一種新型疫苗佐劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種疫苗佐劑組合物及其凍干制劑和制備方法。該疫苗佐劑組合物含有以下質(zhì)量體積百分含量的各組分：（1）油相0.1-15%，所述油相選自角鯊烯、角鯊?fù)楹椭墟湼视腿狨ブ械囊环N或多種；（2）乳化劑0.1-15%，所述乳化劑選自聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯、磷脂和吐溫中的一種或多種；和（3）水70-99.5%。本發(fā)明的新型疫苗佐劑組合物，穩(wěn)定性良好，在2～8℃與20～25℃下均能長期保存?？勺鳛闇缁钜呙纭p活疫苗、裂解疫苗、DNA疫苗、重組疫苗、亞單位疫苗、多肽蛋白疫苗等不同疫苗的佐劑。
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及一種疫苗佐劑組合物及其凍干制劑和制備方法。 一種新型疫苗佐劑及其制備方法

【背景技術(shù)】
[0002] 疫苗是一種特殊的藥物，作為免疫學(xué)經(jīng)驗(yàn)、理論和生物技術(shù)共同發(fā)展而產(chǎn)生的生 物制品，它從防范于未然的角度免除了眾多傳染病對機(jī)體的威脅，對人類做出了巨大的貢 獻(xiàn)。疫苗的基本成分常包括抗原、佐劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、滅活劑和其他活性成分等。
[0003] 隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的迅速發(fā)展，新的疫苗抗原純度高，相對分子量小，疫苗的不良 反應(yīng)低，然而這些抗原的免疫原性普遍較弱，為了提高抗原的有效性，必須在抗原中添加佐 劑以增強(qiáng)它們誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的能力。理想的佐劑不僅能增強(qiáng)機(jī)體的免疫應(yīng)答，更能使機(jī)體 獲得最佳的保護(hù)性免疫。
[0004] 佐劑可通過以下幾種主要作用方式增強(qiáng)或調(diào)節(jié)抗原的作用，使機(jī)體產(chǎn)生持久、高 效和記憶性免疫應(yīng)答。①使機(jī)體細(xì)胞浸潤，出現(xiàn)巨噬細(xì)胞、漿細(xì)胞聚集，并使這些細(xì)胞增殖 以期發(fā)揮更大的作用；②增加抗原表面積，在特定條件下改變活性基團(tuán)的構(gòu)型，使抗原物質(zhì) 降解，因而增加抗原的免疫原性，對相對分子量較低的抗原和半抗原增加抗原性，提高機(jī)體 抗體產(chǎn)量；③形成抗原儲(chǔ)庫的作用，將過多的抗原儲(chǔ)存以延緩釋放；④載體效應(yīng)；⑤免疫刺 激作用，等等。
[0005]目前，應(yīng)用最廣泛的佐劑仍然是鋁佐劑，包括氫氧化鋁、磷酸鋁等。自1926年 Glenny首次使用鋁鹽粘附白喉類毒素至今，經(jīng)過幾十年的使用，雖然鋁佐劑的有效性和安 全性得到了人們的公認(rèn)，但鋁佐劑也有許多不足之處。如主要誘導(dǎo)產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答，誘導(dǎo) 細(xì)胞免疫應(yīng)答的能力較弱，抗體以IgGl型為主。不同批次之間產(chǎn)品差異較大，質(zhì)量難以控 制。會(huì)引起局部不良反應(yīng)，形成肉芽腫，甚至發(fā)生局部無菌性膿腫。
[0006] 其它已經(jīng)批準(zhǔn)上市的佐劑中，MF59和AS03均為0/W型亞微乳，AS04則由氫氧化鋁 和 3-〇_ 脫醜單憐酸類脂A(3-〇-deacylatedmonophosphoryllipidA，3D_MPL)組成。意 大利于1997年率先批準(zhǔn)含MF59佐劑的流感亞單位疫苗復(fù)立達(dá)（Fluatf)上市，該佐劑能同 時(shí)刺激產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答與細(xì)胞免疫應(yīng)答，從而提高對65歲以上老年人的免疫保護(hù)水平。 2009年歐盟批準(zhǔn)含AS03佐劑的的H1N1疫苗Pandemrix*上市，含AS04佐劑的人乳頭瘤狀 病毒（HPV)疫苗Cervarix?也于當(dāng)年在美國上市。
[0007]專利文獻(xiàn)W09014837、EP0399843A2、US6299884B1、US6451325B1、US20090191226A2 公開了MF59的處方、制備方法及其用途。該佐劑含4. 0%?5. 0%角鯊烯、0. 5%吐溫80、0. 5% 司盤85,平均粒徑約為160nm左右。處方中所含的脂溶性表面活性劑司盤85和水溶性表面 活性吐溫80,可使乳化劑的HLB值調(diào)節(jié)至適當(dāng)水平。MF59在制備過程中需要高壓均質(zhì)，制 備過程控制難度高，且如果與疫苗混合后高壓均質(zhì)可導(dǎo)致疫苗部分失活。此外，吐溫80具 有溶血作用，會(huì)導(dǎo)致組胺釋放，容易引起過敏反應(yīng)。
[0008]專利文獻(xiàn)US2007141078A1、US2010189741A1、US2010183667A1 公開了AS03 的處 方、制備方法及其用途。單個(gè)劑量的AS03含角鯊烯10.68mg、DL-α-生育酚11.86mg，吐 溫804. 85mg，平均粒徑為150?155nm，配制過程同樣需要高壓均質(zhì)。2009?2010年甲型 H1N1流行期間，歐洲多個(gè)國家報(bào)告pandemrixK疫苗接種者出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)，主要 表現(xiàn)為嗜睡和睡眠過度。根據(jù)芬蘭國家健康與福利研究所公布的一份調(diào)查報(bào)告顯示，4? 19歲青少年在接種了 :pandemnx_'_疫苗后患嗜睡癥的風(fēng)險(xiǎn)比同年齡組未接種疫苗的青少 年高出9倍。嗜睡癥是一種睡眠失調(diào)現(xiàn)象，患者會(huì)感到極端疲倦，昏昏欲睡，往往會(huì)在毫無 預(yù)警的情況下睡著，甚至是在活動(dòng)中途突然入睡。
