抗cd98抗體及其使用方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了結(jié)合CD98的抗體，以及該抗體在癌癥的診斷和治療中的使用方法。
【專利說明】抗CD98抗體及其使用方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明總體上涉及抗CD98抗體和使用該類抗體的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] CD98 (也被稱為CD98重鏈；42F重鏈；SLC3A2)是由529個氨基酸殘基組成的II 型跨膜糖蛋白。該蛋白包含75個氨基酸的N末端胞內(nèi)細(xì)胞質(zhì)域，單一跨膜域和426個氨基 酸的 C 末端胞外域（Parmacek 等人，Nucleic Acids Res. 17:1915-1931,1989)。CD98 通過 二硫鍵共價連接至幾種輕鏈（SLC7A5、6、7、8、10或11)之一，該些輕鏈?zhǔn)荓型氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋 白。該種相互作用是輕鏈的細(xì)胞表面表達(dá)和氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)功能所需要的。CD98還與整合素 目亞單位結(jié)合，借此調(diào)節(jié)了控制細(xì)胞增殖、存活、遷移和上皮細(xì)胞粘附/極性的整合素信號 (Cai 等人，J. Cell Sci. 118:889-899, 2005)。
[0003] CD98原來被鑒別為與淋己細(xì)胞活化有關(guān)的細(xì)胞表面抗原化aynes等人，J. Immunol. 126:1409-1414, 1981)。此后，在除了血小板之外的所有細(xì)胞類型中均鑒別 出CD98,并且CD98在胃腸佑I)道和腎小管中的表達(dá)水平最高（Verrey等人，Pflugers Arch. 440:503-512, 2000)。在腸炎中已觀察到了 CD98的上調(diào)。最近，腸CD98表達(dá)顯示在 控制腸中的體內(nèi)平衡和先天免疫反應(yīng)中具有重要作用。因此，腸上皮細(xì)胞中CD98表達(dá)的調(diào) 節(jié)已表明是炎癥性腸道疾病，如炎癥性腸?。↖BD)和結(jié)腸炎相關(guān)性癌癥的治療和預(yù)防的有 希望的治療策略（Nguyen等人，J. Clin. Invest. 121:1733-1747, 2011)。不考慮組織來源， CD98還在幾乎所有腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞表面上過表達(dá)（Itoh等人，化n. J. Cancer Res. 92:13 13-1321，2001)。
[0004] 還在多種類型的人癌細(xì)胞中觀察到了結(jié)合CD98的輕鏈之一，L型氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋 白ULAT 1 ;也稱為化口AW的表達(dá)增加，所述癌癥包括乳腺癌、結(jié)腸癌、口腔癌、卵巢癌、 食道癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和白血?。‵an等人，Biochem. Pharmacol. 80:811-818, 2010)。可能 需要增加氨基酸供給來支持癌細(xì)胞的高生長速度，該是通過提供用于蛋白質(zhì)合成的氨基 酸碩塊和通過哺乳動物雷帕霉素祀標(biāo)（mTOR)刺激生長來實(shí)現(xiàn)的（Fan等人，同上；Imai 等人，Anticancer Res. 30:4819-4828, 2010)。與原發(fā)位點(diǎn)相比，人癌癥的轉(zhuǎn)移性位點(diǎn)中 LATl和CD98的表達(dá)顯著更高，該表明LAT1/CD98的過表達(dá)是人癌癥發(fā)展和轉(zhuǎn)移所必需的。 具體地，LAT1/CD98過表達(dá)似乎是結(jié)腸癌患者中腫瘤轉(zhuǎn)移所必需的化aira等人，Cancer Sci. 99:2380-2386, 2008)。
[0005] CD98和LATl和表達(dá)類型和功能表明該些蛋白是治療多種人癌癥的有希望 的祀標(biāo)。LATl活性抑制劑在一些癌癥類型，包括非小細(xì)胞肺癌（Imai等人，同上），結(jié) 腸癌細(xì)胞（Oda 等人，Cancer Sci. 101:173-179, 2010)，口腔癌細(xì)胞化im 等人，Biol. Wiarm. Bull. 33:1117-1121，2010)，和乳腺癌細(xì)胞（Shennan 和 Iliomson.Oncol. Rep. 20:885-889, 2008)中顯示出抗腫瘤活性。LATl還顯示是治療卵巢癌的祀標(biāo)（Fan等人， 同上）中顯示出抗腫瘤活性。
[0006] 發(fā)現(xiàn)鑒別為皿J127的鼠抗CD98單克隆抗體抑制淋己細(xì)胞增殖（Yagita和 Hashimoto, J. Immunol. 136:2062-2068, 1986)并且抑制球囊腫瘤和淋己瘤細(xì)胞的生 長（Yagita 等人，Cancer Res. 46:1478-1489, 1986)。發(fā)現(xiàn)町127 抗體的表位是人 CD98的殘基442AFS444 (Itoh等人，2007)。不同的鼠抗CD98單克隆抗體對神經(jīng)膠質(zhì) 瘤、前列腺和結(jié)腸癌細(xì)胞顯示出顯著抑制腫瘤細(xì)胞體外生長（Papetti和化rman, Am. J. Pathol. 159:165-178,2001)。在美國專利公開No. 20100143367中公開了其他的抗人 CD98單克隆抗體。該些單克隆抗體結(jié)合至CD98的氨基酸區(qū)372-530和104-371內(nèi)的表位。 發(fā)現(xiàn)該些抗體中的五種抑制膀脫癌細(xì)胞中的氨基酸吸收，并且該些抗體中的H種在小鼠模 型中顯示抑制腫瘤生長。
[0007] 如本文所公開的，使用細(xì)胞表面蛋白質(zhì)組的表面標(biāo)記抗原譜對患者新發(fā)原發(fā)性急 性髓性白血?。ˋML)腫瘤樣品的分析將跨膜蛋白CD98鑒別為在AML腫瘤細(xì)胞表面上W高 密度存在。因此，CD98是（例如）通過使用結(jié)合劑，如特異性結(jié)合至CD98的抗體來治療AML 的祀標(biāo)。對CD98特異的結(jié)合劑，如抗CD98抗體，還在多個體內(nèi)異種移植模型中顯示出不但 在AML的治療，而且在多種癌癥，如肉瘤、淋己瘤、非小細(xì)胞肺癌（NSCLC)和結(jié)腸直腸癌的治 療中具有應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明提供了在多種類型的人癌癥的診斷和治療中有用的CD98。
[000引發(fā)明概述
[0010] 使用完整的AML腫瘤細(xì)胞表面的溶液中標(biāo)記，然后通過高分辨率的基于溶液的液 相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS/M巧將CD98鑒別為與正常細(xì)胞（包括發(fā)育的血細(xì)胞）相比， 在大部分AML細(xì)胞亞型表面上W高密度存在。因此，本發(fā)明提供了抗CD98抗體和使用該類 抗體治療AML及其他癌癥，包括（但不限于）淋己瘤、肉瘤、非小細(xì)胞肺癌和結(jié)腸直腸癌的 方法。
[0011] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了特異性結(jié)合至人CD98的分離的抗體或其功能 性片段，其中所述抗體或功能性片段結(jié)合至包含人CD98的殘基A377、D397、1398、G400和 A401的表位。在一些實(shí)施方式中，所述表位還包含人CD98的殘基D374和L378。在一些實(shí) 施方式中，所述表位還包含人CD98的殘基P379和G380。在一些實(shí)施方式中，所述表位還包 含人CD98的殘基F395和P396。在一些實(shí)施方式中，所述表位還包含人CD98的殘基Q381、 P382和P399。在一些實(shí)施方式中，所述表位還包含選自由人CD98的D374、L378、P379、G380、 Q381、P382、F395、P396和P399組成的組中的任意一種或多種其他殘基。
[0012] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了特異性結(jié)合至人CD98的分離的抗體或其功能 性片段，其中所述抗體結(jié)合至包含人CD98的殘基P379、G380、D397和1398的表位。在一些 實(shí)施方式中，所述表位還包含人CD98的殘基F395和P396。在一些實(shí)施方式中，所述表位還 包含人CD98的殘基Q381、P382、P399、G400和A401。在一些實(shí)施方式中，所述表位還包含 人CD98的殘基D374、A377和L378。在一些實(shí)施方式中，所述表位還包含選自由人CD98的 D374、A377、L378、Q381、P382、F395、P396、P399、G400 和 A401 組成的組中的任意一種或多 種其他殘基。
[0013] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了分離的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或 功能性片段結(jié)合至包含人 CD98 的殘基 D374、A377、1378、P379、G380、Q381、P382、F395、 P396、D397、1398、P399、G400 和 A401 的表位。
[0014] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了特異性結(jié)合至人CD98的分離的抗體或其功能 性片段，其中所述抗體或功能性片段結(jié)合至包含在人CD98的氨基酸殘基369-405內(nèi)的表 位。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了特異性結(jié)合至人CD98的分離的抗體或其功能性片 段，其中所述抗體或功能性片段結(jié)合至由人CD98的氨基酸殘基369-405組成的表位。
[0015] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明所述的單克隆抗體是人源化抗體、人抗體或嵌合抗體。 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體功能性片段是F油、F (油'）2、Fv或SCFv片段。
[0016] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了分離的抗體或其功能性片段，其包含來自具有 選自 SEQ ID NO ;4、SEQ ID NO ;8、SEQ ID NO ; 12、SEQ ID NO ;31 和 SEQ ID NO ;35 的氨基 酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的全部H個重鏈互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)，和/或來自具有選自SEQ ID N0;6、SEQ ID N0;10、SEQ ID N0;14、SEQ ID N0;33 和 SEQ ID N0;37 的氨基酸序列的輕鏈 可變結(jié)構(gòu)域的全部H個輕鏈CDR。
[0017] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了分離的抗體或其功能性片段，其包含來自具有 選自沈Q ID NO ;4、SEQ ID NO ;8、SEQ ID NO ; 12、沈Q ID NO ;31 和沈Q ID NO ;35 的氨基 酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的全部H個重鏈CDR，和來自具有選自SEQ ID NO ;6、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO ;14、SEQ ID NO ;33和SEQ ID NO ;37的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的全 部H個輕鏈CDR。在一些實(shí)施方式中，抗體或其功能性片段包含全部重鏈和輕鏈互補(bǔ)決定區(qū) (CDR)，其來自；（a)稱為8-34B的抗體；化）稱為18-2A2. 2的抗體；（C)稱為18-2A7. 1的抗 體；（d)稱為1-47C的抗體；或（e)稱為1-115A的抗體。在一些實(shí)施方式中，所述抗體或其 功能性片段包含來自稱為8-34B的抗體的全部重鏈和輕鏈CDR。在一些實(shí)施方式中，所述抗 體或其功能性片段包含來自稱為18-2A2. 2的抗體的全部重鏈和輕鏈CDR。在一些實(shí)施方 式中，所述抗體或其功能性片段包含來自稱為18-2A7. 1的抗體的全部重鏈和輕鏈CDR。在 一些實(shí)施方式中，所述抗體或其功能性片段包含來自稱為1-47C的抗體的全部重鏈和輕鏈 CDR。在一些實(shí)施方式中，所述抗體或其功能性片段包含來自稱為1-115A的抗體的全部重 鏈和輕鏈CDR。
[001引在一些實(shí)施方式中，所述抗體包含選自SEQ ID NO ;4、SEQ ID NO ;8、SEQ ID NO : 12、SEQ ID N0;31和SEQ ID N0;35的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。在一些實(shí)施方式中，所述抗體 包含選自 SEQ ID NO ;6、SEQ ID NO ; 10、SEQ ID NO ; 14、SEQ ID NO ;33 和 SEQ ID NO ;37 的 輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。在一些實(shí)施方式中，所述抗體包含選自SEQ ID NO ;4、SEQ ID NO ;8、 SEQ ID NO ;12、SEQ ID NO ;31和SEQ ID NO ;35的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，并且還包含選自 沈Q ID NO ;6、SEQ ID NO ; 10、沈Q ID NO ; 14、沈Q ID NO ;33 和沈Q ID NO ;37 的輕鏈可變 結(jié)構(gòu)域序列。
[0019] 在一種實(shí)施方式中，所述抗體包含SEQ ID NO ;4的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列和SEQ ID NO ;6的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。在一種實(shí)施方式中，所述抗體包含SEQ ID NO ;8的重鏈可變 結(jié)構(gòu)域序列和SEQ ID NO=IO的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。在一種實(shí)施方式中，所述抗體包含 SEQ ID NO ;12的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列和SEQ ID NO ;14的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。在一種實(shí) 施方式中，所述抗體包含SEQ ID NO ;31的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列和SEQ ID NO ;33的輕鏈可 變結(jié)構(gòu)域序列。在一種實(shí)施方式中，所述抗體包含SEQ ID NO ;35的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列和 SEQ ID NO ;37的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。
[0020] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了人源化抗體。在一些實(shí)施方式中，所述人源化抗 體包含選自沈Q ID N0;17、沈Q ID N0;18、沈Q ID N0;19、沈Q ID N0;22 和沈Q ID N0;23 的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。在一些實(shí)施方式中，所述人源化抗體包含選自SEQ ID NO ;15、SEQ ID NO ;16、SEQ ID NO ;20和SEQ ID NO ;21的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。在一些實(shí)施方式中， 所述人源化抗體包含選自 SEQ ID NO; 17、SEQ ID NO; 18、SEQ ID NO; 19、SEQ ID NO ;22 和 SEQ ID N0;23的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，并且還包含選自SEQ ID N0;15、SEQ ID N0;16、SEQ ID NO ;20和SEQ ID NO ;21的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。在一些實(shí)施方式中，所述人源化抗體 包含選自SEQ ID NO ;15和SEQ ID NO ;16的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，和選自SEQ ID NO ;17、 SEQ ID NO ;18和SEQ ID NO ;19的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。在一種實(shí)施方式中，所述人源化 抗體包含SEQ ID NO ; 15的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列和SEQ ID NO ; 18的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。
[0021] 在一種實(shí)施方式中，所述人源化抗體包含SEQ ID NO ;20的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列和 SEQ ID NO ;22的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。在一種實(shí)施方式中，所述人源化抗體包含SEQ ID NO ;21的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列和SEQ ID NO ;23所示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。在一種實(shí)施 方式中，所述人源化抗體包含SEQ ID NO ;20的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列和SEQ ID NO ;23的重 鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。在一種實(shí)施方式中，所述人源化抗體包含SEQ ID NO ;21的輕鏈可變結(jié) 構(gòu)域序列和SEQ ID NO ;22的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了結(jié) 合至與人源化抗體相同的表位的抗體，其包含SEQ ID NO ;21的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列和SEQ ID NO ;22的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。在替代性實(shí)施方式中，本發(fā)明包含結(jié)合至與來自Mnl或 bin3-7的抗體基本相同的表位的結(jié)合劑，如圖1所示。
[0022] 在其他實(shí)施方式中，本發(fā)明包含結(jié)合至與W上所公開的任何抗體基本相同的 表位的結(jié)合劑。在一些實(shí)施方式中，所述結(jié)合劑抑制表達(dá)CD98的腫瘤的生長。在一些 實(shí)施方式中，所述結(jié)合劑是抗體或其功能性片段。在其他實(shí)施方式中，所述結(jié)合劑是 anticalin、a化ectin、親和體（affibody)、DARPiru fynomer、affitin、affilin、商親和性多聚 體（avimer)、扭結(jié)菌素膚（knottin peptide)或者工程設(shè)計的Kunitz型抑制劑。
[0023] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了能夠結(jié)合至CD98的結(jié)合劑，其中在競爭性結(jié)合 測定中W上公開的任一種抗體置換結(jié)合劑。在一些實(shí)施方式中，所述結(jié)合劑是抗體或其功 能性片段。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了能夠結(jié)合至CD98的結(jié)合劑，其中在競爭性 結(jié)合測定中結(jié)合劑置換W上公開的任一種抗體。在一些實(shí)施方式中，所述結(jié)合劑是抗體或 其功能性片段。
[0024] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了結(jié)合至CD98的抗體，其中所述抗體包含與選自 沈Q ID N0;4、SEQ ID N0;8、SEQ ID N0;12、沈Q ID N0;17、沈Q ID N0;18、沈Q ID N0;19、 SEQ ID NO ;22、SEQ ID NO; 23、SEQ ID NO ;31 和 SEQ ID NO ;35 的氨基酸序列具有至少 90 %、 至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或 至少99%的序列同一性的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方式中，所述抗體包含與選自SEQ ID N0;6、SEQ ID N0;10、沈Q ID N0;14、沈Q ID N0;15、沈Q ID N0;16、沈Q ID N0;20、沈Q ID NO ;21、SEQ ID NO ;33和SEQ ID NO; 37的氨基酸序列具有至少90 %、至少91 %、至少 92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列 同一性的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方式中，所述抗體包含與選自SEQ ID NO ;4、SEQ ID NO ;8、沈Q ID NO ; 12、沈Q ID NO ; 17、沈Q ID NO ; 18、沈Q ID NO ; 19、沈Q ID NO ;22、沈Q ID NO ;23、SEQ ID NO ;31和SEQ ID NO ;35的氨基酸序列具有至少90%、至少91%、至少 92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列 同一性的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，并且所述抗體還包含與選自SEQ ID NO ;6、SEQ ID NO ;10、SEQ ID NO; 14、沈Q ID NO; 15、沈Q ID NO; 16、沈Q ID NO ;20、沈Q ID NO ;21、沈Q ID NO ;33 和 SEQ ID NO ;37的氨基酸序列具有至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至 少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列同一性的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0025] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了作為任何W上抗體的變體的抗體，其具有一個 或多個氨基酸取代、缺失、插入或修飾，并且其保留了所述抗體的生物學(xué)功能。在一些實(shí)施 方式中，本發(fā)明提供了結(jié)合至在細(xì)胞表面上表達(dá)的CD98并抑制細(xì)胞生長的抗體。在一些實(shí) 施方式中，抗CD98抗體結(jié)合至在細(xì)胞表面上表達(dá)的CD98并且抑制細(xì)胞增殖。在一些實(shí)施 方式中，抗CD98抗體結(jié)合至在細(xì)胞表面上表達(dá)的CD98并且誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。在一些實(shí)施方 式中，本發(fā)明提供了作為任一種上述抗體的變體的抗體，其具有與未修飾的抗體相比改善 的一種或多種性質(zhì)，如結(jié)合親合力、特異性、熱穩(wěn)定性、表達(dá)水平、效應(yīng)子功能、糖基化作用、 降低的免疫原性或溶解度。
[0026] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了上述抗體或功能性片段中的任一種，其中所述 抗體或片段結(jié)合至細(xì)胞毒性試劑。在多個實(shí)施方式中，所述細(xì)胞毒性試劑選自化療劑、藥 物、生長抑制劑、毒素或放射性同位素。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了上述抗體或功能 性片段中的任一種，其中所述抗體或片段結(jié)合至可檢測的標(biāo)志物。在多個實(shí)施方式中，所述 可檢測的標(biāo)志物選自放射性同位素、金屬馨合劑、酶、英光化合物、生物發(fā)光化合物和化學(xué) 發(fā)光化合物。
[0027] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了產(chǎn)生本發(fā)明的單克隆抗體的雜交瘤。在一種實(shí) 施方式中，本發(fā)明提供了產(chǎn)生本發(fā)明的單克隆抗體的轉(zhuǎn)基因動物。
