麥角甾醇過(guò)氧化物與紫杉醇在殺傷Hela癌細(xì)胞方面的協(xié)同作用及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種殺傷Hela癌細(xì)胞的組合物。該組合物由麥角甾醇過(guò)氧化物與紫杉醇組成,具有協(xié)同抑制Hela癌細(xì)胞增殖作用,特別是在6.25-12.5μg/ml麥角甾醇過(guò)氧化物:0.025-0.1μg/ml紫杉醇的濃度范圍內(nèi)協(xié)同作用顯著。該組合物可大幅降低紫杉醇用量，降低費(fèi)用和毒副作用并可能對(duì)紫杉醇有抗藥性的癌細(xì)胞株有效。
【專利說(shuō)明】麥角留醇過(guò)氧化物與紫杉醇在殺傷Hela癌細(xì)胞方面的協(xié) 同作用及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)及食品化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及2種天然產(chǎn)物：麥角留醇過(guò) 氧化物與紫杉醇。麥角留醇過(guò)氧化物可增強(qiáng)紫杉醇對(duì)癌細(xì)胞增殖的抑制作用。

【背景技術(shù)】
[0002] 麥角留醇過(guò)氧化物（EP)(圖1)是藥用真菌及食用蘑菇中廣泛存在的天然成分 (Chen Y. K. , Kuo Y. H., Chiang Β. Η., Lo J. Μ., Sheen L. Y. (2009). Cytotoxic activities of 9, 11-dehydroergosterol peroxide and ergosterol peroxide from the fermentation mycelia of ganoderma lucidum cultivated in the medium containing leguminous plants on Hep 3B cells. Journal of agricultural & food chemistry, 57(13)，5713-5719. ; Kobori M. , Yoshida M. , Kameyama, M. 0. , Shinmoto. H. (2007). Ergosterol peroxide from an edible mushroom suppresses inflammatory responses in RAW264.7 macrophages and growth of HT29 colon adenocarcinoma cells. British Journal of Pharmacology，150(2)，209-219)。靈芝等藥用真菌已用 作癌癥患者的食品補(bǔ)充劑（Sliva D. (2003). 艦 腫（Reishi) in cancer treatment. Integrative Cancer Therapies，2(4)，358-364·).通常認(rèn)為多糖和三硝成 分為靈芝的抗癌活性成分，關(guān)于靈芝中麥角留醇過(guò)氧化物的活性貢獻(xiàn)尚沒(méi)有報(bào)道。其他 生物來(lái)源的EP曾報(bào)道有誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的活性（Takei T.，Yoshida M.，Kameyama M. 0. , Kobori Μ. (2005). Ergosterol peroxide, an apoptosis - inducing component isolated from Sarcodon aspratus (Berk.) S. Ito. Bioscience, Biotechnology & Biochemistry，69(1)，212-215.)，但沒(méi)有關(guān)于麥角留醇過(guò)氧化物與臨床抗癌藥物聯(lián)合作 用的報(bào)道. 紫杉醇（圖1)是臨床常用的廣譜抗癌藥物，尤其對(duì)乳腺癌和子宮癌效果好（Wang T. H. , Wang H. S. , Soong Y. K. (2000). Paclitaxel-induced cell death, where the cell cycle and apoptosis come together. Cancer，88(11)，2619-2628·)。紫杉醇結(jié)合 到微管抑制細(xì)胞的G2/M期，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。臨床使用紫杉醇的最大問(wèn)題是其毒副作 用和耐藥性，另外，昂貴的價(jià)格也對(duì)患者造成負(fù)擔(dān)。近些年，藥物聯(lián)合使用成為治療癌癥的 新策略。聯(lián)合使用作用于不同靶點(diǎn)的藥物常會(huì)產(chǎn)生協(xié)同作用使藥物在較低劑量即可發(fā)揮藥 效，從而減少藥物的毒副作用；聯(lián)合用藥也可對(duì)一些耐藥癌株有效。臨床上已見(jiàn)紫杉醇與其 他藥物聯(lián)合使用的例子，如，文獻(xiàn)報(bào)道紫杉醇-環(huán)磷酰胺聯(lián)用比環(huán)磷酰胺-順鉬聯(lián)用對(duì)子宮 癌的效果更好（Mcguire W. P.，Hoskins W. J.，Brady M. F.，Paul B. S.，Kucera R.， Partridge E. E., Look K. Y., Pearson D. C., Davidson M. (1996). Cyclophosphamide and cisplatin compared with paclitaxel and cisplatin in patients with stage III and stage IV ovarian cancer. The New England Journal of Medicine, 334(1)， 1-6.)。紫杉醇-貝伐單抗聯(lián)用與單用紫杉醇相比可顯著延長(zhǎng)轉(zhuǎn)移性乳腺癌的無(wú)進(jìn)展 生存期，但是，這些聯(lián)合抗癌方案也常常產(chǎn)生一些副作用，如：引起神經(jīng)病變、感染和疲 勞（Miller K.，Wang Μ· M.，Gralow J.，Dickler M.，Cobleigh M.，Perez Ε· A.， Shenkier T. , Celia D. , Davidson N. E. (2007). Paclitaxel plus bevacizumab versus paclitaxel alone for metastatic breast cancer. The New England Journal of Medicine, 357(26)，2666-2676.)。將毒性很低或無(wú)毒的天然產(chǎn)物與紫杉醇聯(lián)用可能 成為癌癥治療的新希望。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種具有協(xié)同作用，可降低紫杉醇用量從而降低其化療副 作用和費(fèi)用的組合藥物。
[0004] 本發(fā)明的組合藥物由麥角留醇過(guò)氧化物與紫杉醇組成，在麥角留醇過(guò)氧化物-紫 杉醇比例為6. 25-12. 5 μ g/ml :0. 025-0. 1 μ g/ml的濃度內(nèi)協(xié)同作用顯著。
[0005] 實(shí)驗(yàn)證明，麥角留醇過(guò)氧化物可增加紫杉醇進(jìn)入癌細(xì)胞濃度，增加對(duì)癌細(xì)胞的選 擇性抑制作用，降低對(duì)正常細(xì)胞的毒性。本發(fā)明的組合藥物協(xié)同抑制Hela細(xì)胞生長(zhǎng)增殖， 顯同樣活性時(shí)所需紫杉醇的用量大幅降低(可達(dá)紫杉醇單獨(dú)使用量的1/10)，從而大幅降低 費(fèi)用和紫杉醇的毒副作用。
[0006]

