一種治療溶血性貧血的藥物組合物及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種治療溶血性貧血的藥物組合物及其應用，該藥物組合物中活性成分由白頭翁水提物和依維莫司組成，優(yōu)選白頭翁水提物和依維莫司的用量比為25-100：1。本發(fā)明為治療溶血性貧血提供了新的候選藥物，具有非常重要的臨床意義。
【專利說明】一種治療溶血性貧血的藥物組合物及其應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術領域】，具體而言，涉及一種貧血用藥，尤其涉及一種治療溶血性貧血的藥物組合物及其應用。
【背景技術】
[0002]貧血是指人體血紅蛋白水平低于10~12g/dL或循環(huán)紅細胞數(shù)量減少，導致需氧組織和器官產(chǎn)生“饑餓感”，由此使得患者表現(xiàn)為容易疲勞和總生活質量下降，嚴重病例若不治療還可能有生命危險。貧血按其發(fā)病原因，主要以下幾類貧血類型。
[0003]慢性病貧血(anemiaof chronic disease, ACD),又稱炎癥性貧血(anemia ofinflammation),其特點為血清鐵、轉鐵蛋白飽和度、總鐵結合力降低、忙鐵不正?；蛎﹁F水平升高，血清轉鐵蛋白受體水平不增高及單核-巨噬細胞系統(tǒng)鐵水平增高，腸道鐵吸收受到抑制。眾多的疾病均能引起炎癥性貧血，主要分為四大類:慢性感染(骨髓炎、肺炎、深部膿腫、感染性心內膜炎、腦膜炎、HIV感染、真菌和分支桿菌感染)、結締組織病(系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎)、惡性腫瘤性疾病(何杰金氏病、非何杰金氏淋巴瘤、肉瘤、轉移癌、多發(fā)性骨髓瘤)、慢性病(充血性心力衰竭、肝病、炎性腸病)。
[0004]再生障礙性貧血(aplastic anemia, AA,簡稱再障)是一種獲得性骨髓造血功能衰竭癥，主要表現(xiàn)為骨髓造血功能低下，全血細胞減少和貧血、出血、感染綜合征，免疫抑制治療有效。發(fā)病原因可能為:①病毒感染，特別是肝炎病毒、微小病毒B19等。臨床上可見到乙型肝炎相關的再生障礙性貧血病例。②化學因素，特別是氯霉素類抗生素、磺胺類藥物及殺蟲劑引起的再障與劑量關系不大，但與個人敏感有關。③長期接觸X射線、鐳及放射性核素等可影響DNA的復制，抑制細胞有絲分裂，干擾骨髓細胞生成，造血干細胞數(shù)量減少。
[0005]溶血是指紅細胞遭破壞壽命縮短的過程，溶血超過造血代償時出現(xiàn)的貧血即溶血性貧血(hemolytic anemia, HA)。溶血發(fā)生而骨髓能夠代償時(骨髓有正常造血6~8倍的代償能力)可以不出現(xiàn)貧血，稱為溶血性疾病。按發(fā)病機制，溶血性貧血的臨床分類如下:①紅細胞自身異常性溶血性貧血，包括紅細胞膜異常性溶血性貧血、遺傳性紅細胞酶缺乏性溶血性貧血、珠蛋白和血紅素異常性溶血性貧血。②紅細胞周圍環(huán)境異常所致的溶血性貧血,包括免疫性溶血性貧血、血管性溶血性貧血、生物因素、理化因素等。
