一種靈芝孢子粉多糖及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種靈芝孢子粉多糖及其制備方法，該靈芝孢子粉多糖是由如下方法制備得到的：靈芝孢子粉用無水乙醇提取，收集沉淀再用沸水提取，收集上清液；上清液減壓濃縮后進(jìn)行醇沉，即得到靈芝孢子粉多糖。本發(fā)明得到的靈芝孢子粉多糖具有很好的保濕效果。
【專利說明】一種靈芝孢子粉多糖及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及食用菌提取領(lǐng)域，具體的說涉及一種靈芝孢子粉多糖及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 靈芝（Ganoderma lucidum)為多孔菌科靈芝屬真菌，是一種具有扶正固本的傳統(tǒng) 珍貴藥材。靈芝孢子粉是靈芝生長(zhǎng)成熟期，從靈芝菌褶中彈射出來的極其微小的卵形生殖 細(xì)胞。隨著靈芝栽培技術(shù)的發(fā)展，靈芝孢子粉的產(chǎn)量越來越高，甚至超過子實(shí)體的產(chǎn)量。多 糖是孢子粉中的主要活性成分之一，近十幾年對(duì)靈芝孢子粉的功效也進(jìn)行了大量的研究， 發(fā)現(xiàn)具有多種生物活性，如提1?機(jī)體免疫力，提1?機(jī)體耐缺氧能力，消除自由基，抑制腫瘤、 抗福射等。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明首先提供了一種靈芝孢子粉多糖的制備方法，該方法包括如下步驟：
[0004] 靈芝孢子粉用無水乙醇提取，收集沉淀再用沸水提取，收集上清液；上清液減壓濃 縮后進(jìn)行醇沉，即得到靈芝孢子粉多糖。
[0005] 具體的說，本發(fā)明的一種靈芝孢子粉多糖的制備方法，包括如下步驟：
[0006] 1)靈芝孢子粉粗多糖的提?。红`芝孢子粉中加入8-12倍重量的無水乙醇中，煮沸 并保持微沸l(wèi)_3h，離心收集沉淀；沉淀加入8-12倍重量的蒸餾水，煮沸并保持微沸l(wèi)-3h，離 心,收集上清液；
[0007] 2)多糖粗提液的濃縮：上清液減壓濃縮至料液比（質(zhì)量/體積）為1:0· 5-1. 5 ;
[0008] 3)乙醇沉淀：向濃縮液中加入無水乙醇，至乙醇與濃縮液體積比達(dá)到56% -57%， 室溫靜置1小時(shí)，離心，收集沉淀，加蒸餾水溶解凍干，即得粗多糖。
[0009] 本發(fā)明還提供了由上述方法制備得到的靈芝孢子粉多糖。
[0010] 本發(fā)明制備得到的粗多糖得率約為1.5%，多糖含量達(dá)到79%以上，蛋白質(zhì)含量 低。HPSEC-MALLS-RI分析顯示粗多糖主要有一個(gè)糖峰，單糖分析結(jié)果顯示粗多糖主要由葡 萄糖組成。制備得到的靈芝孢子粉多糖具有高的保濕活性，具體可用于保濕的化妝品類和 改善老年人體質(zhì)的保健品類等。本發(fā)明的靈芝孢子粉多糖的制備方法是一種簡(jiǎn)便、高效、成 本低、多糖得率及含量高、適合規(guī)模化生產(chǎn)的方法。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0011] 圖 1 HPSEC-MALLS-RI 分析圖譜
[0012] 圖2高效陰離子色譜檢測(cè)結(jié)果
[0013] 圖3保濕率測(cè)定效果（其GLW1代表實(shí)施1制備得到的靈芝孢子粉多糖；GLW2代 表實(shí)施2制備得到的靈芝孢子粉多糖；HyaluronateAcid代表透明質(zhì)酸。）

【具體實(shí)施方式】：
[0014] 靈芝孢子粉來源：浙江龍泉基地的滬農(nóng)靈芝1號(hào)采收的孢子粉。
[0015] 實(shí)施例1 :
[0016] 1、靈芝孢子粉多糖的提?。悍Q取200. 9g靈芝孢子粉，加入2000mL無水乙醇，加熱 至沸騰，保持微沸120分鐘，9700g離心20min。沉淀重復(fù)上述步驟，再提取1次，9700g離心 20min。沉淀加入2000mL蒸饋水，加熱至沸騰，保持微沸120分鐘，9700g離心20min，沉淀 重復(fù)上述步驟，再提取1次，9700g離心20min，合并上清液。
[0017] 2、多糖粗提液的濃縮：上清液濃縮至220mL。
[0018] 3、乙醇沉淀：向濃縮液中緩慢加入無水乙醇，邊加邊攪拌，至乙醇含量達(dá)到56%， 室溫靜置1小時(shí)，離心去除醇沉上清，收集沉淀，蒸餾水溶解后放入冷凍干燥機(jī)中冷凍干 燥，即得多糖干品。
[0019] 制備所得多糖得率為1.51%，多糖含量為79. 79%。
[0020] 分析天平稱量多糖干品的重量。按以下公式計(jì)算粗多糖得率。
[0021] /〇/Λ 多糖的重量§) infW 稱取樣品重量?)
