含有蛋白酶抑制劑的嬰兒營養(yǎng)品的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種包含至少一種蛋白酶抑制劑的嬰兒營養(yǎng)品、制備所述嬰兒營養(yǎng)品的方法和所述嬰兒營養(yǎng)品用于治療和/或預(yù)防兒童肥胖癥和由兒童肥胖癥引起的繼發(fā)病癥的用途。
【專利說明】含有蛋白酶抑制劑的嬰兒營養(yǎng)品

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及營養(yǎng)品、特別是營養(yǎng)完全的嬰兒營養(yǎng)品，和所述營養(yǎng)品用于預(yù)防和/ 或治療兒童肥胖癥的用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 兒童肥胖癥是發(fā)達(dá)國家中日益增加的問題。舉例來說，在美國，2000年認(rèn)為有約 15%的不超過11歲的兒童達(dá)到肥胖，而在1980年只有7%。在歐洲同樣觀察到兒童肥胖癥 的增加。
[0003] 肥胖兒童極有可能患有持續(xù)到成年期的肥胖癥。兒童肥胖癥與高血壓和高血脂以 及長(zhǎng)大后患有諸如哮喘、2型糖尿病、關(guān)節(jié)炎和心血管疾病等疾病的風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)。此外，兒 童肥胖癥可具有負(fù)面的社會(huì)心理作用。兒童肥胖癥的起因包括缺乏定期的體育鍛煉、久坐、 飲食習(xí)慣、社會(huì)經(jīng)濟(jì)因素和遺傳因素。早期營養(yǎng)品在兒童肥胖癥的預(yù)防中也起到重要作用。 Armstrong&Reilly(2002,Lancet 359:2003-4)觀察到喂養(yǎng)人乳可降低兒童肥胖癥的風(fēng)險(xiǎn)。
[0004] 母乳喂養(yǎng)是喂養(yǎng)嬰兒的優(yōu)選方法。然而，存在導(dǎo)致母乳喂養(yǎng)不可能或不太合乎需 要的情況。在這些情況下，嬰兒配方奶粉和較大嬰兒配方奶粉是不錯(cuò)的替代品?，F(xiàn)代嬰兒 配方奶粉和較大嬰兒配方奶粉的組成是經(jīng)調(diào)節(jié)使得其滿足生長(zhǎng)中和發(fā)育中嬰兒的特殊營 養(yǎng)需求。以配方奶粉喂養(yǎng)的嬰兒（幾乎）完全依賴于配方奶粉中的營養(yǎng)物和水。因此，用 于肥胖癥的常用醫(yī)治方法（例如增加飽腹感或降低食欲，或增加生熱）并不可行，這是因?yàn)?嬰兒的
[0005] 嚴(yán)格營養(yǎng)需求會(huì)受到危害。
[0006] WO 0022937描述使用消化速度有所降低的蛋白質(zhì)材料來制備用于腸內(nèi)投藥的組 合物，使得能夠調(diào)節(jié)餐后血漿氨基酸含量。所述文獻(xiàn)也描述含有消化速度有所降低的蛋白 質(zhì)材料的用于腸內(nèi)投與哺乳動(dòng)物的組合物。
[0007] 需要既能滿足支持最佳生長(zhǎng)和發(fā)育的所有營養(yǎng)需求并且能夠防止長(zhǎng)大后發(fā)生兒 童肥胖癥的嬰兒營養(yǎng)品。
[0008] 發(fā)明概述
[0009] 用嬰兒配方奶粉喂食嬰兒可導(dǎo)致比嬰兒接受人乳時(shí)更高的餐后胰島素反應(yīng)，而血 糖含量在投與嬰兒配方奶粉時(shí)也并未降低。因此，與喂食人乳相比，喂食嬰兒配方奶粉而引 起的餐后胰島素含量增加是不合需要的，這是因?yàn)槠湓谝耘浞侥谭畚故车膵雰后w內(nèi)誘發(fā)一 種形式的胰島素抗性，其有助于發(fā)展兒童肥胖癥。
[0010] 本
【發(fā)明者】意外地發(fā)現(xiàn)，投予包含蛋白酶抑制劑的嬰兒營養(yǎng)品與投予不包含蛋白酶 抑制劑的相同嬰兒營養(yǎng)品相比，會(huì)導(dǎo)致更低水平的餐后胰島素含量和餐后葡萄糖含量，同 時(shí)獲得足夠含量的血漿氨基酸、尤其是必需氨基酸。在投與含有蛋白酶抑制劑的嬰兒營養(yǎng) 品之后所觀察到的餐后胰島素反應(yīng)、餐后血糖含量和餐后血漿氨基酸含量與喂食人乳時(shí)所 觀察到的情況相當(dāng)。
[0011] 因此，本發(fā)明的含有蛋白酶抑制劑的嬰兒營養(yǎng)品可有利地用于治療和/或預(yù)防兒 童肥胖癥的方法中。本發(fā)明也可適當(dāng)?shù)赜糜谥委熀?或預(yù)防患有兒童肥胖癥的兒童的繼發(fā) 病癥的方法中，特別是選自由以下各病組成的群組的一種或一種以上的繼發(fā)病癥：糖尿病、 心血管疾病、高血壓、哮喘、睡眠呼吸暫停、矯形術(shù)并發(fā)癥（特別是腿骨和髖骨的矯形術(shù)并 發(fā)癥）和關(guān)節(jié)炎。
[0012] 發(fā)明詳述
[0013] 本發(fā)明一方面涉及一種組合物，其包含蛋白質(zhì)、碳水化合物和至少一種選自由植 物油脂、海洋生物油脂和微生物油脂組成的群組的油脂源，所述組合物包含一種或一種以 上選自由胰蛋白酶抑制劑、胰凝乳蛋白酶抑制劑和彈性蛋白酶抑制劑組成的群組的蛋白酶 抑制劑。蛋白酶抑制劑優(yōu)選地選自由胰蛋白酶抑制劑和胰凝乳蛋白酶抑制劑組成的群組。 在一個(gè)實(shí)施例中，組合物至少包含植物油脂。
[0014] 本發(fā)明的第二方面是本發(fā)明的組合物用于制造對(duì)嬰兒提供營養(yǎng)的營養(yǎng)組合物的 用途。
