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針對(duì)淀粉狀蛋白β的人源化抗體的制作方法

文檔序號(hào):1256006閱讀:151來源:國知局
針對(duì)淀粉狀蛋白β的人源化抗體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及嵌合抗體和人源化抗體,以及涉及在治療淀粉狀變性中應(yīng)用的用于治療和診斷的方法和組合物,所述淀粉狀變性是一組與淀粉狀蛋白相關(guān)的疾病和異常,諸如阿爾茨海默病。
【專利說明】針對(duì)淀粉狀蛋白β的人源化抗體
[0001]本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2007年7月13日、發(fā)明名稱為“針對(duì)淀粉狀蛋白β的人源化抗體”的中國專利申請(qǐng)200780033976.7 (國際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US2007/073504)的分案申請(qǐng)。
[0002]本發(fā)明涉及用于淀粉狀變性的診斷和治療的方法和組合物,所述淀粉狀變性是一組與淀粉狀蛋白相關(guān)的病癥和異常,諸如阿爾茨海默病。
[0003]淀粉狀變性不是單一的疾病實(shí)體,而是一群多種以蠟狀的、淀粉樣蛋白(稱之為淀粉狀蛋白,它們積累在一個(gè)或一個(gè)以上的器官或身體系統(tǒng)中)細(xì)胞外組織的沉積為特征的進(jìn)行性疾病過程。隨著淀粉狀蛋白沉積物聚集,它們開始干擾器官或身體系統(tǒng)的正常功能。至少存在15種不同類型的淀粉狀變性。主要形式是沒有已知前例的原發(fā)性淀粉狀變性,一些其它疾病之后的繼發(fā)性淀粉狀變性,和遺傳性淀淀粉狀變性。
[0004]繼發(fā)性淀粉狀變性發(fā)生在慢性感染或炎性疾病,諸如結(jié)核病、稱為家族性地中海熱的細(xì)菌感染、骨感染(骨髓炎)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、小腸發(fā)炎(肉芽腫性回腸炎)、霍奇金病和麻風(fēng)病期間。 [0005]淀粉狀蛋白沉積物包括淀粉狀蛋白Ρ(五邊形)成分P、與正常血清淀粉狀蛋白P相關(guān)的糖蛋白(SAP)和結(jié)締組織的復(fù)合碳水化合物硫酸鹽化的糖胺聚糖(GAG)。占淀粉狀蛋白物質(zhì)的90%的淀粉狀蛋白原纖維(fibril)包含數(shù)種不同類型蛋白中的一種。這些蛋白能夠折疊為所謂的“ β -折疊”片狀原纖維,這種獨(dú)特的蛋白構(gòu)型顯示出對(duì)剛果紅(Congored)的結(jié)合部位,導(dǎo)致了淀粉狀蛋白的獨(dú)特的著色性質(zhì)。
[0006]許多老年疾病基于或與淀粉狀蛋白樣蛋白有關(guān),并且部分地以促進(jìn)疾病發(fā)生和疾病進(jìn)程的淀粉狀蛋白或淀粉狀蛋白樣物質(zhì)的細(xì)胞外沉積的積累為特征。這些疾病包括但不限于神經(jīng)疾病,諸如阿爾茨海默病(AD)、路易體癡呆(Lewy body dementia)、唐氏綜合征(Down’ s syndrome)、遺傳性腦出血伴淀粉狀變性(荷蘭型);關(guān)島帕金森-癡呆綜合征。其它基于淀粉狀蛋白樣蛋白或與其相關(guān)的疾病是進(jìn)行性核上性麻痹、多發(fā)性硬化、克-雅二氏病(Creutzfeld Jacob disease)、帕金森氏病、HIV相關(guān)癡呆、ALS(肌萎縮性側(cè)索硬化癥)、成年發(fā)病型糖尿病、老年性心臟淀粉狀變性、內(nèi)分泌腫瘤以及其它疾病,包括黃斑變性。
[0007]盡管這些疾病的發(fā)病機(jī)理可能是不同的,但它們的特征性沉積物經(jīng)常含有許多共同的分子成分。在顯著程度上,這些可能歸因于促進(jìn)發(fā)炎途徑的局部活化從而導(dǎo)致活化的補(bǔ)體組分、急性期反應(yīng)物、免疫調(diào)節(jié)劑及其它發(fā)炎介質(zhì)的同時(shí)沉積(McGeer等,1994)。
[0008]阿爾茨海默病(AD)是一種神經(jīng)疾病,主要認(rèn)為由淀粉狀蛋白斑,即在腦中蛋白質(zhì)異常沉積的積累所引起的。在感染個(gè)體腦中發(fā)現(xiàn)的最常見的淀粉狀蛋白的類型主要包含Αβ原纖維。科學(xué)證據(jù)表明在斑塊中β_淀粉狀蛋白的產(chǎn)生和累積的增加導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞死亡,這對(duì)AD的發(fā)展和進(jìn)程有貢獻(xiàn)。在關(guān)鍵腦區(qū)域的神經(jīng)細(xì)胞的損失又導(dǎo)致神經(jīng)遞質(zhì)的減少和記憶的減損。主要造成斑塊聚集的蛋白質(zhì)包括淀粉狀蛋白前體蛋白(APP)和兩種早老蛋白(早老蛋白I和早老蛋白II)。通過酶β和Y分泌酶連續(xù)裂解淀粉狀蛋白前體蛋白(APP)(它們在大多數(shù)細(xì)胞中組成型表達(dá)和分解代謝)導(dǎo)致39至43個(gè)氨基酸的A β肽的釋放。APPs的降解可能會(huì)增加它們在斑塊中聚集的傾向。由于其C末端的兩個(gè)極疏水的氨基酸殘基,(1-42)片段尤其具有構(gòu)建聚集物的高傾向。因此認(rèn)SAP (1-42)片段主要參與并造成AD中神經(jīng)炎斑塊形成的起始,并因此具有高病理學(xué)潛力。因此需要能預(yù)防淀粉狀蛋白斑的形成并擴(kuò)散在AD中現(xiàn)存的淀粉狀蛋白斑的藥劑。
[0009]AD的癥狀出現(xiàn)緩慢,第一個(gè)癥狀可能僅僅是輕度健忘。在這一階段,個(gè)體可能忘記新近的事件、活動(dòng)、熟悉的人或東西的名稱以及不能解決簡單的數(shù)學(xué)問題。隨著疾病進(jìn)展, 癥狀能更容易地被注意到并且變得足夠嚴(yán)重從而導(dǎo)致患有AD的人們或他們的家人尋求醫(yī)學(xué)幫助。AD的中期癥狀包括忘記如何做諸如整理清潔的簡單任務(wù),以及說話、理解、閱讀或書寫的問題逐漸顯現(xiàn)。后期的AD患者可能變得焦慮或具攻擊性,可能從家里走失以及最終需要全面護(hù)理。
[0010]目前,唯一的明確診斷AD的方法是在個(gè)體死后的尸體解剖中鑒別腦組織中的斑塊和纏結(jié)。因此,當(dāng)人仍活著的時(shí)候,醫(yī)生只能作出“可能”或“很可能”患有AD的診斷。應(yīng)用目前的方法,內(nèi)科醫(yī)生利用數(shù)種診斷“很可能”AD的工具可以至多在90%的時(shí)間準(zhǔn)確地診斷AD。內(nèi)科醫(yī)師詢問人的一般健康、過去的醫(yī)療問題和此人完成日常活動(dòng)的任何困難的歷史。記憶、問題求解、注意力、計(jì)算和語言的行為測試提供認(rèn)知退化的有關(guān)信息,醫(yī)療檢驗(yàn)諸如血、尿或脊髓液的檢驗(yàn)和腦部掃描可以提供一些其它信息。[0011]AD的管理由基于藥物的和不基于藥物的治療組成。以改變疾病潛在的過程(延緩或逆轉(zhuǎn)進(jìn)程)為目的的治療目前大部分是不成功的?;謴?fù)神經(jīng)細(xì)胞的化學(xué)信使(神經(jīng)遞質(zhì))不足(缺陷)或功能障礙的藥物,特別是膽堿酯酶抑制劑(ChEI)(諸如他克林和卡巴拉汀(rivastigmine))已顯示出可改善癥狀。ChEI阻礙神經(jīng)遞質(zhì)的酶降解,因此增加在腦中可用于傳遞神經(jīng)信號(hào)的化學(xué)信使的量。
[0012]對(duì)于某些在疾病早期和中期階段的人們,藥物他克林(COGNEX?, Morris Plains, NJ)、多奈哌齊(ARICEPT?,Tokyo, JP), 卡巴拉汀 (丨〈XHOIS",丨(ast丨丨anovc丨或加蘭他敏
(REMINYL?, New Brunswick, 可以在有限的時(shí)間內(nèi)幫助防止某些癥狀變得
更嚴(yán)重。另一種藥物美金剛(NAMENDA?, New York, NY)已被核準(zhǔn)治療中等至
嚴(yán)重的AD。也有藥物用于對(duì)付AD的精神病學(xué)表現(xiàn)。有些藥物也可以幫助控制AD的行為癥狀,諸如失眠、興奮、恍惚、焦慮和抑郁。治療這些癥狀通常使得患者更舒服和使對(duì)于照顧者來說更容易照顧。不幸的是,盡管顯著地治療進(jìn)展顯示出這一類藥劑可靠地比安慰劑好, 但是疾病仍繼續(xù)發(fā)展,并且對(duì)精神功能的平均作用僅為有限的。很多用于AD藥物治療的藥物,例如,諸如ChEI,也具有副作用,包括胃腸功能失調(diào)、肝臟毒性和體重減輕。
[0013]另外一種基于淀粉狀蛋白樣蛋白的聚集和沉積或與其相關(guān)的疾病是黃斑變性。
