一種具有抗新城疫病毒作用的中藥多糖復(fù)方的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明為一種具有抗新城疫病毒作用的中藥多糖復(fù)方，屬于抗病毒中獸藥研究【技術(shù)領(lǐng)域】。分別提取制備黃精多糖、硫酸化黨參多糖，以糖含量按9∶1組方，對(duì)雞新城疫病毒有顯著的抑制作用，可以開(kāi)發(fā)成獸用抗病毒新藥。
【專利說(shuō)明】一種具有抗新城疫病毒作用的中藥多糖復(fù)方
一、【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明一種具有抗新城疫病毒作用的中藥多糖復(fù)方，屬于抗病毒中獸藥研究【技術(shù)領(lǐng)域】。
二、【背景技術(shù)】
[0002]動(dòng)物傳染病尤其是病毒性傳染病一直嚴(yán)重威脅養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。防控這類疾病主要靠接種疫苗預(yù)防，但是由于種種原因，仍難以完全控制其爆發(fā)，如雞新城疫、禽流感、豬瘟等。這些疾病一旦發(fā)病，尚無(wú)特效的藥物治療。一些細(xì)胞因子雖有一定療效，由于其價(jià)格昂貴，很難在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中推廣應(yīng)用。因此，尋找安全有效的新型抗病毒藥物一直是獸醫(yī)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。
[0003]大量研究表明，許多中藥及其有效成分具有一定的抗病毒作用，但是它們的作用較弱，尤其是中藥，由于成分復(fù)雜，質(zhì)量難以控制，國(guó)外難以接受。最近的研究證實(shí)，硫酸化修飾能進(jìn)一步提高中藥多糖的抗病毒活性，硫酸化多糖復(fù)方的作用顯著強(qiáng)于單味組分藥。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，雖然硫酸化多糖復(fù)方有較好的作用，但通過(guò)人工合成硫酸化多糖的成本較高，安全性降低，不利于在獸醫(yī)臨床上推廣應(yīng)用。用部分多糖替代硫酸化多糖后，復(fù)方的功效不減，但成本顯著降低，安全性提高，更有利于在獸醫(yī)臨床上推廣應(yīng)用。
[0004]本發(fā)明通過(guò)中藥多糖的活性比較與篩選、多糖的硫酸化修飾與活性比較、組方篩選、配伍比例篩選等一系列研究，篩選出一種安全、有效、質(zhì)量可控、在獸醫(yī)臨床有應(yīng)用前景的抗新城疫病毒中藥多糖復(fù) 方。
三、
【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明針對(duì)獸醫(yī)臨床缺乏抗病毒藥物的問(wèn)題，提供一種安全、有效、在獸醫(yī)臨床有應(yīng)用前景的抗病毒中藥多糖復(fù)方。
[0006]技術(shù)方案一種具有抗新城疫病毒作用的中藥多糖復(fù)方，包括:提取5種多糖，制備4種硫酸化多糖和15個(gè)多糖-硫酸化多糖復(fù)方，測(cè)定它們細(xì)胞毒性和抗病毒活性，篩選出抗病毒活性最強(qiáng)的復(fù)方。其特征在于，黃精多糖和硫酸化黨參多糖以糖含量按9: I組方對(duì)新城疫病毒的抑制作用最為顯著。
[0007]有益效果本發(fā)明提供一種具有抗新城疫病毒作用的中藥多糖復(fù)方，可開(kāi)發(fā)成為獸用抗病毒新藥，在動(dòng)物生產(chǎn)上推廣應(yīng)用，有效地提高動(dòng)物疫病的防控效果，保障養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。
[0008]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)如下:
[0009]1.從生產(chǎn)需要方面，動(dòng)物疫病防控缺乏有效、安全、經(jīng)濟(jì)的中西藥物，本發(fā)明提供一種具有抗新城疫病毒作用的中藥多糖復(fù)方，可開(kāi)發(fā)成獸用抗病毒新藥，填補(bǔ)國(guó)內(nèi)外獸藥研究的空白。
[0010]2.從中獸藥研究方面，本發(fā)明應(yīng)用分子修飾技術(shù)對(duì)中藥多糖進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，以多糖-硫酸化多糖組方，不僅藥效可靠，而且成分明確，質(zhì)量可控，國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)報(bào)道。[0011]3.與全硫酸化多糖復(fù)方相比，本發(fā)明的藥效不降低，但成本大大降低(9份多糖的純化和硫酸化修飾費(fèi)用)，安全性提高、有利于在獸醫(yī)臨床上推廣應(yīng)用。
四、【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
圖1是各組的最聞病毒抑制率的不意圖。