[0015] 本發(fā)明的第三方面是本發(fā)明的組合物用于制造用于預(yù)防和/或治療兒童肥胖癥 的方法的制劑的用途，所述方法包含向嬰兒經(jīng)口投予所述制劑。
[0016] 本發(fā)明另一方面是本發(fā)明的組合物用于制造營養(yǎng)組合物的用途，所述營養(yǎng)組合物 用于在患有兒童肥胖癥的受試者中治療和/或預(yù)防糖尿病、心血管疾病、高血壓、哮喘、睡 眠呼吸暫停、矯形術(shù)病癥和/或關(guān)節(jié)炎的方法中，所述方法包含向嬰兒經(jīng)口投予所述營養(yǎng) 組合物。
[0017] 本發(fā)明另一方面是用于制備嬰兒營養(yǎng)品的方法，其包含混合以下來源：
[0018] a.包含至少一種選自由胰蛋白酶抑制劑、胰凝乳蛋白酶抑制劑和彈性蛋白酶抑制 劑組成的群組的蛋白酶抑制劑的來源；
[0019] b.油脂源；
[0020] c.蛋白質(zhì)源；和
[0021] d.碳水化合物源。
[0022] 本發(fā)明另一方面是至少一種選自由胰蛋白酶抑制劑、胰凝乳蛋白酶抑制劑和彈性 蛋白酶抑制劑組成的群組的蛋白酶抑制劑用于制造用于預(yù)防和/或治療兒童肥胖癥的營 養(yǎng)組合物的用途。
[0023] 本文所用的術(shù)語嬰兒是指年齡在0到24個(gè)月之間的人類。兒童是年齡在0到12 歲之間的人類。在優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明涉及在具有發(fā)展兒童肥胖癥的高風(fēng)險(xiǎn)的嬰兒中預(yù) 防兒童肥胖癥。
[0024] 本發(fā)明所用的術(shù)語"兒童肥胖癥"是指兒童肥胖或超重。嬰兒和兒童都可患有兒童 肥胖癥。具體來說，性別特異性的以年齡為準(zhǔn)的BMI指數(shù)（BMI-for age)大于85個(gè)百分點(diǎn) 或甚至大于95個(gè)百分點(diǎn)的兒童患有兒童肥胖癥BMI (體質(zhì)指數(shù)）是人體測(cè)量的度量標(biāo)準(zhǔn)， 其被定義為體重（千克）除以身高（米）的平方。舉例來說，可在美國國家衛(wèi)生數(shù)據(jù)中心 (US National Center for Health Statistics)公開獲得具有性別特異性的以年齡為準(zhǔn)的 BMI指數(shù)的表格。如果一個(gè)兒童的性別特異性以年齡為準(zhǔn)的BMI指數(shù)大于85個(gè)百分點(diǎn)或甚 至95個(gè)百分點(diǎn)，那么這意味著在相同年齡和性別的兒童組成的群體中有85%或甚至95% 的兒童具有更低的BMI指數(shù)。
[0025] 在本說明書中的任何地方在體積方面描述組合物時(shí)，這意味著是指無需進(jìn)一步稀 釋以使其適于投予兒童、尤其是嬰兒的即飲液體組合物。
[0026] 蛋白酶抑制劑
[0027] 本文所用的術(shù)語"蛋白酶"是指能夠通過裂解肽鍵來水解蛋白質(zhì)和/或肽的酶。本 發(fā)明尤其涉及對(duì)人類腸蛋白酶胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和/或彈性蛋白酶的抑制。
[0028] 結(jié)合本發(fā)明使用的術(shù)語"蛋白酶抑制劑"是指能夠抑制蛋白酶作用的化合物、物質(zhì) 和/或組合物。本發(fā)明的蛋白酶抑制劑優(yōu)選為食品級(jí)且無毒。本發(fā)明尤其涉及能夠抑制人 類腸胰蛋白酶、人類腸胰凝乳蛋白酶和/或人類腸彈性蛋白酶的活性的蛋白酶抑制劑。能 夠抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和/或彈性蛋白酶的作用的化合物、物質(zhì)和/或組合物可由 所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員使用此項(xiàng)技術(shù)中已知的方法（例如使用下文所述的方法）容易地確 定。
[0029] 本發(fā)明優(yōu)選包含以下至少一種成份作為蛋白酶抑制劑：
[0030] ?卵類粘蛋白（來源于禽蛋）；
[0031] ?在哺乳動(dòng)物血液、血漿、乳汁和/或初乳以及在非人類哺乳動(dòng)物的器官中所發(fā)現(xiàn) 的抗胰蛋白酶和/或抗胰凝乳蛋白酶；
[0032] ?重組人類Ci1-抗胰蛋白酶、重組人類間-α-胰蛋白酶抑制劑和/或重組人類 Ci1-抗胰凝乳蛋白酶；
[0033] ?來自真菌和/或細(xì)菌、優(yōu)選為放線菌屬（actinomyces)、鏈霉菌屬 (streptomyces)、雙歧桿菌（Bifidobacteria)或乳酸菌的蛋白酶抑制劑；
[0034] ?在玉米仁、馬鈴薯和/或豆科種子（諸如利馬豆、鷹嘴豆、青刀豆、赤小豆和/或 大?)中所發(fā)現(xiàn)的蛋白酶抑制劑；
[0035] ?葡糖酸鋅；
[0036] ?或任何一種上述制劑的混合物。
[0037] 蛋白酶抑制劑優(yōu)選是從選自由馬鈴薯、豆科種子、非人乳、禽蛋白和微生物培 養(yǎng)物組成的群組的來源獲得。蛋白酶抑制劑優(yōu)選為肽。蛋白酶抑制劑可從（例如） Sigma-Aldrich購得，或者可如下列文獻(xiàn)中所述分離得到：例如，Seidl&Liener, (1972) J. Biol. Chem. 247:3533-3538;和 Michael 等人，1976, Proc. Natl. Acad Sci，73:1941-1944 ;和W002060932。在特定實(shí)施例中，蛋白酶抑制劑為葡糖酸鋅。