[0009] 專利文獻(xiàn)CN201010247976. 0公開了一種含角鯊烯、聚醚、聚氧乙烯蓖麻油的亞微 乳佐劑，但聚氧乙烯蓖麻油在注射給藥中具有較大毒性，易引起變態(tài)反應(yīng)、中毒性腎損傷、 神經(jīng)毒性、心臟血管毒性等。
[0010] 專利文獻(xiàn)CN200910193930. 2公開了一種水包油型復(fù)方疫苗佐劑，但其中的蜂膠 組成復(fù)雜，含多種不明成分，且制備過程需要用到70%乙醇，易造成溶劑殘留，僅適用于獸 用疫苗。
[0011] 專利文獻(xiàn)CN02144678. 4與201010103495. 2公開的均為一種納米乳佐劑，粒徑在 10?100nm之間。前者在制備過程中流感疫苗需經(jīng)歷高速攪拌與納米裂解過程，容易導(dǎo)致 抗原效價(jià)降低甚至失活。后者所采用的輔料肉豆蘧酸異丙酯、油酸乙酯、聚氧乙烯蓖麻油在 注射給藥中具有較大毒性，且佐劑效果差。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有的疫苗佐劑免疫效果差、制備復(fù)雜的問題， 而提供一種新型疫苗佐劑組合物及其凍干制劑和制備方法，該新型疫苗佐劑能提高機(jī)體免 疫應(yīng)答，降低疫苗用量，增強(qiáng)免疫效果，制備簡單，不需要使用高壓均質(zhì)或納米裂解等步驟， 易于工業(yè)化生產(chǎn)，有利于疫苗活性的保持。
[0013] 為此，本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：
[0014] 本發(fā)明的技術(shù)方案之一：一種疫苗佐劑組合物，其含有以下質(zhì)量體積百分含量的 各組分：
[0015] (1)油相0. 1-15%，所述油相選自角鯊烯、角鯊?fù)楹椭墟湼视腿狨ブ械囊环N或多 種；
[0016] (2)乳化劑0. 1-15%，所述乳化劑選自聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯、磷脂和吐溫中 的一種或多種；和
[0017] (3)水70-99. 5%。
[0018] 其中，所述的質(zhì)量體積百分含量（w/v)是指克/100暈升。
[0019] 其中，所述油相選自角鯊烯、角鯊?fù)楹椭墟湼视腿狨ブ械囊环N或多種，優(yōu)選的所 述油相是角鯊烯與中鏈甘油三酯的組合。所述油相的用量為〇. 1-15% (w/v)，優(yōu)選0. 2-8% (w/v)，進(jìn)一步優(yōu)選0· 5-5% (w/v)。
[0020] 其中，所述乳化劑選自聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯、磷脂和吐溫中的一種或多 種；優(yōu)選的，所述乳化劑是聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯和磷脂的組合，或者是吐溫和磷脂 的組合。所述乳化劑用量為0.1-15% (w/v)，優(yōu)選0.2-8% (w/v)，進(jìn)一步優(yōu)選0.5-5% (w/ V)。
[0021] 其中，所述磷脂為可藥用的天然磷脂或合成磷脂，或其衍生物，所述的天然磷脂優(yōu) 選卵磷脂和/或大豆磷脂，所述的合成磷脂優(yōu)選氫化大豆磷脂和/或氫化卵磷脂。
[0022] 其中，所述疫苗佐劑組合物含有水，用量為70-99. 5% (w/v)，優(yōu)選90-98% (w/v)。 所述的水優(yōu)選注射用水。
[0023] 其中，所述的疫苗佐劑組合物還可含有等滲調(diào)節(jié)劑。所述的等滲調(diào)節(jié)劑是常規(guī)種 類，優(yōu)選氯化鈉、氯化鎂、氯化鈣、葡萄糖和甘油中的一種或多種。所述的等滲調(diào)節(jié)劑的用量 為常規(guī)，優(yōu)選0.1-8% (w/v)，進(jìn)一步優(yōu)選2-2.5% (w/v)。
[0024] 其中，優(yōu)選的，所述的疫苗佐劑組合物還可含有pH調(diào)節(jié)劑。所述的pH調(diào)節(jié)劑是常 規(guī)種類，優(yōu)選氫氧化鈉、氫氧化鉀等堿類，或鹽酸、枸櫞酸、磷酸、醋酸、酒石酸、馬來酸、氨基 酸(如甘氨酸）等酸或其鹽類。所述的pH調(diào)節(jié)劑的用量是常規(guī)，優(yōu)選不超過1% (w/v)。
[0025] 其中，優(yōu)選的，所述疫苗佐劑組合物還可含有防腐劑。所述的防腐劑是常規(guī)種類， 優(yōu)選硫柳汞。所述的防腐劑的用量為常規(guī)，優(yōu)選不超過0.1% (w/v)。
[0026] 其中，優(yōu)選的，所述新型疫苗佐劑組合物還可含有疫苗，疫苗的用量為常規(guī)，優(yōu)選 不超過1% (w/v)。
[0027] 本發(fā)明所述的疫苗佐劑組合物可在臨用時(shí)與疫苗混合，使用，，或與疫苗在生產(chǎn)時(shí) 混合，灌封，供臨床使用。
[0028] 本發(fā)明所述的疫苗佐劑組合物優(yōu)選以水針形式存在。
[0029] 優(yōu)選的，本發(fā)明所述的疫苗佐劑組合物是0/W型微乳溶液，其中微乳的粒徑小于 150nm，優(yōu)選小于100nm，進(jìn)一步優(yōu)選小于70nm。
[0030] 本發(fā)明的技術(shù)方案之二：所述的疫苗佐劑組合物的制備方法，包括以下步驟：
[0031] (1)油相制備
[0032] 將脂溶性乳化劑加入油相中，攪拌均勻作為混合油相，所述油相選自角鯊烯、角鯊 烷和中鏈甘油三酸酯中的一種或多種，所述脂溶性乳化劑選自磷脂和吐溫中的一種或兩 種；
[0033] (2)水相制備
