一種垂絲海棠葉提取物、提取方法及用途
【專利摘要】一種垂絲海棠葉提取物、提取方法及用途，屬于制藥【技術(shù)領(lǐng)域】，其中，垂絲海棠葉提取物為垂絲海棠葉的正丁醇部位或/和乙酸乙酯部位；提取方法包括以下步驟：將垂絲海棠葉的乙醇浸膏分散于水中，依次用乙酸乙酯和正丁醇進行萃取，揮干溶劑，所得乙酸乙酯萃取物即為垂絲海棠葉的乙酸乙酯部位，所得正丁醇萃取物即為垂絲海棠葉的正丁醇部位。實驗證實，本發(fā)明提供的垂絲海棠葉提取物能夠有效清除DPPH、ABTS自由基，還原Fe3+，因此可用于制備抗氧化劑；該提取物還能夠顯著降低急性肝損傷小鼠血清中的GPT、GOT的含量以及小鼠肝組織中的MDA含量，提高SOD活力，可用于制備保肝護肝藥物。
【專利說明】-種垂絲海巣葉提取物、提取方法及用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于制藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種垂絲海棠葉提取物，同時還涉及該提取 物的提取方法和用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 垂絲海棠（Malus halliana Koehne)為醫(yī)薇科蘋果屬落葉喬木，分布于中國大陸 的陜西、四川、江蘇、安徽、浙江和云南等地。目前，國內(nèi)外對垂絲海棠的研究主要集中在人 工栽培、組培再生及品種數(shù)量分類等方面，而對垂絲海棠的藥用價值則極少涉及。據(jù)有關(guān)中 醫(yī)藥典籍記載，垂絲海棠花可入藥，具有調(diào)經(jīng)和血的功效，多用于治療吐血、尿血、便血、跌 打損傷、骨折等癥。但是，垂絲海棠花的其他藥理作用或是垂絲海棠其它部位的藥用價值目 前尚不明確。
[0003] 肝臟是機體內(nèi)W代謝功能為主的器官，承擔著去氧化、儲存肝糖、合成分泌性蛋白 質(zhì)等重要任務(wù)。同時，肝臟也是一個比較脆弱的器官，容易受到多種因素損害。由肝損傷引 發(fā)的肝臟疾病現(xiàn)已成為常見病、多發(fā)病，更為嚴重的是，由肝損傷引發(fā)的肝功能衰竭和肝性 腦病發(fā)病率和死亡率都很高，對人類健康造成了極大地威脅。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的旨在提供一種垂絲海棠葉提取物，同時還提供了該提取物的提取方 法和用途。
[0005] 基于上述目的，本發(fā)明采取了如下技術(shù)方案：一種垂絲海棠葉提取物，為垂絲海棠 葉的正下醇部位或/和己酸己醋部位。
[0006] 所述垂絲海棠葉的己酸己醋部位是將垂絲海棠葉的己醇浸膏分散于水中，用己酸 己醋進行萃取所得的己酸己醋萃取物。
[0007] 所述垂絲海棠葉的正下醇部位是將垂絲海棠葉的己醇浸膏分散于水中，用正下醇 進行萃取所得的正下醇萃取物。
[0008] 所述己醇浸膏通過W下方法獲得；垂絲海棠葉經(jīng)干燥、粉碎后，用60?80V%的己 醇浸提2?3次，每次1?化，合并浸液，過濾、濃縮即得己醇浸膏。
[0009] 浸提溫度為50?7(TC。
[0010] 所述垂絲海棠葉提取物的提取方法，包括W下步驟；將垂絲海棠葉的己醇浸膏分 散于水中，依次用己酸己醋和正下醇進行萃取，揮干溶劑，所得己酸己醋萃取物即為垂絲海 棠葉的己酸己醋部位，所得正下醇萃取物即為垂絲海棠葉的正下醇部位。
[0011] 所述提取方法中，己醇浸膏通過W下方法獲得；垂絲海棠葉經(jīng)干燥、粉碎后，用 60?80V%的己醇浸提2?3次，每次1?化，合并浸液，過濾、濃縮即得己醇浸膏。
[001引 己醇浸提時溫度為50?7(TC。
[0013] 將所述的垂絲海棠葉提取物用于制備抗氧化劑。
[0014] 將所述的垂絲海棠葉提取物用于制備保肝護肝藥物。
[0015] 本發(fā)明分別用DPPH、ABTS和FRAP H種方法對垂絲海棠葉的石油離部位、己酸己醋 部位和正下醇部位進行了體外抗氧化測定，并W二下基輕基甲苯（BHT)為陽性對照，對測定 結(jié)果進行了分析：垂絲海棠葉的己酸己醋部位和正下醇部位均具有較強的抗氧化活性，其 中，垂絲海棠葉己酸己醋部位清除ABTS自由基的能力強于其它提取部位，垂絲海棠葉正了 醇部位清除DPPH自由基和還原化的能力較強。由此可見，本發(fā)明提供的垂絲海棠葉提取 物可W用于制備抗氧化劑。