[0038] 所述組合物優(yōu)選包含至少一種選自由以下各物組成的群組的蛋白酶抑制劑：在人 類血漿中所發(fā)現(xiàn)的a i抗胰蛋白酶；在人類血漿中所發(fā)現(xiàn)的a i抗胰凝乳蛋白酶；在牛肺中 所發(fā)現(xiàn)的抑肽酶（aprotinin);在牛胰腺或午初乳中所發(fā)現(xiàn)的Kunitz抑制劑；在牛胰腺中 所發(fā)現(xiàn)的Kazal抑制劑；在大豆中所發(fā)現(xiàn)的Bowman-Birk胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶抑制劑； 在大豆中所發(fā)現(xiàn)的I-S型胰蛋白酶抑制劑；在大豆中所發(fā)現(xiàn)的II-S型胰蛋白酶抑制劑；在 大豆中所發(fā)現(xiàn)的Kunitz抑制劑；在利馬豆中所發(fā)現(xiàn)的胰蛋白酶抑制劑；在利馬豆中所發(fā)現(xiàn) 的II-L型胰蛋白酶抑制劑；在玉米仁中所發(fā)現(xiàn)的哈格曼因子（Hageman factor);在雞蛋白 中所發(fā)現(xiàn)的卵抑制劑；在雞蛋白中所發(fā)現(xiàn)的III-O型膜蛋白酶抑制劑；在雞蛋白中所發(fā)現(xiàn) 的IV-O型胰蛋白酶抑制劑；在火雞蛋白中所發(fā)現(xiàn)的II-T型胰蛋白酶抑制劑；鏈霉菌屬枯 草桿菌蛋白酶抑制劑；由雙歧桿菌產(chǎn)生的絲氨酸蛋白酶抑制劑；馬鈴薯抑制劑I;馬鈴薯抑 制劑II;和葡糖酸鋅。特別優(yōu)選組合物包含至少一種選自由以下各物組成的群組的蛋白酶 抑制劑：在人類血漿中所發(fā)現(xiàn)的a i抗胰蛋白酶；在人類血漿中所發(fā)現(xiàn)的a i抗胰凝乳蛋白 酶；在牛初乳中所發(fā)現(xiàn)的Kunitz胰蛋白酶抑制劑；在大豆中所發(fā)現(xiàn)的Bowman-Birk胰蛋白 酶-胰凝乳蛋白酶抑制劑；在雞蛋白中所發(fā)現(xiàn)的卵抑制劑；由雙歧桿菌產(chǎn)生的絲氨酸蛋白 酶抑制劑；馬鈴薯抑制劑I ;和馬鈴薯抑制劑II。
[0039] 蛋白酶抑制劑的濃度和活件
[0040] 根據(jù) Schwert G. W.和 Takenaka Y. (Biochim. Biophys. Acta (1955)16, 570)所述 的方法測(cè)量胰蛋白酶活性和胰凝乳蛋白酶活性。在測(cè)定胰蛋白酶活性的方法中，使N-苯甲 ?；?L-精氨酸乙酯[BAEE]在酯鍵處水解，引起在253nm和25°C下所測(cè)量的吸光度增加。 在測(cè)定胰凝乳蛋白酶活性的方法中，使N-乙?；?L-酪氨酸乙酯[ATEE]在酯鍵處水解，弓丨 起在237nm和25°C下所測(cè)量的吸光度降低。可如Gertler, A.和Hofmann, T. (1970) .Can. J. Biochem. 48, 384-6所述通過水解N-乙?；?(L-丙氨酸）3-甲酯（AAAAME)來測(cè)量彈性 蛋白酶活性。
[0041] -個(gè)單位的胰蛋白酶活性是定義為在如Schwert (上文）所述的反應(yīng)條件下每分 鐘水解Iumol BAEE。一個(gè)單位的胰凝乳蛋白酶活性是定義為在如Schwert (上文）所述的 反應(yīng)條件下每分鐘水解lymol ATEE。本文所用的一個(gè)單位的彈性蛋白酶活性是定義為在 如Gertler (上文）所述的反應(yīng)條件下每分鐘水解1 μ mol AAAAME。
[0042] 一個(gè)單位的胰蛋白酶抑制劑活性（TIU)是定義為抑制一個(gè)單位的胰蛋白酶活性 的活性水平。一個(gè)TIU抑制具有2個(gè)單位活性的胰蛋白酶制劑活性的50%。類似地，一個(gè) 單位的胰凝乳蛋白酶和彈性蛋白酶抑制劑分別為抑制一個(gè)單位胰凝乳蛋白酶活性和一個(gè) 單位彈性蛋白酶活性的抑制劑活性。一個(gè)單位的蛋白酶抑制劑（PIU)是定義為抑制一個(gè)單 位的胰蛋白酶加胰凝乳蛋白酶加彈性蛋白酶的活性總和的抑制劑的量。
[0043] 一種或一種以上所述蛋白酶制劑優(yōu)選為每克組合物干重中以抑制胰蛋白酶、胰凝 乳蛋白酶和彈性蛋白酶總和的蛋白酶抑制劑單位（Piu)的至少0. 75、更優(yōu)選為至少3. 0、最 優(yōu)選為至少9. 0的活性存在。所述蛋白酶抑制劑優(yōu)選為每克組合物干重中以低于300、更優(yōu) 選低于75PIU的濃度存在。當(dāng)組合物為即飲液體的形式時(shí)，每100毫升組合物優(yōu)選包含至 少10PIU、更優(yōu)選為至少40PIU、最優(yōu)選為至少120PIU。
[0044] 本發(fā)明的蛋白質(zhì)抑制劑優(yōu)選地每一抑制劑重量不具有尤其高的抑制活性，意即比 抑制活性，這是因?yàn)檫@會(huì)導(dǎo)致不合需要的高局部抑制活性。獲得與食物基質(zhì)的適當(dāng)混合也 需要一定體積和重量的蛋白酶抑制劑。因此，本發(fā)明的組合物優(yōu)選地每克組合物干重包含 至少35 μ g蛋白酶抑制齊[J、更優(yōu)選為至少140 μ g蛋白酶抑制齊[J、最優(yōu)選為至少560 μ g蛋白 酶抑制劑。每100毫升的即飲液體形式的組合物優(yōu)選包含至少0. 5mg、更優(yōu)選為至少2. Omg、 最優(yōu)選為至少8. Omg蛋白酶抑制劑。所用蛋白酶抑制劑優(yōu)選地每毫克蛋白酶抑制劑具有小 于2000PIU、更優(yōu)選小于400PIU，最優(yōu)選小于100PIU的比抑制劑活性。
