具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥用植物銅錘玉帶草[Pratia?begonafolia(Wall)Lindl.or?P.nummularia(Lam.)A.Br.et?Aschers]，具體涉及具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物及其應(yīng)用。本發(fā)明在銅錘玉帶草原有化學(xué)成分和傳統(tǒng)功效的研究基礎(chǔ)上，同時(shí)制備其活性提取物，和現(xiàn)有技術(shù)相比，提出了銅錘玉帶草提取物可以對(duì)抗H22荷瘤小鼠的腫瘤增殖，且提高機(jī)體免疫力，增強(qiáng)抗氧化作用，表明該活性提取物對(duì)腫瘤增長具有明顯的抑制作用。
【專利說明】具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥用植物銅錘玉帶草[Pratia begonafolia(Wall)Lindl.0rP.nummularia(Lam.) A.Br.et Aschers],具體涉及具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物及
其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]腫瘤是是世界范圍內(nèi)多發(fā)的疾病之一，大多數(shù)患者確診時(shí)已屬癌癥晚期，目前治療手段以手術(shù)化療及放療相結(jié)合的綜合立體療法，以期減少腫瘤的多藥耐藥的發(fā)生。目前抗腫瘤藥物對(duì)正常癌細(xì)胞殺傷同時(shí)也破壞機(jī)體免疫功能，帶來嚴(yán)重的副作用。
[0003]研究發(fā)現(xiàn)，多種植物藥具有明顯的抗腫瘤作用，如人參，女貞子，天冬等。銅錘玉帶草又名小銅錘、地扣子、銅錘草、地石榴等，基源植物為桔?？撇荼局参镢~錘玉帶草[Pratiabegonafolia (Wall) Lindl.0r P.nummularia (Lam.)A.Br.et Aschers]的干燥全草，可作為野菜食用。具有祛風(fēng)除濕，活血，解毒之功效，可用于治療風(fēng)濕疼痛，跌打損傷，乳癰，無名腫毒等作用。
[0004]具報(bào)道其含有黃酮、聚乙炔、三萜酯等成分，現(xiàn)代藥理學(xué)對(duì)其藥理活性研究鮮有報(bào)道。到目前為止，未見以銅錘玉帶草為原料制備活性提取物的制備技術(shù)，也未見以銅錘玉帶草為主要組成組分應(yīng)用抗腫瘤藥品或保健品的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物及其應(yīng)用。
[0006]具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物，其制備方法具有以下特征:將干燥的銅錘玉帶草粉碎至細(xì)粉，水提取3次，濾過，合并提取液，濃縮提取液至得浸膏；用水混懸所述浸膏，上大孔樹脂色譜，依次用水和乙醇沖洗；收集乙醇洗脫組分，減壓回收乙醇，真空干燥，既得具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物。該提取物對(duì)H22荷瘤小鼠具有明顯的抗腫瘤作用，具有提高機(jī)體免疫力等作用。
[0007]所述細(xì)粉為過200篩，所述大孔樹脂為通用大孔樹脂，所述乙醇為濃度50%~100%的乙醇水溶液。細(xì)粉為過200篩有利于有效成分浸出，濃度50%~100%的乙醇水溶液可以洗出有效組分中的主要成分。
[0008]所述的通用大孔樹脂為DlOl樹脂或NKA樹脂。
[0009]所述乙醇洗脫組分的主要成分為黃酮類化合物。
[0010]本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供一種上述的方法制備得到的具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物在制備抗腫瘤藥物或抗腫瘤保健品中的應(yīng)用。該提取物對(duì)H22荷瘤小鼠具有明顯的抗腫瘤作用，具有提高機(jī)體免疫力等作用。
[0011]所述藥物或保健品為片劑、注射劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、薇丸、滴丸劑、湯劑、糖
漿劑、合劑、煎膏劑或浸膏劑或其他藥學(xué)上可接受的載體。
