一種銀杏葉提取物的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種銀杏葉提取物的制備方法，該方法是以銀杏葉為原料，經(jīng)過醇或丙酮、水沉、大孔樹脂柱純化、煮沸水沉、大孔樹脂柱二次純化、冷藏沉淀、醇或丙酮低溫水溶性精制制備銀杏葉提取物。其產(chǎn)品具有水溶性、低酚酸、低花青素、低熾灼殘?jiān)奶攸c(diǎn)，其中銀杏葉提取物中的總黃酮醇苷≥24％、萜類內(nèi)酯≥9.5％、熾灼殘?jiān)?.3％、原花青素≤0.3％、總銀杏酚酸≤1ppm且冷水溶解度≥5％。該方法采用兩步樹脂柱法和兩步沉淀法實(shí)現(xiàn)了提高銀杏葉提取物的品質(zhì)，工藝操作簡單，去酚酸效果好，工藝穩(wěn)定，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】一種銀杏葉提取物的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種銀杏葉提取物的制備方法，屬于天然植物有效成分提取分離技術(shù) 領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002] 銀杏葉提取物（Ginko Biloba Extract，EGB)是銀杏科銀杏屬裸子植物銀杏 (Ginkgo biloba L.)的葉的提取物。其可有效清除自由基，并能降低β-淀粉樣蛋白（Αβ) 誘導(dǎo)NO的細(xì)胞毒性，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，提高注意力和短時(shí)記憶等認(rèn)知功能，對(duì)稱阿爾茨海默 病、衰老、神經(jīng)病、學(xué)習(xí)、記憶功能等均有改善作用。銀杏葉制劑目前主要在臨床上用于冠心 病、心絞痛、心肌梗塞、中風(fēng)、腦循環(huán)障礙及大腦功能返化引起的中老年腦功能不全、老年癡 呆癥。
[0003] EGB主要含有總黃酮醇苷類、萜內(nèi)酯類、原花青素、酚酸類化合物、微量元素等成 分。其中：總黃酮醇苷類占22%?27% ;銀杏內(nèi)酯占2. 8%?3. 4%，具有抗炎和保護(hù)神經(jīng) 作用，一定程度上可阻止阿爾茨海默病的進(jìn)展；白果內(nèi)酯占2. 6%?3. 2%，可促進(jìn)神經(jīng)生 長，防止腦、脊髓神經(jīng)脫鞘。這些發(fā)現(xiàn)已引起了國內(nèi)外醫(yī)學(xué)家的廣泛關(guān)注。
[0004] EGB和制劑的質(zhì)量控制方面的標(biāo)準(zhǔn)和要求也日益規(guī)范和嚴(yán)格。目前EGB質(zhì)量控制 標(biāo)準(zhǔn)仍停留在兩種有效成分（總黃酮醇苷和萜類內(nèi)酯）和一種毒性成分（銀杏酸）上，而 這幾種成分在EGB中僅占30%。在銀杏葉制劑過程中，原料的水溶性與熾灼殘?jiān)母叩屯?樣直接影響著制劑的產(chǎn)品質(zhì)量。因此，在制備EGB時(shí)控制總黃酮醇苷、萜類內(nèi)酯和銀杏酸含 量之余，同時(shí)提高其水溶性和降低熾灼殘?jiān)?，能夠更加有效地提高EGB及其制劑的質(zhì)量并 便于生產(chǎn)。
[0005] 銀杏酸是銀杏葉中6-烷基或6-烯基水楊酸的系列衍生物，其具有抗腫瘤活性、 抗氧化、清除自由基和抗炎活性、抑制甘油三酯合成酶GPDH的活性以及強(qiáng)烈的殺蟲、抗菌、 殺菌和抗病毒活性，但還具有免疫毒性和胚胎毒性作用，會(huì)引起漆毒樣皮炎，是銀杏中的致 敏成分，對(duì)人類的健康有潛在的危害。德國衛(wèi)生部規(guī)定EGB制劑中銀杏酸的含量必須小于 5ppm，歐洲藥典8. 0版中EGB的標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的銀杏酸的限量為不大于5ppm，中國藥典2010 版中也規(guī)定了 EGB中銀杏酸的含量不得過百萬分之十（10ppm)。目前我國藥典對(duì)銀杏酸的 限量較高，風(fēng)險(xiǎn)較高。因此，降低EGB及其制劑中銀杏酸含量，對(duì)其生產(chǎn)和市場(chǎng)應(yīng)用均有著 很好的作用。。