[0045] 然而，比蛋白酶抑制活性也不應(yīng)太低，以避免對(duì)有利地包括在組合物中用于提供 營養(yǎng)的營養(yǎng)物構(gòu)成限制。因此，本發(fā)明的組合物優(yōu)選地每100毫升包含少于〇. 2克的蛋白 酶抑制劑，更優(yōu)選地每100毫升包含少于〇. 050克的蛋白酶抑制劑?；蛘?，本發(fā)明的組合物 優(yōu)選地每克組合物干重包含少于Hmg的蛋白酶抑制劑，更優(yōu)選地每克組合物干重包含少 于3. 5 mg的蛋白酶抑制劑。比蛋白酶抑制劑活性優(yōu)選大于0.2PIU/mg蛋白酶抑制劑，或更 優(yōu)選大于I. OPIU/mg蛋白酶抑制劑，最優(yōu)選大于4. OPIU/mg蛋白酶抑制劑。
[0046] 為盡可能地接近人乳，本發(fā)明的組合物優(yōu)選含有與人乳相同的蛋白酶抑制活性。 所述蛋白酶抑制活性優(yōu)選是在人乳中所發(fā)現(xiàn)的蛋白酶抑制活性的20%到5000%范圍內(nèi)、 更優(yōu)選在40%與1000%之間。為確定組合物中應(yīng)存在的蛋白酶抑制劑活性，優(yōu)選使用以下 方法：
[0047] -在如上文所描述的用于測(cè)定胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和/或彈性蛋 白酶抑制活性的合適檢定中，測(cè)定每100毫升中15mg人類血清Ci 1抗胰蛋白酶 (Athena Biochemicals, Athens, GA)與 2. 5mg 人類血清 a i 抗膜凝乳蛋白酶（ICN Biochemicals, Costa Mesa, CA)的溶液的蛋白酶抑制活性。
[0048] -每100毫升本發(fā)明的組合物（當(dāng)為即飲液體形式時(shí)）中所加入的蛋白酶抑制劑 活性是在以上所得的活性的20%與5000%之間，優(yōu)選在該活性的40%與1000%之間。 [0049] 為確定組合物中應(yīng)存在的蛋白酶抑制劑重量，優(yōu)選使用以下方法：
[0050] -使用與用于測(cè)定加入本發(fā)明組合物中的蛋白酶抑制活性的檢定相同的檢定，測(cè) 試含17. 5mg本發(fā)明的蛋白酶抑制劑的溶液在IOOml時(shí)的抑制活性。在計(jì)算每重量的蛋白 酶抑制活性之后，每IOOml本發(fā)明的組合物（即用型液體配方）中需加入的蛋白酶抑制劑 重量是提供從15mg人類血清a i抗胰蛋白酶和2. 5mg人類血清a i抗胰凝乳蛋白酶抑制劑 獲得的胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和/或彈性蛋白酶抑制活性的20%與5000%之間活性的重 量。
[0051] 相當(dāng)?shù)?，可描述每克組合物干重的抑制劑活性。在優(yōu)選實(shí)施例中，每克組合物干重 的蛋白酶抑制劑活性為I. Img人類血清a i抗胰蛋白酶和〇. 18mg人類血清a i抗胰凝乳蛋 白酶的活性的20%到5000%、更優(yōu)選為40%到1000%。
[0052] 在優(yōu)選實(shí)施例中，組合物的蛋白酶抑制劑活性為每克蛋白質(zhì)6到2500PIU、更優(yōu)選 為每克蛋白質(zhì)25到600PIU。蛋白酶抑制劑優(yōu)選以每克蛋白質(zhì)0.03mg到120mg存在，更優(yōu) 選以每克蛋白質(zhì)〇. 12mg到30mg存在?；蛘?，每克蛋白質(zhì)中所存在的蛋白酶抑制劑活性優(yōu)選 為8. 8mg人類血清a r抗胰蛋白酶和I. 5mg人類血清a i-抗胰凝乳蛋白酶的活性的20% 到5000%、更優(yōu)選為40%到1000%。
[0053] 營養(yǎng)物
[0054] 為了對(duì)嬰兒提供滿足支持生長(zhǎng)和發(fā)育的營養(yǎng)需求的營養(yǎng)品，蛋白質(zhì)、碳水化合物 和油脂是必需的。營養(yǎng)品最好進(jìn)一少包含（必需）維生素、礦物質(zhì)和微量元素。合適的維 生素、礦物質(zhì)和微量元素眾所周知，且所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員通常了解用于嬰兒的營養(yǎng)產(chǎn)品 中可包括何種上述物質(zhì)和何種量。舉例來說，諸如Nutrilon x 1和2的市售嬰兒營養(yǎng)品中 所存在的那些維生素、礦物質(zhì)和微量元素包括在本發(fā)明的組合物中同樣合適。
[0055] 蛋白質(zhì)
[0056] 本發(fā)明的組合物包含蛋白質(zhì)。最好本發(fā)明組合物中的蛋白質(zhì)的至少50重量％、更 優(yōu)選為至少90重量％是來源于非人類哺乳動(dòng)物乳汁、優(yōu)選為牛奶。酪蛋白和乳清優(yōu)選以 20/80到80/20范圍內(nèi)的重量比存在。這是最佳范圍，因?yàn)橐环矫媾＠业鞍椎陌被峤M成更 類似于人乳蛋白，且另一方面乳清蛋白更易于消化且發(fā)現(xiàn)其在人乳中的量更多。優(yōu)選地，本 發(fā)明組合物中的至少80重量％、優(yōu)選為至少95重量％的蛋白質(zhì)未被蛋白酶水解成較小的 肽或游離氨基酸。當(dāng)組合物為液體形式時(shí)，優(yōu)選每IOOml包含I. Og到6. Og蛋白質(zhì)，更優(yōu)選 每IOOml包含I. Og到2. 5g蛋白質(zhì)。相當(dāng)?shù)?組合物包含以干重計(jì)7重量％到40重量％、 優(yōu)選為8重量％到20重量％的蛋白質(zhì)。使用N*6. 38,根據(jù)Kjeldahl計(jì)算蛋白質(zhì)含量，其 中N為所測(cè)量的氮的量。本發(fā)明組合物中蛋白質(zhì)的量?jī)?yōu)選為5能量％到16能量％、最優(yōu)選 為8. O能量％到12. O能量％。能量％為能量百分比的縮寫且表示構(gòu)成制劑的總熱量值的 各組份的相對(duì)量。