[0022] 多糖含量的檢測(cè)：
[0023] 多糖含量測(cè)定：用苯酚一硫酸法測(cè)定，精密稱取本品5mg置2ml離心管中，加蒸餾 水lml，溶解后，離心。上清液稀釋50倍，精密吸取樣品1.0ml，置15ml試管中，分別加入苯 酚、硫酸試劑，充分反應(yīng)后在490nm處測(cè)定吸光度值，以葡聚糖為標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算樣品的多糖含 量。本工藝所得靈芝破壁孢子粉多糖含量達(dá)到79%以上。
[0024] 實(shí)施例2 :
[0025] 1、靈芝孢子粉多糖的提?。悍Q取90. 17g靈芝孢子粉，加入900mL無水乙醇，加熱至 沸騰，保持微沸120分鐘，9700g離心20min。沉淀重復(fù)上述步驟，再提取1次，9700g離心 20min。沉淀加入2000mL蒸饋水，加熱至沸騰，保持微沸120分鐘，9700g離心20min，沉淀 重復(fù)上述步驟，再提取1次，9700g離心20min，合并上清液。
[0026] 2、多糖粗提液的濃縮：上清液濃縮至65mL。
[0027] 3、乙醇沉淀：向濃縮液中緩慢加入無水乙醇，邊加邊攪拌，至乙醇含量達(dá)到56%， 室溫靜置1小時(shí)，離心去除醇沉上清，收集沉淀，蒸餾水溶解后放入冷凍干燥機(jī)中冷凍干 燥，即得多糖干品。
[0028] 制備所得多糖得率為1.56%，多糖含量為79.67%。
[0029] 實(shí)施例3
[0030] 1、樣品制備：稱取實(shí)施例2中多糖2mg，加入lmLHPLC流動(dòng)相，充分溶解，13200r/ min離心15min，上清液經(jīng)0. 25 μ m的水相微孔膜過濾后進(jìn)行HPSEC-MALLS-RI分析。
[0031] 2、色譜分析條件：分析柱選日本東洋曹達(dá)TOSOH TSK PWXL6000和TSK PWXL3000 凝膠色譜柱串聯(lián)后分析，流動(dòng)相為含〇· 〇5mol/L的NaH2P04和0· 15mol/L的NaN03溶液（pH =7,0.02%疊氮鈉），流速為0.5111171^11，色譜柱溫用柱溫箱恒定在351：;激光檢測(cè)器光源 波長(zhǎng)選用623. 8nm。多糖在溶液中的折光指數(shù)增量（dn/dc)按照0. 146mL/g計(jì)算。
[0032] 3、分子量計(jì)算：使用 Astra (version6. 1. 1，Wyatt Technology, Santa Barbara，CA)數(shù)據(jù)分析軟件對(duì)光散射數(shù)據(jù)進(jìn)行采集和分析，計(jì)算分子量和其他多糖分子特 性。
[0033] HPSEC-MALLS-RI分析圖譜如圖1所示，實(shí)施例1的靈芝孢子粉多糖組分主要含有 1個(gè)大峰，這個(gè)峰的重均分子量7. 312X 105Da。
[0034] 實(shí)施例4:
[0035] 1、樣品制備：稱取實(shí)施2中的孢子粉多糖2mg加入帶蓋玻璃瓶，加入3mL 2mol/L 的三氟乙酸，110°C油浴4h，冷卻至室溫，50°C氮吹儀吹干，再加甲醇吹干，重復(fù)兩次至無酸 味，用2mL超純水沖洗玻璃瓶于離心管中，13200r/min離心lOmin，對(duì)上清液上高效陰離子 色譜（HPAEC)分析。