[0006] 目前降低銀杏葉提取物中銀杏酸的方法頗多：如CN02113529. 0、 CN201210125732. 4和CN200510097920. 0采用樹脂法脫除銀杏葉提取物中銀杏酸， CN201110306111. 1是將銀杏葉水提物經(jīng)絮凝劑絮凝沉淀、大孔樹脂純化、醇沉后制備 超低酸水溶性銀杏葉提取物，這些方法采用單根大孔樹脂柱或采用絮凝劑與單根大孔 樹脂柱相結(jié)合的方法除酸，除酸不徹底、且絮凝劑的使用對(duì)產(chǎn)品及其制劑的質(zhì)量產(chǎn)生影 響；如CN03114826. 3、CN201210295369. 0采用兩次樹脂法對(duì)銀杏葉提取物進(jìn)行脫酸； 如CN02113531. 2、CN03131915. 7采用烷烴類物質(zhì)萃取法脫除銀杏葉提取物中的銀杏酸， CN02109271. 0采用石油醚或二氧化碳超臨界萃取法制備脫酸銀杏葉和脫酸銀杏葉提取物， CN201310150791. 1采用正己烷為洗滌劑，并加入氯化鋅脫除銀杏葉提取物中銀杏酚酸，這 些方法采用石油醚和烷烴類溶劑萃取銀杏酸，生產(chǎn)操作時(shí)安全性低、產(chǎn)品有機(jī)溶劑殘留易 超標(biāo)，且需使用大量的萃取設(shè)備和萃取溶劑，生產(chǎn)成本較高；如CN201310033052. 4采用四 氧化三鐵納米材料吸附分離脫除銀杏葉提取物總銀杏酸和重金屬，其脫除效果一般，銀杏 酸含量為l_2ppm，且在提取過程中仍需大孔樹脂柱分離；如CN201210144978. 6在pH調(diào)節(jié) 劑作為提取溶劑的條件下經(jīng)聲磁聚能提取器提取以降低銀杏葉提取物中酚酸含量，其只通 過檢測(cè)，無法實(shí)現(xiàn)酚酸的去除；CN201110068721. 2采用混合樹脂和環(huán)己烷或正己烷萃取結(jié) 合對(duì)銀杏葉提取物進(jìn)行脫酸，其除酸效果一般（含量為l-5ppm)。上述方法只是在保證萜類 內(nèi)酯和總黃酮醇苷含量的情況下進(jìn)行的脫酸工藝的研究，并沒有考慮提取物的其他指標(biāo)。
[0007] 銀杏葉提取物主要為總黃酮醇苷和萜類內(nèi)酯成分，其中內(nèi)酯的水溶性很小，其在 用于制劑特別是注射劑產(chǎn)生時(shí)，在水中的溶解度的大小直接決定了原料的損失程度。在制 劑過程中，水溶性較差的銀杏葉提取物中的總黃酮醇苷和萜類內(nèi)酯活性成分隨沉淀的去除 而大量損失，其損失率高達(dá)50%左右，很難滿足液體制劑的生產(chǎn)與應(yīng)用要求。因此，提高銀 杏葉提取物的水溶性也是擺在銀杏葉提取物液體制劑面前的一個(gè)難題。
[0008] 目前改善銀杏葉提取物水溶性的方法可見：CN200510003243. 1將銀杏葉提取物 粗品經(jīng)純凈水或溶劑浸提、明膠水溶液沉淀、乙醇沉淀后制備水溶性GBE，其產(chǎn)品水溶解度 > 5%、銀杏酸含量< 5ppm ;CN200810038506. 6經(jīng)藥用明膠水溶液沉淀、超濾膜超濾制備 注射制劑用水溶性銀杏葉提取物，但并未對(duì)有毒成分銀杏酸加以控制，且產(chǎn)品的水溶解度 沒有明確說明；CN200810060422. 2將銀杏葉經(jīng)60-90%乙醇提取、大孔樹脂吸附和高分子 納米級(jí)膜過濾制備水溶性銀杏葉提取物，其產(chǎn)品總銀杏酸含量< lppm、水溶性> 5%，但生 產(chǎn)成本較高；CN201110275646. 7將銀杏葉經(jīng)丙酮水混合溶液提取、水冷沉、大孔吸附樹脂 吸、醇沉、水提冷沉后制備水溶性銀杏葉提取物，其總黃酮醇苷含量> 27%、總內(nèi)酯含量為 9% -12%、水溶性彡10%、銀杏酚酸彡lppm ;CN201110306111. 1采用銀杏葉提取物進(jìn)行精 制純化以達(dá)到水溶性合格（冷水溶解度>5g/ml)的目的，但絮凝劑的加入會(huì)對(duì)后續(xù)的制劑 產(chǎn)生影響。上述方法工藝較復(fù)雜，成本相對(duì)較高，且未充分考慮提取物的其他指標(biāo)。
