金屬硫蛋白復(fù)合制劑作為制備穴位介入治療腦中風(fēng)后遺癥藥物的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種金屬硫蛋白復(fù)合制劑作為制備穴位介入治療腦中風(fēng)后遺癥藥物的應(yīng)用。所述金屬硫蛋白復(fù)合制劑為純度大于95％的凍干粉兔肝金屬硫蛋白，其重量比例為MT-Ⅰ 50％，MT-Ⅱ 50％。本發(fā)明在治療腦中風(fēng)后遺癥過程中，對(duì)整體器官組織的代謝改善及腦損傷后修復(fù)非常顯著，加快了對(duì)腦內(nèi)環(huán)境的代謝和凈化，加速修復(fù)受損的腦神經(jīng)細(xì)胞，恢復(fù)腦神經(jīng)細(xì)胞的正常分化，使由其控制的運(yùn)動(dòng)、語言神經(jīng)系統(tǒng)體征得到改善，從根本上改善腦中風(fēng)后遺癥的語言不利，肢體功能障礙等癥狀，并且有效防止病癥復(fù)發(fā)。患者康復(fù)時(shí)間短，臨床治愈高，值得推廣。
【專利說明】金屬硫蛋白復(fù)合制劑作為制備穴位介入治療腦中風(fēng)后遺癥 藥物的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于金屬硫蛋白醫(yī)藥用途領(lǐng)域，具體地說是一種金屬硫蛋白（MT)復(fù)合制 劑作為制備穴位介入治療腦中風(fēng)后遺癥藥物的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 目前在治療腦中風(fēng)后遺癥方面，西醫(yī)采用口服或注射藥物以抗血小板聚集類，鈣 離子拮抗劑：卡托普利阿斯匹林，氯吡格雷，尼莫地平，甘露醇，腦活素為主，是通過擴(kuò)張血 管，抗凝血，改善腦組織供血。減輕腦中風(fēng)后遺癥癥狀、降低高復(fù)發(fā)率的有效方法，被動(dòng)恢復(fù) 鍛煉的同時(shí)，通過可靠的藥物治療，對(duì)腦中風(fēng)誘因動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成、血液粘度高等基 礎(chǔ)病變進(jìn)行有效治療，防止動(dòng)脈硬化血栓再次形成；改善腦組織供血供氧量，為腦組織創(chuàng)造 一個(gè)良好的內(nèi)環(huán)境，恢復(fù)腦神經(jīng)系統(tǒng)，使由其控制的運(yùn)動(dòng)、語言神經(jīng)系統(tǒng)，肢體功能障礙等 體征得到改善，并且有效防止病癥復(fù)發(fā)進(jìn)展。
[0003] 多數(shù)西藥，包括阿司匹林都有不同程度的耐藥性，而絕大多數(shù)西藥的副作用明顯， 對(duì)胃腸、肝腎造成不同程度的損傷。所以在腦中風(fēng)急性發(fā)作期多以西藥治療為主，但不適合 在恢復(fù)期和預(yù)防期長期服用。
[0004] 中醫(yī)采用中藥為主，結(jié)合針刺、艾灸、電針、拔罐、刺絡(luò)放血、藥物穴位注射為輔、中 藥方劑用活血化瘀、芳香開竅療法；中藥治療腦中風(fēng)疾病，具有無耐藥性、藥效持久、安全適 合長期服用的優(yōu)勢(shì)，但缺點(diǎn)是質(zhì)量不穩(wěn)定，服用劑量大。
[0005] 目前傳統(tǒng)療法治療腦中風(fēng)后遺癥不論中藥或西藥，都是擴(kuò)張血管?？鼓?，活血化 瘀、芳香開竅進(jìn)行康復(fù)治療，康復(fù)時(shí)間長。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 所要解決的技術(shù)問題：本發(fā)明目的是提供一種金屬硫蛋白（MT)復(fù)合制劑的新用 途，即在作為制備穴位介入治療腦中風(fēng)后遺癥藥物的應(yīng)用。
[0007] 技術(shù)方案：一種金屬硫蛋白（MT)復(fù)合制劑作為制備穴位介入治療腦中風(fēng)后遺癥 藥物的應(yīng)用。所述金屬硫蛋白制劑重量比例為金屬硫蛋白MT- I 50%，金屬硫蛋白MT-II 50%，純度大于95 %的凍干粉兔肝金屬硫蛋白。
[0008] 本發(fā)明作用機(jī)理如下：
[0009] -、本發(fā)明采用金屬硫蛋白復(fù)合制劑（金屬硫蛋白MT- I與金屬硫蛋白MT- II,以 下簡稱為：MT- I、MT- II)介入人體穴位內(nèi)能直接吸收并發(fā)揮其生理作，在治療腦中風(fēng)后遺 癥中，是通過清除體內(nèi)及病灶垃圾（清除自由基，消除腦內(nèi)因血管破裂出血后未吸收的殘 余物及血管栓塞物，通過降低顱內(nèi)壓，修復(fù)受損神經(jīng)細(xì)胞，激活處于休眠狀態(tài)的神經(jīng)細(xì)胞， 實(shí)現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞的正常分化，并清除已經(jīng)受損殘和死亡的神經(jīng)細(xì)胞。修復(fù)損傷的DNA，提升體 液PH值，恢復(fù)腦細(xì)胞正常功能），為腦細(xì)胞提供良好的潔凈生理環(huán)境，分化年輕細(xì)胞，使腦 組織得于修復(fù)活化，恢復(fù)腦神經(jīng)系統(tǒng)，使由其控制的運(yùn)動(dòng)、語言神經(jīng)系統(tǒng)體征得到改善。從 根本上改善腦中風(fēng)后遺癥的語言不利，肢體功能障礙等癥狀，并且有效防止病癥復(fù)發(fā)及進(jìn) 展。金屬硫蛋白（MT)參與體內(nèi)微量金屬元素的運(yùn)輸、儲(chǔ)存和代謝，使人體內(nèi)金屬元素的重 新分配，對(duì)體內(nèi)重金屬元素鉛，汞，鎘，銅等有強(qiáng)力清除力，對(duì)治療腦中風(fēng)后遺癥神經(jīng)軸突的 修復(fù)再生起著重要的作用，使腦內(nèi)及整體代謝處于動(dòng)態(tài)平衡來實(shí)現(xiàn)的。