[0014]黃斑變性是引起視網(wǎng)膜(在眼睛后部的像紙一樣薄的組織,在此感光細(xì)胞傳送視覺信號(hào)至大腦)的中心區(qū)域即黃斑區(qū)變性的常見的疾病。通過黃斑區(qū)處理產(chǎn)生清楚、明晰、 “筆直向前”的視覺。損傷黃斑區(qū)導(dǎo)致盲點(diǎn)的產(chǎn)生和模糊不清或視物變形。年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)在美國是引起視力損傷的主要原因,并且對(duì)于65歲以上的人來說,其為高加索人中法定失明的主要原因。大約有180萬40歲及以上的美國人患有晚期AMD,以及其它730萬患有中等AMD的人具有視力喪失的真實(shí)的危險(xiǎn)。政府估計(jì)到2020年,將會(huì)有290萬人患有晚期AMD。AMD患者常常驚訝和沮喪地發(fā)現(xiàn)對(duì)這種盲癥狀的原因和治療了解的是如此之少。
[0015]存在兩種黃斑變性的形式:干性黃斑變性和濕性黃斑變性。有百分之八十五的黃斑變性患者診斷為干性形式,其中黃斑區(qū)的細(xì)胞緩慢地開始損壞。盡管一只眼睛可能喪失視力而另外一只眼睛保持未受影響,但兩只眼睛通常都受到干性AMD的影響。視網(wǎng)膜下的黃色沉積物,即脈絡(luò)膜小疣是干性AMD的早期征兆。隨著脈絡(luò)膜小疣的數(shù)目和大小的增加,發(fā)展成晚期干性AMD或濕性AMD的危險(xiǎn)也增加。干性AMD可能在不轉(zhuǎn)變?yōu)榧膊〉臐裥孕问降那闆r下進(jìn)一步發(fā)展并且導(dǎo)致視力的喪失;然而,早期的干性AMD也有可能突然變?yōu)闈裥孕问健?br> [0016]盡管只占到病例的百分之十五,濕性形式導(dǎo)致了失明的百分之九十,并且被認(rèn)為是晚期的AMD (沒有早期或中期階段的濕性AMD)。濕性AMD總是處于疾病的干性形式之后。當(dāng)干性形式變得更嚴(yán)重,一些人在黃斑區(qū)的后面開始有異常的血管生長。這些血管非常脆弱并且會(huì)泄漏液體和血液(因此是“濕性”黃斑變性),這導(dǎo)致了對(duì)黃斑區(qū)的快速損傷。
[0017]干性形式的AMD開始會(huì)常常引起輕度的視力模糊。特別是視力的中心可能變得模糊不清,并且這一區(qū)域隨著疾病的發(fā)展變得更大。如果只有一只眼睛受到影響,則沒有癥狀可以被注意到。在濕性AMD中,直線可能看起來像波浪狀,并且中心視力的喪失可能很快出現(xiàn)。
[0018]黃斑變性的診斷一般涉及擴(kuò)張眼檢查、視覺敏感度試驗(yàn),以及用稱之為眼底檢查的方法查看眼睛的后部以幫助診斷AMD,并且如果有濕性AMD的嫌疑,則也可能進(jìn)行熒光素血管造影術(shù)。如果干性AMD達(dá)到晚期階段,沒有預(yù)防視力喪失的現(xiàn)行治療。然而,抗氧化劑
和鋅的特定高劑量配方可以延緩或預(yù)防中期AMD發(fā)展至晚期階段。
【權(quán)利要求】
1.嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其特異地結(jié)合至淀粉狀蛋白上的至少一個(gè)表位,其中所述表位包含至少兩個(gè)連續(xù)的主要參與抗體結(jié)合的氨基酸殘基,其中所述的至少兩個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基是埋在以下核心序列(SEQ ID NO: 10)中的-Lys-Leu-:Xaa1-Xaa2-Lys-Leu-Xaa3,其中Xaa1是選自His、Asn、Gin、Lys和Arg的氨基酸;Xaa2是選自Asn和Gln的氨基酸;以及Xaa3是選自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸。
2.嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其特異地結(jié)合至淀粉狀蛋白上的至少一個(gè)表位,其中所述表位包含至少兩個(gè)連續(xù)的主要參與抗體結(jié)合的氨基酸殘基,其中所述的至少兩個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基是埋在以下核心序列(SEQ ID NO:9)中的-Phe-Phe-:Xaa3-Phe-Phe-Xaa4-Xaa5-Xaa6,其中Xaa3是選自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸殘基;Xaa4是選自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸殘基;Xaa5是選自Glu和Asp的氨基酸殘基;以及 Xaa6是選自Glu和Asp的氨基酸殘基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段, 其特異地結(jié)合至(6-淀粉狀蛋白上的至少兩個(gè)表位,其中所述的至少兩個(gè)表位中的每`一個(gè)表位包含至少兩個(gè)連續(xù)的主要參與抗體結(jié)合的氨基酸殘基,其中該至少兩個(gè)連續(xù)的氨基酸被至少一個(gè)不參與抗體結(jié)合或與所述的連續(xù)的氨基酸殘基相比參與抗體結(jié)合程度顯著較小的氨基酸殘基隔開,其分別是埋在以下核心序列中的-Phe-Phe-和-Lys-Leu-:Xaa1-Xaa2-Lys-Leu-Xaa3-Phe-Phe-Xaa4-Xaa5-Xaa6,其中 Xaa1是選自His、Asn、Gin、Lys和Arg的氨基酸;Xaa2是選自Asn和Gln的氨基酸;Xaa3是選自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸;Xaa4是選自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氛基酸;Xaa5是選自Glu和Asp的氨基酸;以及 Xaa6是選自Glu和Asp的氨基酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其中Xaa1是選自His和Arg的氨基酸;Xaa2是選自Asn和Gln的氨基酸;Xaa3是選自Val和Leu的氨基酸;Xaa4是選自Ala和Val的氨基酸;Xaa5是選自Glu和Asp的氨基酸;以及 Xaa6是選自Glu和Asp的氨基酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其中Xaa1 是 His ;Xaa2 是 Gln ;Xaa3 是 Val ;Xaa4 是 Ala ;Xaa5 是 Glu ;以及 Xaa6 是 Asp。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其特異地結(jié)合至β_淀粉狀蛋白上的至少兩個(gè)表位,其中所述的至少兩個(gè)表位中的每一個(gè)表位包含至少兩個(gè)連續(xù)的主要參與抗體結(jié)合的氨基酸殘基,其分別是-Phe-Phe-和-Lys-Leu-,并且其中所述的至少兩個(gè)獨(dú)特的結(jié)合部位分別呈現(xiàn)出SEQ IDNO: 7所不的氨基酸序列-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-和SEQ ID NO:8所不的氨基酸序列His-Gln-Lys-Leu-Val-O
7.人源化抗體或人源化抗體片段,其在可變區(qū)中包含至少一個(gè)非人源CDR和一個(gè)或多個(gè)人類或靈長類動(dòng)物衍生的構(gòu)架區(qū),以及任選地衍生自人類或靈長類動(dòng)物源抗體的恒定區(qū),所述人源化抗體或人源化抗體片段能夠在包含以下氨基酸序列(SEQ ID NO: 11)的表位處特異地結(jié)合β_淀粉狀蛋白、β_淀粉狀蛋白單體肽、包含多個(gè)β_淀粉狀蛋白單體單位的聚合可溶性淀粉狀蛋白肽,β_淀粉狀蛋白纖維、原纖維或纖絲,以及分離的或作為β-淀粉狀蛋白斑一部分的β-淀粉狀蛋白聚合肽:Xaa1-Xaa2-Lys-Leu-Xaa3-Phe-Phe-Xaa4-Xaa5-Xaa6,其中,Xaa1是選自His、Asn、Gln的氨基酸殘基,但尤其是His ; Xaa2是選自Asn和Gln的氨基酸殘基,但尤其是Gln ;以及Xaa3是選自Val、Leu和Ile的氨基酸殘基,但尤其是Val ;Xaa4是選自Ala和Val的氨基酸殘基,但尤其是Ala ;Xaa5是選自Glu和Asp的氨基酸殘基,但尤其是Glu ;Xaa6是選自Glu和Asp的氨基酸殘基,但尤其是Asp。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的非人源CDR是從針對(duì)不含有所述表位的抗原片段產(chǎn)生的供體抗體得到的。