[0016] 近幾年來，抗氧化劑在國內(nèi)發(fā)展迅速，其用途越拓越廣，不但可W添加在動植物油 及食品中，防止食物變質(zhì)，還可W添加到化妝品中延緩皮膚老化速度。
[0017] 對于機體而言，抗氧化物質(zhì)能夠抑制ROS的產(chǎn)生和過氧化氨的生成，減少DNA的氧 化損傷，抑制脂質(zhì)過氧化。人類的許多疾病包括衰老、癌變、糖尿病、也血管病及肝損傷等都 與過氧化有關(guān)，因此，有些抗氧化劑還可W用于治療疾病。
[001引本發(fā)明W聯(lián)苯雙醋為陽性對照，分別考察了垂絲海棠葉的正下醇部位和己酸己醋 部位對四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠的治療作用。實驗結(jié)果表明，垂絲海棠葉的己酸己 醋部位和正下醇部位能夠使四氯化碳致急性肝損傷小鼠血清中的GOT和GPT水平顯著降 低，降低急性肝損傷小鼠肝臟中MDA含量，升高SOD活力；本發(fā)明提供的垂絲海棠葉提取物 對急性肝損傷具有很好的保護作用，可用于制備保肝護肝藥物。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019] 圖1為不同提取部位質(zhì)量濃度對ABTS自由基的影響；
[0020] 圖2為Trolox標準曲線。

【具體實施方式】
[0021] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。
[0022] 實施例1
[0023] 一種垂絲海棠葉提取物，為垂絲海棠葉的己酸己醋部位。垂絲海棠葉的己酸己醋 部位是將垂絲海棠葉的己醇浸膏分散于水中，用己酸己醋進行萃取所得的己酸己醋萃取 物。
[0024] 其相應(yīng)的提取方法包括W下步驟：
[002引（1)垂絲海棠葉經(jīng)自然干燥、粉碎后，用60V%的己醇常溫下浸提3次，每次3h，合 并浸液，過濾、濃縮即得己醇浸膏。
[0026] (2)將垂絲海棠葉的己醇浸膏分散于水中，用己酸己醋進行萃取，萃取液揮干溶 齊U，得到己酸己醋萃取物，即為垂絲海棠葉的己酸己醋部位。
[0027] 將上述垂絲海棠葉提取物用于制備抗氧化劑。
[0028] 將上述垂絲海棠葉提取物用于制備保肝護肝藥物。
[002引 實施例2
[0030] -種垂絲海棠葉提取物，為垂絲海棠葉的正下醇部位。垂絲海棠葉的正下醇部位 是將垂絲海棠葉的己醇浸膏分散于水中，用正下醇進行萃取所得的正下醇萃取物。
[0031] 其相應(yīng)的提取方法包括W下步驟：
[0032] (1)垂絲海棠葉經(jīng)干燥、粉碎后，用80V%的己醇于7(TC浸提2次，每次比，合并浸 液，過濾、濃縮即得己醇浸膏。
[0033] (2)將垂絲海棠葉的己醇浸膏分散于水中，依次用己酸己醋和正下醇進行萃取，揮 干溶劑，所得正下醇萃取物即為垂絲海棠葉的正下醇部位。
[0034] 將上述垂絲海棠葉提取物用于制備抗氧化劑。
[00巧]將上述垂絲海棠葉提取物用于制備保肝護肝藥物。
[003引 實施例3
[0037] 一種垂絲海棠葉提取物，為垂絲海棠葉正下醇部位和己酸己醋部位的混合物。其 中，垂絲海棠葉的己酸己醋部位是將垂絲海棠葉的己醇浸膏分散于水中，用己酸己醋進行 萃取所得的己酸己醋萃取物；正下醇部位是將垂絲海棠葉的己醇浸膏分散于水中，用正下 醇進行萃取所得的正下醇萃取物。
[003引其相應(yīng)的提取方法包括W下步驟：
[0039] (1)垂絲海棠葉經(jīng)干燥、粉碎后，用70V%的己醇5(TC下浸提2次，每次化，合并浸 液，過濾、濃縮即得己醇浸膏。
[0040] (2)將垂絲海棠葉的己醇浸膏分散于水中，依次用己酸己醋和正下醇進行萃取，揮 干溶劑，所得己酸己醋萃取物即為垂絲海棠葉的己酸己醋部位，所得正下醇萃取物即為垂 絲海棠葉的正下醇部位。將兩者混合，即為產(chǎn)品。
[0041] 將上述垂絲海棠葉提取物用于制備抗氧化劑。
[0042] 將上述垂絲海棠葉提取物用于制備保肝護肝藥物。
[004引實施例4效果實驗
[0044] 4. . 1樣品準備
[0045] 取垂絲海棠葉，經(jīng)自然干燥、粉碎后，用70V%的己醇5(TC下浸提2次，每次Ih ;合 并浸液，過濾、濃縮即得己醇浸膏。將所得垂絲海棠葉的己醇浸膏分散于水中，依次用石油 離、己酸己醋和正下醇進行萃取，萃取之后揮干溶劑，得到垂絲海棠葉的石油離部位、己酸 己醋部位和正下醇部位。各提取部位得率見表1。
