具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物及其制備方法和應(yīng)用。根據(jù)本發(fā)明一方面提供的具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物的制備方法，包括前處理、粗提、過濾、濃縮、萃取以及獲得提取物步驟。根據(jù)本發(fā)明另一方面提供的具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物，由所述制備方法所制得，且所述火麻仁提取物為石油醚部位提取物、乙酸乙酯部位提取物、正丁醇部位提取物或乙醇部位提取物。根據(jù)本發(fā)明又一方面提供的具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物在治療前列腺癌的藥物方面的應(yīng)用或者在制備輔助治療前列腺癌的功能性食品方面的應(yīng)用。本發(fā)明提供的所述火麻仁提取物具有明顯的抑制前列腺癌細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移的作用。
【專利說明】具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物及其制備方法和應(yīng) 用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥提取物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體而言，涉及一種具有治療前列腺癌作用的 火麻仁提取物及其制備方法和應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 前列腺癌（Prostate Cancer, PCa)是老年男性泌尿生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之 一，其發(fā)病率和死亡率在整個(gè)西方國家的男性惡性腫瘤中居第2位，僅次于肺癌。我國PCa 發(fā)病率最高的上海地區(qū)2008年的發(fā)病率己高達(dá)29. 02人/10萬人，位列男性泌尿生殖系統(tǒng) 腫瘤的第1位，所有男性腫瘤的第5位。隨著我國人民整體生活水平的提高和生活方式的 改變、男性平均壽命的延長以及醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)的提高，我國PCa發(fā)病率和檢出率已呈顯著 上升趨勢。因此，對前列腺癌的治療積及預(yù)防顯得尤為重要。近年來，傳統(tǒng)中醫(yī)藥作為PCa 手術(shù)及放化療的輔助治療手段，在提高生活質(zhì)量、延長生存期等方面顯示出了一定的效果。 并且越來越多的學(xué)者把目光投向中藥草研究方面，以其發(fā)現(xiàn)一種新型的治療PCa的藥物。
[0003] 火麻仁，為?？浦参锎舐榈母稍锍墒旆N子，全國各地均有栽培。中醫(yī)認(rèn)為火麻仁性 平、味甘，歸脾、胃、大腸經(jīng)。有潤腸通便之功，臨床上常用于血虛津虧，腸燥便秘之證。近年 來，不少國內(nèi)學(xué)者對火麻仁臨床藥理作用也做了報(bào)道，研究表明火麻仁還具有鎮(zhèn)痛抗炎、抗 衰老、改善記憶和降壓等作用，但迄今為止，尚未見有關(guān)火麻仁提取物治療前列腺癌的研究 報(bào)道和專利。
[0004] 因此，為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的上述不足，本發(fā)明提出了一種新的解決方案。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的上述問題，本發(fā)明一方面提供了具有治療前列腺癌作用的 火麻仁提取物，另一方面提供了上述具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物的制備方法和 應(yīng)用。根據(jù)本發(fā)明提供的具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物具有明顯的抑制前列腺癌 細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移的作用，其制備方法簡單、易操作，其應(yīng)用于治療前列腺癌的藥物和制備輔 助治療前列腺癌的功能性食品。
[0006] 本發(fā)明一方面提供了一種具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物的制備方法，包 括以下步驟：
