 實(shí)施例八的研宄表明，經(jīng)化學(xué)修飾后，本發(fā)明的siRNA在血清中的穩(wěn)定性顯著提 高。實(shí)施例九為siRNA的活體大鼠試驗(yàn)，在關(guān)節(jié)炎模型大鼠的關(guān)節(jié)腔內(nèi)單獨(dú)或混合注射含 反義鏈"3' GCCUCCUCUACCUGAAACU 5' "或 5' -UCGAAACCCAUCUCCUCCG-3' 的化學(xué)修飾物，關(guān)節(jié) 液炎癥因子含量檢測(cè)試驗(yàn)表明，寡聚核酸在大鼠體內(nèi)有明顯的炎癥抑制作用。
[0040] 本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：1、本發(fā)明運(yùn)用基因沉默技術(shù)，經(jīng)過大量的設(shè)計(jì)、篩 選、分析與驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)了一類對(duì)MYD88有顯著抑制作用的寡聚核酸，在一類hFLS細(xì)胞中，抑制 效率達(dá)到84%以上，且與該序列具有70%以上同源性的核酸序列都能起到基因沉默的效 果，表明本發(fā)明是一類對(duì)MYD88沉默效果極強(qiáng)的核酸序列；2、本發(fā)明還涉及一類核酸化學(xué) 修飾物，其具有的高穩(wěn)定性、高活性、高特異性與低細(xì)胞毒性使之能成為活體施用的有效藥 物；3、本發(fā)明涉及的核酸能在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中實(shí)現(xiàn)抑制炎癥作用，顯著降低多種炎癥因子，是一 種十分有前景的炎癥治療藥物。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0041] 圖1siRNA-M8-04免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果示意圖。
[0042] 圖2 siRNA-M8-04下調(diào)炎癥因子實(shí)驗(yàn)結(jié)果示意圖。
[0043] 圖3不同siRNA-M8結(jié)構(gòu)的靶基因表達(dá)量實(shí)驗(yàn)結(jié)果示意圖。
[0044] 圖4化學(xué)修飾增強(qiáng)寡聚核酸血清穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果示意圖。
[0045] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例。下 述實(shí)施例中，如無特殊說明，均為常規(guī)公知方法。
[0046] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。hFLS細(xì) 胞購(gòu)自 Cell Applications，MCF-7 細(xì)胞購(gòu)自 ATCC，Human IL-1 0 immunoassay 檢測(cè)試劑盒 購(gòu)自 Assay Pro, Lipofectamine2000 試劑盒購(gòu)自 Invitrogen，膜酶、Trizol、PBS 為 sigma 產(chǎn)品，雄性SD大鼠為廣東醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心產(chǎn)品，引物、siRNA等核酸序列均廣州市銳博生 物科技有限公司合成。
[0047] 本發(fā)明中所描述的"TNF"為"TNF- a "。
[0048] 抑制率=NC(negativecontral)對(duì)照表達(dá)量-目的基因表達(dá)量/NC(negative contral)對(duì)照表達(dá)量。
[0049] 本發(fā)明所述"藥學(xué)上可接受的載體"是指本領(lǐng)域中常用的體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑，如聚乙烯 亞胺（PEI)，jetPEI (線性聚乙烯亞胺），羥基脂肪酸酯（PHA)，陽(yáng)離子聚合物，氨基酸，脂質(zhì) 體等。
[0050] 實(shí)施例一寡聚核酸的化學(xué)合成
[0051] (1)實(shí)施例中所應(yīng)用的RNA和修飾寡核酸單體均按照以下方法獲得：
[0052] 寡核酸中的RNA核苷酸以2'-0-TBDMS亞磷酰胺單體制備；DNA核苷酸以脫氧核苷 亞磷酰胺單體制備；核苷酸糖基修飾核苷以2'-0CH 3、2'-F、鎖核酸（LNA)、開環(huán)核酸（UNA)、 5-甲基胞喃啶、n引噪、5-乙炔基尿喃啶亞磷酰胺單體制備；骨架磷酸硫代核酸以Beaucage 試劑或PADS試劑代替碘水制備；膽固醇、熒光標(biāo)記、糖修飾、磷酸化寡聚核酸由對(duì)應(yīng)單體制 備；多肽修飾寡核酸由巰基修飾寡核酸與多肽經(jīng)過邁克爾加成反應(yīng)得到，以上所述單體從 Sigma Aldrich，Chem Genes，Glen research 公司購(gòu)買。
[0053] (2)寡聚核酸、糖基、堿基、骨架硫代修飾、膽固醇、熒光標(biāo)記修飾寡核酸制備方 法：