[0010] 細(xì)胞是組成人體最基本的單位，一切生命活動(dòng)都在細(xì)胞之間完成，能量的供給最 終是為細(xì)胞服務(wù)；只有健康的細(xì)胞；人體才能發(fā)揮正常的生理功能。人體在生命活動(dòng)過程 中；不斷地進(jìn)行新陳代謝，在代謝過程中不斷產(chǎn)生代謝產(chǎn)物（垃圾）。代謝產(chǎn)物存在于細(xì)胞 間質(zhì)之間，如得不到及時(shí)的清除則成為內(nèi)毒素不斷攻擊健康細(xì)胞。致使細(xì)胞脂質(zhì)過氧化而 成病態(tài)，加速細(xì)胞鈣內(nèi)流，直接影響血管平滑肌細(xì)胞的正常彈性功能，使血管鈣化變性。值 得指出的是；體內(nèi)積蓄過多代謝產(chǎn)物及過量重金屬元素是導(dǎo)致體液PH值降低的因素，也是 影響血管平滑肌細(xì)胞的正常彈性功能和血液稠度增大而成血栓的原因。
[0011] 金屬硫蛋白（MT)從上世紀(jì)50年代發(fā)現(xiàn)至今，越來越多的科學(xué)家被奇特的金屬硫 蛋白吸引，對(duì)金屬硫蛋白的結(jié)構(gòu)，性質(zhì)，生理功能及其在生物，醫(yī)學(xué)，環(huán)境等方面的應(yīng)用進(jìn)行 了廣泛的研究，目前金屬硫蛋白（MT)在世界上召開過五次國際研討會(huì)議。
[0012] 發(fā)明人從事臨床醫(yī)學(xué)三十余年，對(duì)金屬硫蛋白（MT)的臨床應(yīng)用已有十余年，自 2003年起把金屬硫蛋白（MT)作為強(qiáng)抗氧化劑（自由基強(qiáng)力清除劑）和重金屬解毒劑及促 進(jìn)細(xì)胞生長劑，應(yīng)用于治療腦中風(fēng)后遺癥至今，收到非常理想的治療效果。清除體內(nèi)自由基 (清除腦內(nèi)垃圾，促進(jìn)細(xì)胞生長分化，恢復(fù)腦細(xì)胞功能，從而改善功能障礙等癥狀），療效已 超過傳統(tǒng)治療標(biāo)淮，金屬硫蛋（MT)無毒，無不良反應(yīng)，金屬硫蛋（MT)穴位介入比任何中西 藥制劑的穴位介入都安全。因此，為盡快解除廣大患者的疾苦，得于臨床普及應(yīng)用。
[0013] 金屬硫蛋白（Metallothionein)，簡稱MT是一類低分子量、富含半胱氨酸的金屬 結(jié)合蛋白。1957年Margoshes. M和Vallee. B.L[1]首次從馬腎中分離出該物質(zhì)，當(dāng)時(shí)并未 引起重視，直到80年代之后，逐步發(fā)現(xiàn)其具有多種重要的生物學(xué)功能，才引起科學(xué)家們的 重視?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)MT同時(shí)存在于所有的生物體中，包括哺乳動(dòng)物、各種低等動(dòng)物、植物和微生 物中，從廣義上講，金屬硫蛋白和其類似物可分為三大類：第一類即人，哺乳動(dòng)物的具有全 部金屬硫蛋白結(jié)構(gòu)和特性的。第二類存在于較低等動(dòng)、植物和微生物中的類似金屬硫蛋白。 第三種廣泛地存在于低等植物中的根部，實(shí)為谷胱甘肽類聚合物。第一類也就是真正的金 屬硫蛋白的生物功能的效果最強(qiáng)，尤其是人，其次是各種哺乳動(dòng)物。目前市場(chǎng)上銷售的多為 兔肝金屬硫蛋白。當(dāng)然從豬、牛、羊等哺乳動(dòng)物肝臟中也可制得兔肝類似MT，但由于其中對(duì) 兔肝MT研究得最深，且易獲得，所以還是使用兔肝MT比較安全可靠。
[0014] 兔肝MT與其它哺乳動(dòng)物MT -樣，是由68個(gè)氨基酸構(gòu)成的一個(gè)單肽鏈蛋白質(zhì)分 子，分子量約為6500,分子中富含7個(gè)二價(jià)金屬，主要為鋅，其次為銅，鈷等，在有毒環(huán)境下 也會(huì)含有毒重金屬如汞、鎘、鉛等。它也能與一價(jià)金屬如一價(jià)銅、金、銀結(jié)合。在正常體內(nèi)主 要為鋅，少量的銅，鈷等，其分子最大特點(diǎn)是富含半胱氨酸，即占全部氨基酸中約30% (即 20個(gè)左右），最有意思的是它們?cè)诜肿又卸际且越饘僖粠€基簇形式存在，使整個(gè)分子結(jié)構(gòu) 十分緊密和牢固，穩(wěn)定。在金屬存在下，它可以有效地拮抗高溫和蛋白酶對(duì)其的分解。但在 酸性條件下極不穩(wěn)定，在PH4. 0以下，就易脫掉金屬，暴露自由巰基而使整個(gè)分子松弛（變 性態(tài)），此時(shí)易受蛋白酶的攻擊而被降解，導(dǎo)致生物活性的喪失。所以MT不能口服，否則易 被胃液所破壞導(dǎo)致失效，因此，制成腸溶衣膠囊不失為一種有效的方法，但它一進(jìn)入腸道就 不易再被蛋白酶所破壞，人體對(duì)MT吸收最有效的途徑是舌下或皮下粘膜。
[0015] 金屬硫蛋白是一種誘導(dǎo)蛋白，在體內(nèi)主要由肝臟合成，通常情況下含量甚微，但當(dāng) 受環(huán)境刺激下，諸如鋅和重金屬，烷基化試劑，某些細(xì)胞因子（如干擾素，白介素…）和細(xì) 菌，病毒的侵入，也可因在對(duì)機(jī)體嚴(yán)重不利的情況下（諸如極度寒冷，高溫，緊張，危急，饑 餓等）會(huì)加速其體內(nèi)的生物合成，所以這也可被看作是機(jī)體的一種自衛(wèi)手段。
[0016] 二、金屬硫蛋白（MT)具有多種生物學(xué)作用。