[0034] 將水溶性原料加入水中，攪拌均勻作為水相，所述的水溶性原料包括水溶性乳化 劑聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯；和
[0035] (3)兩相混合
[0036] 在攪拌下將步驟（2)所得的水相加入步驟（1)所得的混合油相中，得到帶乳光的 溶液，加入水?dāng)嚢杈鶆虻?/W型微乳溶液，即得。
[0037] 其中，步驟（1)中將脂溶性乳化劑加入油相中，攪拌均勻作為混合油相。優(yōu)選 的，控溫至2_75°C，使脂溶性乳化劑和油相混合均勻，從而獲得混合油相。更優(yōu)選加熱至 50-70。。。
[0038] 步驟（2)中將水溶性原料加入水中，攪拌均勻作為水相。其中，所述的水溶性原料 包括水溶性乳化劑聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯，優(yōu)選的還包括pH調(diào)節(jié)劑、等滲調(diào)節(jié)劑和防 腐劑中的一種或多種。
[0039] 步驟（3)中在攪拌下將步驟（2)所得的水相加入步驟（1)所得的混合油相中，得 到帶乳光的溶液，然后加入水?dāng)嚢杈鶆虻?/W型微乳溶液，即為所述的疫苗佐劑組合物。其 中，將步驟（2)所得的水相加入步驟（1)所得的混合油相在攪拌下進(jìn)行，所述攪拌的速度為 20-10000rpm，優(yōu)選300-700rpm。所述的攪拌的溫度為2-75°C，優(yōu)選50-70°C。優(yōu)選的，步驟 (3)所述0/W型微乳溶液經(jīng)0. 22μm濾膜過濾。
[0040] 步驟（1 )，（ 2)中所述的攪拌是指常規(guī)的攪拌，優(yōu)選機(jī)械攪拌或磁力攪拌，只要使油 相或水相體系混合均勻即可。步驟（3)所述的攪拌也是指常規(guī)的攪拌，優(yōu)選機(jī)械攪拌、磁力 攪拌或者高剪切攪拌。
[0041] 優(yōu)選的，在步驟（1)、（2)或（3)中所述的任意步驟中往體系中加入疫苗混合均勻。
[0042] 步驟（3)所得的0/W型微乳溶液即可灌裝，儲(chǔ)存或使用。
[0043] 本發(fā)明的技術(shù)方案之三：一種疫苗佐劑凍干制劑，其含有以下質(zhì)量百分比的各組 分：
[0044] (1)油相0.8-45%，所述油相選自角鯊烯、角鯊?fù)楹椭墟湼视腿狨ブ械囊环N或多 種；
[0045] (2)乳化劑0. 8-60%，所述乳化劑選自聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯、磷脂和吐溫中 的一種或多種；和
[0046] (3 )凍干保護(hù)劑5-90%。
[0047] 其中，所述油相選自角鯊烯、角鯊?fù)楹椭墟湼视腿狨ブ械囊环N或多種，優(yōu)選的所 述油相是角鯊烯與中鏈甘油三酯的組合。所述油相的用量為0.8-45% (wt)。
[0048] 其中，所述乳化劑選自聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯、磷脂和吐溫中的一種或多 種；優(yōu)選的，所述乳化劑是聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯和磷脂的組合，或者是吐溫和磷脂 的組合。所述乳化劑用量為0.8-60% (wt)。
[0049] 其中，所述磷脂為可藥用的天然磷脂或合成磷脂，或其衍生物，所述的天然磷脂優(yōu) 選卵磷脂和或大豆磷脂，所述的合成磷脂優(yōu)選氫化大豆磷脂和或氫化卵磷脂。
[0050] 其中，所述的疫苗佐劑凍干制劑含有凍干保護(hù)劑。所述的凍干保護(hù)劑是常規(guī)的種 類，優(yōu)選甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇、海藻糖、蔗糖和麥芽糖中的一種或多種。更優(yōu)選的是 甘露醇、葡萄糖、山梨醇、海藻糖和蔗糖中的一種或多種。所述的凍干保護(hù)劑是的用量也是 常規(guī)的，優(yōu)選5-90% (wt)。
[0051] 其中，優(yōu)選的，所述的疫苗佐劑凍干制劑還可含有pH調(diào)節(jié)劑。所述的pH調(diào)節(jié)劑是 常規(guī)種類，優(yōu)選氫氧化鈉、氫氧化鉀等堿類，或鹽酸、枸櫞酸、磷酸、醋酸、酒石酸、馬來酸、氨 基酸(如甘氨酸）等酸或其鹽類。所述的pH調(diào)節(jié)劑的用量是常規(guī)，優(yōu)選不超過1% (wt)。
[0052] 所述的疫苗佐劑凍干制劑可在臨用時(shí)與疫苗混合，使用。優(yōu)選的，所述的疫苗佐劑 凍干制劑還可含有疫苗，疫苗的用量為常規(guī)，優(yōu)選不超過1% (wt)。
[0053] 本發(fā)明所述的疫苗佐劑凍干制劑以凍干形式存在。
[0054] 本發(fā)明所述的疫苗佐劑凍干制劑復(fù)溶后粒徑小于150nm，優(yōu)選小于100nm，進(jìn)一步 優(yōu)選小于7〇nm。
[0055] 本發(fā)明的技術(shù)方案之四：所述的疫苗佐劑凍干制劑的制備方法，包括以下步驟：
[0056] (1)油相制備
[0057] 將脂溶性乳化劑加入油相中，攪拌均勻作為混合油相，所述油相選自角鯊烯、角鯊 烷和中鏈甘油三酸酯中的一種或多種，所述脂溶性乳化劑選自磷脂和吐溫中的一種或兩 種；
[0058] (2)水相制備
[0059] 將水溶性原料加入水中，攪拌均勻作為水相，所述的水溶性原料包括水溶性乳化 劑聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯；
[0060] (3)兩相混合
[0061] 在攪拌下將步驟（2)所得的水相加入步驟（1)所得的混合油相中，得到帶乳光的 溶液，加入水?dāng)嚢杈鶆虻?/W型微乳溶液；和
[0062] (4)凍干
[0063] 將步驟（3)所得的0/W型微乳溶液凍干，即得。
[0064] 其中，步驟（1)- (3)及其優(yōu)選方式如上文所述。
[0065]其中，步驟（4)將步驟（3)所得的0/W型微乳溶液凍干，即得所述的疫苗佐劑凍干 制劑。其中，所述的凍干的方法是常規(guī)的。
