專(zhuān)利名稱(chēng)：Skf96365在治療蛛網(wǎng)膜下腔出血后發(fā)生的腦血管痙攣的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物新用途技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種SKF96365在治療蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)是由于多種原因使血液進(jìn)入盧頁(yè)內(nèi)或椎管內(nèi)的蛛網(wǎng)膜下腔所引起的綜合征，一般分為創(chuàng)傷性SAH和自發(fā)性SAH，前者由顱腦損傷所致，后者可由多種原因引起。自發(fā)性SAH是一種常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)急危重癥，年發(fā)病率約6 16/100000人，約占腦卒中總發(fā)病率的6 8%，顱內(nèi)動(dòng)脈瘤破裂是自發(fā)性SAH的主要原因，出血后30% 90%的患者可發(fā)生不同程度的腦血管疫攣(cerebral vasospasm,CVS)，部分嚴(yán)重者可引起局部腦組織缺血或遲發(fā)性缺血性腦損害，甚至腦梗塞，是致死和致殘的主要原因。隨著對(duì)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤早期診斷和早期治療水平的不斷提高，大多數(shù)動(dòng)脈瘤患者SAH后再出血的發(fā)生率已經(jīng)明顯降低；因此，大多數(shù)的研究集中在了 CVS。CVS分為急性期CVS和遲發(fā)性CVS，急性期CVS —般在SAH后即刻發(fā)生，數(shù)小時(shí)內(nèi)即能緩解，目前一般認(rèn)為與機(jī)械性刺激有關(guān)，而遲發(fā)性CVS通常在出血后3天左右開(kāi)始，盡管過(guò)去數(shù)十年來(lái)對(duì)SAH后遲發(fā)性CVS的研究?jī)A注了大量心血，但目前對(duì)遲發(fā)性CVS的發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明，至今仍無(wú)理想治療方法，因此仍需進(jìn)行相關(guān)的深入研究。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，SAH后引起CVS是一個(gè)多因素參與的過(guò)程，這些因素主要包括蛋白激酶C的活化、氧化/還原型血紅蛋白引起一氧化氮(nitric oxide,NO)含量減少、收縮性受體亞型引起內(nèi)皮素活性增加、細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度改變、痙攣的動(dòng)脈血管壁結(jié)構(gòu)改變以及其他炎癥因素等。在多種因素作用下，CVS引起腦組織缺血，致使細(xì)胞能量缺乏、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)破壞、鈣超載以及線粒體功能障礙，并最終導(dǎo)致腦受損區(qū)域的功能喪失。所以認(rèn)為腦血管痙攣的產(chǎn)生機(jī)制，包括血管平滑肌收縮、血管內(nèi)皮功能障礙、炎癥反應(yīng)及基因表達(dá)等。其中蛛網(wǎng)膜下腔出血后血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞鈣離子(Ca2+)大量?jī)?nèi)流，激活一系列生物反應(yīng)，引起平滑肌興奮收縮是蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣的主要理論之一。鈣離子通道是細(xì)胞外Ca2+流入細(xì)胞內(nèi)的主要通道，通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度來(lái)調(diào)控血管平滑肌的收縮性能。鈣通道分類(lèi):根據(jù)激活模式的不同，它們可分為電壓依賴(lài)性Ca2+通道(voltage-dependent calcium channels, VDCC)和非 VDCC (non-VDCC)。非 VDCC又包括:Ca2+池操縱性 Ca2+通道(store-operated Ca2+entry channels, S0CC)、受體操縱性 Ca2+通道(receptor-operated Ca2+entry channels, R0CC)、機(jī)械敏感性 Ca2+內(nèi)流通道(mechanosensifive Ca2+entry channels, MSCC)和其它一些 Ca2+通道。VDCC 存在 L、T、N、P、Q和R六種亞型，VDCC的特異性阻斷劑已被廣泛應(yīng)用于腦血管疾病的治療。由于缺乏特異性通道阻斷劑，對(duì)S0CC、ROCC等非選擇性陽(yáng)離子通道的結(jié)構(gòu)和功能的研究進(jìn)展緩慢。直到從屬于陽(yáng)離子通道大家族的瞬時(shí)感受器電位(transient receptor potential, TRP)蛋白的發(fā)現(xiàn)，才使這一領(lǐng)域重新成為研究的熱點(diǎn)。