9.人源化抗體或人源化抗體片段,其包含可變區(qū),其中所述可變區(qū)具有人類或靈長類動(dòng)物衍生的構(gòu)架區(qū)和至少一個(gè)具有選自以下序列的氨基酸序列的CDR:代表重鏈可變區(qū)(HCVR) CDR2的SEQ ID NO: 2和代表重鏈可變區(qū)(HCVR) CDR3的SEQ ID NO: 3,以及代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDRl 的 SEQ ID NO:4。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的人源化抗體包含重鏈可變區(qū),其中所述重鏈可變區(qū)具有人類或靈長類動(dòng)物衍生的重鏈構(gòu)架區(qū)和至少一個(gè)具有選自以下序列的氨基酸序列的⑶R:代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶R2的SEQ ID NO:2和代表重鏈可變區(qū)(HCVR)CDR3 的 SEQ ID NO:3。
11.根據(jù)權(quán)利要求9的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的人源化抗體包含輕鏈可變區(qū),其中所述的輕鏈可變區(qū)具有人類或靈長類動(dòng)物衍生的輕鏈構(gòu)架區(qū)和具有代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDRl的SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR。
12.根據(jù)權(quán)利要求9的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的人源化抗體包含可變區(qū),其中所述可變區(qū)具有人類或靈長類動(dòng)物衍生的構(gòu)架區(qū)和至少兩個(gè)具有選自以下序列的氨基酸序列的⑶R:代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶Rl的SEQ ID NO: 1、代表重鏈可變區(qū)(HCVR)CDR2的SEQ ID NO: 2和代表重鏈可變區(qū)(HCVR) CDR3的SEQ ID NO: 3,以及代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDRl的SEQ ID N0:4、代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDR2的SEQ ID N0:5和代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDR3 的 SEQ ID NO:6。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的人源化抗體包含重鏈可變區(qū),其中所述重鏈可變區(qū)具有人類或靈長類動(dòng)物衍生的重鏈構(gòu)架區(qū)和至少兩個(gè)具有選自以下序列的氨基酸序列的⑶R:代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶Rl的SEQ ID NO: 1、代表重鏈可變區(qū)(HCVR)CDR2的SEQ ID NO:2和代表重鏈可變區(qū)(HCVR)CDR3的SEQ ID NO:3;其中相同的CDR不能在該抗體中出現(xiàn)兩次。
14.根據(jù)權(quán)利要求12的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的人源化抗體包含輕鏈可變區(qū),其中所述輕鏈可變區(qū)具有人類或靈長類動(dòng)物衍生的輕鏈構(gòu)架區(qū)和至少兩個(gè)具有選自以下序列的氨基酸序列的CDR:代表輕鏈可變區(qū)(LCVR) CDRl的SEQ ID N0:4、代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDR2的SEQ ID N0:5和代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDR3的SEQ ID N0:6 ;其中相同的CDR不能在該抗體中出現(xiàn)兩次。
15.根據(jù)權(quán)利要求9的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的人源化抗體包含重鏈可變區(qū),其中所述重鏈可變區(qū)具有人類或靈長類動(dòng)物衍生的重鏈構(gòu)架區(qū)和具有以下氨基酸序列的⑶R:代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶Rl的SEQ ID NO: 1、代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶R2 的SEQ ID NO:2和代表重鏈可變區(qū)(HCVR)CDR3的SEQ ID NO:3 ;特別地以所指出的順序。
16.根據(jù)權(quán)利要求9的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的人源化抗體包含輕鏈可變區(qū),其中所述輕鏈可變區(qū)具有人類或靈長類動(dòng)物衍生的輕鏈構(gòu)架區(qū)和具有以下氨基酸序列的CDR:代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDRl的SEQ ID N0:4、代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDR2 的SEQ ID N0:5和代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDR3的SEQ ID NO:6 ;特別地以所指出的順序。
17.根據(jù)權(quán)利要求9的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的人源化抗體包含可變區(qū),其中所述可變區(qū)具有人類或靈長類動(dòng)物衍生的構(gòu)架區(qū)和至少三個(gè)具有選自以下序列的氨基酸序列的⑶R:代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶Rl的SEQ ID NO: 1、代表重鏈可變區(qū)(HCVR) CDR2的SEQ ID NO: 2和代表重鏈可變區(qū)(HCVR) CDR3的SEQ ID NO: 3,以及代表輕鏈可變區(qū) (LCVR)CDRl的SEQ ID N0:4、代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDR2的SEQ ID N0:5和代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)⑶R3的SEQ ID NO: 6,其中相同的⑶R不能在該抗體中出現(xiàn)兩次。
18.根據(jù)權(quán)利要求9的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的人源化抗體包含可變區(qū),其中所述可變區(qū)具有人類或靈長類動(dòng)物衍生的構(gòu)架區(qū)和至少四個(gè)具有選自以下序列的氨基酸序列的⑶R:代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶Rl的SEQ ID NO: 1、代表重鏈可變區(qū)(HCVR) CDR2的SEQ ID NO: 2和代表重鏈可變區(qū)(HCVR) CDR3的SEQ ID NO: 3,以及代表輕鏈可變區(qū) (LCVR)CDRl的SEQ ID N0:4、代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDR2的SEQ ID N0:5和代表輕鏈可`變區(qū)(LCVR)⑶R3的SEQ ID NO:6,其中相同的⑶R不能在該抗體中出現(xiàn)兩次。
19.根據(jù)權(quán)利要求9的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的人源化抗體包含可變區(qū),其中所述可變區(qū)具有人類或靈長類動(dòng)物衍生的構(gòu)架區(qū)和至少五個(gè)具有選自以下序列的氨基酸序列的⑶R:代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶Rl的SEQ ID NO: 1、代表重鏈可變區(qū)(HCVR) CDR2的SEQ ID NO: 2和代表重鏈可變區(qū)(HCVR) CDR3的SEQ ID NO: 3,以及代表輕鏈可變區(qū) (LCVR) CDRl的SEQ ID NO: 4、代表輕鏈可變區(qū)(LCVR) CDR2的SEQ ID NO: 5和代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)⑶R3的SEQ ID NO:6,其中相同的⑶R不能在該抗體中出現(xiàn)兩次。