[0017] (1)參與體內(nèi)微量金屬元素的運(yùn)輸、儲(chǔ)存和代謝等。研究表明體內(nèi)很多參與新陳 代謝的酶類，包括參與體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸生物合成的多種酶，參與體內(nèi)能量合成的某些酶， 參與體內(nèi)解毒作用的酶，以及參與體內(nèi)蛋白質(zhì)分子折疊（保持蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象與生物功 能的蛋白質(zhì)分子），以及參與體內(nèi)金屬代謝的蛋白質(zhì)、酶類，都需要有某種一定量的金屬參 與，否則就不會(huì)有生物活性和功能。類似老年人與兒童缺鋅、缺鐵等等都會(huì)引起某些疾病的 發(fā)生和影響健康。但如單純補(bǔ)鋅補(bǔ)微量元素，體內(nèi)多數(shù)未被吸收而被排出，如在肝臟內(nèi)富有 MT，它就可從食物中吸收和固定金屬元素，貯藏下來，一旦機(jī)體需要，它就可以將其運(yùn)輸和 緩慢釋放，起到"銀行""倉庫"的作用。尤其是老年人、幼兒的補(bǔ)鋅。
[0018] (2)參與體內(nèi)重金屬解毒作用。目前由于環(huán)境的污染，尤其是土壤與水域中大量重 金屬（如鎘，汞，鉛，鉻等）的存在，通過食物鏈（糧食，蔬菜，水果，空氣，飲用水…）進(jìn)入體 內(nèi)，嚴(yán)重危害人體健康，尤其是鉛對(duì)兒童神經(jīng)系統(tǒng)的破壞最為嚴(yán)重。由于MT結(jié)構(gòu)的特殊性， 它能有效地將細(xì)胞內(nèi)游離的有毒重金屬結(jié)合（高度專一性和親和性）而排出體外，起到解 毒作用。
[0019] (3)抗氧化，抗衰老作用及護(hù)肝作用。通過多年分子、細(xì)胞和整體動(dòng)物水平研究發(fā) 現(xiàn)，它是自然界抗氧化、抗衰老的最有效的生物活性物質(zhì)之一。在細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)它具有大幅度 地提高抗氧化活性物質(zhì)谷胱甘肽、谷胱甘肽過氧化物酶，SOD等的含量，反之，卻能降低氧化 作用產(chǎn)物如肝臟脂質(zhì)過氧化物，心肌脂褐素的含量。通過抗小鼠D-半乳糖擬老化（衰老） 效應(yīng)模型試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)MT可明顯改善小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，降低MDA(丙二醛，一種致癌促 衰老化學(xué)物質(zhì)）的含量及提高SOD活性，說明MT對(duì)D-半乳糖的致衰老效應(yīng)有很好的對(duì)抗 作用。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)MT對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)果蠅壽命縮短具有保護(hù)作用（延緩壽命1/10)，其它 諸如抗靜態(tài)缺氧效應(yīng)，對(duì)小鼠尾靜脈栓子LD50的影響，對(duì)大鼠腦多發(fā)性栓塞致死效應(yīng)的影 響以及對(duì)小鼠腦栓塞記憶功能衰退的影響等都顯示出良好的抗衰老作用。
[0020] (4)參與抗輻射，保護(hù)機(jī)體，尤其是細(xì)胞核，DNA的輻射受損進(jìn)行修復(fù)。實(shí)驗(yàn)證明， 它不單可修復(fù)受損細(xì)胞DNA，而且還可預(yù)防，效果顯著，它能提高因輻射而引起的淋巴細(xì)胞、 白細(xì)胞的下降，且呈量效關(guān)系，高劑量的MT可以抵御高劑量的輻射，同樣動(dòng)物因輻射的死 亡率也大大下降，提高了存活率和存活時(shí)間。因而明顯地具有提高機(jī)體抵抗放射性輻射的 能力，由此可見可被用于預(yù)防輻射損傷的諸行業(yè)人員的勞保和預(yù)防，也可用于腫瘤病人放 療中的保護(hù)。
[0021] (5)清除自由基，尤其是羥基自由基。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，MT具有很強(qiáng)的清除自由基能 力，值得注意的是它尤其對(duì)危害人類健康最甚的羥基自由基，遠(yuǎn)遠(yuǎn)強(qiáng)于S0D，是目前最強(qiáng)的 天然產(chǎn)物。這與上述MT具有強(qiáng)抗氧化作用是一致的，可用于抗腫瘤、糖尿病、心血管疾病及 神經(jīng)退行性病變（如老年性癡呆癥等）的改善和緩解。有關(guān)MT對(duì)這些老年性疾病的關(guān)系， 尚在進(jìn)行研究，將有可能成為這方面的醫(yī)藥產(chǎn)品（目前尚無醫(yī)藥產(chǎn)品）。
[0022] (6)促進(jìn)細(xì)胞生長，機(jī)體發(fā)育和能量代謝等。這很顯然與MT本身的結(jié)構(gòu)與功能有 關(guān)。由于它是體內(nèi)多種參與代謝的蛋白質(zhì)、酶的活性必須成份一微量金屬元素的供應(yīng)者和 運(yùn)輸者，由它才能調(diào)節(jié)體內(nèi)物質(zhì)的新陳代謝，包括能量代謝與細(xì)胞的生長、分化。另外又據(jù) 近來利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的研究，發(fā)現(xiàn)它還能抑制細(xì)胞凋亡和促進(jìn)蛋白質(zhì)正確折疊（使具 有正常的生物學(xué)功能）和抗氧化作用，即抗衰老作用。因而可以判斷MT將可發(fā)展成為營養(yǎng) 保健，抗衰老和治療藥物。