[0046] 4. . 2垂絲海棠葉提取物的體外抗氧化活性實驗
[0047] 4. . 2. . IDPPH 方法
[004引原理；DPPH ?是一種W氮為中也的穩(wěn)定自由基，在可見光區(qū)515nm附近有強吸收， 其己醇水溶液顯深紫色。當有供氨能力的抗氧化劑存在時，DPPH ?的孤對電子被配對，其吸 收消失或減弱。因而可用分光光度法進行定量分析，通過吸光度變化來檢測自由基被消除 的程度，進而評價某種物質(zhì)的抗氧化能力。抗氧化能力可用清除率來表示，清除率越大，貝U 抗氧化能力越強。
[0049] 儀器：電子天平（美國Mettler-Toledo公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（東京理化）； Multiskan MK3酶標儀（美國thermo Electron公司）；MS-H1型混合器（北京博勵陽科技 公司）。
[0050] 試劑；二苯代苦味醜基自由基（1, 1-di地en^-2-pic巧化y化az^，DPPH ?，日本東 京化成工業(yè)株式會社）；BHT (二下基輕基甲苯，比利時Acros organic公司）；其他試劑均 為分析純；
[0051] 檢測方法；先將10 U L樣品溶液和10 U L陽性對照藥物二下基輕基甲苯任HT)溶 液依次加入到96微孔板中，再加入175 yL200ymol/L的DPPH甲醇溶液，W陰暗處反應(yīng) 20min后，用酶標儀在515nm處測定樣品及陽性對照藥物BHT的OD值。甲醇溶液做空白對 照，每份樣品平行操作3次，取平均值，然后按照下式計算清除率：
[005引 DPPH ?清除率佩=[(Aeontroi-Asample)從。。吐。1] X 100〇/〇，
[005引式中，為DPPH ?本身在測定波長的吸收度，為樣品對DPPH作用后的 吸收度數(shù)值(除去樣品自身吸收)。即為樣品的初篩抑制率，若樣品初篩抑制率乂0%，則進行 半倍稀釋當抑制率巧0%時，利用origins. 0軟件計算其相應(yīng)ICw值。
[0054] 4. . 2. . 2ABTS 方法
[00巧]原理；ABTS是一種水溶性的自由基引發(fā)劑，經(jīng)活性氧氧化后生成穩(wěn)定的藍綠色陽 離子自由基ABTS ' +。加入待測物質(zhì)，當待測物質(zhì)中含有抗氧化物時，該物質(zhì)會與ABTS '+發(fā) 生發(fā)應(yīng)而使反應(yīng)體系顏色權(quán)去。ABTS+在734nm處有最大吸收。
[0056] 儀器；UV-2000型紫外可見分光光度計（上海尤尼科儀器有限公司）；電子天平 (美國Mettler-Toledo公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（東京理化）；Multiskan MK3酶標儀（美國 thermo Electron公司）；MS-H1型混合器（北京博勵陽科技公司）等。
[0057] 試劑；[2, 2'-連氨-(3-己基苯并喔哇晰-6-賴酸）二氨鹽](ABTS，美國Fl址a 公司）；二了基輕基甲苯（BHT，比利時Acros organics公司）；其他試劑均為分析純。
[0058] 檢測方法：將粉末狀A(yù)BTS溶解于蒸觸水，配制成3. 5mL7mmol/L的溶液，與 5血2. 45mmol/L的K2S2化溶液混合，使用前在暗處放置12h W上，使用時用甲醇稀釋使吸光 度在734nm處為0. 78?0. 82,得到ABTS自由基工作液，待用。樣品用甲醇配制成初始濃度 為2. Omg/mL的溶液。取10 y L樣品加入200 y LABTS自由基工作液混勻，測定吸光度。
[0059] 每個樣品進行3次平行檢測，取平均值，按照下式計算ABTS清除率：
[0060] ABTS 清除率佩=[(Ac0nt"i-As"pie)從曲。1] X 100〇/〇，
[006。 式中，為ABTS自由基本身在測定波長的吸收度，為樣品對ABTS自由 基作用后的吸收度數(shù)值（除去樣品自身吸收）。初篩抑制率即為ABTS自由基在樣品質(zhì)量濃 度為2mg/mL時的清除率。圖1即為ABTS自由基清除率與抗氧化質(zhì)量濃度的關(guān)系。
[0062] 4. . 2. . 3FRAP 法