20.根據(jù)權(quán)利要求9的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的人源化抗體包含可變區(qū),其中所述可變區(qū)具有人類或靈長類動(dòng)物衍生的構(gòu)架區(qū)和具有以下氨基酸序列的CDR:代表重鏈可變區(qū)(HCVR)CDRl的SEQ ID NO: 1、代表重鏈可變區(qū)(HCVR)CDR2的SEQ ID NO:2和代表重鏈可變區(qū)(HCVR) CDR3的SEQ ID NO: 3,以及代表輕鏈可變區(qū)(LCVR) CDRl的SEQ IDN0:4、代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDR2的SEQ ID N0:5和代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDR3的SEQID N0:6。
21.根據(jù)權(quán)利要求10的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述至少一個(gè)CDR是具有代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶R2的SEQ ID NO:2的氨基酸序列的⑶R。
22.根據(jù)權(quán)利要求10的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述至少一個(gè)CDR是具有代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶R3的SEQ ID NO:3的氨基酸序列的⑶R。
23.根據(jù)權(quán)利要求13的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的至少兩個(gè)CDR是具有代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶Rl的SEQ ID NO:1和代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶R2的SEQ IDNO:2的氨基酸序列的⑶R。
24.根據(jù)權(quán)利要求13的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的至少兩個(gè)CDR是具有代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶Rl的SEQ ID NO:1和代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶R3的SEQ IDNO:3的氨基酸序列的⑶R。
25.根據(jù)權(quán)利要求13的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的至少兩個(gè)CDR是具有代表重鏈可變區(qū)(HCVR) CDR2的SEQ ID NO: 2和代表重鏈可變區(qū)(HCVR) CDR3的SEQ IDNO:3的氨基酸序列的⑶R。
26.根據(jù)權(quán)利要求14的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的至少兩個(gè)CDR是具有代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDRl的SEQ ID NO:4和代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDR2的SEQ IDNO:5的氨基酸序列的⑶R。
27.根據(jù)權(quán)利要求14的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的至少兩個(gè)CDR是具有代表輕鏈可變區(qū)(LCVR) CDRl的SEQ ID NO:4和代表輕鏈可變區(qū)(LCVR) CDR3的SEQ IDNO:6的氨基酸序列的⑶R。
28.根據(jù)權(quán)利要求12的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述的至少兩個(gè)CDR選自根據(jù)權(quán)利要求23至27任一項(xiàng)的⑶R。
29.根據(jù)權(quán)利要求9至28任一項(xiàng)的人源化抗體或人源化抗體片段,其包含人類或靈長類動(dòng)物來源的輕鏈和/或重鏈恒定區(qū)。
30.嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其中如SEQIDNO: 1-6給出的輕鏈和重鏈CDR區(qū)的至少一個(gè)氨基酸通過保守替換被改變,從而該抗體保留了其完全的功能。
31.根據(jù)權(quán)利要求30的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其中在如SEQIDN0:5給出的輕鏈可變區(qū)(LCVR)的CDR2氨基酸序列中,在Kabat位置50的Lys被Arg、Gln或Glu、特別地被Arg替換,和/或在Kabat位置53的Asn被Ala、Val、Leu、Ser和He、尤其是被Ser替換。
32.根據(jù)權(quán)利要求9至31任一項(xiàng)的人源化抗體或人源化抗體片段,其中構(gòu)架區(qū)序列是KABAT亞組VKII的人類種系VK序列。
33.根據(jù)權(quán)利要求9至31任一項(xiàng)的人源化抗體或人源化抗體片段,其中構(gòu)架區(qū)序列是KABAT亞組VHIII的人類種系VH序列。
34.根據(jù)權(quán)利要求1-33任一項(xiàng)的人源化抗體或人源化抗體片段,其中通過替換為來自鼠人源化抗體AC1-01-Ab7C2的相應(yīng)區(qū)域的氨基酸或與之保守的替換來改變?nèi)祟惢蜢`長類動(dòng)物衍生的構(gòu)架區(qū)的至少一個(gè)氨基酸。
35.根據(jù)權(quán)利要求34的人源化抗體或人源化抗體片段,其中人類或靈長類動(dòng)物衍生的重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)的Kabat位置47的Trp被選自Leu、正亮氨酸、lie、Val、Met、Ala和 Phe的氨基酸替換。
36.根據(jù)權(quán)利要求34的人源化抗體或人源化抗體片段,其中如SEQID NO: 15所示的人類或靈長類動(dòng)物衍生的重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)的Kabat位置94的Arg被選自Ser和Thr的氨基酸、但尤其是被Ser替換。
37.根據(jù)權(quán)利要求34的人源化抗體或人源化抗體片段,其中如SEQID NO: 15所示的人類或靈長類動(dòng)物衍生的重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)的Kabat位置47的Trp被選自Leu、正亮氨酸、 Ile、Val、Met、Ala和Phe的氨基酸、特別地被選自Leu和Ile的氨基酸、但尤其是被Leu替換,并且如SEQ ID NO: 15所示的人類或靈長類動(dòng)物衍生的重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)的Kabat位置94的Arg被選自Ser和Thr的氨基酸、但尤其是被Ser替換。
38.根據(jù)權(quán)利要求34的人源化抗體或人源化抗體片段,其中如SEQID NO: 12所示的人類或靈長類動(dòng)物衍生的輕鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)的Kabat位置87的Tyr被選自Phe、Leu、Val、 Ile和Ala的氨基酸、特別地被選自Leu和Phe的氨基酸、但尤其是被Phe替換。
39.根據(jù)權(quán)利要求34的人源化抗體或人源化抗體片段,其中如SEQID NO: 15所示的人類或靈長類動(dòng)物衍生的重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)的Kabat位置47的Trp被選自Leu、正亮氨酸、 Ile、Val、Met、Ala和Phe的氨基酸、特別地被選自Leu和Ile的氨基酸、但尤其是被Leu替換,并且如SEQ ID NO: 15所示的人類或靈長類動(dòng)物衍生的重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)的Kabat位置94的Arg被選自Ser和Thr的氨基酸、但尤其是被Ser替換;并且如SEQ ID NO: 12所示的人類或靈長類動(dòng)物衍生的輕鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)的Kabat位置87的Tyr被選自Phe、Leu、 Val、Ile和Ala的氨基酸、特別地被選自Leu和Phe的氨基酸、但尤其是被Phe替換。