[0066] 在符合本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實(shí) 例。
[0067] 本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。
[0068] 本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于：
[0069] 本發(fā)明提供多種應(yīng)用方法，包括但不限于：（1)獨(dú)立包裝，臨用前與疫苗混勻后使 用；（2)組合包裝，與疫苗混勻后，灌封，貯藏于2?8°C，直至臨床使用；（3)凍干疫苗產(chǎn)品， 與疫苗混勻后，凍干，貯藏于2?8°C，臨床使用前復(fù)溶；(4)凍干疫苗產(chǎn)品，臨床使用前復(fù) 溶，與疫苗混勻后使用。
[0070] 本發(fā)明的新型疫苗佐劑組合物，可使抗原靶向至淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等抗原提 呈細(xì)胞（APC)，提高APC對抗原的捕獲能力。
[0071] 本發(fā)明的新型疫苗佐劑組合物，穩(wěn)定性良好，在2-8°C與20-25°C下均能長期保 存。與MF59、AS03只能采用過濾除菌不同，該佐劑既能采用過濾除菌，也能經(jīng)受終端熱壓滅 菌(不含疫苗時(shí))。
[0072] 本發(fā)明的新型疫苗佐劑組合物，可作為滅活疫苗、減活疫苗、裂解疫苗、DNA疫苗、 重組疫苗、亞單位疫苗、多肽蛋白疫苗等不同疫苗的佐劑，包括但不限于季節(jié)性與大流行流 感疫苗(包括HI、H2、H3、H5、H7、H9、B亞型以及HA、NA、Ml、M2亞單位抗原)、人乳頭瘤狀病 毒疫苗、乙型肝炎疫苗、狂犬疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗等。
[0073] 本發(fā)明的新型疫苗佐劑組合物用于不同年齡人群、動(dòng)物的免疫接種，提高機(jī)體免 疫應(yīng)答，降低疫苗用量。該佐劑較已有的乳劑型佐劑制備簡單，不需要使用高壓均質(zhì)或納米 裂解等步驟，易于工業(yè)化生產(chǎn)，有利于疫苗活性的保持，且能更大的增強(qiáng)疫苗的免疫效果。 該方法工藝簡單，質(zhì)量可控，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。

【具體實(shí)施方式】
[0074] 下面通過實(shí)施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí) 施例范圍之中。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商 品說明書選擇。
[0075] 實(shí)施例1
[0076] 稱取角S烯lg，中鏈甘油三酸酯lg，SolutolHS151. 5g，卵磷脂0.5g，混合后加熱 至70°C，攪拌，得到油相；稱取甘油2g，枸櫞酸0. 132g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解， 用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7作為水相；在500rpm磁力攪拌下，將水相加入油相中，得到帶 乳光的溶液，加水至l〇〇mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，灌封至安瓿，即得。
[0077]實(shí)施例2
[0078]稱取角鯊烯2. 5g，中鏈甘油三酸酯2. 5g，SolutolHS154g，卵磷脂lg，混合后加熱 至60°C，攪拌，得到油相；稱取甘油2g，加入60mL注射用水中，攪拌，作為水相；在300rpm機(jī) 械攪拌下，將水相加入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至l〇〇mL，攪拌均勻，0. 45μm濾膜 濾過，灌封至安瓿，熱壓滅菌，即得。
[0079] 實(shí)施例3
[0080] 稱取角鯊烯〇· 5g，中鏈甘油三酸酯0· 5g，SolutolHS152g，卵磷脂0· 5g，混合后加 熱至50°C，攪拌，得到油相；稱取硫柳汞0. 01g，枸櫞酸0. 132g，加入60mL注射用水中，攪拌 使溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7. 4作為水相；在700rpm磁力攪拌下，將水相加入油相 中，得到帶乳光的溶液，加入三價(jià)流感疫苗(血凝素含量各6mg)，加水至100mL，攪拌均勻， 0. 22μm濾膜濾過，灌封至安瓿，即得。
[0081] 實(shí)施例4
[0082] 稱取角鯊烯0· 5g，SolutolHS154g，混合后控溫至2°C，攪拌，得到油相；稱取甘 油2g，加入60mL注射用水中，攪拌，作為水相；在200rpm磁力攪拌下，將水相加入油相中， 得到帶乳光的溶液，加入三價(jià)流感疫苗(血凝素含量各〇.lmg)，加水至100mL，攪拌均勻， 0. 22μm濾膜濾過，灌封至安瓿，即得。
[0083] 實(shí)施例5
[0084] 稱取角鯊烯0.3g，SolutolHS152g，混合后加熱至40°C，攪拌，得到油相；稱取氯 化鈉0. 6g，磷酸二氫鉀0. 2g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 至6作為水相；在800rpm磁力攪拌下，將水相加入油相中，得到帶乳光的溶液，加入三價(jià)流 感疫苗(血凝素含量各1. 5mg)，加水至100mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，灌封至安瓿，即 得。
[0085] 實(shí)施例6
