一種納米脂質(zhì)體、其制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種高效安全的可在體內(nèi)外轉(zhuǎn)染基因的新型的納米脂質(zhì)體，采用薄膜分散法，將氨基甲?；懝檀寂c磷脂酰乙醇胺按1:1-3的摩爾比混合作為制備脂質(zhì)體的主要材料，同時利用超聲波儀處理得到合適粒徑的納米脂質(zhì)體。該脂質(zhì)體可包裹外源基因或質(zhì)粒，在體外，可安全高效轉(zhuǎn)染多種細(xì)胞；在體內(nèi)，易穿過腫瘤毛細(xì)血管壁，可在腫瘤部位聚集靶向腫瘤細(xì)胞。本發(fā)明提供的新型納米脂質(zhì)體具有低毒、轉(zhuǎn)染效率高、使用方便等優(yōu)點(diǎn)，能攜帶質(zhì)粒進(jìn)入體內(nèi)，特別具有高效腫瘤靶向特性，可發(fā)揮顯著的抗腫瘤作用，用于治療肝癌、肺癌、胃癌等，應(yīng)用前景廣闊。
【專利說明】一種納米脂質(zhì)體、其制備方法及應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及基因工程及藥物制劑領(lǐng)域，具體地說，涉及一種新型的納米脂質(zhì)體、其 制備方法及應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，隨著醫(yī)療技術(shù)的飛速進(jìn)展，科學(xué)家們不斷研發(fā)治療疾病的新藥物和新手 段，但是對于癌癥等疾病的治療，尚缺乏安全有效的治療方法?；蛑委熥鳛橐环N全新的和 革命性的治療手段，是治愈癌癥、先天性缺陷病等疑難雜癥的最佳選擇，基因治療藥物也被 稱為21世紀(jì)的藥物。然而，基因傳遞一直是阻礙基因藥物發(fā)展和臨床試驗(yàn)的瓶頸，因此，獲 得一種高效、安全、使用方便的基因傳遞載體，成為基因治療成功與否的關(guān)鍵。
[0003] 目前常用的基因?qū)敕椒ㄓ屑∪庵苯幼⑸浞ā⒒驑寣?dǎo)入法、體內(nèi)電脈沖法和脂 質(zhì)體導(dǎo)入法等。肌注法，簡單可行，但該方法導(dǎo)入的效率低。基因槍即所謂的顆粒介導(dǎo)的 表皮呈遞（Particle Mediated Epidermal Delivery, PMED)技術(shù)和電脈沖技術(shù)，操作雖簡 單，但儀器成本高；脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是一種體外轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞常用方法，脂質(zhì)體可以結(jié)合DNA分 子而包封住，比較穩(wěn)定，保護(hù)質(zhì)粒不易被降解，易于透過細(xì)胞膜，大大提高DNA進(jìn)入細(xì)胞的 效率。
[0004] 脂質(zhì)體作為新型基因藥物載體具有許多的優(yōu)點(diǎn)，當(dāng)藥物被脂質(zhì)體包裹后，可降低 藥物毒性，減少藥物用量，大大提高藥物的靶向性，增強(qiáng)藥物的療效。目前市場上流通的脂 質(zhì)體多為普通脂質(zhì)體，在某些腫瘤細(xì)胞或正常細(xì)胞中基本無轉(zhuǎn)染效率，更無法應(yīng)用于動物 體內(nèi)，而且作為載體，目前使用的脂質(zhì)體靶向分布不理想，穩(wěn)定性較差。因此，獲得一種高 效、安全、使用方便的基因傳遞載體，無疑成為基因治療成功與否的關(guān)鍵。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種高效安全的可在體內(nèi)外轉(zhuǎn)染基因的新型的納米脂質(zhì)體。
[0006] 本發(fā)明的另一目的是提供所述納米脂質(zhì)體的制備方法及應(yīng)用。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明首先提供一種納米脂質(zhì)體的制備方法，將氨基甲酰 基膽固醇與磷脂酰乙醇胺按1:1-3的摩爾比混合，加入有機(jī)溶劑溶解，使氨基甲?；懝?醇的濃度為l_4mg/mL，將上述溶液置于旋轉(zhuǎn)燒瓶中，在40-70°C水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到一層 附著于燒瓶內(nèi)壁上的脂膜；然后加入水，使氨基甲?；懝檀寂c磷脂酰乙醇胺的摩爾濃度 為10-30mM/L，所得溶液經(jīng)超聲處理或高壓均質(zhì)，收集通過0. 22 μ m的聚碳酸酯膜濾膜的濾 液即得納米脂質(zhì)體。其中，所述有機(jī)溶劑為氯仿與甲醇按1-2:1的體積比配制的混合液。
[0008] 前述制備方法中，超聲處理采用200W超聲波細(xì)胞破碎儀，超聲5s，間歇5s，共超聲 處理 5-lOmin。
