專利名稱：粒徑均勻的亞微米級(jí)芯/殼結(jié)構(gòu)plga微球的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種粒徑均勻的亞微米級(jí)芯/殼結(jié)構(gòu)聚(丙交酯-CO-乙交酯)(PLGA)微球的制備方法，屬于組織工程和藥物控釋材料技術(shù)。
背景技術(shù)：
聚(丙交酯-Co-乙交酯)(PLGA)具有良好的生物降解性和生物相容性，利用其制備的PLGA球作為藥物釋放載體已經(jīng)得到了廣泛的研究(Xu Q X，Chin S E, Wang Ch H,Pack D W.Biomaterialsj 2013，34: 3902-3911)。芯/殼結(jié)構(gòu)PLGA微球作為生物大分子及藥物緩釋載體，可以包覆大量的藥物，其核層可以有效的實(shí)現(xiàn)對(duì)藥物的控制釋放。制備芯/殼結(jié)構(gòu)微球的方法有模板法和非模板法。其中，芯/殼結(jié)構(gòu)PLGA微球的制備大都釆用非模板，主要包含噴霧干燥法、液滴法和乳液 / 相分離法(Du X，Jiang Zj MenX，Wang Zj Yu H，Li Mj Tang T.Journal ofPhysical Chemistry C，2008，112: 6638-6642 ；SokoI E V，Maksimova N V，Volkova NI， Nigmatulina E N， Frenkel A E.Fuel Process Technology, 2000， 67: 35-52 ;SatoYj Kawashima Y， Takeuchi H， Yamamoto H.European Journal of Pharmaceutics andBiopharmaceutics, 2004， 57: 235-243)。乳液/相分離法中的復(fù)乳法常作為制備PLGA微球的技術(shù)，可以制備出實(shí)心結(jié)構(gòu)和多孔結(jié)構(gòu)的微球，但是由于得到的分散相大小不可控，導(dǎo)致制備的微球通常尺寸較大、粒徑不均勻，而且由于內(nèi)水相向外擴(kuò)散導(dǎo)致藥物包封率低。粒徑均一的微球質(zhì)量可控、重現(xiàn)性好，有利于控制和預(yù)測(cè)藥物的釋放行為，從而可以構(gòu)造更復(fù)雜的釋放系統(tǒng)。利用特殊微流體裝置可以控制分散相的大小，能夠制備出粒徑均勻的微球，但是得到的球粒徑較大，大都分布在微米級(jí)以上，缺少納米尺寸的優(yōu)越性(Tiwari S, Verma P.1nternationalJournal of Pharmaceutical and Life Science, 2011, 2: 998-1005)。因此，想要制備粒徑在微米以下的微球，需要特別精確的特殊微流體裝置，不容易實(shí)現(xiàn)。此外，為了解決復(fù)乳法中藥物包封率低的問題，可以通過增加內(nèi)水相粘度的方法實(shí)現(xiàn)，如加入殼聚糖等增加水相粘度后包封率明顯提高(Zheng X, Huang Y, Zheng C，Dong S，Liang ff.The AmericanAssociation of Pharmaceutical Scientists, 2010, 12: 519-524)。現(xiàn)有制備芯/殼結(jié)構(gòu)聚(丙交酯-Co-乙交酯)(PLGA)微球的方法復(fù)雜、需要特殊裝置、微球的粒徑大都在微米級(jí)以上、大小不均勻，利用復(fù)乳/溶劑揮發(fā)擴(kuò)散法制備粒徑均勻的亞微米級(jí)芯/殼結(jié)構(gòu)聚(丙交酯-Co-乙交酯)(PLGA)微球的制備方法未見文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種粒徑均勻的亞微米級(jí)芯/殼結(jié)構(gòu)聚(丙交酯-CO-乙交酯)(PLGA)微球的制 備方法。該方法制備過程簡(jiǎn)單，所制備的亞微米級(jí)芯/殼結(jié)構(gòu)PLGA微球，粒徑均勻，用于組織工程和藥物釋放領(lǐng)域。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案加以實(shí)現(xiàn)的:一種粒徑均勻的亞微米級(jí)芯/殼結(jié)構(gòu)聚(丙交酯-CO-乙交酯)(PLGA)微球的制備方法，所述的微球?yàn)樾?殼結(jié)構(gòu)，粒徑為40(T600nm，殼平均厚度為70nm。其特征在于包括以下過程:
O室溫下將牛血清蛋白溶于磷酸鹽緩沖液中，配制成濃度為5 10mg/mL的溶液；或?qū)⑴Ｑ宓鞍缀椭鼐肿恿繛?.0XlO4的羧甲基殼聚糖溶于磷酸鹽緩沖液中，配制成含有牛血清蛋白濃度為5 10mg/mL和含有羧甲基殼聚糖的濃度為2(T8mg/mL的溶液；或?qū)⑴Ｑ宓鞍缀偷头肿恿扛嗡厝苡诹姿猁}緩沖液中，配制成含有牛血清蛋白濃度為5 10mg/mL和含有低分子量肝素的濃度為2(T8mg/mL的溶液；
2)將數(shù)均分子量為2.0X104的聚(丙交酯-Co-乙交酯)及乳化劑F127溶于二氯甲烷中，配制成含有聚(丙交酯-Co-乙交酯)濃度為5 30mg/mL和含有F127濃度為6 12mg/mL的溶液；
3)將步驟I)所制備的溶液其中的一種與步驟2)所制備的溶液按體積比為1:(2 4)，將步驟I中的一種溶液滴加到步驟2制備的溶液中，在冰浴中超聲分散，形成初乳； 4)將步驟3)所制備的初乳與含氯化鈣濃度為I 2mg/mL的溶液按體積比為1: (2 5)，將初乳滴加到氯化鈣溶液中，在冰浴中超聲分散，形成復(fù)乳；
5)室溫下對(duì)步驟4)所制得的復(fù)乳揮發(fā)溶劑后，再經(jīng)再水中透析，離心洗滌，冷凍干燥得到粒徑均勻的亞微米級(jí)芯/殼結(jié)構(gòu)聚(丙交酯-Co-乙交酯)(PLGA)微球。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于，采用改進(jìn)的復(fù)乳法即復(fù)乳/溶劑揮發(fā)擴(kuò)散法，制備粒徑均勻的亞微米級(jí)芯/殼結(jié)構(gòu)聚(丙交酯-Co-乙交酯)(PLGA)微球，其制備過程簡(jiǎn)便，裝置簡(jiǎn)單。同時(shí)，該方法制備的微球，具有芯/殼結(jié)構(gòu)，可將大量藥物包載在微球芯內(nèi)，由于粒徑均勻，具有穩(wěn)定可預(yù)測(cè)的藥物釋放行為，其亞微米級(jí)的粒徑便于與組織工程支架復(fù)合，負(fù)載藥物，不影響支架表面形貌和粗糙度，從而利于細(xì)胞在支架上更好的生長(zhǎng)。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例1制得的粒徑均勻的亞微米級(jí)芯/殼結(jié)構(gòu)聚(丙交酯-CO-乙交酯)(PLGA)微球的SEM照片。圖2為本發(fā)明實(shí)施例3制得的粒徑均勻的亞微米級(jí)芯/殼結(jié)構(gòu)聚(丙交酯-CO-乙交酯)(PLGA)微球的TEM照片。
具體實(shí)施方式
:
實(shí)施例1:
1.將IOmg的牛血清蛋白溶于ImL的磷酸鹽緩沖液中得到溶液I;將30mg的PLGA和24mg的F127溶于3mL的二氯甲烷中得到溶液2 ;將ImL的溶液I與3mL的溶液2，以功率20W在冰浴中超聲分散3分鐘，形成初乳；
2.將4mL的初乳加到IOmL的濃度為2mg/mL的氯化鈣溶液中，以功率50W在冰浴中超聲10分鐘，形成復(fù)乳；
3.在室溫下將復(fù)乳中的二氯甲烷揮發(fā)4小時(shí)后，再在水中透析4小時(shí)，冷凍干燥即可得到粒徑均勻的亞微米級(jí)芯/殼結(jié)構(gòu)聚(丙交酯-Co-乙交酯)(PLGA)微球,其粒徑約500nm,對(duì)牛血清蛋白的包封率為30% (質(zhì)量)以上。實(shí)施例2:
1.將30mg的牛血清蛋白和60mg的羧甲基殼聚糖溶于3mL的磷酸鹽緩沖液中得到溶液I ;將270mg的PLGA和90mg的F127溶于9mL的二氯甲烷中得到溶液2 ;將3mL的溶液I與9mL的溶液2，以功率為30W在冰浴中超聲分散3分鐘，形成初乳；
2.將12mL的初乳加到30mL的濃度為lmg/mL的氯化鈣溶液中，以功率60W在冰浴中超聲10分鐘，形成復(fù)乳；