注:CP-sCA，黨參多糖加硫酸化當(dāng)歸多糖復(fù)方；EP-sAP，淫羊藿多糖加硫酸化黃芪多糖復(fù)方；EP-sCA，淫羊藿多糖加硫酸化當(dāng)歸多糖復(fù)方；CA-sEP，當(dāng)歸多糖加硫酸化淫羊藿多糖復(fù)方；SR-sCP黃精多糖加硫酸化黨參多糖復(fù)方JS9-SPS1，多糖與硫酸化多糖的配比為9:1 ；PS7-SPS3，多糖與硫酸化多糖的配比為7:3 ;PS6-sPS4，多糖與硫酸化多糖的配比為6:4。a_h柱上標(biāo)注字母不同者差異顯著(P〈0.05)。
五、【具體實(shí)施方式】
[0012]1.多糖提取和硫酸化多糖的制備
[0013]當(dāng)歸多糖(CA)、黃芪多糖(AP)、淫羊藿多糖(EP)、黨參多糖(CP)和黃精多糖(SR)，分別用水煎醇沉法提取；硫酸化當(dāng)歸多糖(sCA)、硫酸化黃芪多糖(sAP)、硫酸化淫羊藿多糖(sEP)和硫酸化黨參多糖(sCP)，分別用氯磺酸-吡啶法制備，用硫酸-苯酚法測(cè)定多糖含量，氯化鋇-明膠法測(cè)定硫酸基取代度。
[0014]2.多糖-硫酸化多糖復(fù)方的制備
[0015]五種組方分別由黨參多糖加硫 酸化當(dāng)歸多糖(CP-sCA)、淫羊藿多糖加硫酸化黃芪多糖(EP-sAP)、淫羊藿多糖加硫酸化當(dāng)歸多糖(EP-sCA)、當(dāng)歸多糖加硫酸化淫羊藿多糖(CA-sEP)、黃精多糖加硫酸化黨參多糖(SR-sCP)組成，各組方再分別按照多糖(PS)與硫酸化多糖(sPS)糖含量比為 9: I(PS9-SPS1)J: 3 (PS7-SPS3)、6: 4 (PS6_sPS4)配成 3 個(gè)復(fù)方，共15個(gè)方劑。
[0016]3.多糖復(fù)方的細(xì)胞毒性測(cè)定
[0017]將15個(gè)方劑分別用MEM培養(yǎng)液自500 ii g ? mL—1倍比稀釋至0.977 u g ? mL—1共10個(gè)濃度。取9日齡SPF雞胚(購(gòu)于南京藥械廠)制備雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)。將細(xì)胞濃度調(diào)整到5X105 ?mL—1，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔IOOy L，置38.5°C>5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，加入各濃度的方劑，每濃度重復(fù)4孔，另設(shè)細(xì)胞對(duì)照孔，37°C、5% CO2條件下培養(yǎng)72h，用MTT法測(cè)定細(xì)胞A57tl值。以A57tl值不顯著小于細(xì)胞對(duì)照孔A57tl值的最高濃度作為該方劑的最大安全濃度。結(jié)果，各方劑的最大安全濃度在31.25~7.813 ii g ? ml/1。為便于統(tǒng)一比較，將各方劑最大安全濃度統(tǒng)一設(shè)定為7.813 V- g ? ml/1。
[0018]4.多糖復(fù)方的抗病毒活性的比較
[0019]將各復(fù)方分別從7.倍比稀釋至0.4881^1171共5個(gè)濃度。培養(yǎng)CEF，待細(xì)胞長(zhǎng)成單層時(shí)，每孔加入IOOTCID5ci的雞新城疫病毒(La Sota strain IV)液IOOii L，置CO2培養(yǎng)箱孵育2h，除去病毒液，分別加入各濃度的方劑。每濃度重復(fù)4孔，同時(shí)設(shè)病毒對(duì)照組(VC，只加病毒)、細(xì)胞對(duì)照組(CC，只加麗培養(yǎng)液)和空白對(duì)照組(BC，不加細(xì)胞)，37 °C、5 % CO2條件下培養(yǎng)72h，用MTT法測(cè)定細(xì)胞A570值，作為各方劑抗病毒作用的指標(biāo)(A57tl值越大，抗病毒作用越強(qiáng))；并計(jì)算最高病毒抑制率(%)[=(最高 A 多糖+病毒_ A病毒對(duì)照)/( A細(xì)胞對(duì)照_ A mmm) X 100%],比較各方劑抗病毒作用的強(qiáng)弱。結(jié)果如下:
[0020](I)PS9-SPS1各組的抗病毒活性[0021]各復(fù)方組在7.813~0.488的細(xì)胞A57tl值均顯著高于病毒對(duì)照組(P< 0.05)(表1)，表明它們?cè)谶@些濃度均具有顯著的抗病毒作用。
[0022]表1 PS9-SPS1各組的細(xì)胞A57。值
[0023]
【權(quán)利要求】
1.一種具有抗新城疫病毒作用的中藥多糖復(fù)方，其特征在于，以糖含量計(jì)，黃精多糖9份，硫酸化黨參多糖1份。
2.權(quán)利要求1所述 方法獲得的中藥多糖復(fù)方，對(duì)雞新城疫病毒有顯著的抑制作用。
【文檔編號(hào)】A61K31/715GK103520201SQ201310282665
【公開(kāi)日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年7月8日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月8日
【發(fā)明者】胡元亮, 王德云, 劉翠, 賽福丁, 趙曉娜, 楊淑娟 申請(qǐng)人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)