[0009] 目前降低銀杏葉提取物熾灼殘?jiān)矫娣椒ㄝ^少。CN201110067189. 2將銀杏葉經(jīng)水 提或醇提、硅藻土過濾、大孔樹脂柱分離以降低銀杏葉提取物中灼燒殘?jiān)浚摲椒ㄊ褂昧?吸附劑硅藻土，過濾容易泄露，除去較難，硅藻土還可能帶入其他未知的雜質(zhì)，給制劑帶來 潛在的危害。
[0010] 浙江康恩貝制藥股份有限公司對(duì)銀杏葉提取物中原花青素含量進(jìn)行了研究，并提 出了銀杏葉提取物中原花青素含量不小于4%的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，但是其制劑中僅涉及口服制劑， 并未涉及注射制劑。雷潔瓊等通過給小鼠腹腔注射原花青素40mg/kg后觀察發(fā)現(xiàn)小鼠活動(dòng) 減少、蜷縮，部分小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)，肌肉注射24h后給藥部位有滲出液、充血、組織壞死等 反應(yīng)，這說明原花青素注射給藥有很大的刺激性。因此，銀杏葉提取物注射用制劑需對(duì)其原 料增加原花青素的檢測(cè)和控制，以減少因原花青素產(chǎn)生的注射刺激性。
[0011] 綜上所述，急需一種更適于生產(chǎn)化的銀杏葉提取物制備工藝，以提高銀杏葉提取 物及其制劑的質(zhì)量和安全性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明提供了一種銀杏葉提取物的制備方法，其制備的銀杏葉提取物具有水溶 性、低酚酸、低花青素、低熾灼殘?jiān)奶攸c(diǎn)。
[0013] 本發(fā)明的銀杏葉提取物的制備方法包括如下步驟： (a) 用60% -85%低級(jí)醇溶液或60% -85%丙酮溶液提取銀杏葉，其中所述低級(jí)醇 溶液或丙酮溶液的體積為銀杏葉重量的6-10倍量，提取時(shí)間為2-4小時(shí)，提取溫度為 50°C -80°C，提取次數(shù)為2-4次； (b) 將步驟（a)所得提取液濃縮至藥材量的0. 5-2倍，加入藥材量4-6倍量的水，冷藏 靜置24-48小時(shí)，過濾； (c) 將步驟（b)所得濾液過大孔樹脂柱，用水洗脫雜質(zhì)，用60% -80%低級(jí)醇溶液或 60% -80%丙酮溶液洗脫，收集洗脫液； (d) 將步驟（c)所得洗脫液濃縮至無有機(jī)溶劑，加入藥材量2-4倍量的水，煮沸1-10分 鐘，冷卻，靜置12-24小時(shí)，過濾； (e) 將步驟（d)所得濾液過大孔樹脂柱，依次用水、10 % -25 %低級(jí)醇溶液或 10% -25 %丙酮溶液洗脫雜質(zhì)，然后用60% -80 %低級(jí)醇溶液或60 % -80 %丙酮溶液洗脫， 收集洗脫液； (f) 將步驟（e)所得洗脫液濃縮干燥，溶于20倍量水或10%-30%低級(jí)醇溶液或 10% -30%丙酮溶液中，冷卻，冷藏靜置12-48小時(shí)，過濾； (g) 將步驟（f)所得濾液濃縮，加入70% -100%低級(jí)醇溶液或70% -100%丙酮溶液 至有機(jī)溶劑含量為70-80%，-25°C?-10°C沉淀12-48小時(shí)，過濾，濾液濃縮干燥，粉碎，過 篩，得銀杏葉提取物。
[0014] 在本發(fā)明中，術(shù)語"低級(jí)醇"是指含有1-6個(gè)碳原子的有機(jī)醇，包括但不限于，甲 醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、異丁醇、叔丁醇、戊醇、己醇等類似有機(jī)醇，優(yōu)選甲醇或乙醇。
[0015] 在本發(fā)明中，所述"低級(jí)醇溶液"是指低級(jí)醇與水混合形成的低級(jí)醇水溶液，所述 "丙酮溶液"是指丙酮與水混合形成的丙酮水溶液，其中用體積百分比表示低級(jí)醇或丙酮在 溶液中的比例。例如：60%甲醇溶液是指甲醇與水混合形成的甲醇水溶液，其中甲醇的體積 百分比為60% ;100%甲醇溶液即甲醇。
[0016] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，步驟（a)中所述60% -85%低級(jí)醇溶液選自60%甲 醇溶液、70 %乙醇溶液或80 %乙醇溶液，所述60 % -85 %丙酮溶液是80 %丙酮溶液。