[0086] 稱取角鯊烯0.2g，SolutolHS150.4g，卵磷脂0·lg，混合后加熱至75°C，攪拌，得 到油相；稱取氯化鈉〇. 9g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解，作為水相；在lOOrprn機(jī)械攪 拌下，將水相加入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至l〇〇mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過， 灌封至安瓿，即得。
[0087] 實(shí)施例7
[0088] 稱取角S烯4g，中鏈甘油三酸酯4g，SolutolHS156g，卵磷脂2g，混合后加熱至 55°C，攪拌，得到油相；量取60mL注射用水作為水相；在300rpm機(jī)械攪拌下，將水相加入油 相中，得到帶乳光的溶液，加水至l〇〇mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，灌封至安瓿，即得。
[0089] 實(shí)施例8
[0090] 稱取角S烯3g，中鏈甘油三酸酯7g，SolutolHS1515g，混合后加熱至45?，攪拌， 得到油相；稱取甘油2. 5g，加入60mL注射用水中，攪拌，作為水相；在400rpm機(jī)械攪拌下， 將水相加入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至l〇〇mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，灌封 至安瓿，即得。
[0091] 實(shí)施例9
[0092] 稱取角鯊?fù)?g，中鏈甘油三酸酯10g，SolutolHS1511g，卵磷脂4g，混合后加熱至 55°C，攪拌，得到油相；稱取甘油2. 0g，加入60mL注射用水中，攪拌，作為水相；在400rpm磁 力攪拌下，將水相加入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至l〇〇mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜 濾過，灌封至安瓿，即得。
[0093] 實(shí)施例10
[0094] 稱取中鏈甘油三酸酯0·lg，SolutolHS150. 15g，卵磷脂0· 05g，混合后加熱至 65°C，攪拌，得到油相；稱取磷酸二氫鈉0. 142g、磷酸二氫鉀0. 027g、氯化鈉0. 8g、氯化 鉀0. 02g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解，用氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH至7作為水相；在 lOOOOrpm高剪切攪拌下，將水相加入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至100mL，攪拌均勻， 0. 22μm濾膜濾過，灌封至安瓿，即得。
[0095] 實(shí)施例11
[0096] 稱取中鏈甘油三酸酯5g，SolutolHS157g，混合后加熱至35°C，攪拌，得到油相； 稱取甘油2. 0g，加入60mL注射用水中，攪拌，作為水相；在500rpm磁力攪拌下，將水相加 入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至l〇〇mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，灌封至安瓿，即 得。
[0097] 實(shí)施例12
[0098] 稱取角S烯〇· 2g，中鏈甘油三酸酯lg，SolutolHS155g，混合后加熱至65°C，攪 拌，得到油相；稱取磷酸二氫鈉〇. 142g、磷酸二氫鉀0. 027g、氯化鈉0. 8g、氯化鉀0. 02g，加 入60mL注射用水中，攪拌，作為水相；在500rpm磁力攪拌下，將水相加入油相中，得到帶乳 光的溶液，加入狂犬疫苗250IU，加水至100mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，灌封至安瓿， 即得。
[0099] 實(shí)施例13
[0100] 稱取角鯊烯5g，SolutolHS1512g，卵磷脂3g，混合后加熱至65°C，攪拌，得到油 相；稱取氯化鈉〇.lg，枸櫞酸〇. 2g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào) 節(jié)pH至7作為水相；在500rpm磁力攪拌下，將水相加入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至 100mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，灌封至安瓿，即得。
[0101] 實(shí)施例14
[0102] 稱取角鯊?fù)?. 5g，中鏈甘油三酸酯0. 5g，SolutolHS153g，大豆磷脂lg，混合后 加熱至75°C，攪拌，得到油相；稱取甘油2g，枸櫞酸0. 3g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶 解，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7作為水相；在lOOOOrpm高剪切攪拌下，將水相加入油相中， 得到帶乳光的溶液，加水至l〇〇mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，灌封至安瓿，熱壓滅菌，即 得。
[0103] 實(shí)施例15
[0104] 稱取中鏈甘油三酸酯0.lg，SolutolHS150.lg，混合后加熱至55°C，攪拌，得到油 相；稱取氯化鈉〇. 4g，加入60mL注射用水中，攪拌，作為水相；在lOOOOrpm高剪切攪拌下， 將水相加入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至l〇〇mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，灌封 至安瓿，即得。