[0057] 可消化碳水化合物
[0058] 本發(fā)明的組合物優(yōu)選包含選自由乳糖、麥芽糊精、淀粉、果糖、蔗糖、葡萄糖和麥芽 糖組成的群組的可消化碳水化合物源。因?yàn)榈鸵葝u素反應(yīng)和低升糖指數(shù)很重要，所以最好 至少35重量％、優(yōu)選至少50重量％、更優(yōu)選至少75重量％的本發(fā)明組合物的可消化碳水 化合物為乳糖。蔗糖加葡萄糖的量?jī)?yōu)選低于可消化碳水化合物的6重量％、更優(yōu)選低于2 重量％。本發(fā)明的組合物優(yōu)選包含25到75能量％、優(yōu)選為40到55能量％的可消化碳水 化合物。當(dāng)為液體形式時(shí)，本發(fā)明的組合物優(yōu)選每IOOml包含6到19g可消化碳水化合物、 更優(yōu)選每IOOml包含6到IOg可消化碳水化合物。以干重計(jì)，組合物優(yōu)選包含40到75重 量％的可消化碳水化合物。本文所用的術(shù)語"可消化碳水化合物"是指能夠轉(zhuǎn)化為可在人 類消化道的口、食道、胃和/或小腸中吸收的單元的碳水化合物。
[0059] 不可消化的可發(fā)酵碳水化合物
[0060] 不可消化的碳水化合物為在經(jīng)口攝入后完整地進(jìn)入人類結(jié)腸的碳水化合物。
[0061] 本文所用的術(shù)語"可發(fā)酵"是指經(jīng)受（厭氧）分解并在胃腸道下半部（例如結(jié)腸） 由微生物轉(zhuǎn)化為較小分子、尤其是短鏈脂肪酸和乳酸鹽的能力?？梢訟m. J. Clin. Nutr. 53， 1418-1424(1991)中所述的方法測(cè)定可發(fā)酵性。
[0062] 不可消化的可發(fā)酵碳水化合物（NDFC)具有血糖調(diào)和作用，這是因?yàn)槠溲舆t胃 排空并縮短小腸通過時(shí)間。這種作用可經(jīng)由從結(jié)腸中的低聚糖通過所謂的回腸結(jié)腸閘 (ileocolonic brake)產(chǎn)生的短鏈脂肪酸引起，回腸結(jié)腸閘是指通過到達(dá)回腸-結(jié)腸接合 處的營養(yǎng)物對(duì)胃排空的抑制。短鏈脂肪酸也可縮短回腸排空。因此，認(rèn)為不可消化的可發(fā) 酵碳水化合物和蛋白酶抑制劑協(xié)同預(yù)防和/或治療兒童肥胖癥。
[0063] 根據(jù)一優(yōu)選實(shí)施例，組合物包含一種或一種以上不可消化的可發(fā)酵碳水化合物。 組合物優(yōu)選每IOOml液體包含0. 2-1. 5g、優(yōu)選為0. 3到I. Og NDFC。以干重計(jì)，組合物優(yōu)選 包含1到10重量％、優(yōu)選為2到6重量％。組合物優(yōu)選包含至少一種選自由多聚果糖、低 聚果糖、低聚半乳糖、部分水解的半乳甘露聚糖、酸性低聚糖和穩(wěn)定的或不可消化的聚糊精 組成的群組的不可消化的可發(fā)酵碳水化合物。在一特別優(yōu)選的實(shí)施例中，組合物包含a)反 式低聚半乳糖與多聚果糖的混合物；或b)部分水解的瓜爾膠與一種選自由多聚果糖和穩(wěn) 定的或不可消化的聚糊精組成的群組的碳水化合物的混合物，這是因?yàn)檫@些混合物協(xié)同產(chǎn) 生最高量的短鏈脂肪酸。
[0064] 多聚果糖為包含聚合度為10或10以上的β連接果糖單兀鏈的多糖碳水化合物。 多聚果糖包括菊糖、果聚糖和/或混合類型的多聚果糖。適用于組合物的菊糖也可容易地 購得，例如 RaftilineK HP (Orafti)。
[0065] 低聚果糖（FOS)是指以葡萄糖和/或果糖終止的果糖鏈，其聚合度（DP)低于10。 因此，可將FOS描述為GFlri鏈和/或Fn鏈，其中G為葡糖基單元，F(xiàn)為果糖基單元且η = 1-9。大部分（至少90%、優(yōu)選為至少95% )果糖單元是通過β (2, 1)果糖基-果糖鍵連 接。合適的FOS 源為 Rafti 丨 ose"'（Orafti)或 Actilight(Beghin-Meiji)。
[0066] 低聚半乳糖（GOS)是指包含半乳糖單元的低聚糖，其DP低于10。葡萄糖單元 可存在于鏈的還原端。GOS包含α-和β-低聚半乳糖。優(yōu)選地，至少66 %的GOS的糖 化物單元為半乳糖單元。反式低聚半乳糖（TOS)為大部分半乳糖單元（至少90%、優(yōu) 選為至少95% )通過β鍵（例如β-(1，4)鍵）連接的低聚半乳糖。優(yōu)選地，本發(fā)明 所用的GOS的鍵中至少50%為β鍵。例如，所述TOS為在VivinaluiGOS(B〇rcul〇 Domo Ingredients, Zwolle, Netherlands)中所發(fā)現(xiàn)的 T0S。
[0067] 術(shù)語酸性低聚糖是指包含至少一個(gè)選自由N-乙酰神經(jīng)氨酸、N-乙醇酰神經(jīng)氨酸、 游離或酯化竣酸、硫酸基和磷酸基組成的群組的酸性基團(tuán)的低聚糖。酸性低聚糖優(yōu)選包含 糖醛酸單元（意即糖醛酸聚合物）、更優(yōu)選為半乳糖醛酸單元。酸性低聚糖可為同源或異源 的碳水化合物。優(yōu)選使用果膠和/或海藻酸鹽的水解產(chǎn)物。DP優(yōu)選低于10。