[0017] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，步驟（c)、（e)中所述60% -80%低級(jí)醇溶液選自 75 %甲醇溶液、70 %乙醇溶液或75 %乙醇溶液，所述60 % -80 %丙酮溶液是80 %丙酮溶液。
[0018] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，步步驟（e)中所述10% -25%低級(jí)醇溶液選自25% 甲醇溶液、10%乙醇溶液或15%乙醇溶液，所述10% -25%丙酮溶液是20%丙酮溶液。
[0019] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，步驟（f)中所述10%-30%低級(jí)醇溶液是30%甲醇， 所述10% -30 %丙酮溶液是20 %丙酮溶液。
[0020] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，步驟（g)中所述70%-100%低級(jí)醇溶液選自甲醇或 95 %乙醇溶液，所述70% -100 %丙酮溶液是丙酮。
[0021] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，步驟（b)和（f)所述冷藏溫度為0-KTC。
[0022] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述大孔樹脂柱選自ro-100大孔樹脂柱、HPD-500 大孔樹脂柱、HPD-600大孔樹脂柱、AB-8大孔樹脂柱、DM130大孔樹脂柱、D101大孔樹脂柱 或HLX-38大孔樹脂柱。
[0023] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述水為純化水。
[0024] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，步驟（c)和（e)中所述水洗脫體積為1-2倍柱體積.
[0025] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，步驟（f)和（g)中所述干燥選自真空干燥、噴霧干 燥、微波干燥、冷凍干燥或常壓干燥。
[0026] 本發(fā)明的銀杏葉提取物的制備方法通過兩次樹脂純化和兩次沉淀處理很好地解 決了銀杏葉提取物的水溶性問題，而且還能保證總黃酮醇苷和內(nèi)酯的含量在限度要求以 內(nèi)，并在兩次樹脂純化之間增加煮沸步驟，更加有效地去除了銀杏葉提取物中的蛋白等雜 質(zhì)，更加利于后續(xù)的處理。發(fā)明人通過比較發(fā)現(xiàn)，煮沸后靜置過濾與直接過濾和室溫靜置 后過濾相比，銀杏葉提取物中總黃酮醇苷含量可以提高1.5%，含萜類內(nèi)酯含量可以提高 1%。
[0027] 本發(fā)明的銀杏葉提取物的制備方法通過兩次樹脂吸附和純化水洗脫的方法實(shí)現(xiàn) 了降低熾灼殘?jiān)康哪康模逸^現(xiàn)有的使用吸附劑硅藻土的方法更加簡便。
[0028] 本發(fā)明的銀杏葉提取物的制備方法首次在水溶性精制過程中使用了低溫條件 (_25°C?-10°C )，該低溫條件可有效降低雜質(zhì)在醇溶液或丙酮溶液中的溶解度從而使其 析出，從而進(jìn)一步提高銀杏葉提取物中總黃酮醇苷和含萜類內(nèi)酯含量，提高產(chǎn)品質(zhì)量。
[0029] 經(jīng)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明制備的銀杏葉提取物中：總黃酮醇苷含量> 24%、總 內(nèi)酯含量彡9. 5%、熾灼殘?jiān)?. 3%、原花青素彡0. 3%、總銀杏酚酸含量彡lppm且冷水溶 解度彡5%。