[0054] 理論產(chǎn)量lumol合成規(guī)格完成，稱取通用固相支持物CPG 20mg (載量50umol/g)， 各類亞磷酰胺的單體溶解于無水乙腈溶液中（0.15M)。5-乙硫基-1H-四唑乙腈溶液作為 活化劑（〇. 25M)，氧化劑碘水（0. 02M)，3%三氯乙酸二氯甲烷溶液。按照標(biāo)準(zhǔn)RNA合成程序 設(shè)置程序循環(huán)合成，每步偶合時(shí)間2-10分鐘，經(jīng)20個(gè)循環(huán)后，完成寡核苷酸固相合成。吹 干CPG，轉(zhuǎn)移到5ml EP管中，加入氨水/乙醇溶液（3/1) l-20ml，55°C加熱5?20小時(shí)。在 lOOOOrpm的轉(zhuǎn)速下離心10min取上清液，抽干濃氨水/乙醇后得到白色膠狀固體。固體溶于 200 y 1 1M TBAF THF 溶液，室溫震蕩 20 小時(shí)。加入 0. 5ml 1M Tris-HCl 緩沖液（pH 7. 4)， 室溫震蕩15分鐘，置于離心抽干機(jī)抽至體積為原體積1/2,除去THF。溶液用0. 5ml氯仿萃 取2次，加入lml 0. 1M TEAA上樣液，將混合溶液倒入固相萃取柱，按照標(biāo)準(zhǔn)RNA除鹽流程， 除去溶液中過量鹽，所得核酸濃度由微量紫外分光光度計(jì)測(cè)定，由質(zhì)譜確認(rèn)核酸結(jié)構(gòu)。
[0055] (3)多肽、抗體連接寡核酸制備方法：
[0056] 以上方法制備lOOnmol HS修飾寡聚核酸后，溶解于950 y 1 lOOmM HEPES-KOH緩 沖液（pHl - 14)。與500nmol含烯鍵修飾的多肽或抗體溶于50 y 1的水溶液混合。在氮?dú)?保護(hù)下〇 - l〇〇°C，進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)效率由HPLC監(jiān)控，定量轉(zhuǎn)化后，將溶液超濾濃縮后用于實(shí) 驗(yàn)。
[0057] 退火：以上制備的寡核酸等量混合于lml水或緩沖液中，95°C加熱2 - 20分鐘，室 溫靜置冷卻至室溫備用。
[0058] 實(shí)施例二抑制MYD88基因mRNA表達(dá)的有效寡聚核酸篩選
[0059] 進(jìn)行siRNA設(shè)計(jì)以確定靶向于MYD88的siRNA，進(jìn)行生物信息篩選，確保序列對(duì)于 MYD88序列是特異性的且對(duì)于來自任何其他基因的序列不是特異性的。靶序列使用NCBI提 供的BLAST搜索引擎相對(duì)于GenBank中的序列進(jìn)行核對(duì)，經(jīng)過大量的初步實(shí)驗(yàn)篩選出9對(duì) 有效siRNA，進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化。
[0060] 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。hFLS細(xì)胞用0. 25%的胰酶進(jìn)行消化，制成細(xì)胞懸液接種于12孔 培養(yǎng)板中，當(dāng)hFLS細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（即生長(zhǎng)達(dá)80%融合成片時(shí)），siRNA與轉(zhuǎn)染試 劑Lip2000混合后，進(jìn)行分組轉(zhuǎn)染，實(shí)驗(yàn)共分為11組：Notarget(NTC)為陰性對(duì)照組、NC為 空白對(duì)照組、siRNA-M8-01至siRNA-M8-09為針對(duì)MYD88基因序列不同位置設(shè)計(jì)的siRNA序 列。

【權(quán)利要求】
1. 抑制MYD88基因的寡聚核酸，所述寡聚核酸為雙鏈RNA，其特征是，所述寡聚核酸的 堿基組成為：包括有（1)含有SEQ. ID NO. 12所示的70%以上同源的反義鏈；（2)含有與（1) 所述反義鏈反向互補(bǔ)配對(duì)的寡聚核酸的50%以上序列同源的正義鏈；且（3)所述正義鏈和 所述反義鏈經(jīng)過退火后能形成雙鏈結(jié)構(gòu)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的寡聚核酸，其特征是，所述寡聚核酸包括有（1)由SEQ. ID NO. 12所示的反義鏈；（2)含有SEQ. ID NO. 11所示至少50%序列同源構(gòu)成的正義鏈；且（3) 所述正義鏈和所述反義鏈經(jīng)過退火后能形成雙鏈結(jié)構(gòu)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的寡聚核酸，其特征是，所述寡聚核酸包括有（1)含有SEQ. ID NO. 12所示至少70%序列同源構(gòu)成的反義鏈；（2)由SEQ. ID NO. 11堿基序列所示的正義鏈； 且（3)所述正義鏈和所述反義鏈經(jīng)過退火后能形成雙鏈結(jié)構(gòu)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的寡聚核酸，其特征是，所述寡聚核酸包括有（1)含有SEQ. ID NO. 12所示至少70 %序列同源構(gòu)成的反義鏈；（2)含有SEQ. ID NO. 11所示至少70 %序列同 源構(gòu)成的正義鏈；且（3)所述正義鏈和所述反義鏈經(jīng)過退火后能形成雙鏈結(jié)構(gòu)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的寡聚核酸，其特征是，所述寡聚核酸由堿基組成如SEQ. ID NO. 12所示的反義鏈以及堿基組成如SEQ. ID NO. 11所示的正義鏈組成。