[0023]目前在國內(nèi)外，有關(guān)MT的研究主要已涉及醫(yī)學(xué)和環(huán)保，尤其是老年性疾病。但是， 金屬硫蛋白（MT)在用于治療腦中風(fēng)后遺癥尚無這方面的應(yīng)用報(bào)道。
[0024] 三、技術(shù)來源和先進(jìn)性。
[0025] 本技術(shù)來自北京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院以茹炳根教授領(lǐng)導(dǎo)的蛋白質(zhì)課題組，其MT研 究處于國際領(lǐng)先地位，先后獲得七五、八五、九五國家科委的國家攻關(guān)項(xiàng)目，七五、八五、 九五的[863]項(xiàng)目，和國家自然科學(xué)基金多項(xiàng)。1995年5月獲國家教委科技進(jìn)步一等獎(jiǎng)， 1999年5月通過了國家教育部組織的產(chǎn)業(yè)化技術(shù)鑒定，2001年和2004年又分別獲中國高 ?？茖W(xué)技術(shù)二等獎(jiǎng)（2個(gè)）。其中兔肝金屬硫蛋白產(chǎn)品已為國家九五攻關(guān)產(chǎn)品。受國際組織 委托，由北京大學(xué)茹炳根教授主持在2005年10月在北京勝利召開了第五屆金屬硫蛋白國 際會(huì)議。
[0026] 四、金屬硫蛋白對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)疾病的作用。
[0027] 1、金屬硫蛋白（MT)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá)及生物學(xué)功能。
[0028] 金屬硫蛋白（metallothioneins, MTs)是一種具有廣泛生物學(xué)活性的蛋白質(zhì)。MTs 作為一種多功能蛋白，在抗氧化、抗凋亡、清除自由基、維持必需金屬穩(wěn)態(tài)、重金屬解毒等 方面具有重要作用。（以下稱MTs表示MT家族）。
[0029]現(xiàn)已知的MT家族包括MT-I，MT-II，MT-III，MT-IV四種亞型，其中MT-I和 MT-II存在于各種組織中，MT-III的表達(dá)局限于腦組織中，MT-IV僅在復(fù)層磷狀上皮中表達(dá)。
[0030] 腦組織表達(dá)的MTs中，MT- I和MT- II是最具代表性的亞型，占腦中金屬硫蛋白總 含量的2/3;而MT-III僅存在于腦中。使用不同抗體進(jìn)行免疫組織化學(xué)研究腦組織中MT- I 和MT- II的表達(dá)，結(jié)果都一致地顯示MT- I和MT- II主要存在于腦和脊髓中，它的主要表 達(dá)細(xì)胞是星形膠質(zhì)細(xì)胞，并在腦室脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞、軟腦（脊）膜細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞中表 達(dá)，而神經(jīng)元很少表達(dá)MT- I / II，但也有少數(shù)報(bào)告顯示神經(jīng)元中有MT- I / II的陽性表 達(dá)。原位雜交結(jié)果與免疫細(xì)胞化學(xué)和細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果一致，顯示MT- I和MT-II mRNAs主要 存在于星形膠質(zhì)細(xì)胞中，但在個(gè)別神經(jīng)元中有低水平的mRNAs，特別是海馬CA3區(qū)的神經(jīng) 元。與MT- I / II不同，MT-III存在于哺乳動(dòng)物腦的神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞中，而且MT-IIImRNA 和MT-III蛋白研究結(jié)果不一致，所以MT-III在細(xì)胞內(nèi)的定位尚存在爭議，但是目前一致認(rèn) 為MT- I，MT- II和MT-III都主要在星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，在神經(jīng)元中有低水平的表達(dá)（且 MT-III >MT- I和MT- II )。關(guān)于區(qū)域分布，星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的MT-III和MT- I / II多數(shù)在 相同中樞神經(jīng)系統(tǒng)區(qū)域中表達(dá)，包括皮層、腦干和脊髓。而神經(jīng)元內(nèi)MT-III在海馬齒狀回 顆粒細(xì)胞中表達(dá)較多，特別是在突觸小泡中儲(chǔ)存鋅的神經(jīng)元。