[0028] 在一些實(shí)施方式中，提供了編碼任何上述抗體的多核巧酸。在一種實(shí)施方式中，提 供了包含多核巧酸的載體。在一種實(shí)施方式中，提供了包含載體的宿主細(xì)胞。在一種實(shí)施 方式中，所述宿主細(xì)胞是原核的。在一種實(shí)施方式中，所述宿主細(xì)胞是大腸桿菌巧.COli) 細(xì)胞。在另一種實(shí)施方式中，所述宿主細(xì)胞是真核細(xì)胞。在一種實(shí)施方式中，所述宿主細(xì)胞 是中華倉鼠卵巢（CHO)細(xì)胞。在一種實(shí)施方式中，提供了制備抗CD98抗體的方法，其中所 述方法包括在適合于表達(dá)編碼所述抗體的多核巧酸的情況下培養(yǎng)宿主細(xì)胞，和分離所述抗 體。
[0029] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的任何上述抗體或其功能性片段、 抗體結(jié)合物或結(jié)合劑的藥物組合物。在其他實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了抑制表達(dá)CD98的癌 細(xì)胞生長的方法，所述方法包括將所述細(xì)胞暴露于任何一種或多種本發(fā)明的上述抗體或其 功能性片段、抗體結(jié)合物或結(jié)合劑。在多個實(shí)施方式中，癌細(xì)胞來自于選自膀脫癌、乳腺癌、 結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、腎癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑 素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋己瘤或白血病，或者任何該些癌癥的轉(zhuǎn)移癌的癌癥。
[0030] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療受試者中癌癥的方法，所述方法包括向所 述受試者施用包含本發(fā)明的任何上述抗體或其功能性片段、抗體結(jié)合物或結(jié)合劑的藥物組 合物。在多種實(shí)施方式中，所述癌癥選自膀脫癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、食道癌、肺 癌、喉癌、腎癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋己瘤或白血 病，或者任何該些癌癥的轉(zhuǎn)移癌。在一些實(shí)施方式中，所述癌癥是急性髓細(xì)胞性白血病。在 一些實(shí)施方式中，所述受試者是復(fù)發(fā)性或難治性急性髓細(xì)胞性白血病。在一些實(shí)施方式中， 所述癌癥與細(xì)胞表面上CD98的表達(dá)增加有關(guān)。
[0031] 在一些實(shí)施方式中，將所述抗體或功能性片段與一種或多種化學(xué)治療化合物組合 向受試者施用，其中所述化學(xué)治療化合物選自苯達(dá)莫司汀鹽酸鹽、環(huán)磯醜胺、異環(huán)磯醜胺、 氣達(dá)拉濱（fliKlur油ine)、阿糖胞巧、吉西他濱、潑尼松、潑尼松龍、甲潑尼龍、紫杉醇、多西 他賽、長春瑞濱、長春新堿、依巧泊巧、伊立替康、意環(huán)霉素、多柔比星、順笛、卡笛和利妥昔 單抗。
[0032] 在一種實(shí)施方式中，提供了檢測生物樣品中CD98的存在性的方法，所述方法包 括在允許抗體與CD98結(jié)合的條件下將所述生物樣品與任何上述抗體接觸，并檢測抗體和 CD98之間是否形成復(fù)合物。在一些實(shí)施方式中，所述生物樣品來自于患有或者懷疑患有 細(xì)胞或組織癌癥的哺乳動物，所述癌癥包括，但不限于，膀脫癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃 癌、食道癌、肺癌、喉癌、腎癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、 淋己瘤或白血病，或者任何該些癌癥的轉(zhuǎn)移癌。
[0033] 在一種實(shí)施方式中，提供了診斷與CD98表達(dá)升高有關(guān)的癌癥的方法，所述方法包 括將測試細(xì)胞與任何上述抗體接觸；通過檢測所述抗體與CD98的結(jié)合來確定CD98的表達(dá) 水平；和將測試細(xì)胞的CD98表達(dá)水平與對照細(xì)胞的CD98表達(dá)水平相比較，其中與對照細(xì) 胞相比，測試細(xì)胞較高的CD98表達(dá)水平顯示癌癥的存在性與CD98表達(dá)增加有關(guān)。在一些 實(shí)施方式中，所述測試細(xì)胞是來自懷疑患有癌癥的患者的細(xì)胞，所述癌癥選自膀脫癌、乳腺 癌、結(jié)腸癌、直腸癌、食道癌、肺癌、喉癌、腎癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、神經(jīng) 膠質(zhì)瘤、淋己瘤或白血病，或者任何該些癌癥的轉(zhuǎn)移癌。在一種實(shí)施方式中，所述方法包括 確定測試細(xì)胞表面上CD98的表達(dá)水平，和將所述測試細(xì)胞表面上CD98的表達(dá)水平與對照 細(xì)胞表面上CD98的表達(dá)水平相比較。在一些實(shí)施方式中，所述測試細(xì)胞是癌細(xì)胞，并且所 述對照細(xì)胞是相同組織類型的正常細(xì)胞。
[0034] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了任何上述抗體或功能性片段藥物制備中的用 途，其中所述藥物用于抑制表達(dá)CD98的癌細(xì)胞的生長的方法中。在多種實(shí)施方式中，所述 細(xì)胞來自于選自膀脫癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、腎癌、口腔癌、 卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋己瘤或白血病，或者任何該些癌癥的 轉(zhuǎn)移癌的癌癥。
[0035] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了任何上述抗體或功能性片段用于抑制表達(dá)CD98 的癌細(xì)胞生長的用途。在多種實(shí)施方式中，所述細(xì)胞來自于選自膀脫癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、直 腸癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、腎癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神經(jīng) 膠質(zhì)瘤、淋己瘤或白血病，或者任何該些癌癥的轉(zhuǎn)移癌的癌癥。
[0036] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包含任何上述抗體或功能性片段的藥物組合物 在藥物制備中的用途，其中所述藥劑用于治療受試者中的癌癥的方法中。在多種實(shí)施方式 中，所述癌癥選自膀脫癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、腎癌、口腔癌、 卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋己瘤或白血病，或者任何該些癌癥的 轉(zhuǎn)移癌。在一些實(shí)施方式中，所述癌癥是急性髓細(xì)胞性白血病。在一些實(shí)施方式中，所述受 試者是復(fù)發(fā)性或難治性急性髓細(xì)胞性白血病。在一些實(shí)施方式中，所述癌癥與細(xì)胞表面上 CD98的表達(dá)增加有關(guān)。在一些實(shí)施方式中，將該抗體或功能性片段結(jié)合與一種或多種化學(xué) 治療化合物組合向受試者施用，其中該化學(xué)治療化合物選自苯達(dá)莫司汀鹽酸鹽、環(huán)磯醜胺、 異環(huán)磯醜胺、氣達(dá)拉濱、阿糖胞巧、吉西他濱、潑尼松、潑尼松龍、甲潑尼龍、紫杉醇、多西他 賽、長春瑞濱、長春新堿、依巧泊巧、伊立替康、意環(huán)霉素、多柔比星、順笛、卡笛和利妥昔單 抗。
[0037] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包含任何上述抗體或功能性片段和可藥用載體 的藥物組合物在治療受試者中癌癥中的應(yīng)用。在多種實(shí)施方式中，所述癌癥選自膀脫癌、乳 腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、腎癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉 瘤、黑素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋己瘤或白血病，或者任何該些癌癥的轉(zhuǎn)移癌。在一些實(shí)施方式 中，所述癌癥是急性髓細(xì)胞性白血病。在一些實(shí)施方式中，所述受試者是復(fù)發(fā)性或難治性急 性髓細(xì)胞性白血病。在一些實(shí)施方式中，所述癌癥與細(xì)胞表面上CD98的表達(dá)增加有關(guān)。在 一些實(shí)施方式中，將所述抗體或功能性片段結(jié)合與一種或多種化學(xué)治療化合物組合向受試 者施用，其中所述化學(xué)治療化合物選自苯達(dá)莫司汀鹽酸鹽、環(huán)磯醜胺、異環(huán)磯醜胺、氣達(dá)拉 濱、阿糖胞巧、吉西他濱、潑尼松、潑尼松龍、甲潑尼龍、紫杉醇、多西他賽、長春瑞濱、長春新 堿、依巧泊巧、伊立替康、意環(huán)霉素、多柔比星、順笛、卡笛和利妥昔單抗。
[0038] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了任何上述抗體或功能性片段在藥物制備中的用 途，其中所述藥物用于在檢測生物樣品中CD98的存在性的方法中。在一些實(shí)施方式中，所 述方法包括在允許抗體與CD98結(jié)合的條件下將所述生物樣品與任何上述抗體接觸，并檢 測抗體和CD98之間是否形成復(fù)合物。在一些實(shí)施方式中，所述生物樣品來自于患有或者懷 疑患有細(xì)胞或組織癌癥的哺乳動物，所述癌癥包括（但不限于）膀脫癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、直 腸癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、腎癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神經(jīng) 膠質(zhì)瘤、淋己瘤或白血病，或者任何該些癌癥的轉(zhuǎn)移癌。
[0039] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了任何上述抗體或功能性片段在檢測生物樣品中 CD98的存在性的方法中的應(yīng)用。在一些實(shí)施方式中，所述方法包括在允許抗體與CD98結(jié) 合的條件下將所述生物樣品與任何上述抗體接觸，并檢測抗體和CD98之間是否形成復(fù)合 物。在一些實(shí)施方式中，所述生物樣品來自于患有或者懷疑患有細(xì)胞或組織癌癥的哺乳動 物，所述癌癥包括（但不限于）膀脫癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、 腎癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋己瘤或白血病，或者任 何該些癌癥的轉(zhuǎn)移癌。
[0040] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了任何上述抗體或功能性片段在藥物制備中的用 途，其中所述藥物用于在診斷與CD98表達(dá)增加有關(guān)的癌癥的方法中使用。在一些實(shí)施方式 中，所述方法包括將測試細(xì)胞與任何上述抗體接觸；通過檢測所述抗體與CD98的結(jié)合來確 定CD98的表達(dá)水平；和將測試細(xì)胞的CD98表達(dá)水平與對照細(xì)胞的CD98表達(dá)水平相比較， 其中與對照細(xì)胞相比，測試細(xì)胞較高的CD98表達(dá)水平顯示癌癥的存在性與CD98表達(dá)升高 有關(guān)。在一些實(shí)施方式中，所述測試細(xì)胞是來自懷疑患有癌癥的患者的細(xì)胞，所述癌癥選自 膀脫癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、食道癌、肺癌、喉癌、腎癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或 者肉瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋己瘤或白血病，或者任何該些癌癥的轉(zhuǎn)移癌。在一種實(shí)施方式中，所 述方法包括確定測試細(xì)胞表面上CD98的表達(dá)水平，和將所述測試細(xì)胞表面上CD98的表達(dá) 水平與對照細(xì)胞表面上CD98的表達(dá)水平相比較。在一些實(shí)施方式中，所述測試細(xì)胞是癌細(xì) 胞，并且所述對照細(xì)胞是相同組織類型的正常細(xì)胞。
[0041] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了任何上述抗體或功能性片段在診斷與CD98表 達(dá)升高有關(guān)的癌癥的方法中的應(yīng)用。在一些實(shí)施方式中，所述方法包括將測試細(xì)胞與任何 上述抗體接觸；通過檢測所述抗體與CD98的結(jié)合來確定CD98的表達(dá)水平；和將測試細(xì)胞 的CD98表達(dá)水平與對照細(xì)胞的CD98表達(dá)水平相比較，其中與對照細(xì)胞相比，測試細(xì)胞較高 的CD98表達(dá)水平顯示癌癥的存在性與CD98表達(dá)增加有關(guān)。在一些實(shí)施方式中，所述測試細(xì) 胞是來自懷疑患有癌癥的患者的細(xì)胞，所述癌癥選自膀脫癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、食道 癌、肺癌、喉癌、腎癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋己瘤或白血病， 或者任何該些癌癥的轉(zhuǎn)移癌。在一種實(shí)施方式中，所述方法包括確定測試細(xì)胞表面上CD98 的表達(dá)水平，和將所述測試細(xì)胞表面上CD98的表達(dá)水平與對照細(xì)胞表面上CD98的表達(dá)水 平相比較。在一些實(shí)施方式中，所述測試細(xì)胞是癌細(xì)胞，并且所述對照細(xì)胞是相同組織類型 的正常細(xì)胞。
[0042] 在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，提供了生產(chǎn)制品或"試劑盒"，其含有用于治療如 上所述的病癥的物質(zhì)。所述生產(chǎn)制品包括容器和位于所述容器上或與之有關(guān)的標(biāo)簽或包裝 說明書。適合的容器包括，例如，瓶、小瓶、注射器、泡罩包裝等。所述容器可W由多種材料， 如玻璃或塑料形成。所述容器容納了對治療病況有效的抗體或抗體-藥物結(jié)合物（ADC)組 合物，并且可W具有無菌入孔（例如，所述容器可W是靜脈內(nèi)輸液袋或者具有通過皮下注 射針頭可刺穿的塞子的小瓶）。所述組合物中至少一種活性劑是抗體或ADC。標(biāo)簽或包裝 說明書顯示所述組合物用于治療所選的病況，如癌癥。作為另外一種選擇或者另外，所述生 產(chǎn)制品還可W包括第二（或第H )容器，其包含可藥用緩沖液，如抑菌性注射用水炬WFI)、 磯酸鹽緩沖鹽水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。它還可W包括從商品化或使用者角度所期望 的其他材料，其包括其他緩沖液、稀釋劑、過濾器、針頭和注射器。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0043] 圖1示出了通過在AML、化L、CRC樣品和相應(yīng)正常對照中的STAg分析鑒別和定量 的CD98的蛋白表達(dá)水平。線顯示了陽性樣品中％歸一化光譜豐度因子（NSA巧的平均值。
[0044] 圖2是顯示39個抗CD98抗體的表位框并（epitope binning)結(jié)果的圖。
[0045] 圖3示出了嵌合抗CD98單克隆抗體8-34B、18-2A2. 1U8-2A2. 2和18-2A2. 7的結(jié) 合性質(zhì)。圖3A是顯示嵌合抗CD98單克隆抗體的表位框并結(jié)果的圖。四個參比抗體如圖1 所示。"同型"是不結(jié)合CD98的相同同型的對照抗體。圖3B顯示了嵌合抗CD98單克隆抗 體的Kd,如通過用結(jié)腸癌細(xì)胞系DLDl的FACS分析所確定的。圖3C顯示了用嵌合抗CD98 單克隆抗體染色的H種AML原發(fā)性腫瘤樣品和表達(dá)食蟹猴CD98(cynCD98)的細(xì)胞系的FACS 分析結(jié)果。
[0046] 圖4示出了人源化8-34B抗體的構(gòu)成。圖4A顯示了與人受體序列（AC)和人源化 輕鏈Ll和L2的序列比對的鼠8-34B輕鏈可變結(jié)構(gòu)域（IGN 34)的序列。根據(jù)K油at編號 的CDR用紅色顯示，并且與Ll相比，L2中的取代用下劃線表示。圖4A按照出現(xiàn)順序分別公 開了 SEQ ID NO 6、38、15-16和38。圖4B示出了與人受體序列（AC)和人源化重鏈H1、肥 和冊的序列比對的鼠8-34B重鏈可變結(jié)構(gòu)域（IGN 34)的序列。根據(jù)KK油at編號的CDR 用紅色顯示，并且與冊相比，肥和冊中的取代用下劃線表示。圖4B按照出現(xiàn)順序分別公 開了 SEQ ID NO 4、39、17-19 和 40。
[0047] 圖5示出了抗CD98抗體處理在建立的Ramos腫瘤中引起了強(qiáng)烈的腫瘤生長抑制。 治療開始時的腫瘤體積從（A)約75mm3,（B)約150mm3提高至（C)約250mm 3。在第29天（A) 或第22天炬）停止抗體劑量施用，并且測量了研究持續(xù)期間的腫瘤再生長。將利妥昔單抗 (抗CD20抗體）用作陽性治療對照抗體，并且抗體皿12UATCC)用作IgG2a同型陰性對照。
[0048] 圖6示出了抗CD98抗體顯著延長了所處理的RAMOS腫瘤發(fā)展的時間。計算了上 述腫瘤再生長數(shù)據(jù)的腫瘤倍增時間（圖4A-C)并用于進(jìn)一步預(yù)測發(fā)展時間（TTP)。然后，對 處理組內(nèi)每只動物外推TTP，直至將達(dá)到2000mm 3,并且作為Kaplan-Meier曲線作圖。
[0049] 圖7示出了與rituxan(美羅華）和陰性對照IgG2a相比，抗CD98單克隆抗體 18-2A對淋己瘤異種移植中體內(nèi)腫瘤生長的抑制。箭頭顯示抗體處理的施用。
[0050] 圖8示出了與陰性對照IgG2a相比，抗CD98單克隆抗體18-2A和8-34B對急性髓 細(xì)胞性白血病異種移植中體內(nèi)腫瘤生長的抑制。箭頭顯示抗體處理的施用。
[0051] 圖9示出了與愛必妥和陰性對照IgG2a(第一研究）W及與DC101+CTX(環(huán)磯醜胺） 和陰性對照IgG2a(第二研究）相比，抗CD98單克隆抗體18-2A對結(jié)腸直腸癌異種移植中 體內(nèi)腫瘤生長的抑制。DClOl是大鼠抗小鼠VEGFR2/邸R IgGl mAb(ATCC No.皿-11534)并 且用作陽性對照。箭頭顯示抗體處理的施用。
[0052] 圖10示出了與愛必妥（抗EGFR)和陰性對照IgG2a相比，抗CD98單克隆抗體 18-2A對非小細(xì)胞肺癌異種移植中體內(nèi)腫瘤生長的抑制。箭頭顯示抗體處理的施用。
[005引圖11示出了抗CD98單克隆抗體對具有不同免疫缺陷背景的小鼠系；(A)NSG小 鼠；做NOD. SCID小鼠和似SCID小鼠中淋己瘤異種移植的體內(nèi)腫瘤生長的影響。
[0054] 圖12示出了與它們親本鼠單克隆抗體（18-2A和8-34B)相比，嵌合抗CD98單克 隆抗體（18-2A-ch7. 1和8-34B-ch)對淋己瘤異種移植的體內(nèi)腫瘤生長的影響的比較。
[005引圖13示出了取代至人CD98序列（SEQ ID NO ;1) W形成用于繪制人源化單克隆抗 體IGN523結(jié)合的人CD98表位圖的13個小鼠-人CD98嵌合體構(gòu)件的小鼠CD98序列（SEQ ID NO ;96)區(qū)。
[0056] 圖14示出了人源化單克隆抗體IGN523和對照抗體與13個小鼠-人CD98嵌合體 構(gòu)件的結(jié)合，如通過FACS分析所確定的。
[0057] 圖15示出了其中IGN523結(jié)合的人CD98區(qū)的序列，如使用小鼠-人CD98嵌合體 構(gòu)件所鑒別的，和該序列在CD98的立體結(jié)構(gòu)內(nèi)的位置。氨基酸T358-G368(下劃線）包埋 在晶體結(jié)構(gòu)中并且不可能是結(jié)合界面的一部分。用加粗顯示了人和小鼠序列之間的非保守 性殘基。
[005引圖16示出了通過將來自小鼠CD98的非同源性殘基引入至人序列的祀標(biāo)環(huán)區(qū)造 成IGN523與四個構(gòu)件結(jié)合。構(gòu)件4. 1包括突變J371L、D374Q、A375G和A376的缺失。構(gòu) 件4.2包括突變；M383A和E384。構(gòu)件4.3包括突變；D391N、F395I、P396F和D397H。構(gòu)件 4. 4包括突變；G400R、A401P和A404L。通過用各個構(gòu)件轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞的FACS分析檢測 表口口。
[0059] 圖17示出了 IGN523與祀標(biāo)環(huán)區(qū)中疏水性殘基的單個突變構(gòu)件的結(jié)合。如所示 的，用高度帶電的氨基酸取代每個所指明的疏水性殘基。通過用各個構(gòu)件轉(zhuǎn)染的Cffi)細(xì)胞 的FACS分析檢測結(jié)合。
[0060] 圖18示出了 IGN523與在祀標(biāo)環(huán)區(qū)中含有多個殘基突變的構(gòu)件的結(jié)合，如通過用 各個構(gòu)件轉(zhuǎn)染的C冊細(xì)胞的FACS分析所檢測的。Ml含有突變D374Q、D397H、G400R和A40IP。 M2含有突變D374E和A375E。M3含有突變D397S和口98T。
[0061] 圖19示出了用于人源化單克隆抗體IGN523的表位定位的可變長度膚篩選的結(jié) 果。用水平線顯示每種膚的化ISA結(jié)果。線的起點(diǎn)和終點(diǎn)顯示了包含在所述膚中的殘基。 線的Y值顯示了對該膚所獲得的化ISA結(jié)果。結(jié)果顯示了對395FPDIPGA401的主要結(jié)合和 對379PGQP382(陰影區(qū)）的次要結(jié)合。
[0062] 圖20示出了最佳結(jié)合的單一位置丙氨酸取代膚組的結(jié)果。每個殘基均被A取代 (或者G，如果原始氨基酸為A)。圖中取代字母作圖的高度是對該突變膚所獲得的ELISA 值。中線和陰影間隔顯示了參考化ISA值。
[0063] 圖21示出了表示得自將人CD98的兩個部分序列狂軸上所示的SEQ ID N045-59， 和Y軸上所示的SEQ ID N060-74)合并的化IPS構(gòu)象矩陣結(jié)構(gòu)的數(shù)據(jù)的熱圖。
[0064] 圖22示出了根據(jù)圖21中所示的矩陣分析的強(qiáng)烈結(jié)合膚的突變篩選結(jié)果。SEQl示 出了膚序列，并且DIFl顯示了膚中突變的位置?；疑珔^(qū)域顯示了具有非突變序列的膚。最 后一列顯示了野生型和突變膚之間化ISA值的差異。較高的值顯示突變對結(jié)合具有強(qiáng)烈的 副作用。
[0065] 圖23示出了確定對人源化單克隆抗體IGN523的結(jié)合重要的氨基酸殘基的人CD98 的序列中和表面上的位置。圖23A顯示了通過嵌合體和突變研究（加粗），通過化pscan分 析（灰色），或者通過兩者（陰影）確定的殘基序列中的位置。圖23B顯示了通過嵌合體和 突變研究（暗灰色）確定的殘基位置。圖23C顯示了通過化pscan分析（淺灰色）確定的 殘基位置。圖23D顯示了兩組殘基的重疊（黑色）。
[0066] 圖24示出了與利妥昔單抗和陰性對照IgG相比，人源化單克隆抗體IGN523對 RAMOS (RA. 1)伯基特淋己瘤異種移植中體內(nèi)腫瘤生長的抑制。在第11、17和25天，W IOmg/ kg腹膜間劑量施用抗體。箭頭顯示抗體處理的施用。
[0067] 圖25示出了與r;Uuxan和陰性對照IgG相比，人源化單克隆抗體IGN523對DAU 伯基特淋己瘤異種移植中體內(nèi)腫瘤生長的抑制。在第20和26天，W lOmg/kg腹膜間劑量 施用抗體。箭頭顯示抗體處理的施用。
[006引圖26A示出了與卡笛和陰性對照IgG相比，人源化單克隆抗體IGN523對 IGN-LNG-12肺腫瘤異種移植中體內(nèi)腫瘤生長的抑制。在第17、24和31天，分別W IOmg/ kg或75mg/kg腹膜間劑量施用IGN523和卡笛。箭頭顯示處理的施用。圖2她顯示了對 應(yīng)于圖26A中用所指示的試劑處理的小鼠的體重測量。W其最大耐受劑量施用卡笛，它在 NOD-SCID小鼠中引起體重?fù)p失。
[006引圖27示出了與rituxan和陰性對照IgG相比，人源化單克隆抗體IGN523對KG-I 急性髓細(xì)胞性白血病異種移植中體內(nèi)腫瘤生長的抑制。在第21、28和34天，W 15mg/kg腹 膜間劑量施用抗體。箭頭顯示抗體處理的施用。
[0070] 圖28示出了人源化單克隆抗體IGN523對肺腫瘤異種移植中體內(nèi)腫瘤生長的劑量 依賴性抑制。在第12和19天，W所指示的劑量腹膜內(nèi)施用抗體。箭頭顯示抗體處理的施 用。
[0071] 圖29示出了通過人源化單克隆抗體IGN523的人和食蟹猴冷凍組織切片的 染色。用IOy g/mL的IGN523對人和食蟹猴腎、腦和胎盤的冷凍切片染色。將化son、 化ng和化erck用于免疫組織化學(xué)的方法的修改用于消除對標(biāo)記IGN523的需要W及 用于排除第二標(biāo)記的抗人IgG和對待檢查組織為內(nèi)源的IgG之間的非特異性反應(yīng)性 (Rmgl992, Hierckl994, I\isonl990)。W約5 y m切割切片。開始，評價所有載玻片的組織 元件和染色的適合性，然后由研究病理學(xué)家對染色強(qiáng)度進(jìn)行評價并主觀地分級。除人腦 (20X)外，W 40X放大顯示代表性圖片。