由于瞬時(shí)受體電位(transientreeeptorpotential,TRP)通道和 SOCC、ROCC 的激活方式極為相似，因此TRP通道被認(rèn)為最可能是SOCC、ROCC的分子實(shí)體。TRP通道蛋白以四聚體形式構(gòu)成Ca2+內(nèi)流通道。TRP通道的生理功能主要有:①調(diào)節(jié)胞內(nèi)Ca2+平衡②感覺(jué)信息傳遞，包括視覺(jué)、味覺(jué)、痛覺(jué)、觸覺(jué)、聽(tīng)覺(jué)、溫度覺(jué)以及感受外激素。TRP通道基因首次發(fā)現(xiàn)于黑腹果蠅的視覺(jué)傳導(dǎo)系統(tǒng)中，到目前為止，在哺乳動(dòng)物中已克隆了 30個(gè)TRP通道基因。根據(jù)同源性的不同，TRP通道分為T(mén)RPC、TRPV、TRPM、TRPP、TRPA及TRPML七個(gè)亞族，構(gòu)成TRP通道超家族。TRPC通道是TRP通道家族中非常重要的一類(lèi)亞家族。在哺乳類(lèi)發(fā)現(xiàn)7種亞型(TRPC1-7)。迄今為止，通過(guò)RT-PCR、免疫組織化學(xué)和免疫蛋白印跡等不同方法，已經(jīng)在不同種類(lèi)的血管平滑肌細(xì)胞中檢測(cè)出十多種TRP超家族成員。幾乎所有的血管平滑肌細(xì)胞都表達(dá)TRPCl和TRPC4。TRPCl和TRPC4在腦都檢測(cè)到其高水平表達(dá)。作為最早被發(fā)現(xiàn)的哺乳動(dòng)物TRP通道，TRPCl公認(rèn)的功能是參與受體介導(dǎo)的、鈣依賴(lài)的平滑肌收縮功能。TRPC4通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)皮源性NO的產(chǎn)生而參與血管張力調(diào)節(jié)，同時(shí)可能參與血管受損和炎癥反應(yīng)的病理過(guò)程。TRPCl和TRPC4是TRPC中重要的成員，研究證實(shí)TRPC亞家族通道起著鈣庫(kù)操縱的通道SOCC和受體操縱性Ca2+通道ROCC的作用，引起腦血管平滑肌的主動(dòng)收縮。然而，到目前為止，還沒(méi)有關(guān)于TRPCl和TRPC4在SAH后CVS發(fā)生發(fā)展中作用的研究。本發(fā)明因此而來(lái)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種SKF96365在治療蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣的新用途，揭示了一種蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣的新治療途徑。為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的這些問(wèn)題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是:一種SKF96365在制備用于治療腦血管痙攣的藥物組合物中的應(yīng)用。優(yōu)選的，所述 腦血管痙攣為蛛網(wǎng)膜下腔出血后發(fā)生的腦血管痙攣。優(yōu)選的，所述藥物組合物包含藥學(xué)上有效量的SKF96365和藥學(xué)上可接受的載體。優(yōu)選的，所述腦血管痙攣為自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣。優(yōu)選的，所述腦血管痙攣為動(dòng)脈瘤性自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣。瞬時(shí)感受器陽(yáng)離子通道(transient receptor potential, TRP)是一種跨膜蛋白質(zhì)，被激活時(shí)允許包括鈣離子在內(nèi)的陽(yáng)離子進(jìn)行跨膜運(yùn)輸。血管平滑肌的功能主要是通過(guò)多種機(jī)制激活Ca2+內(nèi)流使胞內(nèi)Ca2+濃度持續(xù)升高來(lái)實(shí)現(xiàn)的。目前的研究表明這種Ca2+內(nèi)流與TRPC系列瞬時(shí)感受器電位超家族成員有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)采用枕大池一次注血法建立大鼠SAH模型，通過(guò)對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基底動(dòng)脈形態(tài)學(xué)進(jìn)行觀察，同時(shí)應(yīng)用免疫組化、PCR及蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)對(duì)各時(shí)間點(diǎn)基底動(dòng)脈TRPCl和TRPC4表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，研究TRPCl和TRPC4與SAH后CVS發(fā)生的相關(guān)性，研究TRPCl和TRPC4在SAH后CVS形成中的可能機(jī)制。本發(fā)明技術(shù)方案采用大鼠枕大池一次注血的SAH模型，通過(guò)研究TRPCl和TRPC4在痙攣血管壁中的活性變化及應(yīng)用抑制劑后血管痙攣程度的改變，探討TRPCl和TRPC4在SAH后CVS形成中的作用及機(jī)制，為SAH后CVS的防治提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本發(fā)明人通過(guò)72只SD大鼠被隨機(jī)分為對(duì)照組、SAHld組、SAH3d組、SAH5d組、SAH7d組和SAH14d組，利用枕大池一次注血法建立大鼠SAH模型，應(yīng)用光鏡觀察SAH后基底動(dòng)脈管腔面積及管壁形態(tài)改變，并應(yīng)用免疫組化法、PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)基底動(dòng)脈壁TRPCl和TRPC4的表達(dá)變化。