3.在室溫下將復(fù)乳中的二氯甲烷揮發(fā)4小時(shí)后，再在水中透析4小時(shí)，冷凍干燥即可得到粒徑均勻的亞微米級(jí)芯/殼結(jié)構(gòu)聚(丙交酯-Co-乙交酯)(PLGA)微球,其粒徑約600nm,對(duì)牛血清蛋白的包封率為45% (質(zhì)量)以上。實(shí)施例3:
1.將IOmg的牛血清蛋白和50mg的羧甲基殼聚糖溶于ImL的磷酸鹽緩沖液中得到溶液I ;將90mg的PLGA和90mg的F127溶于3mL的二氯甲烷中得到溶液2 ;將ImL的溶液I與3mL的溶液2，以功率為20W在冰浴中超聲分散3分鐘，形成初乳；
2.將4mL的初乳加到12mL的濃度為2mg/mL的氯化鈣溶液中，以功率50W在冰浴中超聲10分鐘，形成復(fù)乳；
3.在室溫下將復(fù)乳中的二氯甲烷揮發(fā)4小時(shí)后，再在水中透析4小時(shí)，冷凍干燥即可得到粒徑均勻的亞微米級(jí)芯/殼結(jié)構(gòu)聚(丙·交酯-Co-乙交酯)(PLGA)微球,其粒徑約600nm,對(duì)牛血清蛋白的包封率為40% (質(zhì)量)以上。
權(quán)利要求
1.一種粒徑均勻的亞微米級(jí)芯/殼結(jié)構(gòu)聚(丙交酯-CO-乙交酯)微球的制備方法，所述的微球?yàn)樾?殼結(jié)構(gòu)，粒徑為40(T600nm，殼平均厚度為70nm，其特征在于包括以下過程: O室溫下將牛血清蛋白溶于磷酸鹽緩沖液中，配制成濃度為5 10mg/mL的溶液；或?qū)⑴Ｑ宓鞍缀椭鼐肿恿繛?.0XlO4的羧甲基殼聚糖溶于磷酸鹽緩沖液中，配制成含有牛血清蛋白濃度為5 10mg/mL和含有羧甲基殼聚糖的濃度為2(T8mg/mL的溶液；或?qū)⑴Ｑ宓鞍缀偷头肿恿扛嗡厝苡诹姿猁}緩沖液中，配制成含有牛血清蛋白濃度為5 10mg/mL和含有低分子量肝素的濃度為2(T8mg/mL的溶液； 2)將數(shù)均分子量為2.0X104的聚(丙交酯-Co-乙交酯)及乳化劑F127溶于二氯甲烷中，配制成含有聚(丙交酯-Co-乙交酯)濃度為5 30mg/mL和含有F127濃度為6 12mg/mL的溶液； 3)將步驟I)所制備的溶液其中的一種與步驟2)所制備的溶液按體積比為1:(2 4)，將步驟I中的一種溶液滴加到步 驟2制備的溶液中，在冰浴中超聲分散，形成初乳； 4)將步驟3)所制備的初乳與含氯化鈣濃度為I 2mg/mL的溶液按體積比為1: (2 5)，將初乳滴加到氯化鈣溶液中，在冰浴中超聲分散，形成復(fù)乳； 5)室溫下對(duì)步驟4)所制得的復(fù)乳揮發(fā)溶劑后，再經(jīng)再水中透析，離心洗滌，冷凍干燥得到粒徑均勻的亞微米級(jí)芯/殼結(jié)構(gòu)聚(丙交酯-Co-乙交酯)微球。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種粒徑均勻的亞微米級(jí)芯/殼結(jié)構(gòu)聚(丙交酯-co-乙交酯)微球的制備方法。該微球?yàn)樾?殼結(jié)構(gòu)，粒徑為400~600nm，殼平均厚度為70nm。其制備過程將牛血清蛋白，羧甲基殼聚糖或低分子量肝素溶于磷酸鹽緩沖液中作為溶液1，將PLGA和乳化劑F127溶于二氯甲烷中作為溶液2，將溶液1和溶液2在冰浴中超聲分散形成初乳；再將初乳滴加到氯化鈣溶液中，在冰浴中超聲分散形成復(fù)乳；經(jīng)揮發(fā)溶劑、透析、離心洗滌、冷凍干燥得到PLGA微球。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于，制備過程簡(jiǎn)單。同時(shí)，該微球的芯/殼結(jié)構(gòu)可將藥物包入芯內(nèi)，粒徑均勻,藥物釋放行為可預(yù)測(cè)，便于與組織工程支架復(fù)合。
文檔編號(hào)A61K9/16GK103239408SQ201310149609
公開日2013年8月14日 申請(qǐng)日期2013年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月26日
發(fā)明者袁曉燕, 韓鳳選 申請(qǐng)人:天津大學(xué)