[0007] (1)前處理：將火麻仁進(jìn)行千燥并粉碎成粗粉；
[0008] (2)粗提：體積濃度75%的乙醇溶液回流提取2_3次，每次1-3個(gè)小時(shí)；
[0009] (3)過濾；
[0010] (4)濃縮：將濾液進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至相對密度為1. 05-1. 35 ;
[0011] (5)獲得提取物：將濃縮液進(jìn)行溶劑回收后冷凍干燥。
[0012] 進(jìn)一步地，步驟（4)與步驟（5)之間還包括萃取步驟：用濃縮液3倍體積的有機(jī)溶 劑進(jìn)行萃取，將萃取液減壓濃縮。
[0013] 優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑為石油醚、乙酸乙酯或正丁醇。
[0014] 可選地，萃取步驟為用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇劑依次進(jìn)行萃取或者為用石油 醚、乙酸乙酯和正丁醇之中的兩種依次進(jìn)行萃取或者為用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇之中 的一種進(jìn)行萃取；優(yōu)選地，萃取步驟為用石油醚和乙酸乙酯依次進(jìn)行萃取。
[0015] 可選地，步驟（1)中火麻仁千燥粗粉的重量與步驟（2)中所述乙醇的體積比為 8:1-10:1〇
[0016] 本發(fā)明另一方面提供了一種具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物，該提取物由 所述制備方法所制得。
[0017] 進(jìn)一步地，所述火麻仁提取物為石油醚部位提取物、乙酸乙酯部位提取物、正丁醇 部位提取物或75%乙醇部位提取物。
[0018] 本發(fā)明又一方面提供了所述具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物在治療前列 腺癌的藥物方面的應(yīng)用或者在制備輔助治療前列腺癌的功能性食品方面的應(yīng)用，優(yōu)選地， 所述藥物為片劑、顆粒劑、散劑、丸劑、茶劑、煎膏劑、膠囊或者溶液劑。
[0019] 優(yōu)選地，所述丸劑為滴丸，所述膠囊為硬膠囊或軟膠囊，所述溶液劑為糖漿劑。
[0020] 本發(fā)明再一方面提供了一種組合物，包含所述火麻仁提取物以及藥學(xué)上可接受的 載體。
[0021] 根據(jù)本申請?zhí)峁┑木哂兄委熐傲邢侔┳饔玫幕鹇槿侍崛∥锛捌渲苽浞椒ê蛻?yīng)用， 能夠帶來以下有益效果：根據(jù)本發(fā)明提供的具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物因具有 明顯的抑制前列腺癌細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移的作用，能夠應(yīng)用于治療前列腺癌的藥物和制備輔助 治療前列腺癌的功能性食品，應(yīng)用于前列腺癌的治療或輔助治療，從而擴(kuò)大了火麻仁的藥 用范圍，提高了火麻仁的藥用價(jià)值，另外，具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物的制備方 法簡單易操作，為火麻仁提取物在治療前列腺癌的藥物和制備輔助治療前列腺癌的功能性 食品的應(yīng)用上奠定了基礎(chǔ)。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0022]圖1示出了本發(fā)明實(shí)施例提供的具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物的制備 方法的流程示意圖；
[0023] 圖2為火麻仁乙酸乙酯提取物對PC-3細(xì)胞株增殖抑制的影響示意圖.
[0024] 圖3為火麻仁乙酸乙酯提取物對PC-3_TXR細(xì)胞株增殖抑制的影^示章圖.
[0025] 圖4為火麻仁乙酸乙酯提取物對DU145細(xì)胞株增殖抑制的影響^章'
[0026]圖5為火麻仁乙酸乙酯提取物對DU145_TXR細(xì)胞株增殖抑制的影^示章圖.
[0027]圖6為火麻仁正丁醇提取物對PC-3細(xì)胞株增殖抑制的影響示意5圖.^思^ ; [0028]圖7為火麻仁正丁醇提取物對DU145細(xì)胞株增殖抑制的影響示U章圖.
[0029]圖8為火麻仁石油醚提取物對PC-3細(xì)胞株增殖抑制的影響示^^圖\ ;
[0030]圖9為火麻仁石油醚提取物對DU145細(xì)胞株增殖抑制的影響示^"圖'.
[0031] 圖10為火麻仁75%乙醇提取物對PC-3細(xì)胞株增殖抑制的影響圖.