[0009] 優(yōu)選地，所述納米脂質(zhì)體的制備方法為：將氨基甲?；懝檀寂c磷脂酰乙醇胺按 1:2的摩爾比混合，加入有機(jī)溶劑溶解，使氨基甲酰基膽固醇的濃度為1. 18mg/mL，將上述 溶液置于旋轉(zhuǎn)燒瓶中，在60°C水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到一層附著于燒瓶內(nèi)壁上的脂膜；然后 加入雙蒸水，使氨基甲?；懝檀寂c磷脂酰乙醇胺的摩爾濃度為20mM/L，所得溶液經(jīng)超聲 處理5min或高壓均質(zhì)5次，依次通過0· 45 μ m、0. 22 μ m的濾膜，收集通過0· 22 μ m的聚碳 酸酯膜濾膜的濾液即得納米脂質(zhì)體。其中所述有機(jī)溶劑為氯仿與甲醇按等體積比配制的混 合液。
[0010] 本發(fā)明還提供根據(jù)上述方法的制備的新型納米脂質(zhì)體。所述納米脂質(zhì)體的平均粒 徑約為l〇〇nm。 toon] 本發(fā)明還提供所述納米脂質(zhì)體在細(xì)胞轉(zhuǎn)染中的應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明還提供所述納米脂質(zhì)體在基因治療中的應(yīng)用。
[0013] 本發(fā)明還提供所述納米脂質(zhì)體在制備基因治療藥物中的應(yīng)用。
[0014] 本發(fā)明進(jìn)一步提供一種基因藥物，所述基因藥物以上述納米脂質(zhì)體作為載體。
[0015] 本發(fā)明中制備的納米脂質(zhì)體可包裹外源基因或質(zhì)粒，在體外，可安全高效轉(zhuǎn)染多 種細(xì)胞；在體內(nèi)，易穿過腫瘤毛細(xì)血管壁，可在腫瘤部位聚集靶向腫瘤細(xì)胞。
[0016] 可將本發(fā)明的新型納米脂質(zhì)體放入潔凈的離心管中，用氮?dú)獬涮铍x心管，將脂質(zhì) 體存放于離心管中，置于4°C避光保存。
[0017] 本發(fā)明人經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)探索，將氨基甲?；懝檀寂c磷脂酰乙醇胺按1:1-3的摩 爾比混合作為制備脂質(zhì)體的主要材料，同時利用超聲波儀處理，得到合適粒徑的納米脂質(zhì) 體。該脂質(zhì)體粒徑適當(dāng)，平均粒徑約為l〇〇nm，容許其穿透極細(xì)的毛細(xì)血管并被細(xì)胞攝取。 脂質(zhì)體與基因或質(zhì)粒包裹后，平均粒徑約為244 (150?300) nm。在體外，可安全高效轉(zhuǎn)染各 種細(xì)胞；在體內(nèi)，易穿過腫瘤毛細(xì)血管壁，可在腫瘤部位聚集靶向腫瘤細(xì)胞，使其產(chǎn)生高效 轉(zhuǎn)染并產(chǎn)生抗腫瘤效應(yīng)。另外，本發(fā)明采用薄膜分散法制備的脂質(zhì)體，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。
[0018] 本發(fā)明提供的新型納米脂質(zhì)體具有低毒、轉(zhuǎn)染效率高、使用方便等優(yōu)點(diǎn)，能攜帶質(zhì) 粒進(jìn)入體內(nèi)，特別具有高效腫瘤靶向特性，可發(fā)揮顯著的抗腫瘤作用，用于治療肝癌、肺癌、 胃癌等，應(yīng)用前景廣闊。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例4中通過動態(tài)光散射測得的本發(fā)明的新型納米脂質(zhì)體的 粒徑及其分布，其中脂質(zhì)體即指空白納米脂質(zhì)體，脂質(zhì)體-TVB是指納米脂質(zhì)體包裹了 T-VISA-BiKDD 質(zhì)粒。
[0020] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例5中利用新型納米脂質(zhì)體包裹含GFP的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肺癌細(xì)胞 H1299圖；其中，左圖為本發(fā)明的新型脂質(zhì)體包裹含GFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，用熒光顯微鏡檢 測成功轉(zhuǎn)染GFP的細(xì)胞（呈綠色熒光）；右圖為本發(fā)明的新型脂質(zhì)體包裹含GFP的質(zhì)粒轉(zhuǎn) 染細(xì)胞后，在檢測到的成功轉(zhuǎn)染GFP細(xì)胞的同一視野下，拍攝全細(xì)胞狀態(tài)。
[0021] 圖3為本發(fā)明實(shí)施例6中新型納米脂質(zhì)體包裹T-VISA-Luc質(zhì)粒后在小鼠體內(nèi)肺 癌細(xì)胞中高效高特異性表達(dá)靶基因 Luciferase。