[0030] 本發(fā)明的銀杏葉提取物的制備方法具有工藝過程簡單、容易操作、不使用其他吸 附劑和有機(jī)溶劑萃取、相對(duì)安全可靠、對(duì)設(shè)備的要求相對(duì)較低、利于車間工人操作、產(chǎn)品的 質(zhì)量穩(wěn)定等特點(diǎn)。其產(chǎn)品具有水溶性、低酚酸、低花青素、低熾灼殘?jiān)奶攸c(diǎn)，其中：銀杏 酸的含量降低至< lppm，不僅滿足國內(nèi)的需求，也可以達(dá)到歐盟的標(biāo)準(zhǔn)；原花青素的含量 < 0. 3%，基本實(shí)現(xiàn)了對(duì)原花青素的控制，減少了銀杏葉提取物注射用制劑因原花青素而產(chǎn) 生的注射刺激性。 具體實(shí)施方案
[0031] 以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步解釋和說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主 題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。在不脫離本發(fā)明上述思想情況下，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知 識(shí)和慣用手段做出的各種替換或變更，均應(yīng)包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。 實(shí)施例1
[0032] 稱取江蘇產(chǎn)銀杏葉1kg，粗粉碎，加入8倍量的70%乙醇溶液，60°C溫浸提取4小 時(shí)，提取3次，濾過，得到提取液，真空濃縮（-0. 07?-0. 09MPa，60°C )至藥材量體積，然后 加入藥材量4倍的純化水，0-10°C冷藏靜置24小時(shí)后，抽取上清液過濾，濾液上HPD-500大 孔樹脂柱，用1L純化水洗脫雜質(zhì)，再用3L75 %乙醇洗脫，收集洗脫液，真空濃縮至無醇味， 加入藥材量2倍量的純化水，煮沸5分鐘，涼至室溫后靜置12小時(shí)，過濾，濾液上第二根 HPD-500大孔樹脂柱，用1L純化水洗脫雜質(zhì)，再用1L10 %的乙醇洗脫雜質(zhì)，最后用3L70 %乙 醇洗脫，收集洗脫液，真空濃縮至干，粉碎，得到棕黃色粉末30g。將干燥粉末加入600ml純 化水中，加熱溶解，涼至室溫，〇-l〇°C冷藏靜置24h，過濾，真空濃縮至100ml，然后加入95% 乙醇，調(diào)節(jié)乙醇含量為70%，-20°C冷藏24h后過濾，真空濃縮至干，粉碎，得到淺黃色銀杏 葉提取物粉末26g。根據(jù)2010版中國藥典一部銀杏葉提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)，其中原花青素 采用分光光度-鹽酸正丁醇法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下：總黃酮醇苷含量36. 5%，總內(nèi)酯含量 10. 4 %，，熾灼殘?jiān)?. 1 %，原花青素0. 2 %，總銀杏酚酸含量0. 25ppm且冷水溶解度彡5 %。 實(shí)施例2
[0033] 稱取重慶產(chǎn)銀杏葉1kg，粗粉碎，加入6倍量的80%乙醇溶液，65°C溫浸提取2小 時(shí)，提取4次，濾過，得到提取液，真空濃縮（-0. 07?-0. 09MPa，65°C )至0. 5倍藥材量體積， 然后加入藥材量6倍的純化水，0-KTC冷藏靜置48小時(shí)后，抽取上清液過濾，濾液上AB-8 大孔樹脂柱，用1. 5L純化水洗脫雜質(zhì)，再用4L70 %乙醇洗脫，收集洗脫液，真空濃縮至無醇 味，加入藥材量4倍量的純化水，煮沸10分鐘，涼至室溫后靜置24小時(shí)，過濾，濾液上第二 根AB-8大孔樹脂柱，用1.5L純化水洗脫雜質(zhì)，再用1L15%乙醇洗脫雜質(zhì)，最后用4L70%乙 醇洗脫，收集洗脫液，真空濃縮至干，粉碎。得到棕黃色粉末33g。將干燥粉末加入660ml純 化水中，加熱溶解，涼至室溫，〇-l〇°C冷藏靜置48h，過濾，真空濃縮至110ml，然后加入95% 乙醇，調(diào)節(jié)乙醇含量為80%，-10°C冷藏48h后過濾，真空濃縮至干，粉碎，得到淺黃色銀杏 葉提取物粉末24g。根據(jù)2010版中國藥典一部銀杏葉提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)，，其中原花青 素采用分光光度-鹽酸正丁醇法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下：總黃酮醇苷含量34. 3%，總內(nèi)酯含量 9. 5 %，熾灼殘?jiān)?. 2 %，原花青素0. 15 %，總銀杏酚酸含量0. 5ppm且冷水溶解度彡5 %。 實(shí)施例3