[0031] MTs在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的功能是調(diào)節(jié)必需金屬的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)和代謝，調(diào)節(jié)非必需 金屬的貯存和解毒，以及抗凋亡、清除自由基和調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)氧化還原平衡。鋅、銅、鎘等金 屬對(duì)MTs的表達(dá)調(diào)控具有重要的作用，均能誘導(dǎo)MTs的產(chǎn)生。其中，鋅與MTs的相互作 用對(duì)正常生理功能的維持具有重要的調(diào)節(jié)作用。鋅缺乏可以影響生長、免疫活性以及腦功 能，但過量鋅也可以對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性，因此動(dòng)物體內(nèi)必須有一個(gè)精密的系統(tǒng)來維持鋅的穩(wěn) 態(tài)平衡。MTs參與鋅離子的貯存和轉(zhuǎn)運(yùn)，同時(shí)鋅又在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)MTs的合成，這種調(diào)節(jié) 是通過金屬反應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子 _1 (metal responsive transcrip tion factor-l，MTF_l)與MTs 基因啟動(dòng)子上的金屬反應(yīng)元件（metal respon-sive elements, MRE)的相互作用來實(shí)現(xiàn)的。 而且研究顯示，鋅的抗氧化作用是通過誘導(dǎo)MTs的合成而實(shí)現(xiàn)的，所以MTs作為一種抗氧 化蛋白在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷中的作用日益得到關(guān)注。目前研究表明腦損傷后MT- I /11的 神經(jīng)生物功能明顯不同于MT-III。MT- I /11在中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng)中具有神經(jīng)保護(hù)作用 和抑制遲發(fā)性損傷如氧化應(yīng)激和退化。而腦中MT- III具有神經(jīng)生長抑制、神經(jīng)保護(hù)及神經(jīng) 再生調(diào)控等生物學(xué)功能。MT家族在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷中具有重要的作用，研究中樞神經(jīng)系 統(tǒng)損傷中MT不同亞型表達(dá)的調(diào)控機(jī)制具有重要意義。
[0032] 2、金屬硫蛋白（MT)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷中的表達(dá)調(diào)控及其保護(hù)作用。
[0033] MT- I / II在損傷后的表達(dá)及其保護(hù)作用研究表明MT- I / II在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損 傷后的表達(dá)上調(diào)對(duì)腦組織具有保護(hù)作用。MT- I / II除了在神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病中表達(dá)上 調(diào)之外，在許多的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭幸渤霈F(xiàn)表達(dá)上調(diào)，如由海人藻酸、6-氨基 煙酰胺和NMDA等引發(fā)的化學(xué)性腦損傷，以及低溫、局部缺血等物理性損傷。這種表達(dá)升高 主要發(fā)生在損傷后最初幾小時(shí)至幾天內(nèi)損傷附近的星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞中。轉(zhuǎn)基 因小鼠的研究進(jìn)一步確證了 MT- I /11的這種表達(dá)上調(diào)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的保護(hù)作用。 MT- I / II基因敲除小鼠對(duì)海人藻酸誘導(dǎo)癲癇發(fā)作的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷更敏感，與對(duì)照組 相比驚厥的次數(shù)顯著增加，時(shí)間顯著增長。具體表現(xiàn)在給予海人藻酸3d后，MT2 I /11基 因敲除小鼠顯示出海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的減少，神經(jīng)元的損傷和凋亡都增強(qiáng)， 并出現(xiàn)明顯的氧化應(yīng)激，表現(xiàn)在核因子κ B、Cu, Zn-超氧化物歧化酶（Cu, Zn-SOD)和酪氨 酸蛋白硝基化水平的升高。同樣，MT- I /11表達(dá)缺失小鼠給予6-氨基煙酰胺3d后可引 起星形神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞浸潤減少，粒細(xì)胞2巨噬細(xì)胞集落刺激因子 (GM-CSF)和其受體表達(dá)的降低。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)低溫?fù)p傷模型中，MT- I / II基因敲除小 鼠腦組織的愈合能力明顯低于對(duì)照組，其神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)損傷，大多數(shù)細(xì)胞發(fā)生凋亡 (主要是神經(jīng)元），且明顯高于對(duì)照組，這間接表明MT具有抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞凋亡的 作用。在缺鋅飲食大鼠的低溫腦損傷中也觀察到相似的結(jié)果，同時(shí)伴隨著MT- I / II的表 達(dá)降低。在皮層局部缺血損傷中，MT- I過表達(dá)小鼠比同類野生型小鼠恢復(fù)能力要快。除 了這些損傷模型的研究外，最近一些研究顯示MT- I / II還能夠顯著影響其他細(xì)胞因子/ 生長因子和皮層低溫?fù)p傷后的血管發(fā)生。