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的寡聚核酸，其特征是，所述寡聚核酸經(jīng)過以下至少 一種修飾： (1) 對(duì)所述寡聚核酸的連接核苷酸的磷酸二酯鍵的氧用硫取代； (2) 對(duì)所述寡聚核酸的所含核糖2 '-0H用甲氧基或氟取代或者對(duì)所述2 '-0H進(jìn)行脫氧 修飾，或以開環(huán)核酸進(jìn)行修飾； (3) 對(duì)所述寡聚核酸的胞嘧啶5位甲基修飾、5-乙炔基尿嘧啶、吲哚修飾； (4) 對(duì)所述寡聚核酸末端連接膽固醇、多肽、熒光、糖、抗體分子、磷酸化修飾； (5) 對(duì)所述寡聚核酸的末端添加懸掛堿基。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的寡聚核酸，其特征是，所述寡聚核酸由堿基組成如下： 5' CmGmGmAGGAGAUGGACUUUmGmAm3' 3' GmCmCmUCCUCUACCUGAAAmCmUm-p5' ；或 5' CmsGmsGmsAGGAGAUGGACUUUmsGmsAms3 '、5 ' UmsCmsAmsAAGUCCAUCUCCUCmsCmsGms3 ' ；或 5 ' -Cho1-CmGmGmAGGAGAUGGACUUUmGmAm-3 '、 5' p-UmCmAmAAGUCCAUCUCCUCmCmGm 3' ；或 5' Cho1-CmsGmsGmsAGGAGAUGGACUUUmsGmsAms 3 ' 5' UmsCmsAmsAAGUCCAUCUCCUCmsCmsGms 3' ；或 5. Cho1-CmGmGmAGGAGAUGG⑶UUCmGmAm3 ' 其中s表示S修飾，m表示2'-甲氧基修飾，Choi表示膽固醇修飾，p表示磷酸化修飾。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的寡聚核酸，其特征是，對(duì)所述寡聚核酸的3'末端添加懸 掛堿基，所述懸掛堿基為dTdT。
9. 可表達(dá)權(quán)利要求1-8任一種所述寡聚核酸且具有抑制MYD88基因表達(dá)功能的DNA。
10. 含有權(quán)利要求1-8任一種所述寡聚核酸或者權(quán)利要求9所述DNA的載體，所述載體 為脂質(zhì)體、聚合物材料、多肽、納米材料。
11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的載體，其特征是，所述脂質(zhì)體為陽(yáng)離子脂質(zhì)體；所述聚合物 材料為透明質(zhì)酸或聚賴氨酸；納米材料為殼聚糖納米粒。
12. -種具有抑制MYD88基因表達(dá)功能的組合物，含有權(quán)利要求1-8任一種所述寡聚核 酸或者權(quán)利要求9所述DNA，以及藥學(xué)上可接受的載體。
13. 權(quán)利要求1-8任一種所述寡聚核酸或者權(quán)利要求9所述DNA或權(quán)利要求10或11 所述載體或者權(quán)利要求12所述的組合物在制備抑制細(xì)胞中MYD88基因表達(dá)制品中的應(yīng)用。
14. 權(quán)利要求1-8任一種所述寡聚核酸或者權(quán)利要求9所述DNA或者權(quán)利要求10或 11所述載體或者權(quán)利要求12所述的組合物在制備診斷MYD88基因異常引發(fā)的疾病的試劑 的應(yīng)用。
15. 權(quán)利要求1-8任一種所述寡聚核酸或者權(quán)利要求9所述DNA或者權(quán)利要求10或 11所述載體或者權(quán)利要求12所述的組合物在制備治療MYD88基因異常引發(fā)的疾病的藥物 中的應(yīng)用。
16. 根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的應(yīng)用，其特征是，所述MYD88基因異常引發(fā)的疾病為 炎癥、免疫性疾病、感染性疾病、癌癥、心血管疾病中的任一種。
17. 根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的應(yīng)用，其特征是，所述MYD88基因異常引發(fā)的疾病為 骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、滑膜炎、炎性腸炎、哮喘、I型糖尿病或紅斑狼瘡。
【文檔編號(hào)】A61P19/08GK104450710SQ201410837417
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月28日
【發(fā)明者】張必良, 楊秀群, 王瑋 申請(qǐng)人:廣州愛格生物醫(yī)藥有限公司, 廣州市銳博生物科技有限公司