[0032] 圖11為火麻仁75 %乙醇提取物對DU145細(xì)胞株增殖抑制的影響^章''
[0033]圖丨2為火麻仁乙酸乙酯提取物對PC_3細(xì)胞株遷移抑制的影;
[0034]圖丨3為火麻仁乙酸乙酯提取物對DU145細(xì)胞株遷移抑制的影卩^^_圖'
[0035] 圖14為火麻仁乙酸乙酯提取物對PC3-TXR細(xì)胞株遷移抑制的影響示意圖；
[0036] 圖15為火麻仁乙酸乙酯提取物對DU145-TXR細(xì)胞株遷移抑制的影響示意圖； [0037] 圖16為火麻仁乙酸乙酯提取物對四種細(xì)胞株遷移抑制的影響示意圖（注：與對照 組比較，P< 0.01)。

【具體實(shí)施方式】
[0038] 下面參照附圖詳細(xì)介紹本發(fā)明的示例性實(shí)施例。提供這些示例性實(shí)施例的目的是 為了使得本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠清楚地理解本發(fā)明，并且根據(jù)這里的描述能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā) 明。附圖和具體實(shí)施例不旨在對本發(fā)明進(jìn)行限定，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求限定。
[0039] 圖1示出了本發(fā)明實(shí)施例提供的具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物的制備 方法的流程示意圖。參照圖1，本發(fā)明一方面提供了一種具有治療前列腺癌作用的火麻仁提 取物的制備方法，包括以下步驟：
[0040] (1)前處理：將火麻仁進(jìn)行千燥并粉碎成粗粉；
[0041] (2)粗提：體積濃度75%的乙醇溶液回流提取2-3次，每次卜3個(gè)小時(shí)；
[0042] (3)過濾；
[0043] (4)濃縮：將濾液進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至相對密度為1. 05-1. 35 ;
[0044] (5)獲得提取物：將濃縮液進(jìn)行溶劑回收后冷凍干燥。
[0045] 其中，步驟（1)中火麻仁千燥粗粉的重量與步驟（2)中所述乙醇的體積比為 8:卜10:1。
[0046] 需要注意的是，步驟（2)中用75%的乙醇溶液回流提取2-3次，每次1-3個(gè)小時(shí)， 其第一次回流提取的時(shí)間應(yīng)該最長，可為2-3個(gè)小時(shí)，時(shí)間越長提取效果越好；第二次回流 提取的時(shí)間較第一次回流提取的時(shí)間短，第三次回流提取的時(shí)間又較第二次回流提取的時(shí) 間短。
[0047] 對于火麻仁提取物的提取方法并不局限于乙醇回流提取法，還可以采用水煎法， 另外本發(fā)明中提供的火麻仁提取物的提取方法中的乙醇回流提取法并不局限于：步驟（1) 中火麻仁干燥粗粉的重量與步驟（2)中所述乙醇的體積比為8:1-10:1，用體積濃度75%的 乙醇溶液回流提取2-3次，每次1-3個(gè)小時(shí)。因?yàn)樘崛r(shí)間、乙醇溶劑的用量倍數(shù)和濃度對 火麻仁提取物的提取率都是有影響的，所以上述提取條件是較優(yōu)的。最優(yōu)的提取條件為：按 重量體積比10:1用體積濃度 75%的乙醇溶液回流提取2次，提取時(shí)間分別為2個(gè)小時(shí)和 1. 5個(gè)小時(shí)。
[0048] 上述步驟（3)中過濾后，將濾液合并，然后再進(jìn)行下一步驟。
[0049] 參照圖1，步驟（4)與步驟（5)之間還包括萃取步驟：用濃縮液3倍體積的有機(jī)溶 劑進(jìn)行萃取，將萃取液減壓濃縮。上述有機(jī)溶劑為石油醚、乙酸乙酯或正丁醇。
[0050] 上述萃取步驟為用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇劑依次進(jìn)行萃取或者為用石油醚、 乙酸乙酯和正丁醇之中的兩種依次進(jìn)行萃取或者為用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇之中的一 種進(jìn)行萃??；優(yōu)選地，萃取步驟為用石油醚和乙酸乙酯依次進(jìn)行萃取或者為僅用乙酸乙酯 進(jìn)行萃取。
[0051] 經(jīng)大量的藥理實(shí)驗(yàn)可知，火麻仁提取物在體外具有一定抗前列腺癌的作用，其中 乙酸乙酯部位提取物是最主要的活性部位。