[0012]銅錘玉帶草提取物制成膠囊劑時(shí)把銅錘玉帶草提取物和載體乳糖或玉米淀粉混合均勻，整粒，然后裝膠囊制成膠囊劑。
[0013]銅錘玉帶草制成片劑時(shí)，把銅錘玉帶草提取物和載體乳糖或玉米淀粉，需要時(shí)加入潤滑劑硬脂酸鎂，混合均勻，然后壓片制成片劑。
[0014]銅錘玉帶草提取物制成顆粒劑時(shí)，把銅錘玉帶草提取物和稀釋劑乳糖或玉米淀粉混合均勻，整粒，干燥，制成顆粒劑。
[0015]銅錘玉帶草提取物制成其他劑型時(shí)，可按藥學(xué)常規(guī)方法制備得到，這里不一一贅述。
[0016]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明在銅錘玉帶草原有化學(xué)成分和傳統(tǒng)功效的研究基礎(chǔ)上，同時(shí)制備其活性提取物，和現(xiàn)有技術(shù)相比，提出了銅錘玉帶草提取物可以對(duì)抗H22荷瘤小鼠的腫瘤增殖，且提高機(jī)體免疫力，增強(qiáng)抗氧化作用，表明該活性提取物對(duì)腫瘤增長具有明顯的抑制作用。因此，銅錘玉帶草提取物有望開發(fā)成為新一代安全有效，用于抗腫瘤的藥物或保健品。
【具體實(shí)施方式】
[0017]以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)發(fā)明做出進(jìn)一步說明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不限制本發(fā)明的范圍，在閱讀本發(fā)明后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的各種等價(jià)形式的修改均落于本發(fā)明所附權(quán)利要求限定的范圍。
[0018]實(shí)施例1
[0019]具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物，其通過以下方法制備得到:
[0020]將干燥的銅錘玉帶草粉碎至過200目的細(xì)粉，10倍量水提取3次，濾過，合并提取液，濃縮提取液至得浸膏；用水混懸所述浸膏，上大孔樹脂DlOl色譜，依次用水和50%乙醇沖洗；收集50%乙醇洗脫組分，減壓回收乙醇，真空干燥，既得具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物。
[0021]實(shí)施例2
[0022]具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物，其通過以下方法制備得到:
[0023]將干燥的銅錘玉帶草粉碎至過200目的細(xì)粉，5倍量水提取3次，濾過，合并提取液，濃縮提取液至得浸膏；用水混懸所述浸膏，上大孔樹脂DlOl色譜，依次用水和100%乙醇沖洗；收集100%乙醇洗脫組分，減壓回收乙醇，真空干燥，既得具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物。
[0024]實(shí)施例3
[0025]具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物，其通過以下方法制備得到:
[0026]將干燥的銅錘玉帶草粉碎至過200目的細(xì)粉，10水提取3次，濾過，合并提取液，濃縮提取液至得浸膏；用水混懸所述浸膏，上大孔樹脂DlOl色譜，依次用水和75%乙醇沖洗；收集50%乙醇洗脫組分，減壓回收乙醇，真空干燥，既得具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物。
[0027]實(shí)施例4
[0028]具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物，其通過以下方法制備得到: [0029]將干燥的銅錘玉帶草粉碎至過200目的細(xì)粉，10水提取3次，濾過，合并提取液，濃縮提取液至得浸膏；用水混懸所述浸膏，上大孔樹脂NKA色譜，依次用水和50%乙醇沖洗；收集50%乙醇洗脫組分，減壓回收乙醇，真空干燥，既得具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物。
[0030]實(shí)施例5
[0031]具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物，其通過以下方法制備得到:
[0032]將干燥的銅錘玉帶草粉碎至過200目的細(xì)粉，5倍量水提取3次，濾過，合并提取液，濃縮提取液至得浸膏；用水混懸所述浸膏，上大孔樹脂NKA色譜，依次用水和100%乙醇沖洗；收集100%乙醇洗脫組分，減壓回收乙醇，真空干燥，既得具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物。
[0033]實(shí)施例6
[0034]具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物，其通過以下方法制備得到:
[0035]將干燥的銅錘玉帶草粉碎至過200目的細(xì)粉，10水提取3次，濾過，合并提取液，濃縮提取液至得浸膏；用水混懸所述浸膏，上大孔樹脂NKA色譜，依次用水和60%乙醇沖洗；收集50%乙醇洗脫組分，減壓回收乙醇，真空干燥，既得具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物。
[0036]實(shí)施例7
[0037]銅錘玉帶草活性提取物抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究
[0038]一、實(shí)驗(yàn)材料、儀器和試劑
[0039]1、實(shí)驗(yàn)材料
[0040]銅錘玉帶草提取物采自廣西，經(jīng)趙立春博士鑒定為桔梗科植物銅錘玉帶草的干燥全草，采用實(shí)施例1-6方法制得銅錘玉帶草提取物；2、實(shí)驗(yàn)儀器
[0041 ] 電子分析天平，全波長掃描酶標(biāo)儀
[0042]3、實(shí)驗(yàn)試劑
[0043]陽性藥:環(huán)磷酰胺，購于吉林省腫瘤醫(yī)院；羧甲基纖維素鈉(食品級(jí))；生理鹽水等；組織固定液，北京化工廠；組織勻漿機(jī)，江蘇省金壇市恒豐儀器制造有限公司；ALT和AST試劑盒，南京建成生物工程有限公司；TNF-a試劑盒，武漢華美生物工程有限公司；白介素12(IL-12)試劑盒，武漢華美生物工程有限公司；腫瘤壞死因子(TNF-α )試劑盒，武漢華美生物工程有限公司；小鼠維持飼料，吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；鑷子；剪刀；注射器；灌胃針等
[0044]4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0045]清潔級(jí)雄性ICR小鼠，體重(20 土 2)
[0046]二、實(shí)驗(yàn)方法
[0047]1、動(dòng)物分組
[0048]C57小鼠腋下接種H22腫瘤造模成功后共分為6組，灌胃方式為灌胃，如下:
[0049]對(duì)照組:生理鹽水(C0N)，陽性藥組:環(huán)磷酰胺組(CTX，腹腔注射)，受試藥組:銅錘玉帶草提取物低劑量組50mg/Kg (PBE-L)，銅錘玉帶草提取物中劑量組100mg/Kg (PBE-M),銅錘玉帶草提取物高劑量組200mg/Kg (PBE-H)。 [0050]2、藥物的配制
[0051]陽性藥:環(huán)磷酰胺20mg/kg，生理鹽水溶解，待腹腔注射；空白給藥組(陰性對(duì)照組):注射用生理鹽水，灌胃給藥；受試藥:灌胃(口服)給藥[0052]3、腹水瘤鼠的制備
[0053]取3只普通ICR小鼠，正常飼養(yǎng)I周，用于實(shí)驗(yàn)。于液氮罐中取凍存的H22細(xì)胞，37度復(fù)蘇后，棄去細(xì)胞保存液，用生理鹽水混懸，注射到3只ICR小鼠腹腔中，三天后每天稱重，接種5-7天后，待腹部隆起，接種成功。
[0054]4、腫瘤鼠的制備
[0055]取接種5-7天的ICR鼠腹水癌細(xì)胞，用生理鹽水制成細(xì)胞個(gè)數(shù)為I X 106/ml的細(xì)胞懸液，以每鼠0.1ml接種于小鼠右腋皮下腫瘤細(xì)胞移植以后，次日，腫瘤小鼠被隨機(jī)分成不同的給藥組，每組12只，開始給藥試驗(yàn)。
[0056]對(duì)照組只給生理鹽水。給藥組用羧甲基纖維素鈉水溶液配置不同給藥濃度，劑量如上，灌胃方式給藥，給藥劑量為0.2ml/10g。陽性藥環(huán)磷酰胺，用生理鹽水配置，腹腔注射給藥。
[0057]給藥14天(2周)后，小鼠摘眼球取血處死，血清靜置2小時(shí)，離心，取血清測各種生化指標(biāo)。待測TNF-α (腫瘤壞死因子)和IL-2 (白介素_2)含量。TNF-α和IL-2測定采用ELISA酶聯(lián)免疫檢測法，操作步驟按試劑盒給定說明書程序進(jìn)行。
[0058]小心剝?nèi)×鰤K、胸腺和脾臟，分別稱重，計(jì)算數(shù)值。