【具體實(shí)施方式】
[0072] 一般巧術(shù)
[0073] 本文所描述或參考的技術(shù)和程序是本領(lǐng)域技術(shù)人員一般公知并且使用常規(guī) 方法常用的，如，例如，在 Sambrook 等人，Molecular Cloning = A L油oratory Manual, 第 3 版(2001)Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. Current Protocols in Molecular Biology (p.M. Ausubel 等人主編，（2003)); Therapeutic Monoclonal Antibodies:From Bench to Clinic, Z. An主編，Wiley, Hoboken N J. (2009) ;Monoclonal Antibodies:Methods and Protocols, M. A 化 itar 主編，Humana Press, Totawa,N.J. (2010);和 Antibody !Engineering,第 2 版，第 I 卷和第 2 卷，Kontermann and Dubel 主編，Springer-Verlag, Heide化e;rg, 2010 中描述的廣泛使用 的方法。
[0074] 定義和縮寫 [00巧]定義
[0076] 出于解釋本說明書的目的，W下定義將適用并且當(dāng)適合時，W單數(shù)使用的術(shù)語還 將包括復(fù)數(shù)，并且反之亦然。如果所述的任何定義與作為參考并入本文的任何文檔沖突時， 則應(yīng)W下列所述的定義為準(zhǔn)。
[0077] 如本文所使用的，除非另外說明，否則術(shù)語"CD98"是指來自任何脊椎動物源的任 何天然CD98,所述脊椎動物包括哺乳動物，如靈長類（例如，人、食蟹猴（cyno))、狗和曬齒 類（例如，小鼠和大鼠）。W下分別作為SEQ ID NO ;1和SEQ ID NO ;2提供了人CD98的氨 基酸和編碼核酸序列。
[0078] MSQDTEVDMKEV 化肥 LEP 邸 QPMNAASGAAMSLAGA 邸 NGLVKIKVAEDEAEAAAAAKFTCLSIffiEli KVAGSPGWVRTRWA 化化 FWLGWLGMLAGAVVIIVRAPRCRELPAQKWWHTGALYRIGDLQAFQGHGAGNLA 化 KGR LD 化 SSLKVKGLVLGPIHKNQ 邸 DVAQTDLLQIDPNFGS 邸 D 抑化 LQSAKKKSIRVILDLTPNYRGENSWFSTQVD TVATKV 邸 ALEFWLQAGVDGFQV 畑 IENL 邸 ASS 化 AEWQNITKG!^ 邸化 LlAGTNSSDLQQIL^LESMffilXLT SS化SDSGSTGEHTKSLVTQYLNATGNRWCSW化SQA化LTS化PA化Lrlyqlmlfiipgtpvfsygdeigldaaa LPGQPMEAPVMLWDESSFPDIPGAVSANMTVKGQS邸PG化LSLFRRLSDQRS邸RSLL服DFHAFSAGPGLFSYIR HWDQ 肥 R化 WLNFGDVGLSA 化 QASDLPASASLPAKADL 化 STQPGREEGSPLELERLKLEP 肥化化 RFPYAA(S EQ ID NO ：1)
[00巧]ATGAGCCAGGACACCGAGGTGGATATGAAGGAGGTGGAGCTGAATGAGTTAGAGCCCGAGAAGCAGCCG ATGAACGCGGCGTCTGGGGCGGCCATGTCCCTGGCGGGAGCCGAGAAGAATGGTCTGGTGAAGATCAAGGTGGCGGA AGACGAGGCGGAGGCGGCAGCCGCGGCTAAGTTCACGGGCCTGTCCAAGGAGGAGCTGCTGAAGGTGGCAGGCAGCC CCGGCTGGGTACGCACCCGCTGGGCACTGCTGCTGCTCTTCTGGCTCGGCTGGCTCGGCATGCTTGCTGGTGCCGTG GTCATAATCGTGCGAGCGCCGCGTTGTCGCGAGCTACCGGCGCAGAAGTGGTGGCACACGGGCGCCCTCTACCGCAT CGGCGACCTTCAGGCCTTCCAGGGCCACGGCGCGGGCAACCTGGCGGGTCTGAAGGGGCGTCTCGATTACCTGAGCT CTCTGAAGGTGAAGGGCCTTGTGCTGGGTCCAATTCACAAGAACCAGAAGGATGATGTCGCTCAGACTGACTTGCTG CAGATCGACCCCAATTTTGGCTCCAAGGAAGATTTTGACAGTCTCTTGCAATCGGCTAAAAAAAAGAGCATCCGTGT CATTCTGGACCTTACTCCCAACTACCGGGGTGAGAACTCGTGGTTCTCCACTCAGGTTGACACTGTGGCCACCAAGG TGAAGGATGCTCTGGAGTTTTGGCTGCAAGCTGGCGTGGATGGGTTCCAGGTTCGGGACATAGAGAATCTGAAGGAT GCATCCTCATTCTTGGCTGAGTGGCAAAATATCACCAAGGGCTTCAGTGAAGACAGGCTCTTGATTGCGGGGACTAA CTCCTCCGACCTTCAGCAGATCCTGAGCCTACTCGAATCCAACAAAGACTTGCTGTTGACTAGCTCATACCTGTCTG ATTCTGGTTCTACTGGGGAGCATACAAAATCCCTAGTCACACAGTATTTGAATGCCACTGGCAATCGCTGGTGCAGC TGGAGTTTGTCTCAGGCAAGGCTCCTGACTTCCTTCTTGCCGGCTCAACTTCTCCGACTCTACCAGCTGATGCTCTT CACCCTGCCAGGGACCCCTGTTTTCAGCTACGGGGATGAGATTGGCCTGGATGCAGCTGCCCTTCCTGGACAGCCTA TGGAGGCTCCAGTCATGCTGTGGGATGAGTCCAGCTTCCCTGACATCCCAGGGGCTGTAAGTGCCAACATGACTGTG AAGGGCCAGAGTGAAGACCCTGGCTCCCTCCTTTCCTTGTTCCGGCGGCTGAGTGACCAGCGGAGTAAGGAGCGCTC CCTACTGCATGGGGACTTCCACGCGTTCTCCGCTGGGCCTGGACTCTTCTCCTATATCCGCCACTGGGACCAGAATG AGCGTTTTCTGGTAGTGCTTAACTTTGGGGATGTGGGCCTCTCGGCTGGACTGCAGGCCTCCGACCTGCCTGCCAGC GCCAGCCTGCCAGCCAAGGCTGACCTCCTGCTCAGCACCCAGCCAGGCCGTGAGGAGGGCTCCCCTCTTGAGCTGGA ACGCCTGAAACTGGAGCCTCACGAAGGGCTGCTGCTCCGCTTCCCCTACGCGGCCTGA(SEQ ID NO ：2)
[0080] 術(shù)語"CD98"涵蓋了 "全長"未處理的CD98 W及由在細(xì)胞中的處理所產(chǎn)生的任何 形式的CD98。該術(shù)語還涵蓋了 CD98的天然存在的變體或突變，例如，剪切變體、等位變體、 SNP變體和同工型。本文所述的CD98多膚可W分離自多種來源，如來自人組織類型或者來 自另一種來源，或者通過重組或合成方法制備。"天然序列CD98多膚"包括具有與來源于天 然的相應(yīng)CD98多膚相同的氨基酸序列的多膚。該些天然序列CD98多膚可W分離自天然， 或者可W通過重組或合成方式產(chǎn)生。術(shù)語"天然序列CD98多膚"具體地涵蓋了天然存在的 截短或分泌形式的特異性CD98多膚（例如，胞外域序列）、所述多膚的天然存在的變體形式 (例如，作為另外一種選擇，剪切形式）和天然存在的等位變體。
[0081] 術(shù)語"抗體"W最廣泛的含義使用并且具體地涵蓋了，例如，單一抗CD98單克隆抗 體（包括激動劑、枯抗劑、中和抗體、全長或完整單克隆抗體）、具有多表位特異性的抗CD98 抗體組合物、多克隆抗體、多價抗體、多重特異性抗體（例如，雙重特異性抗體，只要它們顯 示出所需的生物活性），它是由至少兩個完整抗體形成的，單鏈抗CD98抗體和抗CD98抗體 的片段，如W下所定義的。在本文中，術(shù)語"免疫球蛋白"（Ig)與抗體是可互換地使用的。 抗體可W是人抗體、人源化抗體和/或親合成熟的抗體。
[0082] "抗原"是抗體可W選擇性結(jié)合的預(yù)先確定的抗原。祀標(biāo)抗原可W是多膚、碳水化 合物、核酸、脂質(zhì)、半抗原或其他天然存在或合成的化合物。優(yōu)選地，所述祀標(biāo)抗原是多膚。
[0083] "結(jié)合"所關(guān)也的抗原的抗體是W足夠的親合力結(jié)合抗原的抗體，從而所述抗體 作為祀向表達(dá)所述抗原的細(xì)胞或組織的治療劑是有用的，并且與其他蛋白無顯著的交叉反 應(yīng)。在該些實(shí)施方式中，抗體與"非祀標(biāo)"蛋白結(jié)合的程度將小于抗體與其特定祀標(biāo)蛋白結(jié) 合的約10%，如通過英光激活細(xì)胞分選（FAC巧分析或放射免疫沉淀巧IA)所確定的。對于 抗體與祀標(biāo)分子的結(jié)合，術(shù)語"特異性結(jié)合"或"特異性結(jié)合至"特定多膚或特定多膚祀標(biāo) 上的表位或?qū)ζ?特異的"是指可測量地不同于非特異性相互作用的結(jié)合。可W通過（例 如）確定與對照分子的結(jié)合相比的分子結(jié)合來測量特異性結(jié)合，所述對照分子通常是具有 類似結(jié)構(gòu)但不具有結(jié)合活性的分子。例如，可W通過與類似于祀標(biāo)，例如，過量的未標(biāo)記的 祀標(biāo)的對照分子的競爭來確定特異性結(jié)合。在該種情況下，如果標(biāo)記祀標(biāo)與探針的結(jié)合被 過量未標(biāo)記的祀標(biāo)競爭性地抑制，則表明是特異性結(jié)合。如本文所使用的，術(shù)語"特異性結(jié) 合"或"特異性結(jié)合至"特定多膚或特定多膚祀標(biāo)上的表位或者對其"特異"可W通過（例 如）對祀標(biāo)具有至少約ICT 4M,作為另外一種選擇，至少約IO^M,作為另外一種選擇，至少約 i(t6m，作為另外一種選擇，至少約！(Tm,作為另外一種選擇，至少約i〇-8m，作為另外一種選 擇，至少約1(T9m，作為另外一種選擇，至少約作為另外一種選擇，至少約icriiM，作為 另外一種選擇，至少約ICTi 2M或更大的Kd的分子來顯示。在一種實(shí)施方式中，術(shù)語"特異性 結(jié)合"是指其中分子結(jié)合至特定多膚或特定多膚上的表位，但與任何其他多膚或多膚表位 基本沒有結(jié)合的結(jié)合。
[0084] 術(shù)語"抗CD98抗體"或者"結(jié)合至CD98的抗體"是指能夠W足夠的親合力結(jié)合CD98 從而使所述抗體在作為祀向CD98的診斷和/或治療劑時有用的抗體。優(yōu)選地，抗CD98抗 體與不相關(guān)的非CD98蛋白結(jié)合的程度小于所述抗體與CD98結(jié)合的約10%，例如，如通過英 光激活細(xì)胞分選（FAC巧分析或放射免疫沉淀巧IA)所測量的。"特異性結(jié)合至"CD98或?qū)?CD98 "特異"的抗體為如上所定義的。在某些實(shí)施方式中，結(jié)合至CD98的抗體的解離常數(shù) 化d)<lyM，<100nM，<10nM，<lnM或<0.1nM。在某些實(shí)施方式中，抗CD98抗體結(jié)合至在來 自不同物種的CD98中保守的CD98表位。
[0085] "分離的抗體"是已鑒別并分離和/或從其自然環(huán)境組成中獲得的抗體。其自然環(huán) 境的污染物組分包括（但不限于）將干擾抗體的治療性使用的材料，并且所述材料可W包 括酶、激素和其他蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)溶質(zhì)。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述抗體將純化（1)達(dá)到 按重量計大于95 %的抗體，如通過Lowry法（Lowry等人，J. Bio. Chem. 193:265-275, 1951) 所確定的，并且最優(yōu)選地大于按重量計的99%，（2)達(dá)到足W通過使用自旋杯測序儀 (spinning cup sequenator)獲得N端的至少15個殘基或內(nèi)部氨基酸序列的程度，或（3) 達(dá)到使用考馬斯亮藍(lán)染色，或者優(yōu)選地銀染在還原或非還原條件下通過SDS-PAGE確定的 均一性。分離的抗體包括在重組細(xì)胞內(nèi)的原位抗體，因?yàn)樗隹贵w的天然環(huán)境的至少一個 組分將不存在。然而，通常，分離的抗體將通過至少一個純化步驟制備。
[0086] 基本的4-鏈抗體單元是包含兩個相同的輕（L)鏈和兩個相同的重（H)鏈的雜四 聚糖蛋白。就IgG來說，4-鏈單元通常為約150, 000道爾頓。每個L鏈通過一個共價二硫 鍵與H鏈連接，而根據(jù)H鏈的同型，兩個H鏈通過一個或多個二硫鍵彼此連接。每條H鏈和 L鏈還具有間隔規(guī)律的鏈內(nèi)二硫橋。每條H鏈在N-末端具有一個可變結(jié)構(gòu)域（Vh),接著是 H個（對于每種a和Y鏈）和四個（對于y和e同型）恒定結(jié)構(gòu)域（Ch)D每條L鏈在 N-末端具有一個可變結(jié)構(gòu)域（￥山接著在其另一端具有一個恒定結(jié)構(gòu)域（片)。￥^與￥?排列 在一起，而片與重鏈的第一恒定結(jié)構(gòu)域（ChI)排列在一起。特定的氨基酸殘基被認(rèn)為在輕 鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域之間形成界面。成對的Vh和Vl 一起形成單一抗原結(jié)合位點(diǎn)。對于不 同類別抗體的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，參見，例如，Basic and Clinical Immunology,第8版，Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (主編），Appleton&Lange, Norwa化,CT, I 994,第71頁和第6章。
[0087] 抗體的"可變區(qū)"或"可變結(jié)構(gòu)域"或"V域"是指抗體的重鏈或輕鏈的氨基端域。 重鏈的可變結(jié)構(gòu)域可W稱為"VH"。輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域可W稱為"VL"。術(shù)語"可變"是指在 抗體中，可變結(jié)構(gòu)域的某些部分在序列上顯著不同的事實(shí)。V域調(diào)節(jié)抗原結(jié)合并且定義了特 定抗體對其特定抗原的特異性。然而，可變性是在可變結(jié)構(gòu)域的110個氨基酸區(qū)間內(nèi)不均 勻分布的。相反，V區(qū)由15-30個氨基酸的稱作框架區(qū)（FR)的相對不變異的區(qū)段及將框架 區(qū)分開的每個9-12個氨基酸長的稱作"高變區(qū)"的極度變異的較短區(qū)域組成。天然重鏈和 輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域分別包含四個FR,它們大多采取目-折疊構(gòu)象，通過形成環(huán)狀連接且在 一些情況下形成目-折疊結(jié)構(gòu)的一部分的H個高變區(qū)連接。每條鏈中的高變區(qū)通過FR緊 密結(jié)合在一起，并且與來自另一條鏈的高變區(qū)一起促進(jìn)抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)的形成（參見 Kabat尊人.Se日Uences of Proteins of Tmmunol ogical Interest.第 5 片反.Public Health Service, ^tional Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991)。恒定結(jié)構(gòu)域不直接參與 抗體與抗原的結(jié)合，但顯示出多種效應(yīng)子功能，如在抗體依賴性細(xì)胞毒性（ADCC)和補(bǔ)體依 賴性細(xì)胞毒性（CDC)中抗體的參與。
[008引"完整"抗體是包含抗原結(jié)合位點(diǎn)W及片和至少重鏈恒定結(jié)構(gòu)域Ch1、Ch2和句3的 抗體。所述恒定結(jié)構(gòu)域可W是天然序列恒定結(jié)構(gòu)域（例如，人天然序列恒定結(jié)構(gòu)域）或其 氨基酸序列變體。優(yōu)選地，所述完整抗體具有一種或多種效應(yīng)子功能。
[0089] "抗體片段"包含完整抗體的一部分，優(yōu)選地，包含完整抗體的抗原結(jié)合區(qū)或可變 區(qū)?？贵w片段的實(shí)例無限制地包括F油、F油'、F (油'）2和Fv片段；雙抗體和雙-雙抗體（參 見，例如，Holliger, P.等人，（1993)Proc.化tl. Acad. Sci. 90:6444-8 ;Lu，D.等人，（2005) J. Biol. Chem. 280:19665-72 ;Hudson 等人，化t.Med. 9:129-134(2003) ;W0 93/11161 ;和 美國專利No. 5837242和6492123);單鏈抗體分子（參見，例如，美國專利No. 4946778 ; 5260203 ;5482858和5476786);雙可變結(jié)構(gòu)域抗體（參見，例如，美國專利No. 7612181); 單可變結(jié)構(gòu)域抗體（SdAb)(參見，例如，Woolven 等人，Immunogenetics 50:98-101, 1999 ; Streltsov等人，Proc 化tl Acad Sci USA. 101:12444-12449,2004);和由抗體片段形成的 多特異性抗體。
[0090] 治療性抗體的"功能性片段"將顯示出至少一種歸因于完整抗體的生物學(xué)功能，女口 果不是一些或全部生物學(xué)功能的話，所述功能包括至少對祀標(biāo)抗原的特異性結(jié)合。
[0091] 如本文所使用的，術(shù)語"單克隆抗體"是指得自基本均一的抗體群體的抗體，即除 了可W少量存在的可能的天然存在的突變之外，組成所述群體的各個抗體是相同的。不應(yīng) 將修飾語"單克隆"視作需要通過任何特定方法產(chǎn)生抗體。例如，可W通過首先由Kohier 等人，化化re, 256:495(1975)描述的雜交瘤法制備在本發(fā)明中有用的單克隆抗體，或者 可W在細(xì)菌、真核動物或植物細(xì)胞（參見，例如，美國專利No. 4816567)中使用重組DNA 法進(jìn)行。例如，使用 Clackson 等人，化Uire, 352:624-628(1991)和 Marks 等人，J. Mol. Biol.，222:581-597(1991)中所述的技術(shù)，還可W從瞻菌體抗體文庫中分離"單克隆抗體"。
[0092] 在本文中，單克隆抗體包括其中部分重鏈和/或輕鏈與來源于特定物種或?qū)儆谔?定抗體種類或亞類的抗體中的相應(yīng)序列等同或相同，而所述鏈的其余部分與來源于另一物 種或?qū)儆诹硪环N抗體種類或亞類的抗體中的相應(yīng)序列等同或相同的"嵌合"抗體，W及該些 抗體的片段，只要它們顯示出所需的生物活性（參見美國專利No. 4816567 ;和Morrison等 人，Proc.化tl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984))。
[0093] 非人（例如，曬齒類）抗體的"人源化"形式是指包含來源于非人抗體的最少序列 的嵌合抗體。在極大程度上，人源化抗體指人免疫球蛋白（受體抗體）中的受體的高變區(qū)殘 基被具有所期望的抗體特異性、親合力和能力的非人物種（供體抗體），如小鼠、大鼠、兔或 非人靈長類動物的高變區(qū)殘基置換的人免疫球蛋白。在一些情況下，將人免疫球蛋白的框 架區(qū)（FR)殘基用相應(yīng)的非人殘基置換。此外，人源化抗體可W包含在受體抗體或供體抗體 中不存在的殘基。進(jìn)行該些修飾是為了進(jìn)一步改進(jìn)抗體性能。一般地，人源化抗體將包含 基本全部的至少一個，并且通常兩個可變結(jié)構(gòu)域，其中全部或基本全部的高變環(huán)對應(yīng)于非 人免疫球蛋白的那些，并且全部或基本全部的FR為人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗體 任選地還將包含免疫球蛋白恒定區(qū)（Fe)的至少一部分，通常為人免疫球蛋白的恒定區(qū)。有 關(guān)其他詳細(xì)情況，參見化nes等人，化化re 321:522-525 (1986);化echmann等人，化化re 332:323-329 (1988);和 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)。還參見在本 文中引用的下列綜述和專利和參考文獻(xiàn)；Vaswani和Hamilton, Ann. Allergy, Asthma and Immunol, 1:105-115(1998) ；Harris, Biochem. Soc. Transactions, 23:1035-1038(1995)； Almagro and Rransson'Rront.Biosci. 13:1619-1633(2008);美國專利 No. 5585089; 5693762 ;6180370 ;和 6054297。
[0094]"人抗體"指具有該樣的氨基酸序列的抗體，所述氨基酸序列對應(yīng)于該樣抗體的 氨基酸序列，所述抗體由人產(chǎn)生和/或已使用如本文所公開的用于制備人抗體的任何技 術(shù)制備。人抗體的該種定義明確排除包含非人抗原結(jié)合殘基的人源化抗體?？蒞使用本 領(lǐng)域中已知的多種技術(shù)產(chǎn)生人抗體，其包括瞻菌體展示文庫化OOgenboom和Winter, J. Mol.Biol，227:381 (1991) ;Marks 等人，J.Mol.Biol，222:581 (1991))和酵母展示文庫 (化ao等人，化化re Protocolsl :755-768 (2006))。在W下文獻(xiàn)中描述的方法也可用 于制備人單克隆抗體；Cole 等人，Monoclonal Antibodies and Cancer Hierapy, Alan R. Liss,第 77 頁（1985) sBoerner 等人，J. Immunol, 147 (I) : 86-95 (1991)。還參見 van DiJk和 van de WinkeLQirr. Opin. Pharmacol,5:368-74(2001)。可 W通過將抗原施 用于轉(zhuǎn)基因動物來制備人抗體，所述轉(zhuǎn)基因動物已修飾在對抗原激發(fā)起反應(yīng)時會產(chǎn)生 該些抗體，但是其內(nèi)源位點(diǎn)已失去功能，例如，小鼠（參見，例如，化kobovits, A.,化rr. Opin,Biotechnol. 1995, 6 (5):561-6 ；Briiggemann and Taussing,Curr.Opin. Biotechnol. 1997, 8(4) :455-8 ;和有關(guān) XEN0M0USE? 技術(shù)的美國專利 No. 6075181 和 6150584)。有關(guān)通過人B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的人抗體，參見，例如，Li等人，Proc.化tl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562(2006)。
[009引當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語"高變區(qū)"、"HVR"或"HV"是指序列上高度可變和/或形成 結(jié)構(gòu)上定義的環(huán)的抗體可變結(jié)構(gòu)域區(qū)域。通常，抗體包含六個高變區(qū)：H個在VH中化1、肥、 冊），H個在化中（LU 12、L3)。使用了一些高變區(qū)示意圖并且它們涵蓋在本文中。K油at 互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)基于序列變異性，并且是最常用的化油at等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5 片反，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))。相反，Qiothia 是指結(jié)構(gòu)環(huán)的位置（Qiothia和 Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))。根據(jù)環(huán)的長度，化Othia CDR-Hl環(huán)的末端在使用K油at編號規(guī) 則編號時在冊2和冊4之間改變（該是因?yàn)镵油at編號方案著眼于H35A和H35B處的插入； 如果35A和35B均不存化則環(huán)在32處結(jié)束；如果僅35A存化則環(huán)在33處結(jié)束；如果35A 和35B均存在，則環(huán)在34處結(jié)束）。AbM高變區(qū)表示K油at CDR和化Othia結(jié)構(gòu)環(huán)之間的 折中，并且通過牛津分子AbM抗體模型軟件（Oxford Molecular's AbM antibody modeling software)使用。"觸點(diǎn)"高變區(qū)基于可用的復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)的分析。下文記錄了該些高變 區(qū)中每一個的殘基。
[0096] 環(huán) Kabat AbM Cbothia 觸點(diǎn) LI L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36 L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55 L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96 HI H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30-H35B (Kabat編號） HI H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35 (Chothia編號） H2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58 H3 H95-H102 H95-HI02 H96-H101 H93-H101