[0105] 實(shí)施例16
[0106] 稱取角鯊烯0.2g，中鏈甘油三酸酯0.2g，SolutolHS150.5g，氫化卵磷脂0·lg，混 合后加熱至65°C，攪拌，得到油相；稱取葡萄糖8g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解，作為 水相；在500rpm磁力攪拌下，將水相加入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至100mL，攪拌均 勻，0. 22μm濾膜濾過，灌封至安瓿，即得。
[0107] 實(shí)施例17
[0108] 稱取角S烯2g，中鏈甘油三酸酯2g，SolutolHS154. 5g，氫化大豆磷脂0. 5g，混合 后加熱至65°C，攪拌，得到油相；稱取甘油2g，枸櫞酸0.lg，加入60mL注射用水中，攪拌使 溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7作為水相；在700rpm磁力攪拌下，將水相緩慢加入油相 中，得到帶乳光的溶液，加水至l〇〇mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，灌封至安瓿，即得。
[0109] 實(shí)施例18
[0110] 稱取角鯊烯〇.lg，中鏈甘油三酸酯〇. 2g，吐溫804. 5g，卵磷脂0.lg，混合后加熱 至65°C，攪拌，得到油相；稱取磷酸二氫鈉0. 142g、磷酸二氫鉀0. 027g、氯化鈉0. 8g、氯化 鉀0. 02g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7作為水相；在 600rpm磁力攪拌下，將水相緩慢加入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至100mL，攪拌均勻， 0. 22μm濾膜濾過，灌封至安瓿，即得。
[0111] 實(shí)施例19
[0112] 稱取中鏈甘油三酸酯0. 2g，吐溫200. 15g，卵磷脂0. 05g，混合后加熱至65°C，攪 拌，得到油相；稱取氯化鈉、氯化鎂、氯化鈣各〇. 2g，枸櫞酸0.lg，加入60mL注射用水中，攪 拌使溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7作為水相；在700rpm磁力攪拌下，將水相緩慢加 入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至l〇〇mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，灌封至安瓿，即 得。
[0113] 實(shí)施例20
[0114]稱取中鏈甘油三酸酯0.lg，吐溫800. 075g，卵磷脂0. 025g，混合后加熱至65°C，攪 拌，得到油相；稱取甘油2g，枸櫞酸lg，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解，用氫氧化鈉溶液 調(diào)節(jié)pH至7作為水相；在700rpm磁力攪拌下，將水相緩慢加入油相中，得到帶乳光的溶液， 加入乙肝疫苗50μg，加水至100mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，灌封至安瓿，即得。
[0115] 實(shí)施例21
[0116] 稱取角S烯3g，中鏈甘油三酸酯5g，吐溫806g，卵磷脂2g，混合后加熱至65?，攪 拌，得到油相；稱取甘油2g，甘氨酸0.lg，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解，用氫氧化鈉溶 液調(diào)節(jié)pH至8作為水相；在700rpm磁力攪拌下，將水相緩慢加入油相中，得到帶乳光的溶 液，加入乙肝疫苗500μg，加水至100mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，灌封至安瓿，即得。
[0117] 實(shí)施例22
[0118]稱取角鯊烯5g，中鏈甘油三酸酯10g，吐溫8012g，卵磷脂3g，混合后加熱至65°C， 攪拌，得到油相；稱取甘油2g，枸櫞酸0.lg，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解，用氫氧化鈉 溶液調(diào)節(jié)pH至7. 4作為水相；在500rpm磁力攪拌下，將水相緩慢加入油相中，得到帶乳光 的溶液，加入H1N1流感疫苗150μg，加水至100mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，灌封至安 瓿，即得。
[0119] 實(shí)施例23
[0120] 稱取角鯊烯2g，SolutolHS155g，卵磷脂lg，混合后加熱至65°C，攪拌，得到油相； 稱取甘油2g，枸櫞酸0.lg，硫柳汞0.Olg，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解，用氫氧化鈉溶 液調(diào)節(jié)pH至7作為水相；在700rpm磁力攪拌下，將水相緩慢加入油相中，得到帶乳光的溶 液，加入乙肝疫苗5000μg，加水至100mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，灌封至安瓿，即得。
[0121] 實(shí)施例24
[0122] 稱取角S烯2g，中鏈甘油三酸酯lg，SolutolHS152g，卵磷脂0. 5g，混合后加熱至 65°C，攪拌，得到油相；稱取甘油2g，枸櫞酸0.lg，硫柳汞0.lg，加入60mL注射用水中，攪拌 使溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7作為水相；在700rpm磁力攪拌下，將水相緩慢加入油 相中，得到帶乳光的溶液，加入H1N1流感疫苗5000μg，加水至100mL，攪拌均勻，0. 22μm濾 膜濾過，灌封至安瓿，即得。