[0006]腎性貧血是指各種因素造成腎臟促紅細胞生成素(EPO)產(chǎn)生不足或尿毒癥血漿中一些毒素物質干擾紅細胞的生成和代謝而導致的貧血，是慢性腎功能不全發(fā)展到終末期常見的并發(fā)癥。當腎功能開始受損時，慢性腎病病人體內由腎臟分泌產(chǎn)生的促紅細胞生成素的總量將不足以滿足身體的需要，從而成為引發(fā)腎性貧血的最主要原因之一。除此以外，慢性腎功能不全、尿毒癥病人，體內堆積大量代謝毒素，縮減了紅細胞存活時間；慢性腎病病人長期控制蛋白質的攝入量，而尿蛋白則源源不斷從病人體內流失，慢性腎病病人多發(fā)生出血傾向，這些情況都有可能導致慢性腎病病人發(fā)生腎性貧血。
[0007]低度貧血可以通過食療來糾正血紅蛋白水平，一般要給與富于營養(yǎng)和高熱量、高蛋白、多維生素、含豐富無機鹽和飲食，以助于恢復造血功能。但食療對血紅蛋白升高較慢，其對于中度貧血和重度貧血治療效果不佳。貧血的藥物治療市場目前幾乎全被促紅細胞生成藥物主導。這類藥物靶向促紅細胞生成素(EPO)這一生長因子受體能夠刺激機體產(chǎn)生紅細胞。促紅細胞生成素(EPO)是一種可以增加人體血液中紅細胞數(shù)量、提高血液含氧量的激素，在正常人體內有一定的含量，用于維持和促進正常的紅細胞代謝，因此它可以被用來增加貧血患者體內的紅細胞數(shù)量，用以改善貧血狀況。該藥物自1989年上市后市場份額穩(wěn)步升高，迅速成長為“重磅炸彈”級藥物。該藥物治療范圍廣，療效確切，但由于該藥物價格相對昂貴，需注射給藥而非口服用藥，從而使患者的用藥依從性并不高。
[0008]白頭翁是毛茛科植物白頭翁Pulsatilla chinensis (Bge.) Regel的干燥根,主要含有三萜皂苷、三萜酸、木脂素、白頭翁靈、白頭翁英、白頭翁素、原白頭翁素、胡蘿卜苷以及糖蛋白等成分。《傷寒蘊要》中稱白頭翁為“熱毒下痢紫血鮮血者宜之”，其具有清熱解毒、涼血止痢的功效,主治熱毒血痢、濕熱腸黃。
[0009]依維莫司(everolimus)是西羅莫司(sirolimus)的衍生物，是一種mTOR的抑制劑, PI3K/AKT通路下游的一種絲氨酸蘇氨酸激酶，由瑞士諾華公司最先研制開發(fā)，2003年首次在瑞典上市，依維莫司可以減緩腎癌細胞的生長，降低67%的死亡率，通過抑制腫瘤細胞的生長和增殖，直接作用于腫瘤細胞；通過抑制血管發(fā)生，導致腫瘤血管分布減少而發(fā)揮間接作用。
[0010]通過檢索國內外現(xiàn)有技術發(fā)現(xiàn)，目前還沒有采用白頭翁水提物治療溶血性貧血的文獻報道，更沒有采用白頭翁水提物聯(lián)合依維莫司治療溶血性貧血的文獻報道。

【發(fā)明內容】

[0011]本發(fā)明人采用乙酰苯肼致溶血性貧血模型進行相關的藥效學研究時意外的發(fā)現(xiàn)，白頭翁水提物表現(xiàn) 出較好的抗溶血性貧血的生物活性。乙酰苯肼是一種強氧化劑，可干擾紅細胞內多種酶的活性，使機體出現(xiàn)溶血性貧血:紅細胞和血紅蛋白明顯減少，網(wǎng)織紅細胞代償性增多，肝脾腫大。注射乙酰苯肼后次日，大鼠即表現(xiàn)精神萎靡，神疲乏力，易驚，行動遲緩，團縮弓腰，口唇、眼瞼、耳廓蒼白，易脫毛，毛蓬豎少光澤；飲水多，進食減少，大便干黑而少等貧血癥狀。采用本發(fā)明的白頭翁水提物灌胃治療后，動物一般情況明顯好轉，外周血紅細胞數(shù)、血紅蛋白量明顯回升，網(wǎng)織紅細胞計數(shù)明顯升高，骨髓造血加快。
[0012]在此基礎上，本發(fā)明人進行了更為深入的研究，發(fā)現(xiàn)白頭翁水提物聯(lián)合依維莫司在防治溶血性貧血動物模型方面表現(xiàn)出意想不到的協(xié)同作用，因此本發(fā)明的目的在于提供一種治療溶血性貧血的藥物組合物及其應用。