[0097] 高變區(qū)可以包括如下所示的"延伸的高變區(qū)":VL中的24-36或24-34 (LI)、46-56 或 50-56 (L2)和 89-97 或 89-96 (L3)及VH中的 26-35 或 26-35A(Hl)、50-65 或 49-65 (H2) 和93-102、94-102或95-102 (H3)。對于這些定義中的每一個，可變結(jié)構(gòu)域殘基是根據(jù)Kabat 等人（如上）進(jìn)行編號的。如本文所使用的，術(shù)語"HVR"和"CDR"是可互換使用的。
[0098] "框架"或"FR"殘基是指除本文中所定義的高變區(qū)殘基之外的那些可變結(jié)構(gòu)域殘 基。
[0099] 術(shù)語"依照Kabat的可變結(jié)構(gòu)域殘基編號"或"依照Kabat的氨基酸位置編號"及 其變化形式是指Kabat等人，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第 5 版，PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991)中用 于抗體編制的重鏈可變結(jié)構(gòu)域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的編號系統(tǒng)。使用該編號系統(tǒng)，真實(shí)的線 性氨基酸序列可以含有對應(yīng)于可變結(jié)構(gòu)域的FR或CDR的縮短或插入的較少或其他的氨基 酸。例如，重鏈可變結(jié)構(gòu)域可以在H2的殘基52之后包含單個氨基酸插入（根據(jù)Kabat，殘 基52a)和在重鏈FR殘基82之后包含插入的殘基（例如，根據(jù)Kabat，殘基82a、82b和82c 等）?？梢酝ㄟ^用"標(biāo)準(zhǔn)"Kabat編號序列在抗體序列同源性區(qū)進(jìn)行比對來確定給定抗體的 Kabat殘基編號。
[0100] 當(dāng)提及可變結(jié)構(gòu)域中的殘基（大致為輕鏈的殘基1-107和重鏈的殘基1-113)時， 通常使用Kabat編號系統(tǒng)（例如，Kabat等人，SequencesofImmunologicalInterest.第 5版.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md. (1991))〇 "EU編號系統(tǒng)"或"EU索弓I" 一般在提及免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)中的殘基時使用（例如，在 Kabat等人中報道的EU索引，如上）。"如在Kabat中的EU索弓丨"指人IgGlEU抗體的殘基 編號。除非本文中另有說明，否則提及抗體可變結(jié)構(gòu)域中的殘基編號是指根據(jù)Kabat編號 系統(tǒng)的殘基編號。除非本文中另有說明，否則提及抗體恒定結(jié)構(gòu)域中的殘基編號是指根據(jù) EU編號系統(tǒng)的殘基編號。
[0101] "親合力成熟的"抗體是指這樣的抗體，在該抗體的一個或多個HVR中具有一 個或多個改變，這導(dǎo)致該抗體對抗原的親合力與沒有這些改變的親本抗體相比有所提 高。優(yōu)選的親合力成熟的抗體將對靶標(biāo)抗原具有納摩爾或甚至皮摩爾的親合力。通過 本領(lǐng)域中已知的程序產(chǎn)生親合力成熟抗體。有關(guān)綜述，參見Hudson和Souriau,Nature Medicine9:129-134(2003) ；Hoogenboom,NatureBiotechnol. 23:1105-1116 (2005)； Quiroz 和 Sinclair, Revista Ingeneria Biomedia4:39-51(2010)。
[0102] "阻斷"抗體或"枯抗劑"抗體是抑制或降低它所結(jié)合的抗原的生物活性的抗體。優(yōu) 選的阻斷抗體或枯抗劑抗體基本上或完全抑制抗原的生物活性。
[0103] 如本文所使用的，"激動劑抗體"是模擬所關(guān)也的多膚的至少一種功能性活性的抗 體。
[0104] "結(jié)合親合力"一般是指分子（例如，抗體）的單一結(jié)合位點(diǎn)與其結(jié)合伴侶（例如， 抗原）之間非共價相互作用的總和的強(qiáng)度。除非另外說明，否則如本文所使用的，"結(jié)合親 合力"是指反映結(jié)合對成員（例如，抗體和抗原）之間1 :1相互作用的內(nèi)在結(jié)合親合力。分 子X對其伴侶Y的親合力一般可W通過解離常數(shù)（KD)來表示。可W通過本領(lǐng)域中已知的常 規(guī)方法來測量親合力，包括本文所述的那些方法。低親合力抗體通常與抗原緩慢結(jié)合并且 往往易于解離，而高親合力抗體通常與抗原更快速地結(jié)合并且往往保持結(jié)合更長時間。測 量結(jié)合親合力的多種方法在本領(lǐng)域中是已知的，并且出于本發(fā)明的目的，可W使用任何該 些方法。W下描述了具體的說明性實(shí)施方式。
[0105] 當(dāng)在本文中用于表示結(jié)合親合力時，"或者更好的"是指分子（例如，抗體）及其 結(jié)合伴侶之間更強(qiáng)的結(jié)合，并且它是由較小的Kd數(shù)值表示的。例如，對抗原的親合力為 6nM或者更好的"抗體，所述抗體對抗原的親合力<.6nM，即.59nM、. 58nM、. 57nM等，或者 小于.6nM的任何值。
[0106] 在一種實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的"Kd"或"Kd值"是通過使用所關(guān)也的抗體及其 抗原的F油形式進(jìn)行的放射性標(biāo)記的抗原結(jié)合測定巧IA)來測量的，如通過測量F油溶液 對抗原的結(jié)合親合力的W下測定所描述的，所述測定是在存在非標(biāo)記抗原的滴定系列的情 況下用最低濃度的嚴(yán) 51)-標(biāo)記抗原平衡Fab,然后用抗Fab抗體涂覆的板捕獲結(jié)合的抗原 來進(jìn)行的（Chen等人，（1999) J. Mol Biol 293:865-881)。根據(jù)另一種實(shí)施方式，Kd或Kd 值是通過使用（例如）BIAcore-2000 或TM BIAcore-3000 炬IAcore, Inc. ,Piscataway, NJ), 用表面等離子共振測定所測量的TM。
[0107] 根據(jù)本發(fā)明，還可W使用（例如）BIAcore-2000?或者BIAcore-3000?炬IAcore Inc.，Piscataway, NJ)，使用如上所述的相同的表面等離子共振技術(shù)來確定"on速率"或 "結(jié)合速率"或"kon"。
[010引如本文所使用的，短語"基本類似的"或者"基本相同的"表示兩個數(shù)值（一般一個 與本發(fā)明的抗體有關(guān)，而另一個與參比抗體有關(guān)）之間差異的足夠高的相似度，從而本領(lǐng) 域技術(shù)人員將認(rèn)為在通過所述值所測量的生物學(xué)特征的背景內(nèi)所述兩個數(shù)值之間的差異 幾乎沒有生物和/或統(tǒng)計顯著性。根據(jù)參比抗體的值，所述兩個值之間的差異優(yōu)選地小于 約50 %，優(yōu)選地小于約40 %，優(yōu)選地小于約30 %，優(yōu)選地小于約20 %，優(yōu)選地小于約10 %。
[0109] 如本文所使用的，短語"基本降低的"或者"基本不同的"表示兩個數(shù)值（一般一 個與本發(fā)明的抗體有關(guān)，而另一個與參比抗體有關(guān)）之間差異的足夠高的相似度，從而本 領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)為在通過所述值所測量的生物學(xué)特征（例如，Kd值、HAMA反應(yīng)）的背景 內(nèi)所述兩個值之間的差異具有統(tǒng)計顯著性。根據(jù)參比抗體的值，所述兩個值之間的差異優(yōu) 選地大于約10 %，優(yōu)選地大于約20 %，優(yōu)選地大于約30 %，優(yōu)選地大于約40 %，優(yōu)選地大于 約 50%。
[0110] "抑制表達(dá)CD98多膚的腫瘤細(xì)胞生長"的抗體或者"生長抑制性"抗體是導(dǎo)致表達(dá) 或過表達(dá)適當(dāng)?shù)腃D98多膚的癌細(xì)胞產(chǎn)生可測量的生長抑制的抗體。CD98多膚可W是在癌 細(xì)胞表面上表達(dá)的跨膜多膚，或者可W是由癌細(xì)胞產(chǎn)生和分泌的多膚。與適當(dāng)?shù)膶φ障啾龋?優(yōu)選的生長抑制性抗CD98抗體將表達(dá)CD98的腫瘤細(xì)胞的生長抑制超過20%，優(yōu)選地抑制 了約20%至約50%，并且甚至更優(yōu)選地，抑制了大于50% (例如，約50%至約100% )，所 述對照通常是未用待測試抗體處理的腫瘤細(xì)胞。在一種實(shí)施方式中，可W在細(xì)胞培養(yǎng)物中 W約0. 1至30g/ml或者約0. SnM至200nM的抗體濃度測量生長抑制，其中所述生長抑制是 在將腫瘤細(xì)胞暴露于所述抗體后的1-10天確定的?？蒞通過如下所述的多種方式確定腫 瘤細(xì)胞的體內(nèi)生長抑制。如果W約1 y g/kg至約lOOmg/kg體重施用抗CD98抗體會在從所 述抗體的首次施用起約5天至3個月，優(yōu)選地約5天至30天內(nèi)導(dǎo)致腫瘤大小或腫瘤細(xì)胞增 殖減少，則所述抗體是體內(nèi)生長抑制的。
[0111] "誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡"的抗體是誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡的抗體，如通過膜聯(lián)蛋白V結(jié)合、 DNA斷裂、細(xì)胞皺縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膨脹、細(xì)胞破碎和/或膜囊（稱為調(diào)亡體）形成所確定的。細(xì)胞 通常是過表達(dá)CD98多膚的細(xì)胞。優(yōu)選地，所述細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞。多種方法對評價與細(xì)胞調(diào) 亡有關(guān)的細(xì)胞事件是可用的。例如，可W通過膜聯(lián)蛋白結(jié)合測量磯脂醜絲氨酸（P巧易位； 可W通過DNA梯度法（laddering)評估DNA斷裂；并且可W通過亞二倍體細(xì)胞的任何增加 評價核/染色質(zhì)濃縮W及DNA斷裂。優(yōu)選地，誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡的抗體是在膜聯(lián)蛋白結(jié)合測定 中相對于未處理細(xì)胞引起約2至50倍、優(yōu)選地約5至50倍、最優(yōu)選地約10至50倍的膜聯(lián) 蛋白結(jié)合誘導(dǎo)的抗體。
[0112] "誘導(dǎo)細(xì)胞死亡"的抗體是導(dǎo)致活細(xì)胞死亡的抗體。所述細(xì)胞是特異表達(dá)或過表 達(dá)CD98多膚的細(xì)胞類型。所述細(xì)胞可W是癌性的或者是特定細(xì)胞類型的正常細(xì)胞。CD98 多膚可W是在癌細(xì)胞表面上表達(dá)的跨膜多膚，或者可W是由癌細(xì)胞產(chǎn)生和分泌的多膚?？?W在不存在補(bǔ)體和免疫效應(yīng)細(xì)胞的情況下確定細(xì)胞體外死亡W區(qū)分抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo) 的細(xì)胞毒性（ADCC)或補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性（CDC)誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。因此，可W使用熱 失活血清（即，在沒有補(bǔ)體的情況下）和在沒有免疫效應(yīng)細(xì)胞的情況下進(jìn)行細(xì)胞死亡測 定。為了確定抗體是否能夠誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，如通過楓化丙巧（PI)、臺盼藍(lán)（參見Moore等 人，切totechnology 17:1-11(1995))或7AAD的吸收所評價的，可W相對于未處理的細(xì)胞 評價膜完整性的損失。優(yōu)選的細(xì)胞死亡誘導(dǎo)的抗體是在BT474細(xì)胞中的PI吸收測定中誘 導(dǎo)PI吸收的那些。
[0113] 抗體"效應(yīng)子功能"是指那些可歸于抗體化區(qū)（天然序列化區(qū)或氨基酸序列變 體化區(qū)）的生物學(xué)活性，且其隨抗體同型而變化?？贵w效應(yīng)子功能的實(shí)例包括；Clq結(jié)合 和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性；Fc受體結(jié)合；抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC);吞瞻作用； 細(xì)胞表面受體（例如，B細(xì)胞受體）的下調(diào)；和B細(xì)胞活化。
[0114] 在本文中，術(shù)語"化區(qū)"用于定義免疫球蛋白重鏈的C末端區(qū)域，其包括天然序列 化區(qū)和變體化區(qū)。盡管免疫球蛋白重鏈的化區(qū)的邊界可W改變，但是人IgG重鏈化區(qū)通 常定義從位置切S226的氨基酸殘基或從pro230延伸至其駿基末端。例如，在抗體的生產(chǎn) 或純化期間或者通過重組工程設(shè)計編碼所述抗體重鏈的核酸，可W除去化區(qū)的C末端賴氨 酸（根據(jù)抓編號系統(tǒng)的殘基447)。因此，完整抗體的組成可W包括全部K447殘基除去的 抗體群體、無K447殘基除去的抗體群體和具有K447殘基除去和未除去的抗體混合物的抗 體群體。
[0115] "功能性化區(qū)"具有天然序列化區(qū)的"效應(yīng)子功能"。示例性"效應(yīng)子功能"包括 Clq結(jié)合；CDC ;化受體結(jié)合；ADCC ;吞瞻作用；細(xì)胞表面受體（例如，B細(xì)胞受體；BCR)下調(diào) 等。該些效應(yīng)子功能通常需要化區(qū)與結(jié)合域結(jié)合（例如，抗體可變結(jié)構(gòu)域）并且可W使用 如（例如）在本文中的定義中所公開的多種測定評價。
[0116] "天然序列化區(qū)"包含與自然界中存在的化區(qū)的氨基酸序列相同的氨基酸序列。 天然序列人化區(qū)包括天然序列人IgGl化區(qū)（非A和A同種異型）；天然序列人IgG2化區(qū)； 天然序列人IgG3化區(qū)；和天然序列人IgCM化區(qū)及其天然存在的變體。
[0117] "變體化區(qū)"包含由于至少一個氨基酸修飾，優(yōu)選地一個或多個氨基酸取代而不同 于天然序列化區(qū)的氨基酸序列。優(yōu)選地，與天然序列化區(qū)或與親本多膚的化區(qū)相比，變 體化區(qū)具有至少一個氨基酸取代，例如，在天然序列化區(qū)或在親本多膚的化區(qū)中約1至 約10個氨基酸取代，并且優(yōu)選地約1至約5個氨基酸取代。在本文中，變體化區(qū)將優(yōu)選地 與天然序列化區(qū)和/或與親本多膚的化區(qū)具有至少約80%的同源性，并且最優(yōu)選地與其 具有至少約90 %的同源性，更優(yōu)選地與其具有至少約95 %的同源性。
[0118] "抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性"或者"ADCC"是指一種細(xì)胞毒性形式，其中分 泌的Ig結(jié)合至在某些細(xì)胞毒性細(xì)胞（例如，自然殺傷（NK)細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和巨瞻細(xì)胞） 上存在的化受體（FcR)，從而使得該些細(xì)胞毒性效應(yīng)細(xì)胞與具有抗原的祀細(xì)胞特異性結(jié)合 并隨后通過細(xì)胞毒素殺死祀細(xì)胞。所述抗體"武裝"細(xì)胞毒性細(xì)胞，而且絕對是該類殺傷 所必需的。介導(dǎo)ADCC的主要細(xì)胞僅表達(dá)化Y RIII，而單核細(xì)胞表達(dá)化Y RI、化Y RII和 化 Y RIII。Ravetch 和 Kinet,Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991)中第 464 頁上的表 3 總 結(jié)了造血細(xì)胞上的FcR表達(dá)。為了評價所關(guān)也的分子的ADCC活性，可W進(jìn)行體外ADCC測 定，如美國專利No. 5500362或5821337中所述的。對于該些測定有用的效應(yīng)細(xì)胞包括周圍 血單核細(xì)胞（PBMC)和自然殺傷（NK)細(xì)胞。作為另外一種選擇或另外，可在體內(nèi)評價所關(guān) 也的分子的ADCC活性，例如，在動物模型中，如Clynes等人扣SA) 95:652-656 (1998)中所 公開的。
[0119] "化受體"或"FcR"描述了與抗體化區(qū)結(jié)合的受體。優(yōu)選的FcR是天然序列人 化R。此外，優(yōu)選的FcR是與IgG抗體結(jié)合的化R( Y受體），并且其包括化Y RI、化Y RII 和化YRIII亞類的受體，包括該些受體的等位變體和作為另外一種選擇，該些受體的 剪切形式?；痀RII受體包括化YRIIA("活化受體"）和化YRIIB ("抑制受體"）， 它們具有相似的氨基酸序列，區(qū)別主要在于其細(xì)胞質(zhì)域（參見綜述M. in Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-2:34(1997))。I^R 的綜述參見 Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492(1991) ;Capel 等人，Immunomethods4:25-；M(1994);和 de 化 as 等 人，J. L油.Cl in. Med. 126:330-41(1995)。術(shù)語"化R"在本文中涵蓋其他化R，包括未來將 會鑒別的化R。該術(shù)語還包括新生兒受體（化化），它負(fù)責(zé)將母體的IgG轉(zhuǎn)移給胎兒（Guyer 等人，J. Immunol. 117:587(1976)和 Kim 等人，J. Immunol. 24:249 (1994))。對化R 的結(jié)合 改善或減弱的抗體變體描述于，例如，W02000/42072和美國專利No. 7183387 ;7332581 ;和 7335742。還參見，例如，Shields 等人，J. Biol. Chem. 9(2) :6591-6604(2001)。
[0120] "補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性"或"CDC"是指在存在補(bǔ)體的情況下祀細(xì)胞的溶胞。經(jīng)典 補(bǔ)體途徑的激活是由補(bǔ)體系統(tǒng)第一組分（Clq)的結(jié)合與其同族抗原結(jié)合的（適當(dāng)子類的） 抗體起始的。為了評價補(bǔ)體激活，可W進(jìn)行CDC測定，例如，Gazzano-Santoro等人，J. Immunol. Methods 202:163(1996)所述的。具有改變的化區(qū)氨基酸序列的多膚變體（具有 變體化區(qū)的多膚）和Clq結(jié)合能力的提高或降低描述于，例如，美國專利No. 6194551 Bl 和 W01999/51642,還參見，例如，Idusogie 等人，J. Immunol. 164:4178-4184(2000)。
[012。 CD98多膚的"胞外域"或"ECD"是指基本不含跨膜和細(xì)胞質(zhì)域的CD98多膚的形 式。通常，CD98多膚ECD將具有小于1 %的該些跨膜和/或細(xì)胞質(zhì)域，并且優(yōu)選地，將具有小 于0.5 %的該些域。CD98的跨膜域包含氨基酸殘基76-103 (Parmacek等人，Nucleic Acids Res. 17:1915-1931，1989)?？缒び虻拇_切邊界可W改變，但是如初始鑒別的，在所述域的任 一端很可能改變不超過約5個氨基酸。因此，任選地，CD98多膚的胞外域可W包含CD98序 列從約98-108至529的氨基酸，如在Parmacek等人，同上中所公開的。
[0122] 將相對于參考多膚序列的"氨基酸序列同一性百分比（％)"定義為在序列比對并 且（必要時）引入空隙后W達(dá)到最大百分比序列同一性，但是不認(rèn)為任何保守取代是序列 同一性的部分之后，與參考多膚序列中氨基酸殘基相同的候選序列中的氨基酸殘基的百分 比?？蒞使用本領(lǐng)域技術(shù)內(nèi)的多種方式來實(shí)現(xiàn)用于確定氨基酸序列百分比同一性的比對， 例如，使用公開可用的計算機(jī)軟件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megali即值NASTAR)軟件。 本領(lǐng)域技術(shù)人員可W確定用于序列比對的適當(dāng)參數(shù)，其包括對要比較的序列全長實(shí)現(xiàn)最大 比對所需的任何算法。
[0123] 如本文所使用的，氨基酸殘基/位置的"修飾"是指與起始氨基酸序列相比，主要 氨基酸序列的變化，其中所述變化是由涉及所述氨基酸殘基/位置的序列變化所產(chǎn)生的。 例如，典型的修飾包括用另一個氨基酸置換殘基（例如，保守或非保守置換），鄰近于所述 殘基/位置的一個或多個（通常少于5個或3個）氨基酸的插入，和所述殘基/位置的缺 失。
[0124] "表位"是單一抗體分子結(jié)合的抗原分子表面上的位點(diǎn)。通常，抗原具有幾個或多 個不同的表位并且與多種不同的抗體反應(yīng)。術(shù)語具體地包括線性表位和構(gòu)象表位。
[0125] 當(dāng)兩個抗體識別相同或空間重疊的表位時，抗體結(jié)合與參比抗體"基本相同的表 位"。確定兩個表位是否結(jié)合至相同或空間重疊的表位的最廣泛使用并且快速的方法是競 爭性測定，其可W使用標(biāo)記抗原或標(biāo)記抗體W多個不同形式配置。通常，將抗原固定在96 孔板上，并使用放射性或酶標(biāo)記測量未標(biāo)記抗體阻止標(biāo)記抗體結(jié)合的能力。
[0126] "表位定位"是鑒別抗體對它們的祀標(biāo)抗原的結(jié)合位點(diǎn)或表位的方法?？贵w表位可 W是線性表位或構(gòu)象表位。線性表位是由蛋白質(zhì)中氨基酸的連續(xù)序列形成的。構(gòu)象表位是 由蛋白質(zhì)序列中間斷的氨基酸形成的，但是當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)折疊成其立體結(jié)構(gòu)時匯合在一起。
[0127] 如本文所定義的，"表位框并（epitope binning)"是基于它們所識別的表位對抗 體分組的方法。更具體地，表位框并包括區(qū)分不同抗體的表位識別性質(zhì)的方法和系統(tǒng)，并且 結(jié)合了基于它們的表位識別性質(zhì)對抗體聚類和鑒別具有不同結(jié)合特異性的抗體的計算過 程。
[012引"病癥"是將受益于使用本發(fā)明的物質(zhì)/分子或方法的治療的任何病況或疾病。該 包括慢性和急性病癥，其包括使哺乳動物對所討論的病癥易感染的那些病理學(xué)的條件。在 本文中，待治療的病癥的非限制性實(shí)例包括癌性病況，如膀脫癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、 胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、腎癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或肉瘤、黑素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、 淋己瘤或白血病，和該些癌癥的轉(zhuǎn)移癌。
[0129] 術(shù)語"細(xì)胞增殖性病癥"和"增殖性病癥"是指與一定程度的異常細(xì)胞增殖有關(guān)的 病癥。在一種實(shí)施方式中，所述細(xì)胞增殖性病癥是癌癥。
[0130] 如本文所使用的，"腫瘤"是指所有新生細(xì)胞的生長和增殖，無論是惡性或良性的， 并且是指所有的癌前細(xì)胞和癌細(xì)胞及組織。如本文中所提及的，術(shù)語"癌癥"、"癌性的"、"細(xì) 胞增殖性病癥"、"增殖性病癥"和"腫瘤"不是互相排斥的。
[0131] 術(shù)語"癌癥"和"癌性的"表示或說明哺乳動物W無限制細(xì)胞生長為特征的生理情 況。癌癥的實(shí)例包括（但不限于）癌、淋己瘤、胚細(xì)胞瘤、肉瘤和白血病或淋己惡性腫瘤。該 些癌癥更具體的實(shí)例包括鱗狀細(xì)胞癌（例如，上皮細(xì)胞鱗狀細(xì)胞癌）、肺癌，包括小細(xì)胞肺 癌、非小細(xì)胞肺癌、肺腺癌和肺鱗狀癌、腹膜癌、肝細(xì)胞癌、胃癌，包括胃腸癌、膜癌、成膠質(zhì) 細(xì)胞瘤、宮頸癌、卵巢癌、口腔癌、肝癌、膀脫癌、尿道癌、肝癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、結(jié)腸 直腸癌、子宮內(nèi)膜或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、化口癌、陰 莖癌、黑素瘤、多發(fā)性骨髓瘤和B細(xì)胞淋己瘤、腦癌和頭頸癌W及相關(guān)轉(zhuǎn)移癌。