[0123] 實(shí)施例25
[0124] 制備方法：稱取角鯊烯lg，中鏈甘油三酸酯lg，SolutolHS151. 5g，卵磷脂0. 5g， 混合后加熱至70°C，攪拌，得到油相；稱取甘露醇4g，枸櫞酸0. 132g，加入60mL注射用水 中，攪拌使溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7作為水相；在500rpm磁力攪拌下，將水相加入 油相中，得到帶乳光的溶液，加水至l〇〇mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，凍干，封口，即得。
[0125] 實(shí)施例26
[0126] 稱取角鯊烯2. 5g，中鏈甘油三酸酯2. 5g，SolutolHS154g，大豆磷脂lg，混合后加 熱至60°C，攪拌，得到油相；稱取葡萄糖5g，甘氨酸0.lg，加入60mL注射用水中，攪拌，作為 水相；在300rpm機(jī)械攪拌下，將水相加入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至100mL，攪拌均 勻，0. 45μm濾膜濾過，凍干，封口，即得。
[0127] 實(shí)施例27
[0128] 稱取角S烯4g，中鏈甘油三酸酯4g，SolutolHS156g，卵磷脂2g，混合后加熱至 55°C，攪拌，得到油相；稱取甘露醇4g，加入60mL注射用水中，攪拌，作為水相；在300rpm機(jī) 械攪拌下，將水相加入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至l〇〇mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜 濾過，凍干，封口，即得。
[0129] 實(shí)施例28
[0130] 稱取角S烯3g，中鏈甘油三酸酯7g，SolutolHS1515g，混合后加熱至45?，攪拌， 得到油相；稱取甘露醇2g，醋酸鈉0. 05g，加入60mL注射用水中，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 至6-8作為水相；在400rpm機(jī)械攪拌下，將水相加入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至 100mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，凍干，封口，即得。
[0131] 實(shí)施例29
[0132] 稱取角鯊?fù)?g，中鏈甘油三酸酯10g，SolutolHS1511g，卵磷脂4g，混合后加熱至 55°C，攪拌，得到油相；稱取海藻糖6g，磷酸二氫鈉0.lg，加入60mL注射用水中，攪拌，作為 水相；在400rpm磁力攪拌下，將水相加入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至100mL，攪拌均 勻，0. 22μm濾膜濾過，凍干，封口，即得。
[0133] 實(shí)施例30
[0134] 稱取角鯊烯5g，SolutolHS1512g，卵磷脂3g，混合后加熱至65°C，攪拌，得到油 相；稱取枸櫞酸〇. 2g，蔗糖5g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 至7. 4作為水相；在500rpm磁力攪拌下，將水相加入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至 100mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，凍干，封口，即得。
[0135] 實(shí)施例31
[0136] 稱取中鏈甘油三酸酯0.lg，SolutolHS150.lg，混合后控溫至2°C，攪拌，得到油 相；稱取酒石酸〇.lg，山梨醇5g，加入60mL注射用水中，攪拌，作為水相；在lOOOOrpm高剪 切攪拌下，將水相加入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至l〇〇mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜 濾過，凍干，封口，即得。
[0137] 實(shí)施例32
[0138] 稱取角鯊烯2g，中鏈甘油三酸酯2g，SolutolHS154. 5g，氫化大豆磷脂0. 5g，混合 后加熱至65°C，攪拌，得到油相；稱取枸櫞酸0.lg，葡萄糖2g，加入60mL注射用水中，攪拌 使溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6作為水相；在700rpm磁力攪拌下，將水相緩慢加入油 相中，得到帶乳光的溶液，加水至l〇〇mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，凍干，封口，即得。
[0139] 實(shí)施例33
[0140] 稱取角鯊烯0.lg，中鏈甘油三酸酯0. 2g，吐溫804. 5g，卵磷脂0.lg，混合后加熱 至65°C，攪拌，得到油相；稱取甘露醇2g、磷酸二氫鈉0. 142g、磷酸二氫鉀0. 027g、氯化鈉 〇. 8g、氯化鉀0. 02g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7. 5作 為水相；在20rpm磁力攪拌下，將水相緩慢加入油相中，得到帶乳光的溶液，加水至100mL， 攪拌均勻，〇. 22μm濾膜濾過，凍干，封口，即得。
[0141] 實(shí)施例34
[0142] 稱取中鏈甘油三酸酯0.lg，吐溫800. 075g，卵磷脂0. 025g，混合后加熱至65°C，攪 拌，得到油相；稱取甘露醇l〇g，枸櫞酸lg，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解，用氫氧化鈉 溶液調(diào)節(jié)pH至7作為水相；在70rpm磁力攪拌下，將水相緩慢加入油相中，得到帶乳光的溶 液，加水至100mL，攪拌均勻，0. 22μm濾膜濾過，凍干，封口，即得。