[0068] 部分水解的半乳甘露聚糖是指其中半乳甘露聚糖已經(jīng)受水解但尚未水解為 其單體單元的組合物。半乳甘露聚糖為在直鏈中包含至少90 %、優(yōu)選為至少95%的 β -(1，4)-D_甘露吡喃糖基單元和經(jīng)由α -(1，4)_D鍵與其結(jié)合的半乳糖支鏈的多糖。 根據(jù)一尤其優(yōu)選的實(shí)施例，使用瓜爾膠。制備部分水解的瓜爾膠（PHGG)的方法描述 于 EP0557627 和 EP1252195 中。PHGG 可以商品名 Benefiberx'從 Novartis Nutrition Corporation購得或以商品名"Sunfiber AG "從Taiyo Kagaku, Japan購得。水解的瓜爾 膠優(yōu)選為具有較佳的溶解性的聚結(jié)形式。
[0069] 穩(wěn)定的或不可消化的聚糊精是指DP為3到50、優(yōu)選為4到20且單體單元的至少 80%、優(yōu)選至少85%是來源于葡萄糖（以所存在的全部單體單元計(jì)）的不可消化的碳水 化合物。平均聚合度是在每分子10個(gè)與16個(gè)單糖單元之間。在一優(yōu)選實(shí)施例中，不可消 化的聚糊精為無規(guī)分枝聚糊精且包含α-(1,4)、α-(1,6)葡糖苷鍵和α/β-(1, 2)、a/ β -(1，3)和β _(1，6)鍵。例如，不可消化的聚糊精可以商品名"Fibersol 2K:_"從MatSUtami Inductries購得或以商品名Litesse?從Danisco購得。
[0070] 廸脂
[0071] 組合物包含至少一種選自由植物油脂、海洋生物油脂和微生物油脂組成的群組的 油脂源。
[0072] 飽和脂肪酸易于氧化且其攝取會(huì)導(dǎo)致兒童肥胖癥。因此，飽和脂肪酸的量?jī)?yōu)選低 于總脂肪酸的58重量％、最優(yōu)選低于45重量％。單不飽和脂肪酸的濃度優(yōu)選在以總脂肪 酸重量計(jì)17到60重量％的范圍內(nèi)。本發(fā)明的組合物中多不飽和脂肪酸的濃度優(yōu)選在以總 脂肪酸重量計(jì)11與36重量％之間。
[0073] 必需脂肪酸亞麻酸（LA ;-種ω 6脂肪酸）和α -亞麻酸（ALA ;-種ω 3脂肪酸） 應(yīng)以足量和均衡比存在，這是因?yàn)長(zhǎng)A和ALA缺乏和失衡與諸如胰島素抗性和肥胖癥的病癥 相關(guān)。因此，組合物優(yōu)選每IOOrnl包含0. 3到I. 5g LA且每IOOrnl包含至少50mg ALA。以干 重計(jì)，本發(fā)明的組合物優(yōu)選包含1. 8到12. 0重量％的LA和至少0. 30重量％的ALA。重量 比LA/ALA優(yōu)選是在5與15之間。本發(fā)明的組合物優(yōu)選包含長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸（LCPUFA)、 更優(yōu)選為二十碳五烯酸（EPA)和/或二十二碳六烯酸（DHA)。DHA和EPA都改善胰島素敏 感性且因此有利地包括在本發(fā)明的組合物中。具有如上所述的特性的油脂組合物被認(rèn)為與 蛋白酶抑制劑一起對(duì)兒童肥胖癥的預(yù)防和/或治療起協(xié)同作用。
[0074] 微生物油脂包括來源于海藻和真菌的油脂。
[0075] 當(dāng)組合物為液體形式時(shí)，優(yōu)選每IOOml包含2. 1到6. 5g油脂。以千重計(jì)，組合物 優(yōu)選包含12. 5到30重量％的油脂。本發(fā)明的組合物優(yōu)選包含35到60能量％油脂、更優(yōu) 選為39到50能量％油脂。
[0076] 調(diào)滲物（Osmolyte)
[0077] 調(diào)滲物使諸如胰蛋白酶抑制劑的蛋白酶抑制劑穩(wěn)定。因此，本發(fā)明組合物中的調(diào) 滲物和蛋白酶抑制劑對(duì)兒童肥胖癥的預(yù)防和/或治療具有協(xié)同作用。本發(fā)明的組合物優(yōu)選 包含一種或一種以上選自由甜菜堿、肌氨酸、肌醇、牛磺酸、膽堿和肌酸組成的群組的調(diào)滲 物。
[0078] 當(dāng)本發(fā)明的組合物為液體形式時(shí)，組合物優(yōu)選每IOOml包含至少8mg調(diào)滲物。當(dāng) 本發(fā)明的組合物為液體形式時(shí)，組合物優(yōu)選每IOOml包含不超過90mg調(diào)滲物。組合物優(yōu)選 每克本發(fā)明組合物的干重包含至少〇. 5mg調(diào)滲物。組合物優(yōu)選每克本發(fā)明組合物的干重包 含不超過6mg調(diào)滲物。
[0079] 液體纟目合物
[0080] 本發(fā)明的組合物優(yōu)選以液體形式投藥。為了滿足熱量需要，組合物優(yōu)選包含 50到200kcal/100ml、更優(yōu)選為60到90kcal/100mL。本發(fā)明組合物的摩爾滲透壓濃度 (osmolarity)通常介于150與420m0smol/l之間、優(yōu)選為260到320m0smol/l。低摩爾滲 透壓濃度旨在減輕胃腸壓力，例如，尤其降低嬰兒中腹瀉的發(fā)生率。
[0081] 組合物優(yōu)選為粘度低于35cps的液體即飲形式。合適地，組合物為可以重溶于水 以形成液體的粉末形式或應(yīng)以水稀釋的液體濃縮物形式。
[0082] 毎日劑量
[0083] 當(dāng)組合物為液體形式時(shí)，在每日基礎(chǔ)上所投予的優(yōu)選體積在每日約80到2500ml、 更優(yōu)選為約450到1000ml的范圍內(nèi)，這是適用于嬰兒的量。
[0084] 泡?