[0034] 以上研究都表明MT- I / II的表達(dá)升高主要發(fā)生在損傷后的星形膠質(zhì)細(xì)胞以及 小膠質(zhì)細(xì)胞中，且對(duì)神經(jīng)損傷有保護(hù)作用。在其他轉(zhuǎn)基因模型小鼠的研究也得到相似 的結(jié)果，髓鞘遺傳性缺損小鼠的星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞中可觀察到MT- I /11的 強(qiáng)誘導(dǎo)效應(yīng)，這種突變鼠的遺傳性障礙導(dǎo)致嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理性改變，包括髓 質(zhì)減少、少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞死亡、星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞活動(dòng)增強(qiáng)。在具有臨床癥狀 的GFAP-L6, GFAP-TNF，GFAP-L3和GFAP-干擾素（IFN) - α等轉(zhuǎn)基因小鼠中也能觀察到 MT- I /11表達(dá)升高，而且在這些轉(zhuǎn)基因小鼠上都可觀察到神經(jīng)膠質(zhì)增生及神經(jīng)元的損傷。
[0035] 以上研究有力地支持了中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后MT- I / II的保護(hù)作用，其機(jī)制可能 與它的鋅和銅的結(jié)合能力及抗氧化能力有關(guān)。鋅是腦必需金屬，而過多的鋅具有神經(jīng)毒 性。MT- I / II基因敲除小鼠中鋅鰲合酶水平升高，這可能是由于這些小鼠的神經(jīng)退行性 變性增強(qiáng)。體外和體內(nèi)試驗(yàn)表明在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中MT- I / II有抗氧化功能。此外近期采 用組織培養(yǎng)方法研究發(fā)現(xiàn)在腦損傷中，MT- I /11的表達(dá)上調(diào)是通過星形膠質(zhì)細(xì)胞調(diào)節(jié)的， 這種調(diào)節(jié)是通過一種尚未確定的神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞之間的相互作用來進(jìn)行的。然而， 神經(jīng)元損傷后介導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)MT- I / II的信號(hào)通路尚不明確。神經(jīng)元和星形膠質(zhì) 細(xì)胞共培養(yǎng)的環(huán)境中加入谷氨酸可以引起MT- I / II的表達(dá)增強(qiáng)，而谷氨酸的受體阻斷劑 則明顯減少這種MT- I / II的表達(dá)。由此，他們認(rèn)為谷氨酸是一種重要的介導(dǎo)神經(jīng)元和星 形膠質(zhì)細(xì)胞損傷后聯(lián)系的信號(hào)因子之一，同時(shí)其他一些信號(hào)因子如細(xì)胞因子、鋅以及自由 基可能與谷氨酸共同調(diào)控MT- I / II的表達(dá)。
[0036] 3、金屬硫蛋白（MT)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后免疫應(yīng)答中的作用。
[0037] 近期研究發(fā)現(xiàn)MTs能夠直接減輕伴隨著中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷發(fā)生的炎癥應(yīng)答，并 增強(qiáng)修復(fù)能力。中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后的過度炎癥反應(yīng)是引起再次損傷及影響神經(jīng)再生的 重要因素。研究表明介導(dǎo)損傷后炎癥反應(yīng)的大多數(shù)急性細(xì)胞因子如IL-1，IL_6, TNF-α和 interferon-γ都能夠誘導(dǎo)MT表達(dá)。此外，還觀察到MT和免疫細(xì)胞的直接作用，其中包 括淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。這種相互作用可能改變細(xì)胞與細(xì)胞識(shí)別的免疫過程。