40.根據(jù)權(quán)利要求35的人源化抗體或人源化抗體片段,其中如SEQID NO: 15所示的人類或靈長類動(dòng)物衍生的重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)的Kabat位置47的Trp被選 自Leu、正亮氨酸、 Ile、Val、Met、Ala和Phe的氨基酸、特別地被選自Leu和Ile的氨基酸、但尤其是被Leu替換。
41.根據(jù)權(quán)利要求36的人源化抗體或人源化抗體片段,其中如SEQID NO: 15所示的人類或靈長類動(dòng)物衍生的重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)的Kabat位置94的Arg被選自Ser和Thr的氨基酸、但尤其是被Ser替換。
42.根據(jù)權(quán)利要求37的人源化抗體或人源化抗體片段,其中如SEQID NO: 15所示的人類或靈長類動(dòng)物衍生的重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)的Kabat位置47的Trp被選自Leu和Ile的氨基酸、但尤其是被Leu替換。
43.根據(jù)權(quán)利要求38的人源化抗體或人源化抗體片段,其中如SEQID NO: 12所示的人類或靈長類動(dòng)物衍生的輕鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)的Kabat位置87的Tyr被Phe替換。
44.根據(jù)權(quán)利要求39的人源化抗體或人源化抗體片段,其中如SEQID NO: 15所示的人類或靈長類動(dòng)物衍生的重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)的Kabat位置47的Trp被選自Leu和Ile的氨基酸、但尤其是被Leu替換;并且如SEQ ID NO: 15所示的人類或靈長類動(dòng)物衍生的重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)的Kabat位置94的Arg被Ser替換;并且如SEQ ID NO: 12所示的人類或靈長類動(dòng)物衍生的輕鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)的Kabat位置87的Tyr被Phe替換。
45.根據(jù)權(quán)利要求1-44任一項(xiàng)的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其中重鏈可變區(qū)(HCVR)具有分別與SEQ ID NO: 15和16給出的序列90%、特別地95%、更特別地98%同一的氨基酸序列。
46.根據(jù)權(quán)利要求1-44任一項(xiàng)的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其中輕鏈可變區(qū)(LCVR)具有分別與SEQ ID NO: 12和13給出的序列90%、特別地95%、更特別地98%同一的氨基酸序列。
47.根據(jù)權(quán)利要求1-44任一項(xiàng)的人源化抗體或人源化抗體片段,其中重鏈可變區(qū)(HCVR)的至少兩個(gè)、但尤其是三個(gè)⑶R區(qū)具有與SEQ ID NO: 1-3給出的相應(yīng)的⑶R區(qū)90%、特別地95%、更特別地98%同一的氨基酸序列。
48.根據(jù)權(quán)利要求1-44任一項(xiàng)的人源化抗體或人源化抗體片段,其中輕鏈可變區(qū)(LCVR)的至少兩個(gè)、但尤其是三個(gè)⑶R區(qū)具有與SEQ ID NO:4_6給出的相應(yīng)的⑶R區(qū)90%、特別地95%、更特別地98%同一的氨基酸序列。
49.嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其包含SEQID NO: 13的輕鏈可變區(qū)。
50.根據(jù)權(quán)利要求49的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其還包含SEQ ID NO: 14的輕鏈恒定區(qū)。
51.嵌合抗體或嵌合抗體片段 、或人源化抗體或人源化抗體片段,其包含SEQID NO: 13的輕鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 14的輕鏈恒定區(qū)。
52.嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其包含SEQID NO: 16的重鏈可變區(qū)。
53.根據(jù)權(quán)利要求52的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其還包含SEQ ID NO: 17的重鏈恒定區(qū)。
54.嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其包含SEQID NO: 16的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 17的重鏈恒定區(qū)。
55.根據(jù)權(quán)利要求50、51、53和54任一項(xiàng)的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其中重鏈恒定區(qū)的N-端Lys已被移除。
56.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,所述抗體是I gG1、I gG2、I gG3或包括突變的I gG4在內(nèi)的I gG4同種型,但尤其是I gG4同種型。
57.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,所述抗體是雙功能的,因?yàn)樗鼈冿@示出聚集抑制特性和解聚特性這兩種特性,特別是配以高度構(gòu)象敏感性。
58.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,所述抗體在與淀粉狀蛋白單體的和/或聚合的可溶性淀粉狀蛋白肽,特別是β -淀粉狀蛋白單體肽,例如,諸如Αβ單體肽1-39、1-40、1-41或1_42,和/或包含多個(gè)所述Aβ單體單位的聚合可溶性β -淀粉狀蛋白肽,但尤其是與Αβ卜42單體的和/或包含多個(gè)所述Ai^_42單體單位的Αβ聚合可溶性淀粉狀蛋白肽共孵育后,抑制了 Αβ單體聚集成高分子的聚合原纖維或纖絲,以及此外,在與由淀粉狀蛋白單體肽,特別是β_淀粉狀蛋白單體肽,例如,諸如A ^單體肽1-39、1-40、1-41或1-42,但尤其是A P 1-42單體肽的聚集形成的預(yù)形成高分子聚合淀粉狀蛋白原纖維或纖絲共孵育后,能夠解聚預(yù)形成的聚合原纖維或纖絲。
59.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,所述抗體基本上結(jié)合至哺乳動(dòng)物腦中、特別是人類腦中聚集的A3。
60.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,所述抗體降低哺乳動(dòng)物腦中、特別是人類腦中AP斑塊負(fù)荷。
61.包含編碼根據(jù)權(quán)利要求1-60任一項(xiàng)的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段的核苷酸序列的核酸分子。
62.包含編碼抗體可變區(qū)的核苷酸序列的核酸分子,其中所述抗體可變區(qū)包含代表重鏈可變區(qū)(HCVR)的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 2和3的SEQ ID NO: 2和3。
63.包含編碼抗體可變區(qū)的核苷酸序列的核酸分子,其中所述抗體可變區(qū)包含代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)I的SEQ ID N0:4。
64.根據(jù)權(quán)利要求62的核酸分子,其包含如SEQID NO: 18和SEQ ID NO: 19給出的核苷酸序列。
65.根據(jù)權(quán)利要求63的核酸分子,其包含如SEQID NO: 20給出的核苷酸序列。
66.包含SEQID NO:22的編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列的核酸分子。