[0052] 本發(fā)明另一方面提供了一種具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物，該提取物由 上述的制備方法所制得。上述火麻仁提取物為石油醚部位提取物、乙酸乙酯部位提取物、正 丁醇部位提取物或75%乙醇部位提取物。
[0053] 上述石油醚部位提取物、乙酸乙酯部位提取物、正丁醇部位提取物和75%乙醇部 位提取物在做藥理實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作為：將上述四種提取物均用二甲基亞砜溶解配成濃 度為0. 25g/ml的溶液，置于-80°C冰箱密閉避光保存，臨用前用含血清的培養(yǎng)液稀釋成所 需濃度的提取物，上述用含血清的培養(yǎng)液稀釋成所需濃度的提取物中二甲基亞砜的終濃度 < 0· 1%。
[0054] 本發(fā)明又一方面提供了上述具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物在治療前列 腺癌的藥物方面的應(yīng)用或者在制備輔助治療前列腺癌的功能性食品方面的應(yīng)用，優(yōu)選地， 上述藥物為片劑、顆粒劑、散劑、丸劑、茶劑、煎膏劑、膠囊或者溶液劑。其中，上述丸劑為滴 丸，膠囊為硬膠囊或軟膠囊，溶液劑為糖漿劑。
[0055] 將上述火麻仁提取物進(jìn)行：干燥，粉碎，加入輔料適量，制成片劑、顆粒劑或散劑； 與單硬脂酸甘油醋加熱熔融混勻后，滴入不相混溶的冷凝液中，收縮冷凝制成球形或類球 形的制劑，分裝即得滴丸；80Γ減壓干燥，粉碎，加入輔料，混勻，然后壓塊或裝茶袋或煎袋 內(nèi)，分裝即得茶劑；加入煉蜜收膏，加入適量輔料，分裝即得煎膏劑；80°C減壓干燥，粉碎， 加入輔料適量，混勻，分裝在空心膠囊或密封于軟質(zhì)囊材中，分裝即得硬膠囊產(chǎn)品或軟膠囊 產(chǎn)品；加入輔料適量，制成合劑或糖漿劑。
[0056] 實(shí)施例1 :取火麻仁，加水煎煮提取4次，每次6倍量水，過濾，合并水提液，濃縮成 相對密度為1. 20-1. 35的清膏，80°C減壓干燥，粉碎，加入輔料適量，制成片劑。
[0057] 實(shí)施例2 :取火麻仁，加水煎煮提取2次，每次12倍量水，過濾，合并水提液，濃縮 成相對密度為1. 20-1. 35的清膏，干燥，粉碎，加入輔料適量，制成顆粒劑。
[0058] 實(shí)施例3 :火麻仁粉碎成粗粉，加水煎煮提取3次，每次8倍量水，過濾，合并水提 液，濃縮成相對密度為1. 2〇-1· 35的清膏，干燥，粉碎，加入輔料適量，制成散劑。
[0059] 實(shí)施例4 :取火麻仁，加乙醇回流提取2次，每次8倍量乙醇，過濾，合并醇提液，回 收乙醇濃縮成相對密度為1. 2-1· 35的清膏（60°C測），與單硬脂酸甘油醋加熱熔融混勻后， 滴入不相混溶的冷凝液中，收縮冷凝制成球形或類球形的制劑，分裝即得滴丸。
[0060] 實(shí)施例5 :取火麻仁，加水煎煮提取4次，每次6倍量水，過濾，合并水提液，濃縮成 相對密度為1.05-1. 15的清膏，加95%的乙醇調(diào)至含醇量70%，攪拌，靜置12小時(shí)，過濾， 濾液減壓回收乙醇，并濃縮為相對密度為1. 2-1. 35的清膏（6(TC )，80Γ減壓干燥，粉碎，加 入輔料，混勻，然后壓塊或裝茶袋或煎袋內(nèi)，分裝即得茶劑。
[0061] 實(shí)施例：火麻仁，粉碎成粗粉，加水煎煮提取2次，每次8倍量水，過濾，合并水提 液，濃縮成相對密度為1. 05-1· 15巧的清膏，加的乙醇調(diào)至含醇量60%，攪拌，靜置72 小時(shí)，過濾，濾液減壓回收乙醇，并濃縮為相對密度為1. 2-1. 35的清膏（6(TC ),加入煉蜜收 膏，加入適量輔料，分裝即得煎膏劑。
[0062] 實(shí)施例7 :取火麻仁，加水煎煮提取2次，加水量8倍，6倍，過濾，合并水提液，濃 縮成相對密度為1· 05-1. 15的清膏，加85%的乙醇調(diào)至含醇量55%，攪拌，靜置48小時(shí)，過 濾，濾液減壓回收乙醇，并濃縮為相對密度為1.2-1.35的清膏（60°C )，80°C減壓干燥，粉 碎，加入輔料適量，混勻，分裝在空心膠囊或密封于軟質(zhì)囊材中，分裝即得硬膠囊產(chǎn)品或軟 膠囊產(chǎn)品。 _
[0063] 實(shí)施例8 :取火麻仁，加水煎煮提取2次，每次8倍量水，過濾，合并水提液，濃縮成 相對密度為1.05-1. 15的清膏，加9〇%的乙醇調(diào)至含醇量65%，攪拌，靜置24小時(shí)，過濾， 濾液減壓回收乙醇，并濃縮為相對密度為1. 2-1. 35的清膏（60°C )，加入輔料適量，制成合 劑。