[0038] Hidalgo等廣泛研究了中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后MT基因敲除小鼠的炎癥應(yīng)答的變化， 發(fā)現(xiàn)一些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性損傷模型中，給予MT- I / II可以調(diào)節(jié)損傷后的炎癥應(yīng)答。腦皮層損 傷后，MT- I / II能夠明顯減少促炎癥反應(yīng)細(xì)胞因子的表達(dá)，以及降低反應(yīng)性神經(jīng)膠質(zhì)增 生。實(shí)驗(yàn)性自身免疫腦脊髓炎小鼠給予MT- II處理后，腦中促炎癥反應(yīng)細(xì)胞因子（如IL-6 和TNF-α)表達(dá)降低，神經(jīng)元的凋亡也明顯減少。還有研究顯示MTs能夠顯著降低T淋巴 細(xì)胞（CTL)的誘導(dǎo)作用并抑制同源靶細(xì)胞的溶解活性。由于CTLs在保護(hù)性免疫應(yīng)答中起 到重要作用，所以MT對(duì)免疫系統(tǒng)有重要的保護(hù)作用。體內(nèi)試驗(yàn)中，MT也能夠調(diào)節(jié)T細(xì)胞 依賴性抗原引起的體外體液免疫應(yīng)答，這與注射外源性MT后觀察到的免疫應(yīng)答降低和注 射單克隆MT抗體后卵白蛋白免疫應(yīng)答性增高是一致的。同樣，MT- I /11基因敲除小鼠呈 現(xiàn)出對(duì)T細(xì)胞依賴性抗原引起的體液免疫反應(yīng)升高。以上研究表明MTs參與了中樞神經(jīng)系 統(tǒng)損傷后的免疫應(yīng)答，而且可能通過減少損傷后的免疫應(yīng)答而對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)起保護(hù)作用。
[0039] 4、金屬硫蛋白（MT)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后神經(jīng)元的修復(fù)作用。
[0040] 研究表明MT- I / II對(duì)損傷后的神經(jīng)元有營養(yǎng)作用，能夠加速損傷神經(jīng)元的修 復(fù)。MT- I / II的這種作用可能是通過兩種不同的機(jī)制：一是通過減少損傷引起的炎癥應(yīng) 答；二是通過直接作用于神經(jīng)元而加速損傷神經(jīng)元的修復(fù)。MT- I / II對(duì)于損傷后的修復(fù) 過程是必不可少的。例如星形細(xì)胞的激活和遷移，以及減少免疫應(yīng)答。還有一些明顯的證 據(jù)表明MT- I / II對(duì)神經(jīng)元的死亡有保護(hù)作用，但不確定這種保護(hù)效應(yīng)是由于減少免疫應(yīng) 答還是直接作用于神經(jīng)元，或兩者皆有。通過采用缺少免疫系統(tǒng)的神經(jīng)元損傷組織培養(yǎng)模 型進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)MT- I / II可通過直接作用于神經(jīng)元或增加神經(jīng)元存活率和損傷部位軸 突的后續(xù)再生而加快損傷愈合。有研究表明MT- I / II能夠加速軸突橫斷面處突起反應(yīng)性 增生，而MT-III能夠抑制這種再生反應(yīng)應(yīng)答。此外在成年大鼠大腦皮層局部損傷后給予外 源性MT- I / II能夠明顯加速神經(jīng)元的修復(fù)。
[0041] 金屬硫蛋白MT- I / II，是生物界最理想的極強(qiáng)的抗氧化劑和自由基清除劑，對(duì)人 體全身各組織器官的代謝性及損傷性疾病有顯著療效。是目前無任何藥物可比的對(duì)腦神經(jīng) 細(xì)胞特效修復(fù)和保護(hù)的物質(zhì)，也是對(duì)腦中風(fēng)后遺癥治療的首選的理想制劑。
[0042] 金屬硫蛋白（MT)在治療腦中風(fēng)后遺癥過程中，雖局部穴位介入，但對(duì)整體器官 組織的代謝改善及損傷后修復(fù)非常顯著。金屬硫蛋白（MT)使用一個(gè)細(xì)胞周（90天使用 MT150mg至300mg)后，體內(nèi)環(huán)境空前潔凈，既治愈了疾病，患者又顯得明顯的年輕化。金屬 硫蛋白（MT)是自然界抗氧化、清除自由基的最有效的生物活性物質(zhì)，是目前最理想的細(xì)胞 保護(hù)劑之一。

【具體實(shí)施方式】
[0043] 腦中風(fēng)后遺癥穴位介入治療：
[0044] 金屬硫蛋白（MT)為通過特殊的誘導(dǎo)技術(shù)處理后的兔肝為原料，經(jīng)分離、純化，制 得的凍干粉的兔肝金屬硫蛋白。
[0045] 金屬硫蛋白復(fù)合制劑重量比例為MT- I 50%，MT- II 50%，純度大于95%的凍干 粉兔肝金屬硫蛋白。
[0046] 兔肝金屬硫蛋白（MT)復(fù)合制劑溶劑：滅菌注射用水。
[0047] 兔肝金屬硫蛋白（MT)復(fù)合制劑凍干粉與溶劑稀釋配比：5-10mg/ml。（每毫升溶 液中含5-10毫克金屬硫蛋白）。
[0048] 取穴方法：主穴：啞門透風(fēng)府，輔穴，心俞，關(guān)元，內(nèi)關(guān)，絕骨，平衡功能障礙加針刺 長強(qiáng)。
[0049] 用法：
[0050] A、用2 - 5ml -次性注射器吸取金屬硫蛋白（MT)稀釋液。
[0051] B、距離穴位0· 5Cm斜刺深至0· 4寸行針至氣至，退至皮下介入0· 25-10mg，（即金 屬硫蛋白（MT)復(fù)合制劑凍干粉稀釋后的溶液0.4-2ml)至覆蓋穴位。
[0052] 用量：
[0053] -個(gè)療程90天。分15次穴位介入：前5次，1次/3天；后10次，1次/7天，10-20mg/ 次。三個(gè)月一療程，一般一至三個(gè)療程即可治愈。
[0054] 發(fā)明人把金屬硫蛋白（MT)復(fù)合制劑應(yīng)用于對(duì)照治療腦中風(fēng)后遺癥73例，隨訪到 62例，治療效果如下。
[0055] 診斷與病例選擇標(biāo)準(zhǔn)，臨床資料：
[0056] 1、一般資料：本組62例患者，為2003年03月?2012年04月治療，病例入選標(biāo) 準(zhǔn)：腦中風(fēng)后遺癥診斷標(biāo)準(zhǔn)。男36例，女26例；年齡38?81歲，平均年齡54歲；