[0059]5、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理
[0060]C57小鼠 腫瘤抑制率的計(jì)算
[0061 ] 抑制率=(對(duì)照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤重X 100%。
[0062]胸腺指數(shù)為每克體重胸腺的毫克數(shù)，脾指數(shù)為每克體重中脾臟的毫克數(shù)，所有的數(shù)據(jù)均進(jìn)行均值和方差處理，參數(shù)值用均值土標(biāo)準(zhǔn)差(Mean土SD)表示，組間比較采用了 T檢驗(yàn)，p〈0.05為有顯著性差異。給藥組間差異顯著性比較，顯著性差異*p〈0.05。
[0063]三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0064]1、對(duì)C57小鼠體重的影響
[0065]試驗(yàn)開始后，隔日計(jì)算小鼠體重變化，確定給藥劑量，從統(tǒng)計(jì)結(jié)果我們可以看出給藥組與空白對(duì)照組體重相比無顯著性差異(P>0.05)?？瞻讓?duì)照組、環(huán)磷酰胺給藥組組、銅錘玉帶草高劑量組體重呈下降趨勢，而其各組增加明顯，但各組之間沒有顯著性差異(P>0.05)。一般來說，小鼠腫瘤模型造模成功后，各組對(duì)體重?zé)o顯著影響。
[0066]2、對(duì)C57小鼠H22荷瘤的抑制作用
[0067]統(tǒng)計(jì)結(jié)果見下表。從統(tǒng)計(jì)結(jié)果中我們可以看出，與陰性對(duì)照組相比，陽性組(CTX)與其具有顯著性差異(P〈0.01)，給藥14天后，顯著抑制腫瘤的增殖，受試藥中PBE-L組，抑制腫瘤增長不明顯，高劑量PBE-H和中劑量PBE-M組抑制腫瘤增殖明顯，均具有顯著性差異(ρ〈0.01)。
[0068]表1銅錘玉帶草活性提取物抑瘤率作用
[0069]
【權(quán)利要求】
1.具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物，其制備方法具有以下特征:將干燥的銅錘玉帶草粉碎至細(xì)粉，水提取3次，濾過，合并提取液，濃縮提取液至得浸膏；用水混懸所述浸膏，上大孔樹脂色譜，依次用水和乙醇沖洗；收集乙醇洗脫組分，減壓回收乙醇，真空干燥，既得具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物。
2.如權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物，其特征在于:所述細(xì)粉為過200篩，所述大孔樹脂為通用大孔樹脂，所述乙醇為濃度50%~100%的乙醇水溶液。
3.如權(quán)利要求2所述的具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物，其特征在于:所述的通用大孔樹脂為DlOl樹脂或NKA樹脂。
4.如權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物，其特征在于:所述乙醇洗脫組分的主要成分為黃酮類化合物。
5.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法制備得到的具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物在制備抗腫瘤藥物或抗腫瘤保健品中的應(yīng)用。
6.如權(quán)利要求5所述 的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物或保健品為片劑、注射劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、薇丸、滴丸劑、湯劑、糖漿劑、合劑、煎膏劑或浸膏劑或其他藥學(xué)上可接受的載體。
【文檔編號(hào)】A61K36/34GK103784492SQ201410011982
【公開日】2014年5月14日 申請(qǐng)日期:2014年1月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月12日
【發(fā)明者】趙立春 申請(qǐng)人:廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院