[0132] "表達(dá)CD98的細(xì)胞"是在細(xì)胞表面表達(dá)內(nèi)源或轉(zhuǎn)染的CD98的細(xì)胞。"表達(dá)CD98的 癌癥"是具有在細(xì)胞表面上存在的CD98蛋白的細(xì)胞的癌癥。"表達(dá)CD98的癌癥"在其細(xì)胞 表面上產(chǎn)生足夠水平的CD98,從而使得抗CD98抗體可W與之結(jié)合并對癌癥具有治療效果。 "過表達(dá)"CD98的癌癥是與相同組織類型的非癌性細(xì)胞相比，在其細(xì)胞表面上具有顯著更高 水平的CD98的癌癥。該些過表達(dá)可W由基因擴(kuò)增或者由提高的轉(zhuǎn)錄或翻譯引起?？蒞通過 評價細(xì)胞表面上存在的CD98蛋白水平的提高（例如，通過免疫組織化學(xué)測定；FACS分析）， 在診斷或預(yù)后測定中確定CD98的過表達(dá)。作為另外一種選擇或者另外，可W測量細(xì)胞中 CD98編碼核酸或mRM的水平，例如，通過英光原位雜交；的甜；參見1998年10月公開的 WO 98/45479)、DNA印跡、RNA印跡或聚合酶鏈反應(yīng)（PCR)技術(shù)，如實(shí)時定量PCR(RT-PCR)。 除了上述測定W外，對于熟練的醫(yī)師來說，多種體內(nèi)測定是可用的。例如，可W將患者體內(nèi) 的細(xì)胞暴露于任選地用可檢測標(biāo)記物（例如，放射性同位素）標(biāo)記的抗體，并且可W通過 (例如）對放射性的外部掃描或者通過分析從先前暴露于所述抗體的患者采集的活組織檢 查來評價患者中抗體與細(xì)胞的結(jié)合。表達(dá)CD98的癌癥包括（但不限于）膀脫癌、乳腺癌、 結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、腎癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑 素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋己瘤或白血病，或者任何該些癌癥的轉(zhuǎn)移癌。
[0133] 如本文所使用的，"治療"（及其語法變體）是指在嘗試改變待治療的個體或細(xì)胞 的天然進(jìn)程中的臨床介入，并且可W為了預(yù)防或在臨床病理學(xué)進(jìn)程中進(jìn)行。所希望的治療 效果包括防止疾病發(fā)生或復(fù)發(fā)，緩和癥狀，消除疾病的任何直接或間接病理學(xué)后果，就癌癥 來說預(yù)防轉(zhuǎn)移，減少疾病進(jìn)展速率，改善或減輕疾病狀態(tài)和癥狀緩解或改善預(yù)后。在一些實(shí) 施方案中，本發(fā)明的抗體用于延遲疾病的發(fā)生或延緩疾病的進(jìn)展。
[0134] 通過醫(yī)師所熟悉的常規(guī)程序，用于評價成功治療和疾病改善的上述參數(shù)是可容易 測量的。對于癌癥療法，可W通過（例如）評價疾病進(jìn)展時間OT巧和/或通過確定應(yīng)答率 (RR)測量效力。用于測量效力的其他終點(diǎn)包括，例如，整體存活率（0巧、無病存活率值FS) 和無再發(fā)?。ɑ驘o復(fù)發(fā)）存活率（RF巧?？蒞通過分期測試確定癌轉(zhuǎn)移，并通過骨掃描和 巧水平W及其他酶的測試確定骨轉(zhuǎn)移。還可W進(jìn)行CT掃描W查找在該區(qū)域中的骨盆轉(zhuǎn)移 和淋己結(jié)轉(zhuǎn)移。胸部X射線和通過已知方法的肝臟酶水平的測量分別用于查找肺和肝的轉(zhuǎn) 移。用于監(jiān)測疾病的其他常規(guī)方法包括經(jīng)直腸超聲波掃描（TRU巧和經(jīng)直腸針穿刺活檢術(shù) (TRNB)。
[0135] "個體"是脊椎動物。在某些實(shí)施方式中，所述脊椎動物為哺乳動物。哺乳動物包 括（但不限于）農(nóng)畜（如，牛）、運(yùn)動動物、寵物（如貓、狗和馬）、靈長類、小鼠和大鼠。在 某些實(shí)施方式中，所述哺乳動物是人。
[0136] "有效量"是指W所需劑量和時間段對于實(shí)現(xiàn)所需治療或預(yù)防結(jié)果有效的量。本發(fā) 明的物質(zhì)/分子的"治療有效量"可W根據(jù)W下因素改變，如個體的疾病狀況、年齡、性別和 體重，W及所述物質(zhì)/分子在所述個體中引起所需反應(yīng)的能力。治療有效量包括其中與治 療有益作用相比，所述物質(zhì)/分子的任何毒性或不利作用是微不足道的量。"預(yù)防有效量" 是指W所需劑量和時間段對于實(shí)現(xiàn)所需預(yù)防結(jié)果有效的量。通常，但是不必需的，由于在疾 病之前或疾病早期在受試者中使用預(yù)防劑量，因此預(yù)防有效量將小于治療有效量。就癌癥 來說，藥物的治療有效量可W (例如）減少癌細(xì)胞數(shù)量；減小腫瘤大??；抑制（即，減慢到 一定程度并優(yōu)選地停止）癌細(xì)胞浸潤到周圍器官中；抑制（即，減慢到一定程度并優(yōu)選地停 止）腫瘤轉(zhuǎn)移；在一定程度抑制腫瘤生長；和/或在一定程度上緩解一種或多種與癌癥相 關(guān)的癥狀。參見W上"治療"的定義。到藥物可W防止生長和/或殺死現(xiàn)有的癌細(xì)胞的程 度，它可W是抑制細(xì)胞的和/或細(xì)胞毒性的。
[0137] "長期"施用是指W與急性形式相反的連續(xù)模式施用試劑，從而將初始治療效果 (活性）維持延長的一段時間。"間歇"施用是并非沒有中斷地連續(xù)進(jìn)行的治療，但是在本 質(zhì)上它是循環(huán)的。
[013引與一種或多種其他治療劑"結(jié)合"施用包括W任何順序同時（并行）和連續(xù)施用。
[0139] 如本文所使用的"載體"包括對W所使用的劑量和濃度暴露的細(xì)胞或哺乳動物無 毒的可藥用載體、賦形劑或穩(wěn)定劑。通常，生理學(xué)可用的載體是抑緩沖水溶液。生理學(xué)可 用的載體的實(shí)例包括緩沖液，如磯酸鹽、巧樣酸鹽及其他有機(jī)酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸； 低分子量（小于約10個殘基）多膚；蛋白質(zhì)，如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合 物，如聚己帰化咯焼麗；氨基酸，如甘氨酸、谷氨醜胺、天冬醜胺、精氨酸或賴氨酸；單糖、二 糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；馨合劑，如EDTA ;糖醇，如甘露糖醇或山 梨糖醇；成鹽抗衡離子，如軸；和/或非離子型表面活性劑，如TWEEN?、聚己二醇（PEG)和 化URONICS?。
[0140] 術(shù)語"藥物制劑"是指處于使活性成分的生物活性有效的形式并且不包含對所述 制劑將施用至的受試者具有不可接受的毒性的其他組分的制劑。該些制劑可W是無菌的。
[0141] "無菌"制劑是無菌的，其不含所有活的微生物W及它們的抱子。如本文所公開的， 抗體的"有效量"是足夠進(jìn)行具體說明的目的的量。相對于所說明的目的，可W經(jīng)驗(yàn)性地并 W常規(guī)方式確定"有效量"。
[0142] 術(shù)語"治療有效量"是指對"治療"受試者或哺乳動物中的疾病或病癥有效的抗體 或其他藥物的量。就癌癥來說，藥物的治療有效量可W減少癌細(xì)胞數(shù)量；減小腫瘤大??；抑 制（即，減慢到一定程度并優(yōu)選地停止）癌細(xì)胞浸潤到周圍器官中；抑制（即，減慢到一定 程度并優(yōu)選地停止）腫瘤轉(zhuǎn)移；在一定程度抑制腫瘤生長；和/或在一定程度上緩解一種 或多種與癌癥相關(guān)的癥狀。參見本文中"治療"的定義。到藥物可W防止生長和/或殺死 現(xiàn)有的癌細(xì)胞的程度，它可W是抑制細(xì)胞的和/或細(xì)胞毒性的。"預(yù)防有效量"是指W所需 劑量和時間段對于實(shí)現(xiàn)所需預(yù)防結(jié)果有效的量。通常，但是不必需的，由于在疾病之前或疾 病早期在受試者中使用預(yù)防劑量，因此預(yù)防有效量將小于治療有效量。
[0143] 如本文所使用的術(shù)語"細(xì)胞毒素試劑"是指抑制或放置細(xì)胞功能和/或?qū)е录?xì)胞 破壞的物質(zhì)。術(shù)語旨在包括放射性同位素（例如，At2ii、I"i、li25、YW、Rei 86、Rei88、Smi53、Bi2i2、 P 32和Lu的放射性同位素）、化療劑，例如甲氨蝶嶺、阿霉素、長春花生物堿（長春新堿、長春 堿、依巧泊巧）、多柔比星、美法侖、絲裂霉素C、苯下酸氮芥、柔紅霉素或其他插入劑、酶及 其片段，如核酸酵素酶、抗生素和毒素，如小分子毒素或細(xì)菌、真菌、植物或動物來源的酶活 性毒素，包括其片段和/或變體，和W下所公開的多種抗腫瘤或抗癌劑。W下描述了其他細(xì) 胞毒性試劑。殺腫瘤試劑導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的破壞。
[0144] "毒素"是能夠?qū)?xì)胞的生長或增殖具有不利影響的任何物質(zhì)。
[0145] "化療劑"是不考慮作用機(jī)理，在癌癥治療中有用的化合物?；焺┌ㄔ?祀向 療法"和常規(guī)化療中使用的化合物?；焺┑膶?shí)例包括（但不限于）焼基化試劑，如塞替 脈和CYTOXAN環(huán)磯醜胺；焼基賴酸醋，如白消安、英丙舒凡和脈泊舒凡；嚇丙巧類，如苯佐 替派、卡波釀、美妥替脈和烏瑞替脈；己撐亞胺類和甲基蜜胺類，包括六甲蜜胺、曲他胺、H 亞己基磯醜胺、H己帰硫代磯酸胺和H輕甲蜜胺；多聚己醜類（具體地，布拉他辛和布拉 他辛麗）；A-9-四氨大麻酷（屈大麻酷、AR1N0L);目-拉帕釀；拉帕醇；秋水仙堿；禪木 酸；喜樹堿（包括合成的類似物巧泊替康（HYCAMTIN)、CPT-Il (伊立替康、CAMPT0SAR)、 己醜喜樹堿、scopolectintin和9-氨基喜樹堿）、苔薛抑素；callystatin ;CC-1065 (包 括其阿多來新、卡折來新和比折來新合成類似物）；鬼白毒素；鬼白酸；替尼泊巧；隱藻素 類（具體地，隱藻素1和隱藻素8);多拉司他汀；倍癌霉素（包括合成類似物、KW-2189和 CB1-TM1);艾惱素；pancratistatin ;甸枝珊瑚醇；海綿素；氮芥，如苯下酸氮芥、蔡氮芥、膽 磯醜胺、雌莫司汀、異環(huán)磯醜胺、氮芥、鹽酸氧氮芥、美法侖、新氮芥、苯芥膽留醇、潑尼莫司 汀、曲磯胺、尿嚼巧氮芥；亞硝基脈類，如卡莫司汀、氯脈菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司 汀和雷莫司?。豢股?，如帰二快類抗生素（例如，加利車霉素，具體地，加利車霉素YlI 和加利車霉素《11(參見，例如，Angew, Chem. Intl. Ed. Engl. 33:183-186(1994));帰二快 意環(huán)霉素類抗生素（dynemicin)，包括帰二快意環(huán)霉素類抗生素A ;埃斯波霉素；W及新制 癌菌素生色團(tuán)和相關(guān)色素蛋白帰二快類抗生素生色團(tuán)）、阿克拉霉素、放線菌素、意霉素、 偶氮絲氨酸、博來霉素、放線菌素C、carabicin、洋紅霉素、嗜癌霉素、色霉素、放線菌素D、 柔紅霉素、地巧比星、6-重氮-5-氧代-k正亮氨酸、ADRIAMYCIN、多柔比星（包括嗎晰 代-多柔比星、氯基嗎晰代-多柔比星、2-化咯晰-多柔比星和脫氧多柔比星）、表柔比 星、依索比星、伊達(dá)比星、馬塞羅霉素、絲裂霉素類，如絲裂霉素C、麥考酷酸、諾拉霉素、橄 攬霉素、培洛霉素、紫菜霉素、嘿嶺霉素、H鐵阿霉素、羅多比星、鏈黑霉素、鏈佐星、殺結(jié)核 菌素、烏苯美司、凈司他了、佐柔比星；抗代謝產(chǎn)物，如甲氨蝶嶺和5-氣尿嚼巧巧-即）；葉 酸類似物，如二甲葉酸、甲氨噪嶺、噪羅嶺、H甲曲沙；嘿嶺類似物，如氣達(dá)拉濱、6-琉嘿嶺、 硫咪嘿嶺、硫鳥嘿嶺；嚼巧類似物，如安西他濱、阿扎胞巧、6-氮尿巧、卡莫?dú)狻⑻前?、雙 脫氧尿巧、去氧氣尿巧、依諾他濱、氣尿巧；雄激素類，如卡魯睪麗、丙酸屈他雄麗、環(huán)硫雄 醇、美雄焼、睪內(nèi)醋；抗腎上腺藥，如氨魯米特、米巧坦、曲洛司坦；葉酸補(bǔ)償劑，如亞葉酸； 醋葡酵內(nèi)醋；輕酵磯醜胺糖巧；氨基-Y-麗戊酸；恩尿嚼巧；安嚇巧；bestr油UCil ;比生 群；依達(dá)曲沙；defofamine ;秋水仙胺；地嚇釀；elfornithine ;依利醋饋；埃坡霉素；依巧 格魯；硝酸嫁；輕基脈；香茹多糖；氯尼達(dá)明；美登木素生物堿類，如美登素和安絲菌素；米 巧脈蹤；米巧意釀；莫脈達(dá)醇；尼曲嚇巧；噴司他下；異丙嗦；化柔比星；洛索意釀；2-己基 醜脫；丙卡己脫；PSK多糖復(fù)合物（J服化化ral Pro化Cts,化gene,化eg.);雷佐生；利索 新；西佐喃；錯螺胺；細(xì)交鏈抱菌麗酸；H亞胺釀；2, 2'，2" - H氯H己胺；單端抱霉帰族 化合物（具體地，T-2毒素、verra州rin A、桿抱菌素A和蛇形菌素）；烏拉坦；長春地辛 (化DISINE⑩、巧LD巨SIN⑥）；達(dá)卡己嗦；甘露莫司??；二漠甘露醇；二漠衛(wèi)矛醇；脈泊 漠焼；gacytosine ;阿糖胞巧（"Ara-c");塞替脈；紫杉焼類化合物，例如，TAXOL唆紫 杉醇炬ristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.)、ABRAXANE? 不含克列莫佛的紫 杉醇白蛋白工程納米顆粒制劑（American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, 111.) 和 TAXOTERE 多西他塞（Mione-Poulenc Rorer, Antony, Rrance);苯了酸氮芥；吉西 他濱（GEMZAR駁）；6-硫鳥嘿嶺；琉嘿嶺；甲氨噪嶺；笛類似物，如順笛和卡笛； 長春堿（VELBAN夠）；笛；依巧泊巧（VP-16);異環(huán)磯醜胺；米巧意釀；長春新堿 (ONCOVIN飯）；奧沙利鑰；Ieucovorin ;長春瑞濱（NAV化朗NE⑥）；諾安巧；依 達(dá)曲沙；道諾霉素；氨基噪嶺；伊班麟酸鹽；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑RFS 2000 ;二氣甲基鳥氨 酸（DMFO);類視黃酸類，如視黃酸；卡培他濱（XELODA敬）；任何上述試劑的可藥用 鹽、酸或衍生物；W及兩種或多種上述試劑的組合，如CHOP,即環(huán)磯醜胺、多柔比星、長春新 堿、和潑尼松龍的組合療法的縮寫；和F0LF0X，即關(guān)于與5-即和亞葉酸組合的奧沙利笛 巧L0XATIN?)的治療方案的縮寫。其他化療劑包括作為抗體藥物結(jié)合物有用的細(xì)胞毒性試 齊U，如美登木素生物堿（例如，DMl和DM4)和auristatin (例如，MMAE和MMAF)。
[0146] 在"化療劑"的定義中還包括；（i)調(diào)節(jié)或抑制激素對腫瘤的作用的抗激素 試劑，如抗雌激素和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑（SERM)，其包括，例如，他莫昔芬（包括 NOLVADEX?;巧樣酸它莫西芬）、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-輕基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷 洛昔芬化eoxifene)、LY117018、奧那司麗和FARESTON屯'(巧樣酸巧瑞米芬）；（ii) 抑制酶芳香酶的芳香酶抑制劑，它調(diào)節(jié)腎上腺中雌激素的產(chǎn)生，如，例如，4巧)-咪哇、氨 魯米特、MEGA沈⑧（甲地孕麗）、AROMASIN巧（依西美坦；州zer)、福美司坦、法 個哇、民IVTSOR狼（伏氯哇）、FEMA民A飯（來曲哇；Novartis)和A民IMIDEX飯 (阿那曲哇；AstraZeneca) ; (iii)抗雄激素，如氣他胺、尼魯米特、比卡魯胺、亮脯利特 和戈舍瑞林；W及曲沙他濱（1,3-二氧戊環(huán)核巧胞嚼巧類似物）；（iv)蛋白激酶抑制 齊U，如ME抑制劑（WO 2007/044515) ; (V)脂質(zhì)激酶抑制劑；(Vi)反義寡核巧酸，具體地 抑制與異常細(xì)胞增殖有關(guān)的信號通路中基因表達(dá)的那些，例如，PKC-Q、Raf和H-Ras, 如奧利默森（GENASENSE⑩，Genta Inc.); (Vii)核糖酶，如VEGF表達(dá)抑制劑（例 女口，ANGIOZYM巨? )和肥R2表達(dá)抑制齊U; (ViU)疫化如基因療法疫化例如， ALLOVECTINC島、LEUVECTIN⑩和VAXlD⑩；P民OLEUKIN⑩ r化-2 ;拓?fù)洚悩?gòu) 酶1抑制劑，如LURTOTECAN⑩；ABA艮EUX狼rmRH ; (ix)抗血管原試劑，如貝伐單 抗（AVASTIN夠，Genentech);和任何上述試劑的可藥用的鹽、酸和衍生物。
[0147] 如在本發(fā)明申請中所使用的，術(shù)語"前藥"是指與藥物的母體化合物相比對細(xì) 胞的細(xì)胞毒素可W是較低的并且能夠通過酶解或水解激活或轉(zhuǎn)化為活性更強(qiáng)的母體形 式的本發(fā)明的化合物的前體或衍生形式。參見，例如，Wilman, "Pro化Ugs in Cancer Chemotherapy^'"Biochemical Society Transactions, 14,第 375-382 頁，615th Meeting Belfast(1986)和 Stella 等人，"Pro化ugs:A Qiemical Approach to Targeted Drug Delivery, "Directed Drug Deliveiy, Borchar化等人（主編），第 247-267 頁，Humana Press(1985)。本發(fā)明的前藥包括（但不限于）含有磯酸鹽的前藥、含有硫代磯酸鹽的前藥、 含有硫酸鹽的前藥、含有膚的前藥、D-氨基酸修飾的前藥、糖基化前藥、含有目-內(nèi)醜胺的 前藥、含有任選地取代的苯氧己醜胺的前藥、含有任選地取代的苯己醜胺的前藥、5-氣胞嚼 巧和其他5-氣脈嚼巧前藥，該些前藥可W轉(zhuǎn)化成活性更強(qiáng)的無細(xì)胞毒性藥物。可W衍生化 成用于在本發(fā)明中使用的前藥形式的細(xì)胞毒性藥物的實(shí)例包括但不限于本發(fā)明的化合物 和如上所述的化療劑。
[014引在本文中，將"小分子"定義為具有小于約500道爾頓的分子量。
[0149] "分離的核酸"是基本上與天然地伴隨天然序列的其他基因組DNA序列W及蛋白質(zhì) 或復(fù)合物，如核糖體和聚合酶分離的核酸，例如，RNA、DNA或混合聚合物。該術(shù)語涵蓋了已 從其天然存在的環(huán)境中除去的核酸序列，并且包括重組或克隆的DNA分離物和化學(xué)合成的 類似物或通過異源系統(tǒng)生物合成的類似物。基本純的分子包括所述分子的分離形式。
[0150] 如在本文中可互換使用的"多核巧酸"或"核酸"是指任何長度的核巧酸聚合物并 且包括DNA和RNA。所述核巧酸可W是脫氧核糖核巧酸、核糖核巧酸、修飾的核巧酸或堿基 和/或它們的類似物，或者可W通過DNA或RNA聚合酶或者通過合成反應(yīng)引入到聚合物中 的任何基質(zhì)。多核巧酸可W包括修飾的核巧酸，如甲基化核巧酸和它們的類似物。如本文 所使用的，"寡核巧酸"一般是指短的，通常單鏈的，通常是合成多核巧酸，所述合成多核巧 酸的長度通常（但不必需）小于約200個核巧酸。術(shù)語"寡核巧酸"和"多核巧酸"是不互 相排斥的。W上對多核巧酸的描述同樣并且充分適用于寡核巧酸。
[015。 產(chǎn)生本發(fā)明的抗CD98抗體的細(xì)胞將包括親本雜交瘤細(xì)胞，例如，提交至ATCC的雜 交瘤，W及已引入編碼抗體的核酸的細(xì)菌和真核宿主細(xì)胞。W下公開了適合的宿主細(xì)胞。
[0152] 術(shù)語"包裝說明書"用于表示習(xí)慣上包括在治療產(chǎn)物的商業(yè)包裝中的說明書，其包 含了有關(guān)該些治療產(chǎn)物的使用的適應(yīng)癥、用法、劑量、施用、禁忌征和/或警告的信息。
[0153] 組合物和制備所述組合物的方法
[0154] 提供了結(jié)合至CD98的抗體。提供了包含抗CD98抗體的免疫結(jié)合物。本發(fā)明的抗 體和免疫結(jié)合物對于（例如）與CD98表達(dá)改變，例如，表達(dá)升高有關(guān)的病癥的診斷或治療 有用。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體或免疫結(jié)合物對于細(xì)胞增殖病癥，如癌癥的診斷或 治療有用。
[0155] 抗 CD98 抗體
[0156] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了可W在本文中作為治療劑使用的抗CD98抗體。 示例性抗體包括多克隆抗體、單克隆抗體、人源化抗體、人抗體、雙重特異性抗體和異源結(jié) 合物抗體W及具有改善的親合力或其他性質(zhì)的它們的變體。 。巧7] 1.《克險杭體
[015引本發(fā)明所述的抗體可W包括多克隆抗體。制備多克隆抗體的方法是技術(shù)人員已知 的?？蒞 (例如）通過免疫劑和（如果需要）佐劑的一次或多次注射，在哺乳動物中產(chǎn)生多 克隆抗體。通常，將通過多次皮下或腹膜內(nèi)注射在哺乳動物中注射免疫劑和/或佐劑。所 述免疫劑可W包括CD98多膚或其融合蛋白。將免疫劑結(jié)合至在要免疫的哺乳動物中已知 是免疫原的蛋白可W是有用的。該些免疫原蛋白的實(shí)例包括（但不限于）鑰孔血藍(lán)素、血 清白蛋白、牛甲狀球蛋白和大豆膜蛋白酶抑制劑?？蒞使用的佐劑的實(shí)例包括弗氏不完全 佐劑和MPkTDM佐劑（單磯醜醋A、合成海藻糖二桿菌分枝菌酸醋）。本領(lǐng)域技術(shù)人員無需 過度實(shí)驗(yàn)就可W選擇免疫規(guī)程。然后，可W將哺乳動物放血，并測定血清的CD98抗體滴度。 如果需要，可W促進(jìn)哺乳動物直至抗體滴度升高或達(dá)到平穩(wěn)。 。15引 2.單克險杭體
[0160] 作為另外一種選擇，本發(fā)明所述的抗體可W是單克隆抗體?？蒞使用Kohler等 人，化化re, 256:495(1975)首先描述的雜交瘤方法制備單克隆抗體，或者可W通過重組 DNA方法（參見，例如，美國專利No. 4816567)制備。
[0161] 在雜交瘤方法中，如上所述對小鼠或其他適合的宿主動物，如倉鼠進(jìn)行免疫W 引起淋己細(xì)胞，所述淋己細(xì)胞產(chǎn)生或能夠產(chǎn)生將特異性結(jié)合至用于免疫的所述蛋白的抗 體。作為另外一種選擇，淋己細(xì)胞可W體外免疫。免疫后，分離淋己細(xì)胞，然后使用適合 的融合試劑，如聚己二醇，與骨髓瘤細(xì)胞系融合W形成雜交瘤細(xì)胞(GodinR. Monoclonal Antibodies:Principles and Practice.第 59_103 頁（Academic Press, 1986))〇
[0162] 將因此所制備的雜交瘤細(xì)胞接種并在適合的培養(yǎng)基中生長，所述培養(yǎng)基優(yōu)選地含 有抑制未融合的親本骨髓瘤細(xì)胞的生長或存活的一種或多種物質(zhì)（也稱為融合伴侶）。例 女口，如果親本骨髓瘤細(xì)胞缺少酶次黃嘿嶺鳥嘿嶺轉(zhuǎn)磯酸核糖基酶（HGPRT或HPRT)，則用于 雜交瘤的選擇性培養(yǎng)基通常將包含次黃嘿嶺、氨基蝶嶺和胸巧（HAT培養(yǎng)基），所述物質(zhì)阻 止HGPRT缺陷型細(xì)胞的生長。
[0163] 優(yōu)選的融合伴侶骨髓瘤細(xì)胞是有效地融合，支持所選抗體產(chǎn)生細(xì)胞穩(wěn)定地高 水平產(chǎn)生抗體并且對選擇抵抗未融合親本細(xì)胞的選擇培養(yǎng)基敏感的那些。優(yōu)選的骨髓 瘤細(xì)胞系是鼠骨髓瘤系，如來源于從Sa化Institute Cell Distribution Center, San Diego, California USA可得的MOPC-21和MPC-Il小鼠腫瘤的那些，和SP-2和衍生物，例 女口，從美國模式培養(yǎng)物保藏所（Manassas, Virginia, USA)可得的X63-A妍-653細(xì)胞。還 已描述了用于人單克隆抗體產(chǎn)生的人骨髓瘤和小鼠-人異源骨髓瘤細(xì)胞系化〇zbor，J. Immunol. ,133:3001(1984);和 Brodeur 等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,第 51-63 頁（Marcel Dekker, Inc. , New York, 1987))。
[0164] 對雜交瘤細(xì)胞在其中生長的培養(yǎng)基測定了針對所述抗原的單克隆抗體的產(chǎn)生。優(yōu) 選地，通過免疫沉淀或體外結(jié)合測定，如放射免疫測定巧IA)或酶聯(lián)免疫吸附測定巧LISA) 確定了通過雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的單克隆抗體的結(jié)合特異性?？蒞 (例如）通過Munson等 人，Anal. Biochem. , 107:220 (1980)描述的斯卡查德分析確定單克隆抗體的結(jié)合親合力。
[0165] 一旦鑒別出產(chǎn)生具有所期望的特異性、親合力和/或活性的抗體的雜交瘤細(xì)胞 后，可W通過有限稀釋程序?qū)⒃摽寺喛寺〔⑼ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)方法培養(yǎng)(GodinR. Monoclonal AntibodiesiPrinciples and Practice.第 59_103 頁（Academic Press, 1986)) 〇 出于此 目的，適合的培養(yǎng)基包括（例如）D-MEM或RPMI-1640培養(yǎng)基。另外，可W在動物中作為腹 水腫瘤體內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞，例如，通過將細(xì)胞i.P.注射至小鼠。
[0166] 通過常規(guī)抗體純化程序?qū)喛寺》置诘膯慰寺】贵w與培養(yǎng)基、腹水液或血清適當(dāng) 地分離，所述純化程序如（例如）親和色譜法（例如，使用蛋白A或蛋白G-Se地arose)或 離子交換色譜法、輕基磯灰石色譜法、凝膠電泳、透析等。
[0167] 使用常規(guī)程序（例如，通過使用能夠特異性結(jié)合至編碼鼠抗體重鏈和輕鏈基因的 寡核巧酸探針）將編碼單克隆抗體的DNA容易地分離并測序。雜交瘤細(xì)胞用作該DNA優(yōu) 選的來源。一旦分離，可W將DNA置于表達(dá)載體中，然后將所述載體轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞中，女口 大腸桿菌巧.COli)細(xì)胞、猿COS細(xì)胞、中國倉鼠卵巢（CHO)細(xì)胞或不產(chǎn)生抗體蛋白的骨髓 瘤細(xì)胞，從而在重組宿主細(xì)胞中獲得單克隆抗體的合成。有關(guān)編碼所述抗體的DNA的細(xì)菌 中重組表達(dá)的綜述包括 Skerra 等人，Qirr. Opinion in Immunol. ,5:256-262(1993)和 Pluckthun, Tmmunol. Revs. 130:151-188(1992)。