[0143] 下述試驗(yàn)例進(jìn)一步證明本發(fā)明的創(chuàng)造性與新穎性，但所列舉的試驗(yàn)例并不代表本 發(fā)明的全部應(yīng)用范疇。
[0144] 試驗(yàn)例1佐劑粒徑測定
[0145] 將實(shí)施例1-24制備的佐劑以注射用水稀釋5倍，采用MalvernNano_ZS90動(dòng)態(tài)光 散射粒徑電位測定儀測定其粒徑(結(jié)果見下表)。
[0146] 表1.佐劑粒徑測定結(jié)果
[0147]

【權(quán)利要求】
1. 一種疫苗佐劑組合物，其特征在于，所述的疫苗佐劑組合物含有以下質(zhì)量體積百分 含量的各組分： (1) 油相0. 1-15%，所述油相選自角鯊烯、角鯊?fù)楹椭墟湼视腿狨ブ械囊环N或多種； (2) 乳化劑0. 1-15%，所述乳化劑選自聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯、磷脂和吐溫中的一 種或多種；和 (3) 水 70-99. 5%。
2. 如權(quán)利要求1所述的疫苗佐劑組合物，其特征在于，所述油相是角鯊烯與中鏈甘油 三酯的組合；所述油相為〇. 2-8% (w/v);所述乳化劑是聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯和磷脂 的組合，或者是吐溫和磷脂的組合；所述乳化劑為〇. 2-8% (w/v)。
3. 如權(quán)利要求1所述的疫苗佐劑組合物，其特征在于，所述磷脂為卵磷脂、大豆磷脂、 氫化大豆磷脂和氫化卵磷脂中的一種或多種。
4. 如權(quán)利要求1所述的疫苗佐劑組合物，其特征在于，所述的疫苗佐劑組合物還含有 等滲調(diào)節(jié)劑，所述的等滲調(diào)節(jié)劑為〇.l-8%(w/v);所述的疫苗佐劑組合物還含有pH調(diào)節(jié)劑， 所述的pH調(diào)節(jié)劑不超過1% (w/v);所述疫苗佐劑組合物還含有防腐劑，所述的防腐劑不超 過0. 1% (w/v);或者，所述新型疫苗佐劑組合物還含有疫苗，所述的疫苗不超過1% (w/v)。
5. 如權(quán)利要求1所述的疫苗佐劑組合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 油相制備 將脂溶性乳化劑加入油相中，攪拌均勻作為混合油相，所述油相選自角鯊烯、角鯊?fù)楹?中鏈甘油三酸酯中的一種或多種，所述脂溶性乳化劑選自磷脂和吐溫中的一種或兩種； (2) 水相制備 將水溶性原料加入水中，攪拌均勻作為水相，所述的水溶性原料包括水溶性乳化劑聚 乙二醇-12-羥基硬脂酸酯；和 (3) 兩相混合 在攪拌下將步驟（2)所得的水相加入步驟（1)所得的混合油相中，得到帶乳光的溶液， 加入水?dāng)嚢杈鶆虻?/W型微乳溶液，即得。
6. 如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟（1)中控溫至2-75°C，使所述的脂 溶性乳化劑和所述油相混合均勻，從而獲得混合油相； 步驟（2)中所述的水溶性原料包括水溶性乳化劑還包括pH調(diào)節(jié)劑、等滲調(diào)節(jié)劑和防腐 劑中的一種或多種； 步驟（3)中將步驟（2)所得的水相加入步驟（1)所得的混合油相在攪拌下進(jìn)行，所述攪 拌的速度為20-10000rpm，所述的攪拌的溫度為2-75°C; 步驟（3 )所述0/W型微乳溶液經(jīng)0. 22μm濾膜過濾； 步驟（3)所述的攪拌是機(jī)械攪拌、磁力攪拌或者高剪切攪拌；或者， 在步驟（1)、（2)或（3)中所述的任意步驟中往體系中加入疫苗混合均勻。
7. -種疫苗佐劑凍干制劑，其特征在于，所述的疫苗佐劑凍干制劑含有以下質(zhì)量百分 比的各組分： (1) 油相0. 8-45%，所述油相選自角鯊烯、角鯊?fù)楹椭墟湼视腿狨ブ械囊环N或多種； (2) 乳化劑0.8-60%，所述乳化劑選自聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯、磷脂和吐溫中的一 種或多種；和 (3)凍干保護(hù)劑5-90%。
8. 如權(quán)利要求7所述的疫苗凍干制劑，其特征在于，所述的凍干保護(hù)劑是選自甘露醇、 乳糖、葡萄糖、山梨醇、海藻糖、蔗糖和麥芽糖中的一種或多種。
9. 如權(quán)利要求7所述的疫苗凍干制劑，其特征在于，所述的疫苗佐劑凍干制劑還含有 pH調(diào)節(jié)劑，所述的pH調(diào)節(jié)劑不超過1% (wt);所述的疫苗佐劑凍干制劑還含有疫苗，所述的 疫苗不超過1% (wt)。
10. 如權(quán)利要求7所述的疫苗佐劑凍干制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 油相制備 將脂溶性乳化劑加入油相中，攪拌均勻作為混合油相，所述油相選自角鯊烯、角鯊?fù)楹?中鏈甘油三酸酯中的一種或多種，所述脂溶性乳化劑選自磷脂和吐溫中的一種或兩種； (2) 水相制備 將水溶性原料加入水中，攪拌均勻作為水相，所述的水溶性原料包括水溶性乳化劑聚 乙二醇-12-羥基硬脂酸酯； (3) 兩相混合 在攪拌下將步驟（2)所得的水相加入步驟（1)所得的混合油相中，得到帶乳光的溶液， 加入水?dāng)嚢杈鶆虻?/W型微乳溶液；和 (4) 凍干 將步驟（3)所得的0/W型微乳溶液凍干，即得。
【文檔編號】A61K39/145GK104043119SQ201310080474
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2013年3月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月13日
【發(fā)明者】金方, 蔡偉惠 申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院, 中國醫(yī)藥工業(yè)研究總院