[0063] 原理；在低抑值的溶液中，化3+-H化巧H啞嗦（tripyricbd-triazine，TPTZ)可 被抗氧化劑還原為二價鐵形式，呈現(xiàn)出明顯的藍色，并在593nm處有最大吸收。因此可W根 據(jù)吸光度的大小計算出抗氧化活性的強弱，結(jié)果W化"當量或相對于標準抗氧化劑的能力 來表不。一般米用Trolox來表不樣品的抗氧化活性。
[0064] 儀器：Multiskan MK3酶標儀（美國thermo Electron公司）；電子天平（美國 Mettler-Toledo公司）；UV-2000型紫外可見分光光度計（上海尤尼科儀器有限公司）；旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（東京理化）；MS-H1型混合器（北京博勵陽科技公司）等。
[0065] 試劑：Trolox (6-hydroloxy-2, . 5, 7, 8-tetramethylchroman-2-carboxylicac id, Al 化 ich) ;Fe3+-Hf]比巧H啞嗦（2, 4, 6-Tri(2-py;rid5d)-s-t;riazine, TPTZ;比利時 Acrossorganics公司）；BHT(二了基輕基甲苯，比利時Acros organic公司）；其他試劑均 為分析純；
[0066] 檢測方法；將樣品用甲醇配制成初始濃度為2. Omg/mL的溶液，取10 y L樣品加入 到96微孔板中，加入200 y L新鮮配制的TPTZ工作液，混勻，37C反應(yīng)30min后，用酶標儀在 593nm測定吸光度。每份樣品平行操作3次，取平均值。圖2為Trolox標準曲線，W 593nm 處的吸光度值根據(jù)圖2中公式換算成Trolox當量濃度，結(jié)果W Trolox當量（即每克樣品 的自由基清除能力相當于Trolox的自由基清除能力的微摩爾數(shù)）表示，若所測定樣品吸光 度值超過線性范圍，則需要進一步稀釋樣品。
[0067] 4. . 2. . 4 結(jié)果分析
[0068] 表1垂絲海棠葉各提取部位得率及抗氧化活性
[0069]

【權(quán)利要求】
1. 一種垂絲海棠葉提取物，為垂絲海棠葉的正丁醇部位或/和乙酸乙酯部位。
2. 如權(quán)利要求1所述的垂絲海棠葉提取物，其特征在于，所述垂絲海棠葉的乙酸乙酯 部位是將垂絲海棠葉的乙醇浸膏分散于水中，用乙酸乙酯進行萃取所得的乙酸乙酯萃取 物。
3. 如權(quán)利要求1所述的垂絲海棠葉提取物，其特征在于，所述垂絲海棠葉的正丁醇部 位是將垂絲海棠葉的乙醇浸膏分散于水中，用正丁醇進行萃取所得的正丁醇萃取物。
4. 如權(quán)利要求2或3所述的垂絲海棠葉提取物，其特征在于，所述乙醇浸膏通過以下方 法獲得：垂絲海棠葉經(jīng)干燥、粉碎后，用60?80V%的乙醇浸提2?3次，每次1?3h，合并 浸液，過濾、濃縮即得乙醇浸膏。
5. 如權(quán)利要求4所述的垂絲海棠葉提取物，其特征在于，浸提溫度為50?70°C。
6. 如權(quán)利要求1所述垂絲海棠葉提取物的提取方法，其特征在于，包括以下步驟：將垂 絲海棠葉的乙醇浸膏分散于水中，依次用乙酸乙酯和正丁醇進行萃取，揮干溶劑，所得乙酸 乙酯萃取物即為垂絲海棠葉的乙酸乙酯部位，所得正丁醇萃取物即為垂絲海棠葉的正丁醇 部位。
7. 如權(quán)利要求6所述垂絲海棠葉提取物的提取方法，其特征在于，所述乙醇浸膏通過 以下方法獲得：垂絲海棠葉經(jīng)干燥、粉碎后，用60?80V%的乙醇浸提2?3次，每次1? 3h，合并浸液，過濾、濃縮即得乙醇浸膏。
8. 如權(quán)利要求7所述垂絲海棠葉提取物的提取方法，其特征在于，浸提溫度為50? 70。。。
9. 將權(quán)利要求1-3任一所述的垂絲海棠葉提取物用于制備抗氧化劑。
10. 將權(quán)利要求1-3任一所述的垂絲海棠葉提取物用于制備保肝護肝藥物。
【文檔編號】A61P1/16GK104224969SQ201310228785
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2013年6月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月6日
【發(fā)明者】康文藝, 張偉, 彭濤, 尹震花, 孔祥密 申請人:河南大學(xué)