[0168] 在其他實(shí)施方式中，單克隆抗體或抗體片段可W分離自使用（例如）Antibody Phage Display:Methods and Protocols, P.M.0'E5rien 和 R. Aitken 主編，Humana Press, Totawa N. J.，2002中所述的技術(shù)產(chǎn)生的抗體瞻菌體文庫?；旧希ㄟ^含有展示融 合至瞻菌體外殼蛋白的抗體可變區(qū)（Fv)的多個片段的瞻菌體的篩選瞻菌體文庫選擇合成 抗體克隆。對于針對所期望的抗原，篩選該些瞻菌體文庫。將表達(dá)能夠結(jié)合至所期望的抗 原的Fv片段的克隆吸附至所述抗原，并因此與所述文庫中的非結(jié)合克隆分離。然后，從所 述抗原洗脫結(jié)合克隆，并且還可W通過抗原吸附/洗脫的額外的循環(huán)進(jìn)行富集。
[0169] 可W在瞻菌體上或者作為單鏈Fv(SCFv)片段在功能上展示可變結(jié)構(gòu)域，其 中VH和化通過短的柔性膚共價連接，或者作為F油片段在功能上展示可變結(jié)構(gòu)域，其 中它們分別融合至恒定結(jié)構(gòu)域，并且非共價鍵地相互作用，如Winter等人，Ann. Rev. Immunol.，12:433-455(1994)中所述。
[0170] 可W通過聚合酶鏈反應(yīng)（PCR)單獨(dú)克隆VH和化基因的集合，并且在瞻菌體文庫 中隨機(jī)重組，然后可W對其尋找抗原結(jié)合克隆，如Winter等人，同上中所述。來自免疫來源 的文庫提供了對免疫原具有高親合力的抗體，而無需構(gòu)造雜交瘤。作為另外一種選擇，可W 克隆天然集合（naive repertoire) W提供針對廣泛的非自體W及自體抗原的單一來源的 人抗體，而無需任何免疫，如通過Gri巧ths等人，EMBO J，12:725-734(1993)所述。最后， 也可W通過從干細(xì)胞克隆未重排的V基因區(qū)段，并使用含有隨機(jī)序列的PCR引物編碼高度 可變的CDR3區(qū)并在體外實(shí)現(xiàn)重排來合成制備天然文庫，如通過化Ogenboom和Winter, J. Mol. Biol.，227:381-388(1992)所描述的。
[0171] 可W通過本領(lǐng)域中已知的多種技術(shù)完成文庫的篩選。例如，CD98可W用于涂 覆吸附板的孔，可W在固定至吸附板的宿主細(xì)胞上表達(dá)或者可W在細(xì)胞分選中使用，或 者可W結(jié)合至生物素W用于用抗生蛋白鏈菌素涂覆的珠進(jìn)行捕獲，或者可W在淘選展 示文庫的任何其他方法中使用。通過使用長時間清洗和單價瞻菌體展示（如Bass等 人，Proteins, 8:309-314 (1990)和 WO 92/09690 中所述）W及抗原低涂覆密度（如 Marks 等人，Biotechnol., 10:779-783(1992)中所述），可W促進(jìn)具有慢解離動力學(xué)（和良好結(jié)合 親合力）的抗體的選擇。
[0172] 可W通過設(shè)計適合的抗原篩選程序W選擇所關(guān)也的瞻菌體克隆，然后使用來自 所關(guān)也的瞻菌體克隆的Fv序列和適合的恒定區(qū)（Fe)序列構(gòu)建全長抗CD98抗體克隆 (女口 Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 片反，NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991)，第1-3卷中所述）來獲得任何本發(fā)明的抗CD98 抗體。 。。引 3.杭體片段
[0174] 本發(fā)明涵蓋了抗體片段。在某些情況下，存在使用抗體片段的優(yōu)勢，而不是整個抗 體。片段較小的尺寸允許快速清除，并且可W導(dǎo)致對實(shí)體瘤可接近性的改善。對于某些抗 體片段的綜述，參見化dson等人，（2003)化t. Med. 9:129-134。
[01巧]已發(fā)展了多種用于生產(chǎn)抗體片段的技術(shù)。傳統(tǒng)地，該些片段是通過完整抗體 的蛋白水解消化獲得的（參見，例如，Morimoto等人，Journal of Biochemical and Bio地ysical Methods24:107-117(1992);和化ennan 等人，Science, 229:81 (1985))。然 而，現(xiàn)在可W直接通過重組宿主細(xì)胞產(chǎn)生該些片段。F油、Fv和scFv抗體片段均可W在大腸 桿菌巧.COli)或酵母細(xì)胞中表達(dá)并從它們中分泌，因此使得能夠容易地產(chǎn)生大量該些片 段?？贵w片段可W分離自W上所討論的抗體瞻菌體文庫。作為另外一種選擇，可W直接從 大腸桿菌巧.COli)回收F油甜片段并化學(xué)偶聯(lián)W形成F(油'）2片段（Carter等人，Bio/ Technology 10:163-167 (1992))。根據(jù)另一種方法，F(xiàn) (油'）2片段可W直接從重組宿主細(xì)胞 培養(yǎng)中分離。在美國專利No. 5869046中描述了包含補(bǔ)救受體結(jié)合表位殘基的體內(nèi)半衰期 提高的Fab和F (ab'）2片段。對于熟練的醫(yī)師來說，用于產(chǎn)生抗體片段的其他技術(shù)將是顯 而易見的。在某些實(shí)施方式中，抗體是單鏈Fv片段（scFv)。參見WO 93/16185;美國專利 No. 5571894 ;和5587458。Fv和SCFv是僅有的具有缺少恒定區(qū)的完整結(jié)合簇的種類；因此， 在體內(nèi)使用期間，它們可W適合于降低的非特異性結(jié)合?？蒞構(gòu)造SCFv融合蛋白W產(chǎn)生在 scFv的氨基或駿基末端中任一處的效應(yīng)子蛋白的融合。參見Antibody化gineering,ed. Borrebaeck，同上。所述抗體片段也可W是"線性抗體"，例如，如在W前所引用的參考文獻(xiàn) 中所述的。該些線性抗體可W是單特異性的或多重特異性的，如雙重特異性的。
[0176] 最小的抗體來源的結(jié)合結(jié)構(gòu)是還稱為單可變結(jié)構(gòu)域抗體（SdAb)的單獨(dú)的可變結(jié) 構(gòu)域（V域）。某些類型的生物，駱駝科動物和軟骨魚，具有作為它們免疫系統(tǒng)的一部分的位 于化等價域結(jié)構(gòu)上的高親合力單V樣域（Woolven等人，ImmunogeneticsSO :98-101, 1999 ; Streltsov 等人，Proc 化tl Acad Sci USA. 101:12444-12449,2004)。V 樣域（在駱駝科 動物中稱為化H，而在蠻魚中稱為V-NAR)通常顯示了長表面環(huán)，其允許祀標(biāo)抗原腔的滲透。 它們還通過掩蔽疏水表面片區(qū)來穩(wěn)定分離的VH域。該些化H和V-NAR域已用于工程設(shè)計 sdAb。已使用來自瞻菌體文庫的選擇和產(chǎn)生穩(wěn)定、高結(jié)合Vk和VH-來源的域的其他方法 設(shè)計了人V域變體。 。177] 4.人源化杭體
[0178] 本發(fā)明涵蓋了人源化抗體。用于將非人抗體人源化的多種方法在本領(lǐng)域中是已知 的。例如，人源化抗體可W具有來自非人來源的引入其中的一個或多個氨基酸殘基。該些 非人氨基酸殘基通常稱作"輸入"殘基，所述殘基通常取自"輸入"可變區(qū)。人源化可W按 照Winter及其同事的方法通過用高變區(qū)序列取代人抗體的相應(yīng)序列來進(jìn)行（Jones等人 (1986)化1:腳6321:522-525 ;I?iechmann 等人（1988)化1:腳6332:323-327 sVerhoeyen 等人 (1988) Science239:15:34-1536)。
[0179] 在一些情況下，通過CDR移植構(gòu)建人源化抗體，其中將親本曬齒類抗體的6個互補(bǔ) 決定區(qū)（CDR)的氨基酸序列移植到人抗體框架上。Padlan等人（FASEB J. 9:133-139, 1995) 確定CDR中實(shí)際上僅有約H分之一的殘基接觸抗原，并且將該些稱為"特異性決定 殘基"或SDR。在SDR移植技術(shù)中，僅將SDR殘基移植到人抗體框架上化ashmiri等 人，Methods36:25-；34, 2005)。
[0180] 在制備人源化抗體中使用的人可變結(jié)構(gòu)域（輕鏈和重鏈兩者）的選擇對降低抗原 性來說可W是重要的。根據(jù)所謂的"最佳擬合化est-fit)"法，針對已知的人可變結(jié)構(gòu)域序 列的整個文庫篩選了曬齒類抗體的可變結(jié)構(gòu)域序列。然后，將與曬齒類最接近的人序列接 受作為人源化抗體的人框架（Sims等人（1993) J. Immunol. 151:2296 ;Chothia等人（1987) J. Mol. Biol. 196:901)。另一種方法使用了來源于輕鏈或重鏈的特定亞群的所有人抗體 的共有序列的特定框架。相同框架可W用于幾種不同的人源化抗體（Carter等人（1992) Proc.化1:1. Acad. Sci. USA, 89:4285 ;Presta 等人（1993) J. Immunol. , 151:2623)。在一些情 況下，所述框架來源于最大量的人亞類K亞組I (V, Kl)和Vh亞組III (VhHI))的共有 序列。在另一種方法中，在框架區(qū)來源使用人種系基因。
[0181] 在基于CDR比較的替代性范例（稱為超人源化）中，F(xiàn)R同源性是不相關(guān)的。所述 方法包括非人序列與功能性人種系基因集合的比較。然后，選擇編碼與鼠序列相同或者密 切相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)結(jié)構(gòu)（canonical structure)的那些基因。然后，在與非人抗體共有所述標(biāo) 準(zhǔn)結(jié)構(gòu)的基因內(nèi)，選擇在CDR內(nèi)具有較高同源性的那些作為FR供體。最后，將所述非人CDR 移植到該些 FR 上（Tan 等人，J. Immunol. 169:119-1125, 2002)。
[0182] 通常，還期望人源化的抗體保留對抗原的高親合力W及其他良好的生物學(xué)性 質(zhì)。為了實(shí)現(xiàn)該目標(biāo)，根據(jù)一種方法，通過使用親本和人源化序列的立體模型的親本序 列分析方法和多種概念性人源化產(chǎn)物制備人源化抗體。立體免疫球蛋白模型是一般可 用的并且是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的。說明和顯示所選候選免疫球蛋白序列的大致立 體構(gòu)型結(jié)構(gòu)的計算機(jī)程序是可用的。該些包括（例如）WAM(Whitelegg和Rees, Protein 化 g. 13:819-824, 2000) ,Modeller (Sali 和 Blundell, J. Mol. Biol. 2:34:779-815, 1993)和 Swiss PDB Viewer(Guex 和化itsch,Electrophoresis 18:2714-2713, 1997)。對該些顯巧 圖案的檢查使得能夠分析所述殘基在候選免疫球蛋白序列的功能中可能所起的作用，即對 影響候選免疫球蛋白結(jié)合其抗原的能力的殘基的分析。W該種方式，可W從接受者和輸入 序列選擇FR殘基并合并，從而實(shí)現(xiàn)所需的抗體特性，如對祀標(biāo)抗原提高的親合力。一般地， 高變區(qū)殘基直接并且最顯著地參與影響抗原結(jié)合。
[0183] 用于抗體人源化的另一種方法是基于被稱為人類序列含量化SC)的抗體人化的 量度。該種方法將小鼠序列與人種系基因的集合進(jìn)行比較，并且將差異作為HSC評分。然 后，通過使其服C最大，而不是使用產(chǎn)生多個多樣性人源化變體的全局同一性方法來使祀 標(biāo)序列人源化（Lazar 等人，Mol. Immunol. 44:1986-1998, 2007)。
[0184] 與上述方法相反，經(jīng)驗(yàn)方法可W用于產(chǎn)生和選擇人源化抗體。該些方法基于使 用富集技術(shù)或高通量篩選技術(shù)的大人源化變體文庫的產(chǎn)生和最佳克隆的選擇?？贵w變 體可W分離自瞻菌體、核糖體和酵母展示文庫W及通過菌落篩選分離Oloogenboom，化t. Biotechnol. 23:1105-1116,2005 ;Dufner 等人，Trends Biotechnol. 24:523-529,2006; Fel化aus 等人，化1:. Biotechnol. 21:163-70, 2003 ;Schlapschy 等人，Protein E；ng. Des. Sel.17:847-60, 2004)。
[0185] 在FR文庫方法中，將一系列殘基變體引入到FR中的特定位置，然后選擇文庫W選 擇對移植的CDR最佳支持的FR。要取代的殘基可W包括鑒別為可能有助于CDR結(jié)構(gòu)的"游 標(biāo)"殘基的一些或全部（Foote 和 Winter, J. Mol. Biol. 224:487-499, 1992)，或者來自 Baca 等人（J. Biol. Chem. 272:10678-10684, 1997)鑒別的祀標(biāo)殘基的更有限的組。
[0186] 在FR改組中，整個FR與非人CDR結(jié)合，而不是產(chǎn)生了所選殘基變體的組合文庫 值all'Acqua等人，Methods 36:43-60,2005)。可W在兩步選擇過程（首先人源化化，然后 VH)中對文庫篩選結(jié)合。作為另外一種選擇，可W使用一步FR改組方法。該方法已證明比兩 步篩選更有效，該是因?yàn)樗玫目贵w顯示出改善的生物化學(xué)性質(zhì)和理化性質(zhì)，其包括提高 的表達(dá)、提高的親合力和熱穩(wěn)定性值amsc虹Oder等人，Mol. Immunol. 44:3049-60, 2007)。
[0187] "人化工程化umaneering)"方法基于基本最小特異性決定簇（MSD)的實(shí)驗(yàn)鑒別 和基于非人片段向人FR文庫中的序列取代W及對結(jié)合的評價。它從非人VH和化鏈的 CDR-3區(qū)開始并逐漸將非人抗體的其他區(qū)（包括VH和化兩者的CDR-I和CDR-2)置換到 人FR中。該方法通常導(dǎo)致表位保留和從具有不同人V片段CDR的多個亞類的抗體的鑒別。 Humaneering使得能夠分離與人種系基因抗體91-96%同源的抗體（Alfenito, Cambridge Healthtech Institute's Third Annual PEGS, The Protein Engineering Summit, 2007)。 。18引 5.人杭體
[0189] 可W通過合并選自具有如上所述的已知的人恒定結(jié)構(gòu)域序列的人來源的瞻 菌體展示文庫的Fv克隆可變結(jié)構(gòu)域序列來構(gòu)造本發(fā)明的人抗CD98抗體。作為另外 一種選擇，可W通過雜交瘤方法制備本發(fā)明的人單克隆抗CD98抗體。已通過W下 文獻(xiàn)描述了用于產(chǎn)生人單克隆抗體的人骨髓瘤和小鼠-人雜合骨髓瘤細(xì)胞系，例如， Kozbor J. Immunol. , 133:3001 (1984) ;Brodeur 等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,第 51-63 頁（Marcel Dekker, Inc. , New York, 1987);和 Boerner 等人，J. Tmmunol. , 147:86 (1991)。
[0190] 還可能產(chǎn)生一旦免疫，能夠在不存在內(nèi)源免疫球蛋白產(chǎn)生的情況下產(chǎn)生人抗體 的全部集合的轉(zhuǎn)基因動物（例如，小鼠）。表達(dá)人抗體集合的轉(zhuǎn)基因小鼠已用于產(chǎn)生抗 多種潛在藥物祀標(biāo)的高親合力人序列單克隆抗體。參見，例如，化kobovits，A.，化rr. Opin. Biotechnol. 1995, 6 (5) :561-6 ；Briiggemann 和 Taussing, Curr. Opin. Biotechnol. 1997,8(4) :455-8 ;美國專利 No. 6075181 和 6150584 ;和 Lonberg 等人，化Uire Biotechnol. 23:1117-1125,2005。
[0191] 作為另外一種選擇，可W通過產(chǎn)生針對祀標(biāo)抗原的抗體的人B淋己細(xì)胞（該些B 淋己細(xì)胞可W從個體收獲或者可W體外免疫）的永生化制備人抗體。參見，例如，Cole等 人，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss,第 77 頁（1985) ；Boerner 等人，J. Immunol.，147(1) :86-95(1991);和美國專利 No. 5750373。
[0192] 基因改組還可W用于從非人，例如曬齒類抗體獲得人抗體，其中所述人抗體具有 與起始非人抗體類似的親合力和特異性。根據(jù)該方法，它還被稱為"表位印記"或者"導(dǎo) 向選擇"，用人V域基因的集合替代通過如本文所述的瞻菌體展示技術(shù)獲得的非人抗體片 段的重鏈或輕鏈可變區(qū)，從而產(chǎn)生非人鏈/人鏈SCFv或Fab嵌合體的群體。用抗原進(jìn)行 選擇導(dǎo)致非人鏈/人鏈嵌合SCFv或Fab的分離，其中人鏈在一級瞻菌體展示克隆中去除 了相應(yīng)的非人鏈后使破壞的抗原結(jié)合位點(diǎn)恢復(fù)，即表位導(dǎo)向（印記）人鏈伴侶的選擇。當(dāng) 重復(fù)該方法W置換剩余的非人鏈時，獲得了人抗體（參見PCT W093/06213和Osbourn等 人，Methods. , 36, 61-68, 2005)。與傳統(tǒng)的通過CDR移植進(jìn)行的非人抗體的人源化不同，該 技術(shù)提供了完全人抗體，它們不含非人來源的FR或CDR殘基。使小鼠抗體對細(xì)胞表面抗原 人源化的導(dǎo)向選擇的實(shí)例包括卵巢癌細(xì)胞上存在的葉酸鹽結(jié)合蛋白（Figini等人，Cancer Res.，58, 991-996, 1998)和CD147,其在肝細(xì)胞癌上高表達(dá)炬ao等人，Cancer Biol. Ilier.，4, 1374-1380, 2005)。
[0193] 導(dǎo)向選擇方法可能的缺陷在于一個抗體鏈改組而保持另一個不變可能會導(dǎo) 致表位漂移。為了維持非人抗體識別的表位，可W應(yīng)用CDR保留化Iimfoi等人，Br. J. Cancer.，83, 252-260, 2000 ;Beiboer 等人，J. Mol. Biol.，296, 833-49, 2000)。在該方法 中，非人CDR-冊通常保留，該是因?yàn)镃DR位于抗原結(jié)合位點(diǎn)的中也并且已證明是用于抗原 識別的抗體最重要的區(qū)域。然而，在一些情況下，可W保留非人抗體的CDR-冊和CDR-L3 W 及 CDR-冊、CDR-L3 和 CDR-L2。 。194] 6.雙軍特屏巧杭體
[0195] 雙特異性抗體是對至少兩個不同抗原具有結(jié)合特異性的單克隆抗體。在某些實(shí)施 方式中，雙重特異性抗體是人或人源化抗體。在某些實(shí)施方式中，其中一種結(jié)合特異性是對 CD98,而另一種是對任何其他抗原。在某些實(shí)施方式中，雙重特異性抗體可能結(jié)合至兩個不 同的CD98表位。雙重特異性抗體還可W用于將細(xì)胞毒性試劑定位至表達(dá)CD98的細(xì)胞。該 些抗體具有CD98結(jié)合臂和結(jié)合細(xì)胞毒性試劑（如，例如，服皂草毒蛋白、抗干擾素-a、長春 花生物堿、當(dāng)麻毒蛋白A鏈、甲氨蝶嶺或放射性同位素半抗原）的臂。可W將雙重特異性抗 體制備成全長抗體或抗體片段（例如，F(xiàn) (油'）2雙重特異性抗體）。
[0196] 制備雙重特異性抗體的方法在本領(lǐng)域中是已知的，如，例如，通過兩種免疫 球蛋白重鏈-輕鏈對的共表達(dá)，其中所述兩個重鏈具有不同的特異性（Milstein和 化e 11〇,化化re, 305:537 (1983))。有關(guān)產(chǎn)生雙重特異性抗體的詳細(xì)信息，參見，例如， Bispeci円C Antibodies, Kontermann 主編，Springer-Verlag, Hiedelberg(2011)。 陽197] 7.名價杭體
[019引多價抗體可W比二價抗體更快的受到表達(dá)該抗體所結(jié)合抗原的細(xì)胞的內(nèi)化（和/ 或分解代謝）。本發(fā)明的抗體可W是具有H個或更多抗原結(jié)合位點(diǎn)（例如，四價抗體）的多 價抗體（它們是除IgM類W外的），其可W容易地通過編碼所述抗體多膚鏈的核酸的重組 表達(dá)而產(chǎn)生。多價抗體可W包含二聚化域和H個或更多個抗原結(jié)合位點(diǎn)。在某些實(shí)施方案 中，所述二聚化域包含（或由其組成）化區(qū)或較鏈區(qū)。在該種情況下，抗體將包含化區(qū)W 及化區(qū)氨基末端的H個或更多個抗原結(jié)合位點(diǎn)。在某些實(shí)施方式中，多價抗體包含（或由 其組成）H個至約八個抗原結(jié)合位點(diǎn)。在一個該種實(shí)施方式中，多價抗體包含（或由其組 成）四個抗原結(jié)合位點(diǎn)。多價抗體包含至少一條多膚鏈（例如，兩條多膚鏈），其中所述多 膚鏈包含兩個或更多個可變結(jié)構(gòu)域。例如，多膚鏈可W包含VDl-狂1) n-VD2-狂2) n-Fc，其中 VDl是第一可變結(jié)構(gòu)域，VD2是第二可變結(jié)構(gòu)域，化是化區(qū)的一條多膚鏈，Xl和X2代表氨 基酸或多膚，而n是0或1。例如，多膚鏈可W包含；VH-CHl-柔性接頭-VH-CHl-化區(qū)鏈；或 VH-CHl-VH-CHl-Fc區(qū)鏈。本文中的多價抗體還可W包含至少兩條（例如，四條）輕鏈可變 結(jié)構(gòu)域多膚。本文中的多價抗體可W (例如）包含約2至約8條輕鏈可變結(jié)構(gòu)域多膚。本 文所考慮的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域多膚包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，并且任選地還包含化域。 陽19引 8.效巧子巧能的工巧改浩
[0200] 可W期望對于效應(yīng)子功能來修飾本發(fā)明的抗體，例如，從而提高所述抗體的抗原 依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC)或補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性（CDC)。該可W通過在所述抗體 的化區(qū)引入一個或多個氨基酸取代來實(shí)現(xiàn)。參見，例如，Lazar等人，Proc.化1:1. Acad. Sci. USA 2006, 103 (11) : 4005-4010 ；Presta, L. G. , Curr. Opin. Immunol. 2008, 20(4) :460-70 ； 和美國專利 No. 7183387 ;7332581 ;和 7335742。
[0201] 作為另外一種選擇或另外，可W將半脫氨酸殘基引入化區(qū)，借此允許在該區(qū) 域中形成鏈間二硫鍵。因此所產(chǎn)生的均二聚抗體可W具有改善的內(nèi)化能力和/或提 高的補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞殺死和抗體依賴性細(xì)胞毒性（ADCC)。參見Caron等人，J.Exp Med. 176:1191-1195(1992)和 Shopes，B.J. Immunol. 148:2918-2922(1992)。還可 W 使 用異源雙功能交聯(lián)劑制備具有提高的抗腫瘤活性的均二聚抗體，如Wolff等人，Cancer Research 53:2560-2565(1993)中所述。作為另外一種選擇，可W工程改造具有雙化區(qū)并 因此具有提高的補(bǔ)體溶胞和ADCC能力的抗體。參見Stevenson等人，Anti-Cancer Drug Design 3:219-230(1989)。為了提高抗體的血清半衰期，一種方法是在所述抗體（特別是 抗體片段）中慘入補(bǔ)救受體結(jié)合表位，例如，如美國專利5739277中所述。如本文所使用的， 術(shù)語"補(bǔ)救受體結(jié)合表位"是指IgG分子（例如，IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)化區(qū)中負(fù)責(zé)提 高所述IgG分子的體內(nèi)血清半衰期的表位。 陽20引 9.替代結(jié)合劑
[0203] 本發(fā)明涵蓋了特異性結(jié)合至與本文所公開的抗CD98抗體相同的表位的非免疫 球蛋白結(jié)合劑。在一些實(shí)施方式中，結(jié)合劑是所鑒別的在競爭性結(jié)合測定中置換本發(fā)明 的抗CD98抗體或被本發(fā)明的抗CD98抗體置換的試劑。該些替代結(jié)合劑可W包括（例 如）本領(lǐng)域中已知的任何工程改造的蛋白骨架。該些骨架包括，例如，anticalins，它基 于Iipocalin骨架，其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的特征在于支持形成配體結(jié)合位點(diǎn)的四個高變環(huán)的剛性 目-折疊桶。通過環(huán)區(qū)域中祀向隨機(jī)突變并結(jié)合功能展示和導(dǎo)向選擇來工程改造新型的結(jié) 合特異性（Skerra (2008)陽BS J. 275:2677-2683)。其他適合的骨架可W包括例如EUlnectin 或單體（monobody)，基于第十人纖連蛋白III型胞外域化Oide和Koide (2007)Methods Mol.Biol.352:95-109);親和體（affibody)，基于葡萄球菌蛋白A的Z結(jié)構(gòu)域（Nygren等 人，（2008)陽BS J. 275:2668-2676) ;DARPin，基于銷蛋白重復(fù)蛋白（Stumpp 等人，（2008) Drug. Discov. Todayl3:695-701) ;fynomers,基于人 Fyn 蛋白激酶的甜3 域（Grabulovski 等人，（2007) J. Biol. Qiem. 282:3196-3204) ;affitins,基于來自 Sulfolobus acidolarius 的 Sa(：7d(Krehenbrink 等人，（2008) J. Mol. Biol. 383:1058-1068) ;affilins,基于人 y-B-晶體蛋白巧bersbach 等人，（2007) J. Mol. Biol. 372:172-185);高親和性多聚體 (avimer),基于膜受體蛋白的 A 域（Silverman 等人，（200 巧 Biotechnol. 23:1556-1561); 富含半脫氨酸的結(jié)膚化〇lmar(2008)陽BS J. 275:2684-2690);和工程改造的Kunitz型 抑制劑（Nixon 和 Wood(2006) Qirr. Opin. Drug. Discov. Dev. 9:261-268)。有關(guān)綜述，參見 Gebauer 和 Skerra(2009) Qirr. Opin. Qiem. Biol. 13:245-255。