[0034] 稱取重慶產(chǎn)銀杏葉1kg，粗粉碎，加入10倍量的60%甲醇溶液，50°C溫浸提取3小 時(shí)，提取3次，濾過，得到提取液，真空濃縮（-0. 07?-0. 09MPa，50°C )至2倍藥材量體積，然 后加入藥材量4倍的純化水，0-10°C冷藏靜置36小時(shí)后，抽取上清液過濾，濾液上HPD-500 大孔樹脂柱，用1L純化水洗脫雜質(zhì)，再用3L75%甲醇洗脫，收集洗脫液，真空濃縮至無醇 味，加入藥材量3倍量的純化水，煮沸1分鐘，涼至室溫后靜置24小時(shí)，過濾，濾液上第二根 AB-8大孔樹脂柱，用1L純化水洗脫雜質(zhì)，再用1L25%甲醇洗脫雜質(zhì)，最后用3L75%甲醇洗 脫，收集洗脫液，真空濃縮至干，粉碎。得到棕黃色粉末42g。將干燥粉末加入840ml30%甲 醇溶液中，加熱溶解，涼至室溫，〇-l〇°C冷藏靜置24h，過濾，真空濃縮至140ml，然后加入甲 醇，調(diào)節(jié)甲醇含量為75%，-20°C冷藏24h后過濾，真空濃縮至干，粉碎，得到黃色銀杏葉提 取物粉末27g。根據(jù)2010版中國藥典一部銀杏葉提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)，其中原花青素采用 分光光度-鹽酸正丁醇法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下：總黃酮醇苷含量30. 7%，總內(nèi)酯含量9. 8%， 熾灼殘?jiān)?. 1 %，原花青素0. 1 %，總銀杏酚酸含量0. 3ppm且冷水溶解度彡5 %。 實(shí)施例4
[0035] 稱取江蘇產(chǎn)銀杏葉1kg，粗粉碎，加入6倍量的80%丙酮溶液，80°C溫浸提取4小 時(shí)，提取2次，濾過，得到提取液，真空濃縮（-0. 07?-0. 09MPa，80°C )至藥材量體積，然后 加入藥材量4倍的純化水，0-10°C冷藏靜置48小時(shí)后，抽取上清液過濾，濾液上DM130大 孔樹脂柱，用1L純化水洗脫雜質(zhì)，再用3L80%丙酮洗脫，收集洗脫液，真空濃縮至無丙酮 味，加入藥材量3倍量的純化水，煮沸5分鐘，涼至室溫后靜置24小時(shí)，過濾，濾液上第二根 D101大孔樹脂柱，用1L純化水洗脫雜質(zhì)，再用1. 5L20%丙酮洗脫雜質(zhì)，最后用3L80%丙酮 洗脫，收集洗脫液，真空濃縮至干，粉碎。得到淺黃色粉末32g。將干燥粉末加入540ml20%
【權(quán)利要求】
1. 一種銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于，該方法包括下列步驟： (a) 用60% -85%低級(jí)醇溶液或60% -85%丙酮溶液提取銀杏葉，其中所述低級(jí)醇 溶液或丙酮溶液的體積為銀杏葉重量的6-10倍量，提取時(shí)間為2-4小時(shí)，提取溫度為 50°C -80°C，提取次數(shù)為2-4次； (b) 將步驟（a)所得提取液濃縮至藥材量的0. 5-2倍，加入藥材量4-6倍量的水，冷藏 靜置24-48小時(shí)，過濾； (c) 將步驟（b)所得濾液過大孔樹脂柱，用水洗脫雜質(zhì)，用60% -80%低級(jí)醇溶液或 60% -80%丙酮溶液洗脫，收集洗脫液； (d) 將步驟（c)所得洗脫液濃縮至無有機(jī)溶劑，加入藥材量2-4倍量的水，煮沸1-10分 鐘，冷卻，靜置12-24小時(shí)，過濾； (e) 將步驟（d)所得濾液過大孔樹脂柱，依次用水、10 % -25 %低級(jí)醇溶液或 10% -25%丙酮溶液洗脫雜質(zhì)，然后用60% -80%低級(jí)醇溶液或60% -80%丙酮溶液洗脫， 收集洗脫液； (f) 將步驟（e)所得洗脫液濃縮干燥，溶于20倍量水或10%-30%低級(jí)醇溶液或 10% -30%丙酮溶液中，冷卻，冷藏靜置12-48小時(shí)，過濾； (g) 將步驟（f)所得濾液濃縮，加入70% -100%低級(jí)醇溶液或70% -100%丙酮溶液 至有機(jī)溶劑含量為70-80%，-25°C?