[0085] 本發(fā)明的組合物可有利地用于治療和/或預(yù)防兒童肥胖癥的方法中。本發(fā)明的組 合物也可有利地用于在患有兒童肥胖癥的嬰兒和/或兒童中治療和/或預(yù)防2型糖尿病、 高血壓、心血管疾病、關(guān)節(jié)炎、睡眠呼吸暫停、哮喘和/或矯形術(shù)并發(fā)癥（特別是腿骨和髖骨 的矯形術(shù)并發(fā)癥）。
[0086] 本發(fā)明的組合物優(yōu)選經(jīng)口投藥。組合物尤其可用于對(duì)嬰兒提供營養(yǎng)物和/或刺激 嬰兒生長(zhǎng)的方法中。因?yàn)榻M合物尤其可用于預(yù)防長(zhǎng)大后的兒童肥胖癥，所以組合物應(yīng)有利 地投予0-24個(gè)月大的嬰兒或兒童、優(yōu)選投與0-18個(gè)月大的嬰兒或兒童。
[0087] 本發(fā)明涵蓋經(jīng)包裝的營養(yǎng)組合物，其具有明確地或含蓄地指導(dǎo)消費(fèi)者根據(jù)一種或 一種以上上述或下述目的使用所述補(bǔ)充物或產(chǎn)品的標(biāo)簽。例如，所述標(biāo)簽可通過結(jié)合例如 "瘦"、"預(yù)防超重"、"發(fā)展健康身體質(zhì)量"和類似術(shù)語的術(shù)語而涉及用于治療兒童肥胖癥的方 法。產(chǎn)品的兒童肥胖癥預(yù)防特性可經(jīng)由諸如圖像、圖式和其它指示的標(biāo)記來表明，消費(fèi)者 可由所述標(biāo)記推斷產(chǎn)品旨在治療或預(yù)防兒童肥胖癥。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0088] 圖I :在喂食2ml人乳的大鼠（·）中、喂食2ml標(biāo)準(zhǔn)嬰兒配方奶粉的大鼠（□) 中和喂食2ml含有Img大豆胰蛋白酶/胰凝乳蛋白酶抑制劑（Sigma T9777)的標(biāo)準(zhǔn)嬰兒配 方奶粉的大鼠（)中的餐后血糖含量。
[0089] 圖2 :在喂會(huì)2ml人乳（·）、2ml標(biāo)準(zhǔn)嬰兒配方奶粉（□)和2ml補(bǔ)充有Img大 豆胰蛋白酶/胰凝乳蛋白酶抑制劑（Sigma T9777)的標(biāo)準(zhǔn)嬰兒配方奶粉（)的大鼠中的 餐后胰島素含量。

【具體實(shí)施方式】
[0090] 實(shí)例 1
[0091] 動(dòng)物:
[0092] 個(gè)別圈養(yǎng)20只成年雄性Wistar大鼠（在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)為10周齡）。動(dòng)物可隨意進(jìn) 食水和食物（Standard Rat Chow, Harlan)。動(dòng)物在異氟燒/^20/02麻醉下的外科手術(shù)期間 于頸靜脈中接收永久插管以使得能夠輕松地反復(fù)采血。
[0093] 治療:
[0094] 在4h禁食期后，對(duì)10只動(dòng)物喂食2ml奶粉組合物。在交叉設(shè)計(jì)（間隔一周的實(shí) 驗(yàn)）中測(cè)試三種不同的組合物。
[0095] 1.人類乳汁 _] 2. Nutrilonx 1
[0097] 3.含有Img蛋白酶抑制劑（大豆胰凝乳蛋白酶和膜蛋白酶抑制劑抑制劑，Sigma T9777)的 Nutrilonli 1。
[0098] Nutrilon" 1的組成提供于表I中。隨后，在喂食后t = 0、5、10、15、30、60、90和 120分鐘時(shí)，在經(jīng)肝素化冷卻的管中收集血樣（200μ 1)。隨后，在離心（10min，5000rpm)后 分離血漿并存儲(chǔ)在_2〇°C下直到分析。
[0099] 測(cè)量胰島素:
[0100] 通過放射免疫檢定（RIA，Linco)，根據(jù)試劑盒實(shí)驗(yàn)方案測(cè)量血漿胰島素，并進(jìn)行 以下調(diào)整：所有的檢定體積都減少4倍。
[0101] 測(cè)量葡萄糖:
[0102] 以96孔格式（Roche Diagnostics, #1448668)用氧化酶-過氧化物酶方法測(cè)量血 漿葡萄糖。
[0103] 測(cè)量氨某酸:
[0104] 根據(jù) Fekkes D，van Dalen A, Edelman M，VoskuiIen A 的 "Validation of the determination of amino acids in plasma by high performance liquid chromatography using automated pre-column derivatization with o-phtaldialdehyde" Journal of Chrom. B. (1995) 177-186 測(cè)定氨基酸。不能用這一方法 測(cè)量半胱氨酸。
[0105] 曲線下面積、峰倌時(shí)間、最大峰高
[0106] 在早期峰（t = 0-30min)期間，在所測(cè)量的整個(gè)曲線下（t = 0-120min)，計(jì)算每只 動(dòng)物的葡萄糖和胰島素的曲線下面積?？鄢?fù)值（當(dāng)反應(yīng)到達(dá)基線下水平時(shí)）。測(cè)定每只 動(dòng)物的葡萄糖和胰島素峰值的時(shí)間和水平（所有測(cè)量時(shí)間點(diǎn)的最大血漿濃度）。