【具體實(shí)施方式】
[0022] 以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例 中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。
[0023] 實(shí)施例1新型納米脂質(zhì)體及其制備方法
[0024] 新型納米脂質(zhì)體的制備方法如下：
[0025] 1、從4°C冰箱中取出3β [N_(N'，N'-二甲基氨基乙基）]氨甲酰基-膽固醇 (DC-CH0L)與二油?；字Ｒ掖及罚―OPE)，恢復(fù)至室溫，水浴加熱旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀至60°C。
[0026] 2、稱取 33mg DC-CH0L 和 99mg DOPE，放入 250mL 圓底燒瓶中。
[0027] 3、向圓底燒瓶中加入14mL氯仿和14mL甲醇。
[0028] 4、旋轉(zhuǎn)燒瓶，使其充分混合。
[0029] 5、打開真空泵，在60°C的水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1.2h，充分除盡有機(jī)溶劑，并在燒瓶壁 上形成一層脂質(zhì)薄膜。
[0030] 6、用封口膜封住瓶口，將圓底燒瓶置于真空干燥器中，室溫下過夜，避光。
[0031] 7、向圓底燒瓶中，加雙蒸水8.8mL。室溫放置15min。
[0032] 8、在水浴超聲波清洗器（200w)中對圓底燒瓶進(jìn)行超聲處理5min，再使用超聲波 細(xì)胞破碎儀（200w)超聲5min (超聲5s，間歇5s)。
[0033] 9、將所制得的脂質(zhì)體依次通過0. 45 μ m和0. 22 μ m的濾膜，最后將脂質(zhì)體放入潔 凈的離心管中，即得新型納米脂質(zhì)體。
[0034] 10、用氮?dú)獬涮铍x心管10s，可將上述制備的新型納米脂質(zhì)體存放于離心管中，置 于4°C避光保存?zhèn)溆茫ǚ乐箍諝膺M(jìn)入）。
[0035] 實(shí)施例2新型納米脂質(zhì)體及其制備方法
[0036] 新型納米脂質(zhì)體的制備方法如下：
[0037] 1、從4°C冰箱中取出3β[Ν_(Ν'，N'-二甲基氨基乙基）]氨甲?；?膽固醇 (DC-CH0L)與二油酰基磷脂酰乙醇胺（DOPE)，恢復(fù)至室溫，水浴加熱旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀至40°C。
[0038] 2、稱取 33mg DC-CH0L 和 49. 6mg DOPE，放入 250mL 圓底燒瓶中。
[0039] 3、向圓底燒瓶中加入10. 5mL氯仿和10. 5mL甲醇。
[0040] 4、旋轉(zhuǎn)燒瓶，使其充分混合。
[0041] 5、打開真空泵，在40°C的水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)2. 5h，充分除盡有機(jī)溶劑，并在燒瓶壁 上形成一層脂質(zhì)薄膜。
[0042] 6、用封口膜封住瓶口，將圓底燒瓶置于真空干燥器中，室溫下過夜，避光。
[0043] 7、向圓底燒瓶中，加雙蒸水6.6mL。室溫放置lOmin。
[0044] 8、在水浴超聲波清洗器（200w)中對圓底燒瓶進(jìn)行超聲處理5min，再使用超聲波 細(xì)胞破碎儀（200w)超聲10min (超聲5s，間歇5s)。
[0045] 9、將所制得的脂質(zhì)體依次通過0. 45 μ m和0. 22 μ m的濾膜，最后將脂質(zhì)體放入潔 凈的離心管中，即得新型納米脂質(zhì)體。
[0046] 10、用氮?dú)獬涮铍x心管10s，可將上述制備的新型納米脂質(zhì)體存放于離心管中，置 于4°C避光保存?zhèn)溆茫ǚ乐箍諝膺M(jìn)入）。
[0047] 實(shí)施例3新型納米脂質(zhì)體及其制備方法
[0048] 新型納米脂質(zhì)體的制備方法如下：
[0049] 1、從4°C冰箱中取出3β[Ν_(Ν'，N'-二甲基氨基乙基）]氨甲酰基-膽固醇 (DC-CH0L)與二油?；字Ｒ掖及罚―OPE)，恢復(fù)至室溫，水浴加熱旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀至70°C。
[0050] 2、稱取 33mg DC-CH0L 和 148. 8mg DOPE，放入 250mL 圓底燒瓶中。
[0051] 3、向圓底燒瓶中加入21mL氯仿和21mL甲醇。
[0052] 4、旋轉(zhuǎn)燒瓶，使其充分混合。