結(jié)果表明:對(duì)照組、SAHld組、SAH3d組、SAH5d組、SAH7d組和 SAH14d 組的管腔面積分別為 57，944±5，581μπι2、32，100±2，439μπι2、19，723±2，412μπι2、26，100±2，639μπι2、34，800±2，580μπι2、57，100±2，579μπι2。SAH 后第 I 天基底動(dòng)脈就已明顯狹窄，管壁增厚、內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞變性，第3天達(dá)高峰，第5天至第七天逐漸減輕，第14天基本恢復(fù)；基底動(dòng)脈壁TRPCl和TRPC4在SAH后第I天即呈陽(yáng)性表達(dá)，第3天最為明顯，第5天至第七天逐漸減弱，第14天表達(dá)為陰性。表明SAH后基底動(dòng)脈壁TRPCl和TRPC4表達(dá)上調(diào)，其活化水平在時(shí)相上的改變與基底動(dòng)脈管腔狹窄及病理變化程度密切相關(guān)，提示TRPCl和TRPC4在腦血管痙攣病理過(guò)程中可能起重要作用。另外，本發(fā)明人通過(guò)將144只SD大鼠被隨機(jī)分為對(duì)照組、SAH組、SAH+Vehicle組、SAH+SKF96365低劑量組和SAH+SKF96365高劑量組，枕大池一次注血法建立大鼠SAH模型，應(yīng)用光鏡觀察基底動(dòng)脈管腔面積及管壁形態(tài)改變，并應(yīng)用免疫組化法和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)基底動(dòng)脈TRPCl和TRPC4的表達(dá)變化。結(jié)果:血管痙攣在SAH組和SAH+Vehicle組最重，管腔面積分別為17，225±4，436μπι2和19，780±7，870 μ m2，TRPCl和TRPC4表達(dá)亦明顯增強(qiáng)，應(yīng)用SKF96365干預(yù)能抑制TRPCl和TRPC4的表達(dá)，同時(shí)減輕了血管痙攣的程度，且高劑量組比低劑量組作用更加明顯。表明TRPCl和TRPC4離子通道在SAH后基底動(dòng)脈呈現(xiàn)顯著激活，鈣離子可能通過(guò)此通道內(nèi)流參與腦血管痙攣的發(fā)生，應(yīng)用TRPC抑制劑如SKF96365可以減輕血管痙攣，較高劑量效果更加明顯。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)TRPC拮抗劑SKF96365對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣具有干預(yù)作用，可以作 為預(yù)防和治療蛛網(wǎng)膜下腔出血后發(fā)生的腦血管痙攣的藥物組合物使用。SKF96365，其分子式 SC22H26N2O3^HCl,其化學(xué)名稱(chēng)為1_[β_ (3~ (4-Methoxyphenyl) propoxy)-4-methoxyphenethyl]-1H-1midazolehydrochloride, cas number:130495-35-1,來(lái)源于 Sigma-Aldrich C0.LLC.公司；其公不
的結(jié)構(gòu)為:
權(quán)利要求
1.一種SKF96365在制備用于治療腦血管痙攣的藥物組合物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述腦血管痙攣為蛛網(wǎng)膜下腔出血后發(fā)生的腦血管痙攣。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物組合物包含藥學(xué)上有效量的SKF96365和藥學(xué)上可接受的載體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述腦血管痙攣為自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述腦血管痙攣為動(dòng)脈瘤性自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦 血管痙攣。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種SKF96365在制備用于治療腦血管痙攣的藥物組合物中的應(yīng)用。本發(fā)明采用枕大池一次注血法大鼠SAH模型，揭示SAH后血管壁TRPC1和TRPC4表達(dá)上調(diào)，活化水平在表達(dá)時(shí)相上與痙攣血管壁病理改變程度密切相關(guān)，提示TRPC1和TRPC4參與了CVS的發(fā)生發(fā)展。應(yīng)用TRPC通道阻滯劑SKF96365對(duì)腦血管痙攣進(jìn)行防治，通過(guò)阻滯TRPC通道，限制平滑肌細(xì)胞鈣內(nèi)流，可以部分緩解管腔狹窄、管壁增厚的程度，顯示出一定的治療效果。
文檔編號(hào)A61P9/10GK103211812SQ20131011217
公開(kāi)日2013年7月24日 申請(qǐng)日期2013年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月2日
發(fā)明者王中, 陳罡, 孫曉歐 申請(qǐng)人:蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院