[0064] 實(shí)施例9 :取火麻仁，加水煎煮提取2次，每次8倍量水，過濾，合并水提液，濃縮成 相對密度為1.05-1. 15的清膏，加9〇%的乙醇調(diào)至含醇量60%,攪拌，靜置36小時(shí)，過濾， 濾液減壓回收乙醇，并濃縮為相對密度為1. 2-1. 35的清膏（60°C )，加入輔料適量，制成糖 漿劑。
[0065] 本發(fā)明再一方面提供了一種組合物，包含上述火麻仁提取物以及藥學(xué)上可接受的 載體。其中，包含上述火麻仁提取物的量應(yīng)為具有治療效果或輔助治療效果的有效量，本領(lǐng) 域的專業(yè)人員能夠理解有效量可以隨著給藥的方式、載體的使用和可能與其它治療劑合用 等而有所不同。
[0066] 藥理實(shí)驗(yàn)例1 :火麻仁不同部位提取物對前列腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用
[0067] 實(shí)驗(yàn)方法：取對數(shù)生長期的（011145、0111454乂1?、？(：-3、？03-111?)細(xì)胞，0.25%胰 蛋白酶消化后，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上（2X10 4個(gè)/ml)，每孔100μ 1。置37°C，5% C02 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，實(shí)驗(yàn)組分別加入四個(gè)不同部位（石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇 部位、75%乙醇部位）提取物的培養(yǎng)液，藥物濃度從高到低依次為：250yg/ml、187. 5Pg/ ml、125 μ g/ml、93. 75 μ g/ml、62. 5 μ g/ml、46. 875 μ g/ml、31. 25 μ g/ml。對照組則加入等體 積的溶劑培養(yǎng)液，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，重復(fù)3次，同時(shí)設(shè)不含細(xì)胞的完全培養(yǎng)基做空白對照孔。 將％孔培養(yǎng)板置于37°C，5%的C0 2培養(yǎng)箱分別培養(yǎng)24h、48h、72h后，各加入20 μ 1的MTS 繼續(xù)培養(yǎng)2h，以酶標(biāo)儀在490nm處測各孔吸光度值（〇D)，測定時(shí)減去空白對照，按以下公式 計(jì)算藥物對腫瘤細(xì)胞生長的抑制率：抑制率（％) = (1 -實(shí)驗(yàn)孔平均0D值/對照孔平均 0D值）Χ1〇〇%，并利用對數(shù)回歸方程計(jì)算藥物的半數(shù)抑制濃度（IC50)。采用 SPSS17.0進(jìn) 行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以表示，進(jìn)行單因素方差分析，組間比較采用LSD法，以P < 0. 05為 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0068]實(shí)驗(yàn)結(jié)果：圖2為火麻仁乙酸乙酯提取物對PC-3細(xì)胞株增殖抑制的影響示意圖； 圖3為火麻仁乙酸乙酯提取物對PC-3-TXR細(xì)胞株增殖抑制的影響示意圖；圖4為火麻仁 乙酸乙酯提取物對DU145細(xì)胞株增殖抑制的影響示意圖；圖 5為火麻仁乙酸乙酯提取物對 DU145-TXR細(xì)胞株增殖抑制的影響示意圖；圖6為火麻仁正丁醇提取物對PC-3細(xì)胞株增殖 抑制的影響示意圖；圖 7為火麻仁正丁醇提取物對DU145細(xì)胞株增殖抑制的影響示意圖； 圖8為火麻仁石油醚提取物對PC-3細(xì)胞株增殖抑制的影響示意圖；圖 9為火麻仁石油醚 提取物對DU145細(xì)胞株增殖抑制的影響示意圖；圖10為火麻仁 75%乙醇提取物對PC_3細(xì) 胞株增殖抑制的影響示意圖；圖11為火麻仁 75°%乙醇提取物對DU145細(xì)胞株增殖抑制的 影響示意圖。參照圖2-11，可知在31. 25-250 μ g/ml濃度范圍內(nèi)，火麻仁乙酸乙酯提取物 對4種腫瘤細(xì)胞（DU145、DU145-TXR、PC-3、PC-3-TXR)均有顯著地抑制作用，且隨著提取物 濃度的增加，其抑制率越來越高，存在一定的劑量依賴性。