67.包含SEQID NO:22的編碼輕鏈可變區(qū)和SEQ ID NO:23的編碼輕鏈恒定區(qū)的核苷酸序列的核酸分子。
68.包含SEQID NO:25的編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列的核酸分子。
69.包含SEQID NO:25的編碼重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO:26的編碼重鏈恒定區(qū)的核苷酸序列的核酸分子。
70.包含權(quán)利要求60至69任一項(xiàng)的核苷酸序列的表達(dá)載體。
71.包含表達(dá)載體的細(xì)胞,其中所述表達(dá)載體包含權(quán)利要求60至68任一項(xiàng)的核苷酸序列、或是權(quán)利要求70的表達(dá)載體。
72.包含治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至60任一項(xiàng)的抗體的組合物,其中所述抗體包括任何功能等效抗體或其功能部分。
73.根據(jù)權(quán)利要求72的組合物,其為任選地還包含可藥用載體的藥物組合物。
74.根據(jù)權(quán)利要求72至73任一項(xiàng)的組合物,其包含治療有效量的抗體。
75.混合物,所述混合物包含治療有效量的包括任何功能等效抗體或其功能部分的根據(jù)權(quán)利要求1至60任一項(xiàng)的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段, 以及任選地其它生物活性物質(zhì)和/或可藥用載體和/或稀釋劑和/或賦形劑。
76.根據(jù)權(quán)利要求75的混合物,其中其它生物活性物質(zhì)是在治療淀粉狀變性中使用的化合物,所述淀粉狀變性是一組與淀粉狀蛋白或淀粉狀蛋白樣蛋白,諸如參與阿爾茨海默病的AP蛋白相關(guān)的疾病和病癥。
77.根據(jù)權(quán)利要求76的混合物,其包含根據(jù)本發(fā)明的抗體、任選的可藥用載體和/或稀釋劑和/或賦形劑、以及至少一種選自以下的化合物:抗氧化應(yīng)激的化合物、抗細(xì)胞凋亡的化合物、金屬螯合劑、DNA修復(fù)抑制劑諸如哌侖西平和代謝物、3-氨基-1-丙磺酸(3APS)、 1,3_丙二磺酸(1,3^^)、0-分泌酶活化劑、0-和Y-分泌酶抑制劑、T蛋白、神經(jīng)遞質(zhì)、β折疊破壞劑、淀粉狀蛋白β清除/減少細(xì)胞內(nèi)組分的引誘劑、包括焦谷氨酸化淀粉狀蛋白β 3-42在內(nèi)的N端截短淀粉狀蛋白β的抑制劑、消炎分子、或膽堿酯酶抑制劑(ChEI),諸如他克林、卡巴拉汀、多奈哌齊、和/或加蘭他敏,Ml激動(dòng)劑和其它藥物,包括任何淀粉狀蛋白修飾藥物或τ修飾藥物和營養(yǎng)補(bǔ)充劑。
78.根據(jù)權(quán)利要求77的混合物,其中所述化合物是膽堿酯酶抑制劑(ChEI)。
79.根據(jù)權(quán)利要求75至77任一項(xiàng)的混合物,其中所述化合物是他克林、卡巴拉汀、多奈哌齊、加蘭他敏、煙酸和美金剛胺。
80.根據(jù)權(quán)利要求75至79任一項(xiàng)的混合物,其包含治療有效量的抗體和/或生物活性物質(zhì)。
81.根據(jù)權(quán)利要求1至60任一項(xiàng)的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段和/或其功能部分和/或根據(jù)權(quán)利要求72至74任一項(xiàng)的藥物組合物,或根據(jù)權(quán)利要求75至80任一項(xiàng)的混合物在制備治療或減輕淀粉狀變性的效應(yīng)的藥物中的用途,所述淀粉狀變性是一組與淀粉狀蛋白斑的形成相關(guān)的疾病和病癥,包括繼發(fā)性淀粉狀變性和年齡相關(guān)性淀粉狀變性,諸如以下疾病,包括但不限于神經(jīng)疾病諸如阿爾茨海默病(AD)、路易體癡呆、唐氏綜合征、遺傳性腦出血伴淀粉狀變性(荷蘭型)、關(guān)島帕金森-癡呆綜合征;以及其它基于淀粉狀蛋白樣蛋白或與其相關(guān)的疾病,諸如進(jìn)行性核上性麻痹、多發(fā)性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相關(guān)癡呆、ALS (肌萎縮性側(cè)索硬化癥)、成年發(fā)病型糖尿?。焕夏晷孕呐K淀粉狀變性;內(nèi)分泌腫瘤,以及其它疾病,包括黃斑變性。
82.根據(jù)權(quán)利要求81的用途,其中淀粉狀蛋白相關(guān)疾病或病癥是阿爾茨海默病。
83.根據(jù)權(quán)利要求81的用途,其中淀粉狀蛋白相關(guān)病癥以動(dòng)物、特別是哺乳動(dòng)物或人類認(rèn)知記憶能力喪失為特征。
84.根據(jù)權(quán)利要求81的用途,其中治療患有以認(rèn)知記憶能力喪失為特征的淀粉狀蛋白相關(guān)病癥的動(dòng)物、特別是哺乳動(dòng)物或人類導(dǎo)致認(rèn)知記憶能力的升高。
85.根據(jù)權(quán)利要求81的用途,其中治療患有以認(rèn)知記憶能力喪失為特征的淀粉狀蛋白相關(guān)病癥的動(dòng)物、特別是哺乳動(dòng)物或人類導(dǎo)致認(rèn)知記憶能力的完全恢復(fù)。
86.制備用于預(yù)防、治療或減輕淀粉狀變性的效應(yīng)的方法中的根據(jù)權(quán)利要求72至74任一項(xiàng)的藥物組合物,或根據(jù)權(quán)利要求75至80任一項(xiàng)的混合物的方法,包括以可藥用形式配制根據(jù)本發(fā)明的抗體,其中所述淀粉狀變性是一組與淀粉狀蛋白斑的形成相關(guān)的疾病和病癥,包括繼發(fā)性淀粉狀變性和年齡相關(guān)性淀粉狀變性,諸如以下疾病,包括但不限于神經(jīng)疾病諸如阿爾茨海默病(AD)、路易體癡呆、唐氏綜合征、遺傳性腦出血伴淀粉狀變性(荷蘭型)、關(guān)島帕金森-癡呆綜合征;以及其它基于淀粉狀蛋白樣蛋白或與其相關(guān)的疾病,諸如進(jìn)行性核上性麻痹、多發(fā)性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相關(guān)癡呆、ALS (肌萎縮性側(cè)索硬化癥)、成年發(fā)病型糖尿病、老年性心臟淀粉狀變性、內(nèi)分泌腫瘤,以及其它疾病,包括黃斑變性。
87.根據(jù)權(quán)利要求86的方法,其中抗體以治療有效量包含于組合物中。
88.根據(jù)權(quán)利要求86的方法,其中淀粉狀蛋白相關(guān)疾病或病癥是阿爾茨海默病。
89.根據(jù)權(quán)利要求86的方法,其中淀粉狀蛋白相關(guān)病癥以動(dòng)物、特別是哺乳動(dòng)物或人類認(rèn)知記憶能力喪失為特征。
90.根據(jù)權(quán)利要求86的方法,其中治療患有以認(rèn)知記憶能力喪失為特征的淀粉狀蛋白相關(guān)病癥的動(dòng)物、特別是哺乳動(dòng)物或人類導(dǎo)致認(rèn)知記憶能力的升高。
91.根據(jù)權(quán)利要求86的方法,其中淀粉狀蛋白相關(guān)病癥以動(dòng)物、特別是哺乳動(dòng)物或人類認(rèn)知記憶能力減損為特征。
92.根據(jù)權(quán)利要求86的方法,其中治療患有以認(rèn)知記憶能力喪失為特征的淀粉狀蛋白相關(guān)病癥的動(dòng)物、特別是哺乳動(dòng)物或人類導(dǎo)致認(rèn)知記憶能力的逆轉(zhuǎn),并且特別是導(dǎo)致認(rèn)知記憶能力的完全恢復(fù)。
93.預(yù)防、治療或減輕淀粉狀變性的效應(yīng)的方法,所述淀粉狀變性是一組與淀粉狀蛋白斑的形成相關(guān)的疾病和病癥,包括繼發(fā)性淀粉狀變性和年齡相關(guān)性淀粉狀變性,諸如以下疾病,包括但不限于神經(jīng)疾病諸如阿爾茨海默病(AD)、路易體癡呆、唐氏綜合征、遺傳性腦出血伴淀粉狀變性(荷蘭型)、關(guān)島帕金森-癡呆綜合征;以及其它基于淀粉狀蛋白樣蛋白或與其相關(guān)的疾病,諸如進(jìn)行性核上性麻痹、多發(fā)性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、 HIV-相關(guān)癡呆、ALS (肌萎縮性側(cè)索硬化癥)、成年發(fā)病型糖尿病、老年性心臟淀粉狀變性、 內(nèi)分泌腫瘤,以及其它疾病,包括黃斑變性,所述方法通過施與治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至60任一項(xiàng)的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段和/或其功能部分和/或根據(jù)權(quán)利要求72至74任一項(xiàng)的藥物組合物,或根據(jù)權(quán)利要求75至80任一項(xiàng)的混合物給受到此類病癥影響的動(dòng)物或人類,包括施與治療有效量的抗體。