[0053] 5、打開真空泵，在70°C的水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)2h，充分除盡有機(jī)溶劑，并在燒瓶壁上 形成一層脂質(zhì)薄膜。
[0054] 6、用封口膜封住瓶口，將圓底燒瓶置于真空干燥器中，室溫下過夜，避光。
[0055] 7、向圓底燒瓶中，加雙蒸水13. 2mL。室溫放置20min。
[0056] 8、在水浴超聲波清洗器（200w)中對圓底燒瓶進(jìn)行超聲處理5min，再使用超聲波 細(xì)胞破碎儀（200w)超聲lOmin (超聲5s，間歇5s)。
[0057] 9、將所制得的脂質(zhì)體依次通過0. 45 μ m和0. 22 μ m的濾膜，最后將脂質(zhì)體放入潔 凈的離心管中，即得新型納米脂質(zhì)體。
[0058] 10、用氮?dú)獬涮铍x心管10s，可將上述制備的新型納米脂質(zhì)體存放于離心管中，置 于4°C避光保存?zhèn)溆茫ǚ乐箍諝膺M(jìn)入）。
[0059] 實(shí)施例4T-VISA_BikDD脂質(zhì)體及其制備方法 [0060](一）納米脂質(zhì)體的制備
[0061] 同實(shí)施例1。
[0062] (二）脂質(zhì)體包被質(zhì)粒T-VISA-BikDD
[0063] 實(shí)驗(yàn)開始前將實(shí)驗(yàn)所用試劑（納米脂質(zhì)體、質(zhì)粒溶液、PBS)在室溫放置不少于15 分鐘；取濃度為1 μ g/ μ 1的T-VISA-BikDD質(zhì)粒溶液60 μ 1 (含有60 μ g的T-VISA-BikDD 質(zhì)粒）加入裝有40 μ 1 PBS溶液的小離心管中，用移液槍頭輕輕吹打3次，混勻，得到 100 μ 1濃度為0. 6 μ g/ μ 1的T-VISA-BikDD質(zhì)粒溶液；迅速將100 μ 1稀釋后的質(zhì)粒溶液 加入到100 μ 1濃度為8mM的納米脂質(zhì)體中（用1. 5ml小離心管保存），用移液槍頭輕輕吹 打3次，混勻，得到200 μ 1的T-VISA-BikDD質(zhì)粒-納米脂質(zhì)體混合液（其中含有60 μ g T-VISA-BikDD質(zhì)粒，質(zhì)粒濃度為0. 3 μ g/ μ 1)，混合液室溫放置20min，即得。
[0064] 最后，經(jīng)動態(tài)光散射檢測，納米脂質(zhì)體包裹質(zhì)粒后的粒徑為150nm-300nm，結(jié)果如 圖1所示。
[0065] 實(shí)施例5納米脂質(zhì)體包裹含綠色熒光蛋白基因（GFP)質(zhì)粒的細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
[0066] 將待轉(zhuǎn)染的肺癌細(xì)胞H1299,按常規(guī)方法培養(yǎng)于含10%新生小牛血清的RPMI1640 培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)染前24h時用胰酶消化貼壁細(xì)胞，重懸于含血清的RPMI1640培養(yǎng)液，按4X 104 個細(xì)胞/孔轉(zhuǎn)接于24孔培養(yǎng)板中，待細(xì)胞生長達(dá)70%融合度進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。
[0067] 將實(shí)施例1中制備的納米脂質(zhì)體，含綠色熒光蛋白質(zhì)粒（GFP-CMV)等試劑室溫放 置15-20min，肉眼可見溶液呈均勻渾濁狀但無沉淀。按一定比例混合脂質(zhì)體和質(zhì)粒（脂 質(zhì)體原濃度為8mM,推薦比例為脂質(zhì)體（μ 1):質(zhì)粒（μ g) = 1. 0-2. 5:1)。標(biāo)記管1 :加入 0· 8 μ g質(zhì)粒DNA到50 μ 1無血清培養(yǎng)基中混勻，室溫放置5min ;標(biāo)記管2 :加入1 μ 18mM納 米脂質(zhì)體到50 μ 1無血清培養(yǎng)基中混勻，室溫放置5min?？焖賹⒐?中的液體加入到管2， 上下吹打2次后，室溫下靜置20min。
[0068] 將培養(yǎng)板中的完全培養(yǎng)基去掉，加入400 μ 1無血清培養(yǎng)基，然后加入100 μ 1脂質(zhì) 體-質(zhì)?；旌弦褐量字小?7 °C，5 % C02孵育4-6小時后，將培養(yǎng)基換成有血清培養(yǎng)基，繼續(xù) 培養(yǎng)至48h后在突光顯微鏡下觀察。
[0069] 結(jié)果如圖2所示，上述納米脂質(zhì)體包裹GFP-CMV質(zhì)粒后，其轉(zhuǎn)染肺癌細(xì)胞H1299的 轉(zhuǎn)染率約為60%。
[0070] 實(shí)施例6納米脂質(zhì)體在小鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