[0036] 2、色譜條件：Dionex 公司色譜柱 CarboPac?PA20 (3X 150nm);流動(dòng)相 0· 8% NaOH 溶液（pH = 12);時(shí)間 30min ;柱溫 30°C ;流速 0· 45mL/min ;進(jìn)樣量 25ul。
[0037] 經(jīng)高效陰離子色譜檢測(cè)所得單糖組成如圖2所示。多糖組分由海藻糖、半乳糖、葡 萄糖和甘露糖四種單糖組成，其中葡萄糖所占比例最高，百分摩爾比為94. 53%，而海藻糖、 半乳糖和甘露糖糖比例很低。
[0038] 實(shí)施例5 :
[0039] 體外保濕功效測(cè)定：通過測(cè)定物質(zhì)的保濕效果來測(cè)定實(shí)施例1和實(shí)施例2的靈芝 破壁孢子粉多糖的保濕效果，以透明質(zhì)酸為對(duì)照。將由飽和（nh 4)2so4水溶液作為相對(duì)濕度 (R.H.)為81%的干燥器和由飽和K 2C03水溶液作為R.H. = 43%的干燥器置于20°C恒溫環(huán) 境中，精確稱取1. 〇g各種提取物干燥試樣置于直徑為3cm的結(jié)晶皿中，放在81 %的干燥器 內(nèi)，48h后吸濕后的試樣繼續(xù)放置43 %的干燥器中24h，測(cè)定放置前后試樣的重量差，由式 (1)求出保濕率，H0為試樣含水重量，Hn為放置后試樣含水重量。
[0040] 保濕率（％ ) = 100Hn/H0 (1)
[0041] 結(jié)果顯示實(shí)施例1和實(shí)施例2的靈芝破壁孢子粉多糖均具有較好的保濕效果。
【權(quán)利要求】
1. 一種靈芝孢子粉多糖的制備方法，該方法包括如下步驟： 靈芝孢子粉用無水乙醇提取，收集沉淀再用沸水提取，收集上清液；上清液減壓濃縮后 進(jìn)行醇沉，即得到靈芝孢子粉多糖。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靈芝孢子粉多糖的制備方法，包括如下步驟： 1) 靈芝孢子粉粗多糖的提?。红`芝孢子粉中加入8-12倍重量的無水乙醇中，煮沸并保 持微沸l(wèi)_3h，離心收集沉淀；沉淀加入8-12倍重量的蒸餾水，煮沸并保持微沸l(wèi)-3h，離心， 收集上清液； 2) 多糖粗提液的濃縮：上清液減壓濃縮至料液比為1 :0. 5-1. 5 ; 3) 乙醇沉淀：向濃縮液中加入無水乙醇，至乙醇與濃縮液體積比達(dá)到56% -57%，室溫 靜置1小時(shí)，離心，收集沉淀，加蒸餾水溶解凍干，即得粗多糖。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的制備方法制備得到的靈芝孢子粉多糖。
【文檔編號(hào)】A61K8/73GK104193840SQ201410374769
【公開日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年7月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月31日
【發(fā)明者】唐慶九, 于華崢, 張勁松, 劉艷芳, 周帥, 張忠, 唐傳紅 申請(qǐng)人:上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院, 上海百信生物科技有限公司