[0204] 杭體巧體
[0205] 在一些實(shí)施方式中，考慮了本文所述的抗體的氨基酸序列修飾。例如，可W期望改 善抗體的結(jié)合親合力和/或其他生物學(xué)性質(zhì)，其包括（但不限于）特異性、熱穩(wěn)定性、表達(dá) 水平、效應(yīng)子功能、糖基化作用、降低的免疫原性或溶解度。除本文所述的抗CD98抗體之 夕F，考慮可W制備抗CD98抗體變體?？蒞通過將適當(dāng)?shù)暮饲伤嶙兓氲骄幋aDNA中和/ 或通過所需抗體或多膚的合成來制備抗CD98抗體變體。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解氨基酸變 化可W改變抗CD98抗體的翻譯后過程，如改變糖基化位點(diǎn)的數(shù)目或位置或者改變膜銷定 特性。
[0206] 變化可W是編碼所述抗體或多膚的一個或多個密碼子的取代、缺失或插入，其導(dǎo) 致與天然序列的抗體或多膚相比，氨基酸序列的變化。氨基酸取代可W是用具有類似的結(jié) 構(gòu)的和/或化學(xué)性質(zhì)的另一種氨基酸替代一種氨基酸的結(jié)果，如用絲氨酸替代亮氨酸，即 保守氨基酸替代。插入或缺失可W任選地在約1至5個氨基酸的范圍內(nèi)?？蒞通過在序列 中系統(tǒng)地進(jìn)行氨基酸的插入、缺失或取代并測試所得變體的全長或成熟天然序列所顯示的 活性來確定所允許的變化。
[0207] 氨基酸序列插入包括長度在1個殘基至含有100個或更多個殘基的多膚的范圍內(nèi) 的氨基-和/或駿基-末端融合，W及單個或多個氨基酸殘基的序列間插入。末端插入的 實(shí)例包括具有N末端甲硫氨醜基殘基的抗體。所述抗體分子的其他插入變體包括向抗體的 N-或C-末端融合提高所述抗體血清半衰期的酶（例如，用于抗體定向酶前藥療法）或膚。 [020引抗體生物性質(zhì)中的顯著改變伴隨著選擇置換，它們對于維持（a)置換區(qū)域中多 膚主鏈的結(jié)構(gòu)，例如，作為折疊或螺旋構(gòu)象，化）祀標(biāo)位點(diǎn)處分子的電荷或疏水性，或（C) 整個側(cè)鏈的影響差異顯著。根據(jù)側(cè)鏈性質(zhì)的類似性，氨基酸可W分組（A. L Lehninger, in Biochemistry,第 2 版，第 73-75 頁，Worth Publishers, New York (1975)):
[0209] (I)非極性；Ala (A)、Val (V)、Leu (L)、Ile(I)、Pro (P)、Wie (巧、Tn(W)、Met (M)
[0210] 似不帶電荷的極性；Gly 似、Ser (S)，、T虹(T)、切S 似、Tyr (Y)、Asn ㈱、Gln(Q)
[0211] 做酸性；Asp (D)、Glu 似
[0引引（4)堿性；LysOO、Arg (R)、His 做
[0213] 作為另外一種選擇，可W將天然存在的殘基基于常見的側(cè)鏈性質(zhì)分組為：
[0214] (1)疏水：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile ;
[0215] 似中性親水性：切s、Ser、I"虹、Asn、Gln ;
[021 引（3)酸性；Asp、Glu ;
[0217] (4)堿性；His、Lys、Arg ;
[0引引 妨影響鏈取向的殘基；Gly、Pro ;
[0219] 做芳香；TiT^TyiNPhe。
[0220] 非保守置換需要將該些類別中的一個的成員與另一類交換。所述置換的殘基還可 W引入至保守置換位點(diǎn)，或引入至其余（非保守）位點(diǎn)。
[0221] 使用本領(lǐng)域中已知的方法可W制備所述變化，如寡核巧酸介導(dǎo)的（定向）誘變、 丙氨酸掃描和PCR誘變?？蒞對克隆的DNA進(jìn)行定點(diǎn)突變（Carter等人，Nucl. Acids Res.，13:4331(1986) ;Zoller 等人，Nucl. Acids Res.，10:6487(1987))、盒式突變（Wells 等人，Gene, 34:315 (1985))、限制-選擇突變（Wells 等人，Philos. Trans. R. Soc. London SerA，317:415 (1986))或其他已知的技術(shù)W產(chǎn)生抗CD98抗體變體DM。
[0222] 還可W通常用絲氨酸置換未參與維持抗CD98抗體正確構(gòu)象的任何半脫氨酸殘基 W改善所述分子的氧化穩(wěn)定性并防止異常交聯(lián)。相反地，可W將半脫氨酸鍵加入到抗CD98 抗體中W改善其穩(wěn)定性（具體地，其中所述抗體是抗體片段，如Fv片段）。在（例如）WO 2006/034488中描述了可W用于產(chǎn)生抗體-藥物結(jié)合物的半脫氨酸工程改造的抗體。
[0223] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗CD98抗體分子是"去免疫"抗體。"去免疫"抗 CD98抗體是來源于人源化或嵌合抗CD98抗體的抗體，它在其氨基酸序列中具有一個或多 個變化，從而導(dǎo)致與各自原始的非去免疫抗體相比，所述抗體的免疫原性減小。用于產(chǎn)生 該些抗體突變體的程序之一涉及抗體分子T細(xì)胞表位的鑒別和除去。在第一步中，可W通 過幾種方法確定所述抗體分子的免疫原性，例如，通過如本領(lǐng)域中已知的T細(xì)胞表位的體 外確定或者該些表位在娃片上的預(yù)測。一旦鑒別了 T細(xì)胞表位功能的關(guān)鍵殘基，則可W進(jìn) 行突變W除去免疫原性并保留抗體活性。對于綜述，參見，例如，Jones等人，Methods in Molecular Biology 日25:405-423, 2009。
[0224] 體外親合力成熟
[0225] 在一種實(shí)施方式中，與親代抗體相比，具有改善的性質(zhì)（如親合力、穩(wěn)定性或表達(dá) 水平）的抗體變體是體外親合力成熟。與天然原型類似，體外親合力成熟基于突變和選擇 的原則?？贵w文庫展示為在生物（例如，瞻菌體、細(xì)菌或酵母）表面上或者與它們的編碼 mRNA或DNA結(jié)合（共價鍵或非共價鍵）的F油、scFv或V域片段。展示抗體的親合力選擇 允許攜帶編碼所述抗體的遺傳信息的生物或復(fù)合物的分離。使用展示方法（如瞻菌體展 示），2或3輪突變和選擇通常導(dǎo)致抗體片段的親合力在低納摩爾范圍內(nèi)。優(yōu)選的親和成熟 的抗體將對祀標(biāo)抗原具有納摩爾或甚至皮摩爾的親合力。
[0226] 瞻菌體展示是抗體展示和選擇的最廣泛的方法。抗體作為瞻菌體外殼蛋白上的 融合在Fd或M13瞻菌體表面上展示。選擇涉及暴露于抗原W允許瞻菌體展示的抗體與它 們的祀標(biāo)結(jié)合，該過程稱為"淘選"。將結(jié)合至抗原的瞻菌體收獲并在細(xì)菌中感染W(wǎng)產(chǎn)生用 于其他選擇的瞻菌體。對于綜述，參見化Ogenboom, Methods. Mol. Biol. 178:1-37,2002 ; Bradbuiy 和 Marks, J. Tmmuno. Methods 290:29-49, 2004)〇
[0227] 在酵母展示系統(tǒng)炬Oder 等人，化1:. Biotech. 15:553-57, 1997 ;Qiao 等人，化1:. Protocols 1:755-768, 2006)，抗體作為單鏈可變?nèi)诤希⊿Cfv)展示，其中重鏈和輕鏈通過 柔性接頭連接。scFv融合至酵母凝集素蛋白Aga化的附著亞單位上，其通過與Agalp的二硫 鍵連接至酵母細(xì)胞壁。通過Aga2p的蛋白質(zhì)展示顯示所述蛋白質(zhì)遠(yuǎn)離細(xì)胞表面，從而使與 酵母細(xì)胞壁上其他分子可能的相互作用最小化。將磁力分離和流式細(xì)胞術(shù)用于篩選文庫W 選擇具有改善的親合力和穩(wěn)定性的抗體。通過用生物素化抗原和第二試劑（如結(jié)合至英光 團(tuán)的抗生蛋白鏈菌素）標(biāo)記酵母來確定對所關(guān)也的可溶性抗原的結(jié)合?？蒞通過血球凝集 素或側(cè)接SCFv的C-Myc表位標(biāo)記的免疫英光標(biāo)記來測量抗體表面表達(dá)中的變化。表達(dá)已顯 示與所展示蛋白的穩(wěn)定性相互關(guān)聯(lián)，并因此可W選擇穩(wěn)定性和親合力改善的抗體（Shusta 等人，J. Mol. Biol. 292:949-956, 1999)。酵母展示的其他優(yōu)勢在于所展示的蛋白在真核酵 母細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中折疊，從而利用了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)侶伴蛋白和質(zhì)量控制機(jī)構(gòu)。一旦成熟完全，則可 W在酵母表面上展示的同時方便地"滴定"抗體親合力，從而消除對每個克隆表達(dá)和純化的 需要。酵母表面展示的理論限制是與其他展示方法相比可能較小的功能性文庫大?。蝗欢?， 最近的方法使用了酵母細(xì)胞繁育系統(tǒng)W產(chǎn)生預(yù)計為1014大小的組合多樣性（美國專利公 開 2003/0186374 ;Blaise 等人，Gene :342:211-218, 2004)。
[022引在核糖體展示中，產(chǎn)生了抗體-核糖體-mRNA(ARM)復(fù)合物W用于在無細(xì)胞體系中 選擇。將編碼特定抗體文庫的DNA文庫遺傳融合至缺少終止密碼子的間隔序列。翻譯時，該 間隔序列仍連接至膚基tRNA并占據(jù)核糖體通道，并且因此允許所關(guān)也的蛋白從核糖體伸 出并折疊。mRNA、核糖體和蛋白質(zhì)所得的復(fù)合物可W結(jié)合至表面結(jié)合的配體，從而允許通過 與所述配體的親合力捕獲同時分離所述抗體及其編碼mRNA。然后，將核糖體結(jié)合的mRNA反 轉(zhuǎn)錄到cDNA中，然后它可W經(jīng)歷突變并在下一輪選擇中使用(pukuda等人，Nucleic Acids Res. 34, el27, 2006)。在mRNA展示中，使用嘿羅霉素作為接合體分子在抗體和mRNA之間建 立共價鍵（Wilson 等人，Proc.化tl. Acad. Sci. USA 98, 3750-3755, 2001)。
[0229] 由于該些方法是完全體外進(jìn)行的，因此它們提供了優(yōu)于其他選擇技術(shù)的兩個主要 優(yōu)勢。首先，文庫的多樣性不受細(xì)菌細(xì)胞轉(zhuǎn)化效力的限制，而是僅受試管中存在的核糖體和 不同的mRNA分子的數(shù)目的限制。第二，在每輪選擇之后可W容易地引入隨機(jī)突變，例如，通 過無校正活性的聚合酶，該是因?yàn)樵谌魏味鄻踊襟E后無須轉(zhuǎn)化文庫。
[0230] 可W W祀標(biāo)方式或者通過隨機(jī)引入將多樣性引入到抗體文庫的CDR或整個V基 因中。前一種方法包括順序地通過高或低水平的突變祀向抗體全部的CDR或者祀向體細(xì) 胞高度突變的分離的熱點(diǎn)化〇等人，J. Biol.化em. 280:607-617, 2005)或者在實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上 或出于結(jié)構(gòu)原因懷疑影響親合力的殘序?？蒞使用大腸桿菌巧.COli)突變基因株、使用 DNA聚合酶（Hawkins等人，J. Mol. Biol. 226:889-896, 1992)或RNA復(fù)制酶的易錯復(fù)制將 隨機(jī)突變引入到整個V基因中。還可W通過DNA改組或類似技術(shù)置換天然多樣性區(qū)域來 引入多樣性（(Lu 等人，J. Biol. Chem 278:43496-43507,2003 ;美國專利 No. 5565332 ;美 國專利No. 6989250)。替代性技術(shù)祀向伸入到框架區(qū)殘基中的高變環(huán)炬ond等人，J. Mol. Biol. 348:699-709, 2005)，使用CDR中的環(huán)缺失和插入或者使用基于雜交的多樣化（美國 專利公開No. 2004/0005709)。在美國專利No. 7985840中公開了在CDR中產(chǎn)生多樣性的其 他方法。可W通過本領(lǐng)域中已知的多種技術(shù)完成文庫的篩選。例如，可W將CD98固定在固 體載體、柱、針或纖維素/聚（偏二氣己帰）膜/其他過濾器上，在固定至吸附板的宿主細(xì) 胞上表達(dá)或者在細(xì)胞分選中使用，或者結(jié)合至生物素W用于使用抗生蛋白鏈菌素涂覆珠的 捕獲，或者在用于淘選展示文庫的任何其他方法中使用。
[0231] 有關(guān)體外親合力成熟的綜述，參見Hoogenboom,化加"6 Biotechnology23:1105-1116,2005 和 Quiroz and Sinclair, Revista Ingeneria Biomedia 4:39-51,2010 W及其中的參考文獻(xiàn)。
[023引 杭CD98杭體的修飾
[0233] 抗CD98抗體的共價修飾包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。共價修飾包括將抗CD98抗體的 目標(biāo)氨基酸殘基與能夠與抗CD98抗體所選的側(cè)鏈或者N-或C-末端殘基反應(yīng)的有機(jī)衍生 化試劑反應(yīng)。其他修飾包括谷氨醜胺醜基和天冬醜胺醜殘基分別向相應(yīng)谷氨醜基和天冬氨 醜殘基的脫醜胺，脯氨酸和賴氨酸的輕基化作用，絲氨醜或蘇氨醜殘基的輕基的磯酸化作 用，賴氨酸、精氨酸和組氨酸側(cè)鏈的a氨基的甲基化化E.化ei曲ton, Proteins = Struc^r e and Molecular Properties, W. H. Freeman&Co. , San Francisco, pp. 79-86(1983))、N末 端胺的己醜化作用和任何C末端駿基的醜胺化。
[0234] 包含在本發(fā)明范圍內(nèi)的其他類型的抗CD98抗體的共價修飾包括改變所述抗 體或多膚天然的糖基化類型炬eck等人，Qirr. Pharm. Biotechnol. 9:482-501, 2008 ; Walsh, Drug Discov. Today 15:773-780, 2010)，和 W 美國專利 No. 4640835 ;4496689 ; 4301144 ;4670417 ;4791192或者4179337中所述的方式，將所述抗體連接至多種非蛋白質(zhì) 聚合物之一，例如，聚己二醇（PEG)、聚丙二醇或聚氧化帰。
[0235] 還可W修飾本發(fā)明所述的抗CD98抗體W形成包含融合至另一種異源多膚或氨基 酸序列，例如，表位標(biāo)記（Te巧e, Appl. Microbiol. Biotechnol. 60:523-533, 2003)或 IgG 分子的化區(qū)的抗 CD98 抗體的嵌合分子（Aruffo, "Immunoglobulin fusion proteins"in Antibody Fusion Proteins, S. M. Chamow 和 A.Ashkenazi 主編，Wiley-Liss, New 化rk, 1999,第 221-242 頁）。 。23引 杭CD98杭體的制各
[0237]可W通過培養(yǎng)用含有抗CD98抗體編碼核酸的載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的細(xì)胞來產(chǎn)生抗 CD98抗體。可W使用標(biāo)準(zhǔn)重組技術(shù)獲得編碼本發(fā)明的抗體的多膚組成的多核巧酸序列。所 需的多核巧酸序列可W分離和測序自抗體產(chǎn)生細(xì)胞，如雜交瘤細(xì)胞。作為另外一種選擇，可 W使用核巧酸合成儀或PCR技術(shù)合成多核巧酸。一旦獲得，將編碼所述多膚的序列插入到 能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制和表達(dá)異源多核巧酸的重組載體中。出于本發(fā)明的目的，可W使用 在本領(lǐng)域中可用并且已知的多種載體。適當(dāng)載體的選擇將主要取決于要插入到載體中的核 酸的大小W及將要用所述載體轉(zhuǎn)化的具體的宿主細(xì)胞。適合于表達(dá)本發(fā)明的抗體的宿主細(xì) 胞包括原核生物，如古細(xì)菌和真細(xì)菌，其包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物，真核微生物， 如絲狀真菌或酵母、無脊椎動物細(xì)胞，如昆蟲或植物細(xì)胞和脊椎動物細(xì)胞，如哺乳動物宿主 細(xì)胞系。用上述表達(dá)載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞并根據(jù)用于誘導(dǎo)啟動子、選擇轉(zhuǎn)化體或擴(kuò)增編碼所 需序列的基因的情況，在適當(dāng)改變的常規(guī)培養(yǎng)基中培養(yǎng)宿主細(xì)胞。使用本領(lǐng)域中已知的標(biāo) 準(zhǔn)蛋白純化方法純化通過所述宿主細(xì)胞產(chǎn)生的抗體。
[023引包括載體構(gòu)建、表達(dá)和純化的抗體生產(chǎn)方法還描述于Pluckthun等人，（1996) in Antibody Engineering!Producing antibodies in Escherichia coli:From PCR to fermentation(McCafferty, J. , Hoogenboom, H. R.,和 Chiswell, D. J.主編），第 I 版,第 203-252 頁,IRL Press, Oxford ；Kwong,K.&Rader, C. E. coli expression and puri円cation of Fab antibody fragments. Current protocols in protein science editorial board John E Coligan 等人，第 6 章，6. 10 單元（2009) Jachibana 和 Takekoshi, "Production of Antibody Fab Fragments in Escherischia coli,"in Antibody Expression and Production, M. Al-Rubeai 主編，Springer, New York, 2011; Therapeutic Monoclonal Antibodies:From Bench to Clinic (Z.An 主編），John Wiley&Sons, Inc. , Hoboken, NJ, USA。
[0239] 當(dāng)然，考慮可W使用本領(lǐng)域中熟知的其他方法來制備抗CD98抗體。例如，可W 通過使用固相技術(shù)的直接膚合成生產(chǎn)適合的氨基酸序列或其部分（參見，例如，Stewart 等人，Solid-Phase Peptide Synthesis, W. H. Freeman Co. , San Francisco, CA(1969)； Merrifield, J. Am. Chem. Soc, 85:2149-2154(1963))。可 W使用手動技術(shù)或通過自動化進(jìn)行 體外蛋白質(zhì)合成?？蒞單獨(dú)地化學(xué)合成抗CD98抗體的多個部分，并使用化學(xué)或酶促方法 合并W產(chǎn)生所需的抗CD98抗體。作為另外一種選擇，可W從工程改造W表達(dá)所述抗體的 轉(zhuǎn)基因動物的細(xì)胞或體液，如乳汁中純化抗體，例如在美國專利No. 5545807和美國專利 No. 5827690中所公開的。
[0240] 免疫結(jié)合物
[0241] 本發(fā)明還提供了免疫結(jié)合物（可互換地稱為"抗體藥物結(jié)合物"，或者"ADC")，其 包含通過合成接頭共價結(jié)合至一種或多種細(xì)胞毒性試劑的本發(fā)明的抗CD98抗體中的任一 種。ADC將單克隆抗體的高特異性與細(xì)胞毒性分子的藥理學(xué)效力結(jié)合，從而允許特異地將 細(xì)胞毒性試劑祀向腫瘤細(xì)胞并避免大部分抗癌藥物的非特異性毒性。對于綜述，參見，例 女口，Carter and Senter, Cancer J.14:154-169(2008) ；Ducry and Stump, B ioconjugate Chem. 21:5-13 (2010) ;Beck 等人，Discov. Med. 10:329-339 (2010)。
[0242] 在本發(fā)明所述的免疫結(jié)合物中使用的細(xì)胞毒性試劑可W包括如上所述的化療劑、 藥物或生長抑制劑、毒素（例如，細(xì)菌、真菌、植物或動物來源的酶活性毒素或其片段）或者 放射性同位素。在一些實(shí)施方式中，所述免疫結(jié)合物包括DNA結(jié)合劑（例如，刺抱霉素）或 微管蛋白解聚劑（例如，類美坦素或奧里斯他汀（auristatin))。本發(fā)明還考慮了在抗體和 具有核酸酵素活性（例如，核糖核酸酶或DNA核酸內(nèi)切酶，如脫氧核糖核酸酶；DNA酶）的 化合物之間形成的免疫結(jié)合物。
[0243] 可W在本發(fā)明的免疫結(jié)合物中使用的酶活性毒素及其片段包括白喉毒素A鏈、白 喉毒素的非結(jié)合活性片段、外毒素A鏈（來自銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa))、 當(dāng)麻毒蛋白（ricin)A鏈、相思豆毒蛋白（abrin)A鏈、菊蓮根毒蛋白（modeccin)A鏈、a-靑 曲霉素（sarcin)、油桐（Aleurites fordii)蛋白、香石竹毒蛋白（dianthin proteins)、美 洲商陸（Phytolaca americana)蛋白（PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜（Momordica charantia) 抑制劑、麻瘋樹毒蛋白（curcin)、己豆毒蛋白（crotin)、服皂草（sapaonaria officinalis) 抑制劑、白樹毒蛋白（gelonin)、絲林霉素（mitogellin)、局限曲菌素（restrictocin)、酷 霉素（phenomycin)、依諾霉素（enomycin)和單端抱菌素（trichothecenes)。參見，例如， WO 93/21232。
[0244] 多種放射性同位素對放射性結(jié)合抗體的產(chǎn)生是可用的。實(shí)例包括At2"、1"1、 Iiss、yw、Reise、Reiss、Sm" 3、Bi"2、P32、Pb2I2和Lu的放射性同位素。當(dāng)所述結(jié)合物用于檢測 時，它可W包含用于閃爍掃描研究的放射性原子，例如，tc99m或1123,或用于核磁共振 (NMR)成像（也稱為磁共振成象，MRI)的自旋標(biāo)記物，如楓-123、楓-131、鋼-111、氣-19、 碳-13、氮-15、氧-17、亂、猛或鐵。可W W已知的方法將放射性同位素引入到結(jié)合物中， 例女口，女口 Reilly, "The radiochemistry of monoclonal antibodies and peptides, "in Monoclonal Antibody and Peptide-Targeted Radiotherapy of Cancer, R. M. Reilly 主 編，Wil巧，Hoboken N. J.，2010 中所述。
[0245] 所述接頭可W是有利于細(xì)胞毒性藥物在細(xì)胞中釋放的"可切割接頭"，但是在本 文中還考慮了非可切割接頭。在本發(fā)明的免疫結(jié)合物中使用的接頭無限制地包括酸不穩(wěn) 定的接頭（例如，蹤接頭）、含有二硫化物的接頭、膚酶敏感性接頭（例如，膚接頭，如瓜 氨酸-額氨酸或苯丙氨酸-賴氨酸）、光不穩(wěn)的接頭、二甲基接頭（化ari等人，Cancer Research52:127-131 (1992);美國專利No. 5208020)、硫離接頭或設(shè)計用于避免多藥物轉(zhuǎn) 運(yùn)蛋白介導(dǎo)的耐受性的親水接頭化OVtun等人，Cancer Res. 70:2528-2537, 2010)。
[0246] 可W使用多種雙功能蛋白偶聯(lián)劑制備抗體和細(xì)胞毒性試劑的結(jié)合物，所述偶聯(lián) 劑如 BMPS、EMCS、GMBS、皿VS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、 賴基-EMCS、賴基-GMBS、賴基-KMUS、賴基-MBS、賴基-SIAB、賴基-SMCC和賴基-SMPB W及SVSB(玻巧醜亞胺基-(4-己帰基諷）苯甲酸醋））。例如，可W如Vitetta等 人，Science238:1098(1987)中所述制備當(dāng)麻毒蛋白免疫毒素。本發(fā)明還考慮可W 使用如本領(lǐng)域中所公開的任何適合的方法制備抗體和細(xì)胞毒性試劑的結(jié)合物，例如， Bioconjugate Techniques,第 2 片反，G. T. Hermanson主編，Elsevier, San Francisco, 2008。
[0247] 常規(guī)的抗體-藥物結(jié)合策略已基于涉及Lys殘基的e -氨基或切S殘基的硫 醇基團(tuán)的隨機(jī)結(jié)合化學(xué)，其導(dǎo)致產(chǎn)生了異源結(jié)合物。近期發(fā)展的技術(shù)允許與抗體的位點(diǎn) 特異性結(jié)合，從而導(dǎo)致了均一的藥物加載并且避免了具有改變的抗原結(jié)合或者藥物動 力學(xué)的ADC亞群。該些包括在重鏈和輕鏈上的位置處包含半脫氨酸取代的"硫代單抗 (thiomab)"的工程改造，其提供了反應(yīng)性硫醇基團(tuán)并且不破壞免疫球蛋白折疊和組裝或者 改變抗原結(jié)合（Junu1:ula 等人，J. Immunol. Meth. 332:41-52 (2008) ;Junu1:ula 等人，化1:. Biotechnol. 26:925-932, 2008)。在另一種方法中，通過從末端到砸代半脫氨酸插入重編 碼終止密碼子UGA，將砸代半脫氨酸共翻譯地插入到抗體序列中，從而在存在另一種天然 氨基酸的情況下允許在砸代半脫氨酸的親核砸醇基團(tuán)處進(jìn)行位點(diǎn)特異性共價結(jié)合Olofer 等人，Proc.化1:1. Acad. Sci. USA105:12451-12456 (2008) ;Hofer 等人，Biochemistry 48巧0):12047-12057, 2009)。 陽24引 藥物制劑