-10°C沉淀12-48小時(shí)，過濾，濾液濃縮干燥，粉碎，過 篩，得銀杏葉提取物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（a)、（c)、（e)、⑴和（g)中所 述低級(jí)醇選自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇或己醇，優(yōu)選甲醇或乙醇。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于，步驟（a)中所述 60 % -85 %低級(jí)醇溶液選自60 %甲醇溶液、70 %乙醇溶液或80 %乙醇溶液，所述60 % -85 % 丙酮溶液是80%丙酮溶液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于，步驟（c)、（e)中所述 60 % -80 %低級(jí)醇溶液選自75 %甲醇溶液、70 %乙醇溶液或75 %乙醇溶液，所述60 % -80 % 丙酮溶液是80%丙酮溶液。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的制備方法，其特征在于，步驟（e)中所述10%-25%低 級(jí)醇溶液選自25%甲醇溶液、10%乙醇溶液或15%乙醇溶液，所述10% -25%丙酮溶液是 20%丙酮溶液。
6. 要根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（f)中所述10%-30%低級(jí)醇 溶液是30%甲醇，所述10% -30%丙酮溶液是20%丙酮溶液。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于，步驟（g)中所述 70% -100%低級(jí)醇溶液選自甲醇或95%乙醇溶液，所述70% -100%丙酮溶液是丙酮。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于，步驟（b)和⑴所述 冷藏溫度為0-10 °C。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于，所述大孔樹脂柱選 自ro-100大孔樹脂柱、HPD-500大孔樹脂柱、HPD-600大孔樹脂柱、AB-8大孔樹脂柱、DM130 大孔樹脂柱、D101大孔樹脂柱或HLX-38大孔樹脂柱。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于，所述水為純化水。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于，步驟（C)和（e)中 所述水洗脫體積為1-2倍柱體積。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于，步驟（f)和（g)中 所述干燥選自真空干燥、噴霧干燥、微波干燥、冷凍干燥或常壓干燥。
13. 根據(jù)權(quán)利要求1-12中任意一項(xiàng)所述的銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于，所 述銀杏葉提取物為總黃酮醇苷含量> 24%，總內(nèi)酯含量> 9. 5 %，熾灼殘?jiān)?lt; 0. 3%，原花 青素< 0. 3%，總銀杏酚酸含量< lppm且冷水溶解度> 5%的銀杏葉提取物。
【文檔編號(hào)】A61P39/06GK104095889SQ201410329028
【公開日】2014年10月15日 申請(qǐng)日期:2014年7月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月11日
【發(fā)明者】馮玉康, 孫勝斌, 姜國志, 劉鐵軍, 張巖巖, 霍寶軍, 陳鐘, 李振江 申請(qǐng)人:神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司