[0013]具體地，本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的:
一種治療溶血性貧血的藥物組合物，其中所述的藥物組合物中活性成分由白頭翁水提物和依維莫司組成。
[0014]優(yōu)選地，如上所述治療溶血性貧血的藥物組合物，其中所述的活性成分中白頭翁水提物和依維莫司的用量比為25-100:1。
[0015]進一步優(yōu)選地，如上所述治療溶血性貧血的藥物組合物,其中所述的活性成分中白頭翁水提物和依維莫司的用量比為50-100:1。
[0016]再進一步優(yōu)選地，如上所述治療溶血性貧血的藥物組合物，其中所述的活性成分中白頭翁水提物和依維莫司的用量比為100:1。[0017]再進一步優(yōu)選地，如上所述治療溶血性貧血的藥物組合物，其中所述的白頭翁水提物按如下方法制備而得:將白頭翁用乙醇加熱回流提取，過濾，濾液棄掉后的剩余藥渣加水加熱回流提取，再過濾，濾液濃縮至膏狀物，得白頭翁水提物。
[0018]白頭翁水提物聯(lián)合依維莫司對溶血性貧血模型大鼠的療效試驗結果顯示，與單藥組相比，聯(lián)合用藥組大鼠的紅細胞和血紅蛋白濃度均較模型組明顯上升，差異具有統(tǒng)計學意義(產(chǎn)<0.01)，這預示著白頭翁水提物聯(lián)合依維莫司可協(xié)同防治溶血性貧血。因此，本發(fā)明還提供一種制藥用途，即:白頭翁水提物和依維莫司組成的活性成分在制備治療溶血性貧血的藥物中的應用。
[0019]需要說明的是，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)白頭翁水提物對溶血性貧血有較好的治療作用，因此嘗試將該水提物應用于再生障礙性貧血、腎性貧血。然而，令人遺憾的是，白頭翁水提物并不能治療其他類型的貧血。
[0020]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明涉及的藥物組合物具有如下優(yōu)點和顯著進步:
(I)為治療貧血提供了新的候選藥物，具有非常重要的臨床意義。
[0021](2)白頭翁水提物為天然提取產(chǎn)物，毒性非常小，副作用和不良反應率低；依維莫司用量僅僅為常規(guī)用量的四分之一，因此費用、副作用和不良反應率也較低。
[0022](3)白頭翁水提物和依維莫司均可以通過口服方式用藥，因此可以降低貧血患者的治療費用，提高貧血患者的用藥依從性。
[0023]
【具體實施方式】
[0024]以下是本發(fā)明的具體實施例，對本發(fā)明的技術方案做進一步作描述，但是本發(fā)明的保護范圍并不限于該實施例。凡是不背離本發(fā)明構思的改變或等同替代均包括在本發(fā)明的保護范圍之內。
[0025]實施例1白頭翁水提物的制備
稱取白頭翁干燥根1kg，粉碎，用12L濃度為80%乙醇(V/V)加熱回流提取3h，過濾，棄掉濾液，濾渣中加入IOL的80%乙醇(V/V)，加熱回流提取1.5h，過濾，棄掉濾液，濾渣中加入12L純水加熱回流提取2次，合并提取液，減壓濃縮至膏狀物，冷凍干燥，得白頭翁水提物凍干粉。
[0026]實施例2白頭翁水提物的制備
稱取白頭翁干燥根1.5kg，粉碎，用18L濃度為85%乙醇(V/V)加熱回流提取3h，過濾，棄掉濾液，濾渣中加入15L的85%乙醇(V/V)，加熱回流提取1.5h，過濾，棄掉濾液，濾渣中加入18L純水加熱回流提取2次，合并提取液，減壓濃縮至膏狀物，冷凍干燥，得白頭翁水提物凍干粉。