[0071] 給Balb/c裸鼠原位接種肺癌細(xì)胞系H1299,2周后，分別取8πιΜ/50μ 1新型納米脂 質(zhì)體（實(shí)施例1中制備）和〇· 8 μ g/50 μ 1 T-VISA-Luc質(zhì)粒（中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院謝小 明教授惠贈）混合后通過尾靜脈注射到裸鼠體內(nèi)，于第5天用活體成像儀動態(tài)觀察靶基因 Luciferase的表達(dá)。結(jié)果如圖3所示，T-VISA-Luc質(zhì)粒在小鼠腫瘤組織熒光強(qiáng)度明顯較強(qiáng)， 而小鼠體內(nèi)其它組織器官未見熒光，提示T-VISA-Luc在腫瘤組織特異高表達(dá)，表明新型納 米脂質(zhì)體可以轉(zhuǎn)染T-VISA-Luc質(zhì)粒到小鼠體內(nèi)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，本發(fā)明的新型納米脂質(zhì)體 在動物體內(nèi)呈現(xiàn)高轉(zhuǎn)染率，可用于活體動物實(shí)驗(yàn)研究。
[〇〇72] 雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在 本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因 此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
【權(quán)利要求】
1. 一種納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，將氨基甲?；懝檀寂c磷脂酰乙醇胺按 1:1-3的摩爾比混合，加入有機(jī)溶劑溶解，使氨基甲?；懝檀嫉臐舛葹閘-4mg/mL，將上述 溶液置于旋轉(zhuǎn)燒瓶中，在40-70°C水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到一層附著于燒瓶內(nèi)壁上的脂膜；然 后加入水，使氨基甲?；懝檀寂c磷脂酰乙醇胺的摩爾濃度為10_30mM/L，所得溶液經(jīng)超聲 處理，收集通過0. 22 μ m的聚碳酸酯膜濾膜的濾液即得納米脂質(zhì)體； 其中所述有機(jī)溶劑為氯仿與甲醇按1-2:1的體積比配制的混合液。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，超聲處理采用200w超聲波細(xì)胞破碎 儀，超聲5s，間歇5s，共超聲處理5-10min。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，將氨基甲?；懝檀寂c磷脂酰乙 醇胺按1:2的摩爾比混合，加入有機(jī)溶劑溶解，使氨基甲?；懝檀嫉臐舛葹?. 18mg/mL， 將上述溶液置于旋轉(zhuǎn)燒瓶中，在60°C水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到一層附著于燒瓶內(nèi)壁上的脂膜； 然后加入雙蒸水，使氨基甲?；懝檀寂c磷脂酰乙醇胺的摩爾濃度為20mM/L，所得溶液經(jīng) 超聲處理5min或高壓均質(zhì)5次，依次通過0· 45 μ m、0. 22 μ m的濾膜，收集通過0· 22 μ m的 聚碳酸酯膜濾膜的濾液即得納米脂質(zhì)體； 其中所述有機(jī)溶劑為氯仿與甲醇按等體積比配制的混合液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述方法的制備的納米脂質(zhì)體。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述納米脂質(zhì)體，其特征在于，所述納米脂質(zhì)體的平均粒徑為 100nm。
6. 權(quán)利要求4或5所述的納米脂質(zhì)體在細(xì)胞轉(zhuǎn)染中的應(yīng)用。
7. 權(quán)利要求4或5所述的納米脂質(zhì)體在制備基因治療藥物中的應(yīng)用。
8. -種基因藥物，其特征在于，所述基因藥物以權(quán)利要求4或5所述的納米脂質(zhì)體為載 體。
【文檔編號】A61K47/28GK104043134SQ201410310727
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年6月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月30日
【發(fā)明者】莫國玉, 陳光明, 饒桂榮, 杜桂容, 王秋云 申請人:廣州市軍科泰特醫(yī)藥科技有限公司