94.根據(jù)權(quán)利要求93的方法,其中淀粉狀蛋白相關(guān)疾病或病癥是阿爾茨海默病。
95.根據(jù)權(quán)利要求93的方法,其中淀粉狀蛋白相關(guān)病癥以動(dòng)物、特別是哺乳動(dòng)物或人類認(rèn)知記憶能力喪失為特征。
96.根據(jù)權(quán)利要求93的方法,其中治療患有以認(rèn)知記憶能力喪失為特征的淀粉狀蛋白相關(guān)病癥的動(dòng)物、特別是哺乳動(dòng)物或人類導(dǎo)致記憶力或認(rèn)知記憶能力的升高。
97.根據(jù)權(quán)利要求93的方法,其中淀粉狀蛋白相關(guān)病癥以動(dòng)物、特別是哺乳動(dòng)物或人類認(rèn)知記憶能力減損為特征。
98.根據(jù)權(quán)利要 求93的方法,其中治療患有以認(rèn)知記憶能力喪失為特征的淀粉狀蛋白相關(guān)病癥的動(dòng)物、特別是哺乳動(dòng)物或人類導(dǎo)致認(rèn)知記憶能力的完全恢復(fù)。
99.在患者中診斷淀粉狀蛋白相關(guān)疾病或病癥的方法,其包括:(a)使懷疑含有淀粉狀蛋白的樣本或特定身體部分或身體區(qū)域與根據(jù)權(quán)利要求1-60 任一項(xiàng)的抗體接觸;(b)允許抗體結(jié)合至淀粉狀蛋白;(C)檢測結(jié)合至蛋白的抗體;以及(d)將抗體結(jié)合的存在或不存在與樣本或特定身體部分或身體區(qū)域中淀粉狀蛋白的存在或不存在相關(guān)聯(lián)。
100.確定組織和/或體液中產(chǎn)生淀粉狀蛋白的斑塊負(fù)荷的程度的方法,包括:(a)獲得代表所研究的組織和/或體液的樣本;(b)用根據(jù)權(quán)利要求1-60任一項(xiàng)的抗體測試所述樣本中淀粉狀蛋白的存在;(C)確定結(jié)合到蛋白的抗體的量;以及(d)計(jì)算組織和/或體液中的斑塊負(fù)荷。
101.用于檢測和診斷淀粉狀蛋白相關(guān)疾病和病癥的測試試劑盒,其包含根據(jù)權(quán)利要求 1-60任一項(xiàng)的抗體。
102.根據(jù)權(quán)利要求101的測試試劑盒,其包含容納一種或多種根據(jù)本發(fā)明的抗體的容器,以及使用抗體用于結(jié)合淀粉狀蛋白抗原以形成免疫復(fù)合物,以及檢測免疫復(fù)合物的形成,從而使免疫復(fù)合物的存在或不存在與淀粉狀蛋白存在或不存在相關(guān)聯(lián)的說明書。
103.輕鏈可變區(qū)(LCVR),其包含人類或靈長類動(dòng)物衍生的構(gòu)架區(qū)和至少一個(gè)具有代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)⑶Rl的SEQ ID NO:4的氨基酸序列的⑶R。
104.重鏈可變區(qū)(HCVR),其包含人類或靈長類動(dòng)物衍生的構(gòu)架區(qū)和至少一個(gè)具有選自以下序列的氨基酸序列的⑶R:代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶R2的SEQ ID NO:2和代表重鏈可變區(qū)(HCVR)CDR3 的 SEQ ID NO:3。
105.重鏈可變區(qū)(HCVR),其包含人類或靈長類動(dòng)物衍生的重鏈構(gòu)架區(qū)和至少兩個(gè)具有選自以下序列的氨基酸序列的⑶R:代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶Rl的SEQ ID N0:1、代表重鏈可變區(qū)(HCVR)CDR2的SEQ ID NO:2和代表重鏈可變區(qū)(HCVR)CDR3的SEQ ID NO:3。
106.輕鏈可變區(qū)(LCVR),其包含人類或靈長類動(dòng)物衍生的輕鏈構(gòu)架區(qū)和至少兩個(gè)具有選自以下序列的氨基酸序列的CDR:代表輕鏈可變區(qū)(LCVR) CDRl的SEQ ID N0:4、代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDR2的SEQ ID NO:5和代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDR3的SEQ ID NO:6。
107.重鏈可變區(qū)(HCVR),其包含人類或靈長類動(dòng)物衍生的重鏈構(gòu)架區(qū)和具有以下氨基酸序列的⑶R:代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶Rl的SEQ ID NO: 1、代表重鏈可變區(qū)(HCVR)⑶R2的SEQ ID NO:2和代表重鏈可變區(qū)(HCVR)CDR3的SEQ ID NO:3,特別地以上面所指出的順序。
108.輕鏈可變區(qū)(LCVR),其包含人類或靈長類動(dòng)物衍生的輕鏈構(gòu)架區(qū)和具有以下氨基酸序列的CDR:代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDRl的SEQ ID N0:4、代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDR2的SEQ ID N0:5和代表輕鏈可變區(qū)(LCVR)CDR3的SEQ ID NO:6,特別地以上面所指出的順序。
109.SEQ ID NO: 12 的輕鏈可變區(qū)(LCVR)。
110.提供了包含SEQID NO: 12的輕鏈可變區(qū)(LCVR)的人源化抗體或人源化抗體片段。
111.SEQ ID NO: 13所示的包括信號(hào)序列的輕鏈可變區(qū)(LCVR)。
112.包含SEQID NO: 13所示的包括信號(hào)序列的完整的輕鏈可變區(qū)(LCVR)的人源化抗體或人源化抗體片段。
113.人源化抗體或人源化抗體片段,其包含SEQID N0:12的輕鏈可變區(qū)(LCVR)和SEQID NO: 14的輕鏈恒定區(qū)。
114.人源化抗體或人源化抗體片段,其包含SEQID NO: 13的完整的輕鏈可變區(qū)(LCVR)和SEQ ID NO: 14的輕鏈恒定區(qū)。
115.SEQ ID NO: 15 的重鏈可變區(qū)(HCVR)。
116.人源化抗體或人源化抗體片段,其包含SEQID NO: 15的重鏈可變區(qū)(HCVR)。
117.SEQ ID NO: 16所示的包括信號(hào)序列的重鏈可變區(qū)(HCVR)。
118.人源化抗體或人源化抗體片段,其包含SEQID NO: 16所示的包括信號(hào)序列的完整的重鏈可變區(qū)(HCVR)。
119.人源化抗體或人源化抗體片段,其包含SEQID NO: 15的重鏈可變區(qū)(HCVR)和SEQID NO: 17的重鏈恒定區(qū)。
120.人源化抗體或人源化抗體片段,其包含SEQID NO: 16的重鏈可變區(qū)(HCVR)和SEQ ID NO: 17的重鏈恒定區(qū)。
121.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,所述抗體基本上結(jié)合A3單體,但優(yōu)選不顯示出任何顯著的與淀粉狀蛋白前體蛋白(APP)的交叉反應(yīng)性。
122.根據(jù)權(quán)利要求122的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述抗體或片段以由至少約1x10_7M至至少約1x10_12M,特別地至少約1x10_8M至至少約lxlO_nM,更特別地至少約1x10_8M至至少約IxKTkiM,甚至更特別地至少約1x10_8M至至少約5X10_8M范圍內(nèi)的Kd代表的結(jié)合親和力與AP單體結(jié)合,但優(yōu)選地不顯示出任何顯著的與淀粉狀蛋白前體蛋白(APP)的交叉反應(yīng)性。
123.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,所述抗體基本上結(jié)合A3纖維、原纖維或纖絲,但優(yōu)選不顯示出任何顯著的與淀粉狀蛋白前體蛋白(APP)的交叉反應(yīng)性。
124.根據(jù)權(quán)利要求123的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述抗體或片段以由至少約1x10_7M至至少約1x10_12M,特別地至少約1x10_8M至至少約lxlO_nM,更特別地至少約1x10_9M至至少約IxKTkiM,甚至更特別地至少約2xlO_9M至至少約8x10_9M之間范圍的Kd代表的結(jié)合親和力與A ^纖維、原纖維或纖絲結(jié)合,但優(yōu)選地不顯示出任何顯著的與淀粉狀蛋白前體蛋白(APP)的交叉反應(yīng)性。