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】：圖1麥角甾醇過(guò)氧化物與紫杉醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)式； 圖2紫杉醇、麥角留醇過(guò)氧化物及紫杉醇+麥角留醇過(guò)氧化物對(duì)Hela細(xì)胞的增殖抑制 率（72小時(shí)；濃度μ g/ml); 圖3. A:用紫杉醇（10 μ g/ml)或紫杉醇（10 μ g/ml) +麥角甾醇過(guò)氧化物（10 μ g/ ml)處理Hela細(xì)胞2. 5小時(shí)后，用UHPLC-MS檢測(cè)到的紫杉醇峰；B.用紫杉醇（10 μ g/ml) 或紫杉醇（10 μ g/ml) +麥角甾醇過(guò)氧化物（10 μ g/ml)處理Hela或GES-1細(xì)胞2. 5小時(shí) 后檢測(cè)到的細(xì)胞內(nèi)紫杉醇含量； 圖4.麥角甾醇過(guò)氧化物處理72小時(shí)后對(duì)不同癌細(xì)胞及正常細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，X軸 為麥角甾醇過(guò)氧化物的濃度（μ g/ml); 圖5. Hela癌細(xì)胞與GES-1正常細(xì)胞中的總SOD活性；（+):用20 μ g/ml麥角甾醇過(guò) 氧化物處理18小時(shí)； 圖6. A:無(wú)細(xì)胞體系中麥角留醇過(guò)氧化物與S0D反應(yīng)后的相對(duì)濃度(麥角留醇過(guò)氧化 物在不含S0D的緩沖液中的濃度定義為1);B :用20 μ g/ml麥角甾醇過(guò)氧化物處理細(xì)胞6 小時(shí)后的麥角留醇過(guò)氧化物相對(duì)含量(麥角留醇過(guò)氧化物在GES-1正常細(xì)胞中的含量定義 為1)。
[0007] 表1.麥角留醇過(guò)氧化物在藥用真菌與食用蘑菇中的含量

【權(quán)利要求】
1. 一種抑制Hela癌細(xì)胞增殖的組合物，其特征在于該組合物由麥角留醇過(guò)氧化物與 紫杉醇組成。
2. 權(quán)利要求1所述組合物，其特征在于麥角留醇過(guò)氧化物與紫杉醇有協(xié)同抑制Hela癌 細(xì)胞增殖作用，特別是麥角甾醇過(guò)氧化物：紫杉醇的濃度在6. 25-12. 5 μ g/ml :0. 025-0. 1 μ g/ml范圍內(nèi)，兩物質(zhì)協(xié)同作用顯著。
3. 權(quán)利要求1所述組合物，其特征在于該組合物對(duì)癌細(xì)胞增殖的抑制力大于對(duì)正常細(xì) 胞增殖的抑制力，原理與正常細(xì)胞中SOD表達(dá)水平較高，可有效代謝麥角留醇過(guò)氧化物有 關(guān)。
4. 權(quán)利要求1所述組合物，其特征在于麥角留醇過(guò)氧化物可以增加紫杉醇進(jìn)入癌細(xì)胞 的能力。
5. 權(quán)利要求1所述組合物，其特征在該組合物可大幅降低紫杉醇的用量，降低費(fèi)用和 毒副作用并可能對(duì)有抗紫杉醇藥性的癌細(xì)胞株有效。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK104083382SQ201410311586
【公開(kāi)日】2014年10月8日 申請(qǐng)日期:2014年7月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月2日
【發(fā)明者】馬超美, 高杰, 鄭華川, 阿拉坦高勒 申請(qǐng)人:內(nèi)蒙古大學(xué)