另外，隨著作用時(shí)間的延長，對 DU145、PC-3、PC-3_TXR等3種腫瘤細(xì)胞的抑制作用也越來越高。乙酸乙酯提取物在作用 7此時(shí)后，對？(：-3、？(：-3^011145』1]14 5，1?等4種腫瘤細(xì)胞的1(：50分別為72.12 4§/ ml、80_ 80μ g/ml、51. ΟΟμ g/ml 和 113· ΟΟμ g/ml。石油醚、正丁醇和 75% 乙醇提取物對pc-3 和DU145也有一定的抑制作用，但在同一測定濃度范圍內(nèi)其抑制作用明顯不如乙酸乙酯提 取物。由此可知，火麻仁提取物在體外具有一定的抗前列腺癌的作用，其中乙酸乙酯提取物 是最主要的活性部位。
[0069] 藥理實(shí)驗(yàn)例2 :火麻仁不同部位提取物對前列腺癌細(xì)胞遷移的抑制作用
[0070] 實(shí)驗(yàn)方法：使用marker筆在6孔板背后劃橫線，每隔〇· 5cm -道，橫穿過孔，每孔 穿過5條線。取對數(shù)生長期的四種腫瘤細(xì)胞（DU145、PC-3、DU145-TXR、PC-3-TXR)常規(guī)消 化后接種于6孔板，調(diào)整細(xì)胞濃度為5 X 105個(gè)/ml，過夜待細(xì)胞鋪滿孔底為宜，24h后，各組 細(xì)胞用絲裂霉素處理lh，抑制細(xì)胞分裂。用20 μ 1移液器槍頭比著直尺，垂直于背后的橫線 進(jìn)行細(xì)胞劃痕。用PBS洗滌3次，去除劃下的細(xì)胞，加入含有不同濃度火麻仁乙酸乙酯提取 物（150 μ g/ml和300 μ g/ml)的無血清培養(yǎng)基，其中一組只加入無血清培養(yǎng)基做陰性對照。 放入37°C含5%的C02培養(yǎng)箱，于15h時(shí)檢測細(xì)胞的劃痕愈合率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，按〇h、24h 取樣，拍照。每個(gè)樣品取5個(gè)視野測量距離。細(xì)胞劃痕愈合率=(〇h劃痕距離一 15h劃痕 距離）/0h劃痕距離X100%。采用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以表示，進(jìn)行單因素 方差分析，組間比較采用LSD法，以P < 0. 05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0071]實(shí)驗(yàn)結(jié)果：圖12為火麻仁乙酸乙酯提取物對PC-3細(xì)胞株遷移抑制的影響示意圖； 圖13為火麻仁乙酸乙酯提取物對DU145細(xì)胞株遷移抑制的影響示意圖；圖14為火麻仁乙 酸乙酯提取物對PC3-TXR細(xì)胞株遷移抑制的影響示意圖；圖15為火麻仁乙酸乙酯提取物 對DU145-T)(R細(xì)胞株遷移抑制的影響示意圖；圖16為火麻仁乙酸乙酯提取物對四種細(xì)胞 株遷移抑制的影響示意圖（注：與對照組比較，P< 0.01)。參照圖12-16,可知細(xì)胞劃痕實(shí) 驗(yàn)結(jié)果顯示，火麻仁乙酸乙酯部位提取物對上述四種腫瘤細(xì)胞均有不同程度的遷移抑制作 用，與對照組比較差異顯著（P < 0. 01)。在使用不同濃度（150μ g/ml和300μ g/ml)提取 物作用15h后，PC-3的致傷區(qū)"愈合率"分別為58. 3%和16. 7% ;DU145分別為50. 2%和 21.6%屮〇34乂1?分別為40.2%和19.8%;011145-1乂1?分別為44.9%和31.3%。
[0072]上述藥理實(shí)驗(yàn)例1和藥理實(shí)驗(yàn)例2中，前列腺癌腫瘤細(xì)胞株（DU145、PC-3)和前列 腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株（DU145-TXR、PC-3-TXR)由廣西醫(yī)科大學(xué)轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中心提供。 [0073]通過上述藥理實(shí)驗(yàn)例1和藥理實(shí)驗(yàn)例2可見，本發(fā)明提供的火麻仁提取物在體外 對前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C- 3和DU145,以及相應(yīng)的紫杉醇耐藥細(xì)胞株P(guān)C-3TXR和DU145-TXR均 有抑制作用，即本發(fā)明提供的火麻仁提取物具有明顯的抑制前列腺癌生長和轉(zhuǎn)移的作用， 能夠應(yīng)用于治療前列腺癌的藥物和制備輔助治療前列腺癌的功能性食品，應(yīng)用于前列腺癌 的治療或輔助治療，從而擴(kuò)大了火麻仁的藥用范圍，提高了火麻仁的藥用價(jià)值，另外，具有 治療前列腺癌作用的火麻仁提取物的制備方法簡單易操作，為火麻仁提取物在治療前列腺 癌的藥物和制備輔助治療前列腺癌的功能性食品的應(yīng)用上奠定了基礎(chǔ)。