125.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,所述抗體基本上結(jié)合可溶的聚合淀粉狀蛋白3,但優(yōu)選不顯示出任何顯著的與淀粉狀蛋白前體蛋白(APP)的交叉反應(yīng)性。
126.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,所述抗體基本上結(jié)合A3單體和/或A3纖維、原纖維或纖絲和/或可溶的聚合淀粉狀蛋白P,但優(yōu)選不顯示出任何顯著的與淀粉狀蛋白前體蛋白(APP)的交叉反應(yīng)性。
127.根據(jù)權(quán)利要求126的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述結(jié)合親和力以遞升序次升高。
128.根據(jù)權(quán)利要求127的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述抗體或其片段表現(xiàn)出比與AP單體的結(jié)合親和力高至少10倍,特別地至少15 倍,更特別地高至少20倍,但尤其是至少25倍的與A ^纖維、原纖維或纖絲的結(jié)合親和力。
129.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,所述抗體基本上與哺乳動(dòng)物特別是人類腦中的包括AP斑在內(nèi)的聚集的々0結(jié)合, 但優(yōu)選地不顯示出任何顯著的與淀粉狀蛋白前體蛋白(APP)的交叉反應(yīng)性。
130.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,所述抗體基本上與哺乳動(dòng)物特別是人類腦中的包括A3單體在內(nèi)的可溶纖維結(jié)合,但優(yōu)選地不顯示出任何顯著的與淀粉狀蛋白前體蛋白(APP)的交叉反應(yīng)性。
131.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,所述抗體或其片段能夠通過誘導(dǎo)構(gòu)象的轉(zhuǎn)變和結(jié)合并穩(wěn)定組織和/或體液、特別是腦中解聚的和溶解的A3形式,從而通過使纖維解聚為可溶的聚合和單體形式,使可溶和聚集狀態(tài)的AP之間的平衡轉(zhuǎn)向其可溶形式。
132.根據(jù)項(xiàng)權(quán)利要求131的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,所述抗體或其片段能夠誘導(dǎo)β折疊構(gòu)象向α螺旋和/或無規(guī)則卷曲構(gòu)象,但特別是無規(guī)則卷曲構(gòu)象,甚至更特別的是在分子內(nèi)給定區(qū)域,尤其是在Αβ蛋白的TyrlO和Vall2環(huán)境中的無規(guī)則卷曲構(gòu)象的轉(zhuǎn)變,這導(dǎo)致了以β折疊構(gòu)象為代價(jià)的無規(guī)則卷曲構(gòu)象的增加,以及預(yù)形成的高分子聚合淀粉狀蛋白原纖維或纖絲的溶解的提高。
133.根據(jù)項(xiàng)權(quán)利要求132的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,其中當(dāng)與在緩沖液(對(duì)照)中孵育的分別的預(yù)形成淀粉狀蛋白聚合原纖維或纖絲相比較,β折疊構(gòu)象減少了至少30%,特別地至少35%,以及更特別地至少40%及更多。
134.根據(jù)權(quán)利要求131的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,所述抗體或其片段基本上結(jié)合至聚合的和包括單體形式在內(nèi)的較少聚集的可溶Αβ蛋白種類,由此改變這些Αβ蛋白種類的外周的清除和代謝,并且降低它們的毒性作用。
135.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的人源化抗體或人源化抗體片段,其包含摻入有至少一個(gè)、特別地兩個(gè)以及更特別地三個(gè)獲自小鼠供體抗體、特別是獲自小鼠抗體AC1-01-Ab7C2的⑶R區(qū)的至少一個(gè)輕鏈或其片段、或至少一個(gè)重鏈或其片段,其中所述抗體或其片段具有比小鼠供體抗體高至少5倍、特別地至少8倍、更特別地至少10倍、但尤其是至少15倍的對(duì)Αβ抗原的親和力。
136.根據(jù)權(quán)利要求83至85任一項(xiàng)的用途,其中所述人源化抗體或人源化抗體片段不一定需要結(jié)合腦中聚集的淀粉狀蛋白β。
137.根據(jù)權(quán)利要求89至91任一項(xiàng)的方法,其中所述人源化抗體或人源化抗體片段不一定需要結(jié)合腦中聚集的淀粉狀蛋白β。
138.根據(jù)權(quán)利要求81的用途,其中治療患有以認(rèn)知記憶能力喪失為特征的淀粉狀蛋白相關(guān)病癥的動(dòng)物、特別是哺乳動(dòng)物或人導(dǎo)致認(rèn)知記憶能力的保持。
139.根據(jù)權(quán)利要求86的方法,其中治療患有以認(rèn)知記憶能力喪失為特征的淀粉狀蛋白相關(guān)病癥的動(dòng)物、特別是哺乳動(dòng)物或人導(dǎo)致認(rèn)知記憶能力的保持。
140.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,所述抗體或其片段能夠使可溶和聚集狀態(tài)的Aβ之間的平衡轉(zhuǎn)向其可溶形式。
141.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,所述抗體或其片段能夠通過使纖維解聚為可溶的聚合和單體形式,從而使可溶和聚集狀態(tài)的Αβ之間的平衡轉(zhuǎn)向其可溶形式。
142.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的嵌合抗體或嵌合抗體片段、或人源化抗體或人源化抗體片段,所述抗體或其片段基本上不結(jié)合人組織和/或體液、特別是腦中的Αβ,但是能夠通過誘導(dǎo)構(gòu)象的轉(zhuǎn)變和結(jié)合并穩(wěn)定組織和/或體液、特別是腦中解聚的和溶解的A β形式,從而通過使纖維解聚為可溶的聚合或單體形式,從而使可溶和聚集狀態(tài)的Aβ之間的平衡轉(zhuǎn)向其可溶形式。
143.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述抗體或其片段展示出比小鼠抗體的結(jié)合親和力高至少5倍、10倍,特別地至少15倍,更特別地至少20倍,但尤其是至少100倍的結(jié)合親和力。
144.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的人源化抗體或人源化抗體片段,其中通過改變糖基化模式修飾了所述抗體或其片段的親和力、特異性和穩(wěn)定性。
145.包含如SEQID N0:27所示的可變區(qū)的抗體或其變體。
146.表達(dá)權(quán)利要求145的抗體的細(xì)胞系。
147.包含如SEQID N0:29所示的可變區(qū)的抗體基因或其變體。
148.表達(dá)權(quán)利要求147的抗體的細(xì)胞系。
149.解聚預(yù)形成的P淀粉狀蛋白纖維的方法,包括使hC2抗體與預(yù)形成的P淀粉狀蛋白纖維接觸。
150.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的人源化抗體或人源化抗體片段,其中所述抗體或其片段保護(hù)神經(jīng)元免于AP誘導(dǎo)的退化。
151.防止AP誘導(dǎo)的神經(jīng)元退化的方法,包括用有效量的根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的人源化抗體或人源化抗體片段處理神經(jīng)元。
152.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利 要求的人源化抗體或人源化抗體片段在制備用于防止暴露于八0寡聚體后的神經(jīng)元變性的藥物中的用途。
【文檔編號(hào)】A61P25/28GK103524617SQ201310250243
【公開日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2007年7月13日 優(yōu)先權(quán)日:2006年7月14日
【發(fā)明者】A·普法伊費(fèi)爾, M·皮爾格倫, A·穆斯, R·沃茨 申請(qǐng)人:Ac免疫有限公司, 基因技術(shù)公司
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