[0027]實施例3白頭翁水提物聯(lián)合依維莫司對溶血性貧血模型大鼠的療效試驗
SPF級Wistar大鼠50只，體重180g~200g，雌雄各半，所有Wistar大鼠隨機分成如下五組:正常對照組、模型對 照組、水提物組、依維莫司組、聯(lián)合用藥組，每組10只。模型對照組大鼠在第1、第4、第7天皮下注射2%乙酰苯肼生理鹽水注射液，第I天注射劑量為IOml/kg體重，第4、第7天劑量減半，第4天起每天以等量純水灌胃。治療組(水提物組、依維莫司組、聯(lián)合用藥組)按同樣的方法造模，并于第4天起每天按如下方式灌胃相應的藥物:水提物組:按IOOmg / kg體重的劑量灌胃白頭翁水提物凍干粉(實施例1制備)，每天一次，共7天；
依維莫司組:按0.5mg / kg體重的劑量灌胃依維莫司，每天一次，共7天；
聯(lián)合用藥組:按50mg / kg體重的劑量灌胃白頭翁水提物凍干粉(實施例1制備)，同時按0.5mg / kg體重的劑量灌胃依維莫司，每天一次,共7天；
參照模型對照組，正常對照組大鼠用等量純水代替2%乙酰苯肼進行皮下注射，然后以等量純水進行灌胃。試驗期間，飼喂正常固體飼料，自由飲水。試驗第11天結束，眼眶取血，檢測如下外周血指標:紅細胞數(shù)、血紅蛋白濃度、白細胞數(shù)、網(wǎng)織紅細胞數(shù)。
[0028]外周血象檢測結果:與正常對照組比較，模型對照組大鼠的紅細胞數(shù)和血紅蛋白量明顯降低，白細胞、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)明顯升高。除依維莫司組外，其他治療組大鼠的紅細胞和網(wǎng)織紅細胞數(shù)、血紅蛋白濃度均較模型組明顯上升，差異具有統(tǒng)計學意義0° <0.01)；另外，與單藥組相比，聯(lián)合用藥組大鼠的紅細胞和血紅蛋白濃度均較模型組明顯上升，差異具有統(tǒng)計學意義0° <0.01)，這預示著白頭翁水提物聯(lián)合依維莫司可協(xié)同防治溶血性貧血；具體結果見表1。
[0029]表1各組大鼠外周血細胞檢測結果比較
【權利要求】
1.一種治療溶血性貧血的藥物組合物，其特征在于:所述的藥物組合物中活性成分由白頭翁水提物和依維莫司組成。
2.根據(jù)權利要求1所述治療溶血性貧血的藥物組合物，其特征在于:所述的活性成分中白頭翁水提物和依維莫司的用量比為25-100:1。
3.根據(jù)權利要求2所述治療溶血性貧血的藥物組合物，其特征在于:所述的活性成分中白頭翁水提物和依維莫司的用量比為50-100:1。
4.根據(jù)權利要求3所述治療溶血性貧血的藥物組合物，其特征在于:所述的活性成分中白頭翁水提物和依維莫司的用量比為100:1。
5.根據(jù)權利要求1-4任一項所述治療溶血性貧血的藥物組合物，其特征在于:所述的白頭翁水提物按如下方法制備而得:將白頭翁用乙醇加熱回流提取，過濾，濾液棄掉后的剩余藥渣加水加熱回流提取，再過濾，濾液濃縮至膏狀物，得白頭翁水提物。
6.白頭翁水提物和依維`莫司組成的活性成分在制備治療溶血性貧血的藥物中的應用。
【文檔編號】A61K31/4353GK103860668SQ201410098924
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年3月18日 優(yōu)先權日:2014年3月18日
【發(fā)明者】于法周 申請人:于法周