[0074]以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領(lǐng)域的技 術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修 改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1. 一種具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物的制備方法，包括以下步驟： (1) 前處理：將火麻仁進(jìn)行干燥并粉碎成粗粉； (2) 粗提：體積濃度75%的乙醇溶液回流提取2-3次，每次1-3個(gè)小時(shí)； (3) 過濾； (4) 濃縮：將濾液進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至相對密度為1. 05-L 35 ; (5) 獲得提取物：將濃縮液進(jìn)行溶劑回收后冷凍干燥。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，步驟（4)與步驟（5)之間還包括萃取步驟： 用濃縮液3倍體積的有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，將萃取液減壓濃縮。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其中，所述有機(jī)溶劑為石油醚、乙酸乙酯或正丁 醇。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其中，萃取步驟為用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇劑 依次進(jìn)行萃取或者為用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇之中的兩種依次進(jìn)行萃取或者為用石油 醚、乙酸乙酯和正丁醇之中的一種進(jìn)行萃??；優(yōu)選地，萃取步驟為用石油醚和乙酸乙酯依次 進(jìn)行萃取。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，步驟（1)中火麻仁干燥粗粉的重量與步驟 (2)中所述乙醇的體積比為8:1-10:1。
6. -種具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物，該提取物由權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng) 所述的制備方法所制得。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物，其特征在于，所述 火麻仁提取物為石油醚部位提取物、乙酸乙酯部位提取物、正丁醇部位提取物或75%乙醇 部位提取物。
8·根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的具有治療前列腺癌作用的火麻仁提取物在治療前列腺癌 的藥物方面的應(yīng)用或者在制備輔助治療前列腺癌的功能性食品方面的應(yīng)用，優(yōu)選地，所述 藥物為片劑、顆粒劑、散劑、丸劑、茶劑、煎膏劑、膠囊或者溶液劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其中，所述丸劑為滴丸，所述膠囊為硬膠囊或軟膠囊， 所述溶液劑為糖漿劑。
10· -種組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的火麻仁提取物以及藥學(xué)上可接受的載 體。
【文檔編號】A61P35/00GK104189085SQ201410417655
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月22日
【發(fā)明者】張健, 郭宏偉, 盧奕, 黃昕, 鄒春林 申請人:廣西南寧隆吉維特生物科技有限公司