[0107]統(tǒng)計(jì):
[0108] 使用GraphPad InStat軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。因?yàn)閿?shù)據(jù)不是正常分布，所以使用任意分 布Kruskal-Wallis檢驗(yàn)（成對(duì)樣品，反復(fù)測(cè)量）以post-hoc檢驗(yàn)測(cè)試差異。P值〈0.05在 統(tǒng)計(jì)學(xué)上被認(rèn)為具有顯著性。
[0109] 表1 :毎IOOml膳食的組成

【權(quán)利要求】
1. 用于0至24月齡嬰兒的組合物，其包含5到16能量％的蛋白質(zhì)；35到60能量％的 油脂，其中至少一種油脂源選自植物油脂、海洋生物油脂和微生物油脂；和25到75能量％ 的碳水化合物，其特征在于：所述組合物包含一種或多種蛋白酶抑制劑，其選自胰蛋白酶抑 制劑、胰凝乳蛋白酶抑制劑和彈性蛋白酶抑制劑，并且其中每克組合物干重的所述蛋白酶 抑制劑活性為1. lmg人類血清Ql抗胰蛋白酶和0. 18mg人類血清抗胰凝乳蛋白酶的活 性的40 %到1000%。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，所述組合物至少包含植物油脂。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述蛋白酶抑制劑是從選自馬鈴薯、豆科種子、 非人乳、禽蛋白和微生物培養(yǎng)物的來源獲得。
4. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的組合物，其中所述蛋白酶抑制劑是選自：來 自人類血漿的a f抗胰蛋白酶或a i蛋白酶抑制劑、來自人類血漿的a f抗胰凝乳蛋白 酶、來自初乳胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶抑制劑的牛Kunitz胰蛋白酶抑制劑、來自大豆的 Bowman-Birk抑制劑、來自雞蛋白的11-0型胰蛋白酶抑制劑或卵抑制劑、來自雙歧桿菌 (Bifidobacteria)的絲氨酸蛋白酶抑制劑（serpin)、馬鈴薯抑制劑I、馬鈴薯抑制劑II和葡 糖酸鋅。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述蛋白酶抑制劑是每克所述組合物的干重中 存在35 y g到14mg。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述蛋白酶抑制劑是每克所述組合物的干重中 存在0. 75到300個(gè)蛋白酶抑制劑單位，其中一個(gè)蛋白酶抑制劑單位是抑制一個(gè)單位的總活 性的活性，所述總活性是胰蛋白酶活性、胰凝乳蛋白酶活性和彈性蛋白酶活性的總活性。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中至少50重量％的可消化碳水化合物為乳糖。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物還包含以所述組合物的干重計(jì)1-10 重量％的選自以下的不可消化的可發(fā)酵碳水化合物：反式低聚半乳糖、菊糖、低聚果糖、低 聚半乳糖醛酸、部分水解的瓜爾膠和不可消化的葡聚糖。
9. 制備用于權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的0至24月齡嬰兒的嬰兒營養(yǎng)品的方法，包括 將一種或多種選自胰蛋白酶抑制劑、胰凝乳蛋白酶抑制劑和彈性蛋白酶抑制劑的蛋白酶抑 制劑與蛋白質(zhì)、碳水化合物和植物油脂混合，其量使得所述嬰兒營養(yǎng)品包含5到16能量％ 的蛋白質(zhì)、35到60能量％的油脂和25到75能量％的碳水化合物。
10. 權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的組合物在制備用于治療和/或預(yù)防兒童肥胖癥的方 法的制劑中的用途，所述用途包括對(duì)嬰兒經(jīng)口給予所述制劑。
11. 權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的組合物在制備用于對(duì)嬰兒提供營養(yǎng)的組合物中的用 途。
12. 權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的組合物的用途，其用于制備用于在患有兒童肥胖癥 的個(gè)體中治療和/或預(yù)防糖尿病、心血管疾病、高血壓、哮喘、睡眠呼吸暫停、矯形術(shù)病癥和 /或關(guān)節(jié)炎的方法中的營養(yǎng)組合物，所述用途包含向嬰兒經(jīng)口給予所述營養(yǎng)組合物。
【文檔編號(hào)】A61P11/06GK104366188SQ201410637567
【公開日】2015年2月25日 申請(qǐng)日期:2004年11月26日 優(yōu)先權(quán)日:2004年11月26日
【發(fā)明者】卡瑞恩·瑪麗亞·約瑟夫·范拉爾, 貝納迪納·瓊哈納·瑪提娜·德爾辛, 克里斯托夫·比爾曼, 瑞雷·約翰·拉格斯 申請(qǐng)人:荷蘭紐迪希亞公司