[0057] 腦出血24例，腦血栓18例，腦栓塞20例。
[0058] 病程在3個(gè)月之內(nèi)7例，3個(gè)月?半年21例，7個(gè)月?1年20例，1年以上14例。 均排除有嚴(yán)重的心、腎疾病，無感染、手術(shù)、妊娠等應(yīng)激情況。
[0059] 2、治療方法：用隨機(jī)數(shù)字表將患者隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組，每組各31例患者， 兩組均給予相同的基礎(chǔ)治療（復(fù)方丹參片，腦活素膠囊）口服，治療組在此基礎(chǔ)上用金屬硫 蛋白（MT)復(fù)合制劑穴位介入，對(duì)照組口服復(fù)方丹參片，腦活素膠囊，兩組年齡、性別、病程 等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 〇. 05)，可以進(jìn)行組間比較。
[0060] 其中，治療組31例，男性17例，女性14例；年齡38?78歲，平均51. 6歲；病 程03?8年，平均3. 5年；除偏癱外，合并口眼歪斜病者3例，合并言語不利者4例，合并 偏盲者3例，合并嘴歪眼斜者4例，合并上肢患側(cè)障礙重者4例，合并下肢患側(cè)障礙重者 5例。合并上下肢患側(cè)障礙重者8例。
[0061] 對(duì)照組31例，男性19例，女性12例。年齡40?81歲，平均52. 4歲；病程03? 10年，平均2. 4年；除偏癱外，合并口眼歪斜病者2例，合并言語不利者5例，合并偏盲者2 例，合并嘴歪眼斜者4例，合并上肢患側(cè)障礙重者5例，合并下肢患側(cè)障礙重者6例。合 并上下肢患側(cè)障礙重者7例
[0062] 3、臨床表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室檢查：
[0063] MRl或CT顯示：
[0064] (1)治療組左腦溢血5例，右腦溢血9例，左腦血栓8例，右腦血栓9例，
[0065] (2)對(duì)照組左腦溢血6例，右腦溢血8例，左腦血栓11例，右腦血栓6例
[0066]血壓：
[0067] (1)治療組；收治時(shí)；130 ?139/80 ?89mmHg 7 例，140 ?149/90 ?95mmHg，13 例，小于 130/80mmHg 11 例。
[0068] (2)對(duì)照組；收治時(shí)；130 ?139/80 ?89mmHg 11 例，140 ?149/90 ?95mmHg，10 例，小于 130/80mmHg 10 例。
[0069] 治療實(shí)施：兩組均相同的基礎(chǔ)治療（復(fù)方丹參片，腦活素膠囊）口服，療程均為3 個(gè)月。
[0070] 治療組在上述基礎(chǔ)上加用金屬硫蛋白（MT)復(fù)合制劑穴位介入，取穴標(biāo)準(zhǔn)；按中醫(yī) 腦中風(fēng)后遺癥辨證診斷；主穴；啞門透風(fēng)府，輔穴，心俞，關(guān)元，內(nèi)關(guān)，絕骨，平衡功能障礙加 針刺長強(qiáng)；用量：一個(gè)療程90天。分15次穴位介入：前5次，1次/3d ;后10次，1次/7d， 10-20mg/次。復(fù)方丹參片，4片/次，腦活素膠囊，2粒/次，3次/d，餐后30min 口服，療程 為3個(gè)月。
[0071] 對(duì)照組；復(fù)方丹參片，4片/次，腦活素膠囊，2粒/次，3次M餐后30min 口服，療 程為3個(gè)月。
[0072] 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：建立FOXPRO數(shù)據(jù)庫，用SAS6. 12軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用 t檢驗(yàn)和X 2檢驗(yàn)。P〈0. 05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0073] 5、療效判定標(biāo)準(zhǔn)（1);臨床治愈：患側(cè)肢體有力，能徒步行走，生活可自理。（2);顯 效：患側(cè)肢體功能明顯改善，可扶杖行走，生活可基本自理。（3);好轉(zhuǎn)：患側(cè)肢體功能恢復(fù) 有進(jìn)步。（4);無效：治療前后癥狀無改善。治療總有效率=(臨床治愈例數(shù)+顯效例數(shù)+ 有效例數(shù)）/總例數(shù)X 100 %。
[0074] 6、臨床治療結(jié)果見下表。
[0075]治療1個(gè)療程治療組與對(duì)照組患者療效比較（例）
[0076]

【權(quán)利要求】
1. 一種金屬硫蛋白復(fù)合制劑作為制備穴位介入治療腦中風(fēng)后遺癥藥物的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的金屬硫蛋白復(fù)合制劑作為制備穴位介入治療腦中風(fēng)后遺癥 藥物的應(yīng)用，其特征在于：所述金屬硫蛋白復(fù)合制劑為純度大于95 %的凍干粉兔肝金屬硫 蛋白，其重量比例為金屬硫蛋白MT- I 50%，金屬硫蛋白MT- II 50%。
【文檔編號(hào)】A61K38/17GK104399060SQ201410597049
【公開日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2014年10月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月29日
【發(fā)明者】劉添如 申請(qǐng)人:劉添如