[0249] 可W通過適合于要治療的病況的任何途徑施用本發(fā)明所述的抗體或抗體-藥物 結(jié)合物（ADC)。通常，將腸胃外（即輸注）、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、銷內(nèi)和硬膜外施用抗 體或ADC。
[0巧0] 對于治療癌癥，在一種實(shí)施方式中，通過靜脈內(nèi)輸注施用所述抗體或抗體-藥物 結(jié)合物。通過輸注施用的劑量在每次劑量約1 U g/m2至約IOOOOy g/m2的范圍內(nèi)，通常每 周一次劑量，總計1、2、3或4次劑量。作為另外一種選擇，所述劑量范圍為約1 y g/m2至約 1000 y g/m2,約 1 y g/m2 至約 800 y g/m2,約 1 y g/m2 至約 600 y g/m2,約 1 y g/m2 至約 400 y g/ m2,約 10 至約 500 y g/m2,約 10 y g/m2 至約 300 y g/m2,約 10 y g/m2 至約 200g/m2 和約 1 y g/ m2至約200 y g/m2。所述劑量可W每天施用一次，每周施用一次，每周施用多次但小于每天 施用一次，每月施用多次但小于每天施用一次，每月施用多次但小于每周施用一次，每月施 用一次或間歇施用W緩解或減輕疾病癥狀。可W在任何公開的間隔繼續(xù)施用，直至待治療 的腫瘤或癌癥癥狀緩解。在實(shí)現(xiàn)癥狀緩解或減輕后，可W繼續(xù)施用，其中通過該繼續(xù)的施用 延長了該種緩解或減輕。
[0巧1] 在一個方面，本發(fā)明還提供了藥物制劑，其包含至少一種本發(fā)明的抗CD98抗體和 /或其至少一種免疫結(jié)合物和/或至少一種本發(fā)明的抗CD98抗體-藥物結(jié)合物。在一些實(shí) 施方式中，藥物制劑包含1)抗CD98抗體和/或抗CD98抗體-藥物結(jié)合物和/或其免疫結(jié) 合物，和2)可藥用載體。在一些實(shí)施方式中，藥物制劑包含1)抗CD98抗體和/或其免疫 結(jié)合物，和任選地，2)至少一種其他治療劑。
[0巧2] 通過將具有所需純度的抗體或抗體-藥物結(jié)合物與任選的生理學(xué)可用的載體、賦 形劑或穩(wěn)定劑化emington'S Pharmaceutical Sciences,第 16 版，Osol, A.主編（1980)) 混合制備了用于儲存的水溶液形式或凍干形式或其他干燥形式的包含本發(fā)明的抗體或免 疫結(jié)合物或者本發(fā)明的抗體-藥物結(jié)合物的藥物制劑。本文的制劑還可W包含對待治療 的具體適應(yīng)癥所必需的不止一種活性化合物，優(yōu)選地，彼此不會不利地影響的具有補(bǔ)充活 性的那些。例如，除了抗CD98抗體之外，可W期望在一種制劑中包含其他抗體，例如，結(jié)合 CD98多膚上不同表位的第二抗CD98抗體，或針對影響特定癌癥生長的一些其他祀標(biāo)，如生 長因子的抗體。作為另外一種選擇或者另外，所述組合物還可W包括化療劑、細(xì)胞毒性試 齊U、細(xì)胞因子、生長抑制劑、抗激素劑和/或也臟保護(hù)劑。該些分子W對預(yù)定用途有效的量 適合地W組合存在。
[0253] 本發(fā)明的抗體或免疫結(jié)合物可W配制成任何適合于遞送至祀標(biāo)細(xì)胞/組 織的形式，例如，作為微膠囊或巨乳液化emington' S Pharmaceutical Sciences, 第 16 版，Osol, A.主編（1980) ;Park 等人，Molecules 10:146-161 (2005); Malik 等人，Qirr. Drug. Deliv. 4:141-151(2007));作為緩釋制齊0 (Putney and Burke,化1:腳6 Biotechnol. 16:153-157, (1998))或者在脂質(zhì)體中（Maclean 等人，Int. J. Oncol. 11:235-332 (1997) ;Kontermann, Qirr. Opin. Mol. Hier. 8:39-45(2006))。 。巧4] 治巧方法
[0255] 本發(fā)明的抗體或免疫結(jié)合物可W在（例如）體外、離體和體內(nèi)治療方法中使用。在 一個方面，本發(fā)明提供了體內(nèi)或體外抑制細(xì)胞生長或增殖的方法，所述方法包括將細(xì)胞在 允許免疫結(jié)合物結(jié)合至CD98的條件下暴露于抗CD98抗體或其免疫結(jié)合物。"抑制細(xì)胞生長 或增殖"表示將細(xì)胞的生長或增殖降低至少10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、 90%、95%或100%，并且包括引起細(xì)胞死亡。在某些實(shí)施方式中，所述細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞。在 某些實(shí)施方式中，所述細(xì)胞是膀脫腫瘤、乳腺腫瘤、結(jié)腸腫瘤、直腸腫瘤、胃腫瘤、食道腫瘤、 肺腫瘤、喉腫瘤、腎腫瘤、口腔腫瘤、卵巢腫瘤或前列腺腫瘤細(xì)胞，或者是肉瘤、黑素瘤、神經(jīng) 膠質(zhì)瘤、淋己瘤或白血病細(xì)胞。
[0256] 在一個方面，本發(fā)明的抗體或免疫結(jié)合物用于治療或防止細(xì)胞增殖病癥，如癌癥。 在某些實(shí)施方式中，細(xì)胞增殖病癥與CD98提高的表達(dá)和/或活性有關(guān)。例如，在某些實(shí)施 方式中，所述細(xì)胞增殖病癥與癌細(xì)胞表面上的CD98的提高的表達(dá)有關(guān)。通過本發(fā)明的抗體 或免疫結(jié)合物治療的細(xì)胞增殖病癥的實(shí)例包括（但不限于）膀脫癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸 癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、腎癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神經(jīng)膠 質(zhì)瘤、淋己瘤或白血病，或者任何該些癌癥的轉(zhuǎn)移癌。
[0257] 在一個方面，本發(fā)明提供了治療細(xì)胞增殖病癥的方法，其包括向個體施用有效量 的抗CD98抗體或其免疫結(jié)合物。在某些實(shí)施方式中，用于治療細(xì)胞增殖病癥的方法包括向 個體施用有效量的藥物制劑，所述藥物制劑包含抗CD98抗體或抗CD98免疫結(jié)合物，和任選 地至少一種其他治療劑，如W下提供的那些。在一種實(shí)施方式中，抗CD98抗體或免疫結(jié)合 物可W通過將所述抗體或免疫結(jié)合物與CD98接觸W形成抗體或免疫結(jié)合物-抗原復(fù)合物 來用于祀向癌細(xì)胞上的CD98,從而免疫結(jié)合物結(jié)合的細(xì)胞毒性劑進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)部。在一種 實(shí)施方式中，結(jié)合的抗體或免疫結(jié)合物內(nèi)化至表達(dá)CD98的癌細(xì)胞中。
[0巧引出于治療目的，可W將抗CD98抗體或免疫結(jié)合物施用于人。此外，可W將抗CD98 抗體或免疫結(jié)合物施用于表達(dá)CD98的非人哺乳動物，并且出于獸醫(yī)目的或者作為人疾病 的動物模型抗體與所述非人哺乳動物交叉反應(yīng)（例如，靈長類、豬、大鼠或小鼠）。對于后 者，該些動物模型可W用于評價本發(fā)明的抗體或免疫結(jié)合物的治療效力（例如，測試施用 劑量和時間過程）。
[0259] 本發(fā)明的抗體或免疫結(jié)合物可W在療法中單獨(dú)使用或者與其他組合物結(jié)合使用。 例如，本發(fā)明的抗體或免疫結(jié)合物可W與至少一種其他治療劑和/或佐劑共施用。在某些 實(shí)施方式中，其他治療劑是細(xì)胞毒性劑、化療劑或生長抑制劑。在一些實(shí)施方式中，化療劑 是試劑或試劑組合，如焼化劑（例如，苯達(dá)莫司汀鹽酸鹽、環(huán)磯醜胺或異環(huán)磯醜胺）、核巧類 似物（例如，氣達(dá)拉濱、阿糖胞巧或吉西他濱）、皮質(zhì)類固醇（例如，潑尼松、潑尼松龍或甲 潑尼龍）、抗有絲分裂劑（例如，紫杉醇、多西他賽或長春瑞濱）、長春花生物堿（例如，長春 新堿或依巧泊巧）、局部異構(gòu)酶抑制劑（例如，伊立替康）、抗生素（例如，意環(huán)霉素或多柔 比星）、笛類似物（例如，順笛或卡笛）、治療性抗體（例如，利妥昔單抗）或者試劑的組合 (例如，CHOP或CVP)，其中所述組合療法在癌癥的治療中有用。在一些實(shí)施方式中，其他化 合物是除抗CD98抗體之外的治療性抗體（例如，利妥昔單抗）。
[0260] 上述該些組合療法包括混合施用（其中兩種或更多種治療劑包含在相同或單獨(dú) 的制劑中）和單獨(dú)施用，在該種情況下，本發(fā)明的抗體或免疫結(jié)合物的施用可W在其他治 療劑和/或佐劑的施用之前、同時和/或之后發(fā)生。本發(fā)明的抗體或免疫結(jié)合物還可W與 其他治療方案組合使用，所述其他治療方案無限制地包括放射療法和/或骨髓和周圍血液 移植。
[0261] 可W通過任何適合的方法施用本發(fā)明的抗體或免疫結(jié)合物（和任何其他治療劑 或佐劑），其包括腸胃外、皮下、腹膜內(nèi)、肺內(nèi)和鼻內(nèi)施化并且如果對于局部治療需要，還包 括損害內(nèi)施用。腸胃外輸注包括肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下施用。另外，所述抗體 或免疫結(jié)合物適合地通過脈沖輸注施用，具體地使用劑量降低的抗體或免疫結(jié)合物。部分 基于所述施用是短暫還是長期的，劑量施用可W通過任何適合的途徑，例如通過注射，如靜 脈內(nèi)或皮下注射。
[0262] 本發(fā)明的抗體或免疫結(jié)合物將W按照優(yōu)良醫(yī)療實(shí)踐的方式配制，劑量分配和施 用。出于在該背景下的考慮，因素包括要治療的具體病癥、要治療的具體哺乳動物，個體患 者的臨床情況，造成病癥的原因、試劑遞送位點(diǎn)、施用方法、施用時間表和開業(yè)醫(yī)生已知的 其他因素。所述抗體或免疫結(jié)合物不需要，但是任選地與目前用于預(yù)防或治療所討論的病 癥的一種或多種試劑一起配制。該些其他試劑的有效量取決于所述制劑中存在的抗體或免 疫結(jié)合物的量，病癥或治療類型W及W上所討論的其他因素。該些通常W相同的劑量并通 過如本文所述的施用途徑，或者本文所述的約1至99 %的劑量，或者W經(jīng)驗(yàn)/臨床確定適合 的任何劑量和通過任何途徑來使用。
[0263] 為了預(yù)防或治療疾病，本發(fā)明的抗體或免疫結(jié)合物適當(dāng)?shù)膭┝浚ó?dāng)單獨(dú)使用或與 一種或多種其他額外的治療劑，如化療劑組合使用時）將取決于要治療的疾病類型、抗體 或免疫結(jié)合物的類型、疾病的嚴(yán)重程度和過程、所述抗體或免疫結(jié)合物是出于預(yù)防還是治 療目的施用，上述療法、患者的病史W及對所述抗體或免疫結(jié)合物的反應(yīng)和主治醫(yī)師的判 斷。所述抗體或免疫結(jié)合物一次或在一系列治療中適合地施用于患者。根據(jù)疾病的類型和 嚴(yán)重性，無論是（例如）通過一次或多次單獨(dú)施用還是通過連續(xù)輸注，約Iy g/kg至IOOmg/ kg(例如，0. lmg/kg-20mg/kg)的抗體或免疫結(jié)合物可W是用于施用于患者的初始候選劑 量。根據(jù)上述因素，一個典型的日劑量可W在約IygAg至lOOmg/kg或W上的范圍內(nèi)。對 于在幾天或更長時間內(nèi)的反復(fù)施用，根據(jù)情況，所述治療通常將持續(xù)直至發(fā)生所需的疾病 癥狀抑制。所述抗體或免疫結(jié)合物的一個示例性劑量將在約0. 〇5mg/kg至約lOmg/kg的范 圍內(nèi)。因此，可W向患者施用一個或多個劑量的約0. 5mg/kg、2. 0mg/kg、4. Omg/kg或IOmg/ kg(或它們的任意組合）的抗體或免疫結(jié)合物。該些劑量可W間歇施用，例如，每周或每H 周（例如，從而所述患者接受約2至約20,或者例如，約6次劑量的所述抗體或免疫結(jié)合 物）?？蒞施用初始較高的負(fù)荷劑量，然后是一個或多個較低的劑量。示例性劑量施用方案 包括施用約4mg/kg的初始負(fù)荷劑量，然后是約2mg/kg抗體的每周維持劑量。然而，其他劑 量方案可W是有用的。通過常規(guī)技術(shù)和測定，容易地監(jiān)控了該療法的發(fā)展。 陽264] i金斷方法巧檢測方法
[0265] 在一個方面，本發(fā)明的抗CD98抗體和免疫結(jié)合物對于檢測生物樣品中CD98的存 在性是有用的。如本文所使用的，術(shù)語"檢測"包括定量或定性檢測。在某些實(shí)施方式中， 生物樣品包括細(xì)胞或組織。在某些實(shí)施方式中，該些組織包括相對于其他組織，W較高水平 表達(dá)CD98的正常和/或癌性組織，例如，膀脫癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、食道癌、肺 癌、喉癌、腎癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋己瘤或白血 病，或者任何該些癌癥的轉(zhuǎn)移癌。
[0266] 在一個方面，本發(fā)明提供了檢測生物樣品中CD98的存在性的方法。在某些實(shí)施方 式中，所述方法包括在允許抗CD98抗體與CD98結(jié)合的條件下將所述生物樣品與抗CD98抗 體接觸，并檢測抗CD98抗體和CD98之間是否形成復(fù)合物。
[0267] 在一個方面，本發(fā)明提供了診斷與CD98表達(dá)升高有關(guān)的病癥的方法。在某些實(shí)施 方式中，所述方法包括將測試細(xì)胞與抗CD98抗體接觸；通過檢測抗CD98抗體與CD98的結(jié) 合確定測試細(xì)胞的CD98表達(dá)水平（定量或定性）；和將測試細(xì)胞的CD98表達(dá)水平與對照 細(xì)胞（例如，與測試細(xì)胞相同組織來源的正常細(xì)胞或者與該正常細(xì)胞相當(dāng)?shù)乃奖磉_(dá)CD98 的細(xì)胞）的CD98表達(dá)水平相比較，其中與對照細(xì)胞相比，測試細(xì)胞較高水平的CD98表達(dá)表 明存在與CD98表達(dá)升高有關(guān)的病癥。在某些實(shí)施方式中，如與正常細(xì)胞相比，提高的表達(dá) 對應(yīng)于腫瘤細(xì)胞表面上較高密度的CD98表達(dá)。在某些實(shí)施方式中，測試細(xì)胞得自懷疑患有 與CD98的表達(dá)升高有關(guān)的病癥的個體。在某些實(shí)施方式中，所述病癥是細(xì)胞增殖病癥，女口 癌癥或腫瘤。可W使用本發(fā)明的抗體確診的示例性細(xì)胞增殖病癥包括膀脫癌、乳腺癌、結(jié)腸 癌、直腸癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、腎癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、 神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋己瘤或白血病，或者任何該些癌癥的轉(zhuǎn)移癌。
[026引在某些實(shí)施方式中，如W上所述的那些，診斷或檢測方法包括檢測抗CD98抗體與 細(xì)胞表面上表達(dá)的CD98或者與得自在其表面上表達(dá)CD98的細(xì)胞的膜制備中的CD98的結(jié) 合。在某些實(shí)施方式中，所述方法包括在允許抗CD98抗體與CD98結(jié)合的條件下將細(xì)胞與 抗CD98抗體接觸，并檢測抗CD98抗體和細(xì)胞表面上的CD98之間是否形成復(fù)合物。用于檢 測抗CD98抗體與細(xì)胞表面上表達(dá)的CD98的結(jié)合的示例性測定是"FACS"測定。
[0269] 某些其他方法可W用于檢測抗CD98抗體與CD98的結(jié)合。該些方法包括（但不限 于）在本領(lǐng)域中熟知的抗原-結(jié)合測定，如免疫印跡、放射免疫測定、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附 測定）、"夾也"免疫測定、免疫沉淀測定、英光免疫測定、蛋白A免疫測定和免疫組織化學(xué) 煙C)。
[0270] 在某些實(shí)施方式中，標(biāo)記了抗CD98抗體。標(biāo)記包括（但不限于）直接檢測的標(biāo)記 或部分（如英光、發(fā)色、電子密度、化學(xué)發(fā)光和放射性標(biāo)記），W及（例如）通過酶促反應(yīng)或 分子間相互作用間接檢測的部分，如酶或配體。示例性標(biāo)記包括但不限于放射性同位素 3中、 1吃、1251、巧和"4、英光團(tuán)如稀±馨合物或英光素及其衍生物、羅丹明及其衍生物、丹醜、傘 形麗、英光素酶，例如，英光蟲英光素酶和細(xì)菌英光素酶（美國專利No. 4737456)、蠻光素、 2, 3-二氨二氮雜蔡二麗、辣根過氧化酶（HRP)、堿性磯酸酶、目-半乳糖巧酶、葡糖淀粉酶、 溶菌酶、糖氧化酶，例如，葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磯酸脫氨酶、雜環(huán)氧化 酶如尿酸酶和黃嘿嶺氧化酶，其與使用過氧化氨氧化染料前體的酶結(jié)合，如HRP、乳過氧化 物酶或微過氧化酶、生物素/抗生物素蛋白、自旋標(biāo)記物、瞻菌體標(biāo)記物、穩(wěn)定的自由基等。
[0271] 在某些實(shí)施方式中，將抗CD98抗體固定在不溶性基質(zhì)上。固定化需要將抗CD98抗 體與溶液中保持游離的任何CD98分離。該通常伴隨著在測定程序前使抗CD98抗體不溶， 如通過吸附至不溶于水的基質(zhì)或表面炬ennich等人，U. S. 3720760)，或通過共價偶聯(lián)（例 女口，使用戊二酵交聯(lián)），或通過（例如）免疫沉淀在抗CD98抗體和CD98之間形成復(fù)合物后 使抗CD98抗體不溶。
[0272] 可W使用本發(fā)明的免疫結(jié)合物代替抗CD98抗體或者除抗CD98抗體之外使用本發(fā) 明的免疫結(jié)合物來進(jìn)行診斷或檢測的任何上述實(shí)施方式。
[0273] 遞定
[0274] 可W通過本領(lǐng)域中已知的多種測定來鑒定本發(fā)明的抗CD98抗體和免疫結(jié)合物的 物理/化學(xué)性質(zhì)和/或生物活性。 。的引 活巧測定
[0276] 在一個方面，提供了鑒別具有生物活性的抗CD98抗體或其免疫結(jié)合物的測定。生 物活性可W包括（例如）抑制細(xì)胞生長或增殖的能力（例如，"細(xì)胞殺死"活性），或誘導(dǎo)細(xì) 胞死亡的能力，包括程序性細(xì)胞死亡（細(xì)胞調(diào)亡）。還提供了體內(nèi)和/或體外具有該種生物 活性的抗體或免疫結(jié)合物。
[0277] 在某些實(shí)施方式中，測試了抗CD98抗體或其免疫結(jié)合物體外抑制細(xì)胞生長或增 殖的能力。細(xì)胞生長或增殖的抑制測定在本領(lǐng)域中是熟知的。通過本文所述的"細(xì)胞殺死" 測定舉例說明的細(xì)胞增殖的某些測定測量了細(xì)胞存活力。一個該種測定是CellTiter-Glo? 發(fā)光細(xì)胞存活力測定，其可商購自Promega(Madison, WI)。該測定基于所存在的ATP(它 是代謝活性細(xì)胞的指示）的定量確定了培養(yǎng)中活細(xì)胞的數(shù)目。參見Crouch等人（1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88，美國專利 No. 6602677。所述測定可 W 在 96 或 384 孔形 式中進(jìn)行，使其能夠進(jìn)行自動高通量篩選（HT巧。參見化ee等人（1995)Anticancer Drugs6:398-404。
[027引細(xì)胞增殖的另一種測定是"MTT"測定，它是測量3-(4, 5-二甲基喔 哇-2-基）-2,5-二苯四哇漠化物通過線粒體還原酶氧化為甲潑的比色測定。像 CellTiter-Glo?測定一樣，該測定顯示了細(xì)胞培養(yǎng)中存在的代謝活性細(xì)胞的數(shù)目。參 見，例如，Mosmann (1983) J. Immunol. Meth. 65:55-63 和化ang 等人（2005) Cancer Res.65:3877-3882。
[0279] 在一個方面，測試了抗CD98抗體誘導(dǎo)細(xì)胞體外死亡的能力。誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的測定 在本領(lǐng)域中是熟知的。在一些實(shí)施方式中，該些測定測量（例如）膜完整性的損失，如通過 楓化丙巧（PI)、臺盼藍(lán)（參見Moore等人（1995)切totechnology, 17:1-11)或7AAD的吸 收所指示的。在示例性PI吸收測定中，細(xì)胞在杜爾貝科改良的伊格爾培養(yǎng)基值-MEM)中 培養(yǎng)；補(bǔ)充有10%熱失活的FBS(Hyclone)和2mM k谷氨醜胺的漢姆氏F-12巧0:50)。因 此，所述測定是在沒有補(bǔ)體和免疫效應(yīng)細(xì)胞的情況下進(jìn)行的。細(xì)胞W 3X 1〇6/皿的密度在 100X20mm培養(yǎng)皿中接種并使其附著過夜。除去培養(yǎng)基并僅用新鮮培養(yǎng)基或含有不同濃度 的抗體或免疫結(jié)合物的培養(yǎng)基置換。將細(xì)胞培育3天的時間段。處理后，用PBS清洗單層 并通過膜酶消化分離。然后，W 120化pm將細(xì)胞在4C離也5分鐘，將顆粒再息浮于3ml冷 Ca"結(jié)合緩沖液（lOmM 化pes，pH7. 4，140mM NaCl，2. 5mM CaCl2)并等分到 35mm 蓋有濾網(wǎng) (strainer-capped)的12X75mm管中（每管1ml，每個處理組3管）W除去細(xì)胞團(tuán)塊。然 后，向管中加入PI (10 y g/ml)。使用FACSCAN?流式細(xì)胞儀和FACSCONVERT?CellQuest軟 件炬ecton Dickinson)分析樣品。因此，鑒別了如通過PI吸收所確定的誘導(dǎo)統(tǒng)計學(xué)顯著 水平的細(xì)胞死亡的抗體或免疫結(jié)合物。
[0280] 在一個方面，測試了抗CD98抗體或免疫結(jié)合物體外誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡（程序性細(xì)胞死 亡）的能力。誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡的抗體或免疫結(jié)合物的示例性測定是膜聯(lián)蛋白結(jié)合測定，例如， 如化ang等人中所述炬ioTechniques 23:525-531,1997)。誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡的抗體或免疫結(jié) 合物的另一個示例性測定是檢測基因組DNA的核小體間降解的組蛋白DNA ELISA比色測 定?？蒞使用（例如）細(xì)胞死亡檢測化ISA試劑盒（Roche,化Io Alto, CA)進(jìn)行該種測定。
[0281] 在任何上述體外測定中使用的細(xì)胞包括天然表達(dá)CD98或已工程改造表達(dá)CD98的 細(xì)胞或細(xì)胞系。該些細(xì)胞包括相對于相同組織來源的正常細(xì)胞過表達(dá)CD98的腫瘤細(xì)胞。該 些細(xì)胞還包括表達(dá)CD98的細(xì)胞系（包括腫瘤細(xì)胞系）和不正常表達(dá)CD98但用編碼CD98 的核酸轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系。
[0282] 在一個方面，測試了抗CD98抗體或其免疫結(jié)合物體內(nèi)抑制細(xì)胞生長或增殖的能 力。在某些實(shí)施方式中，測試了抗CD98抗體或其免疫結(jié)合物抑制腫瘤體內(nèi)生長的能力。體 內(nèi)模型系統(tǒng)，如異種移植模型可W用于該些測試。在示例性異種移植系統(tǒng)中，將人腫瘤細(xì)胞 引入到適當(dāng)免疫受損的非人動物，例如SCID小鼠中。將本發(fā)明的抗體或免疫結(jié)合物施用于 動物。測量了抗體或免疫結(jié)合物抑制或降低腫瘤生長的能力。在上述異種移植系統(tǒng)的某些 實(shí)施方式中，人腫瘤細(xì)胞是來自人患者的腫瘤細(xì)胞。用于制備異種移植模型的該些細(xì)胞無 限制地包括表達(dá)外源CD98的細(xì)胞和天然表達(dá)CD98的細(xì)胞。在某些實(shí)施方式中，通過皮下 注射或者通過移植到適合位點(diǎn)（如乳房脂肪墊）將人腫瘤細(xì)胞引入到適當(dāng)免疫受損的非人 動物中。 陽28引 結(jié)合測定巧巧他測定
[0284] 在一個方面，測試了抗CD98抗體的抗原結(jié)合活性。例如，在某些實(shí)施方式中，測試 了抗CD98抗體結(jié)合至在細(xì)胞表面上表達(dá)的外源或內(nèi)源CD98的能力。FACS測定可W用于該 些測試。
[0285] 可W基于它們所識別的表位將一組抗CD98的單克隆抗體分組，該方法稱為表位 框并。通常使用競爭測定進(jìn)行表位框并，它評價了在存在另一種抗體的情況下抗體結(jié)合至 抗原的能力。在示例性競爭測定中，在包含結(jié)合至CD98的第一標(biāo)記的抗體和測試與所述第 一抗體競爭結(jié)合至CD98的能力的第二未標(biāo)記抗體的溶液中培育固定化CD98。所述第二抗 體可W存在于雜交瘤上清液中。作為對照，在包含所述第一標(biāo)記的抗體但不包含所述第二 未標(biāo)記抗體的溶液中培育固定化CD98。在允許所述第一抗體與CD98結(jié)合的情況下培育后， 除去過量未結(jié)合的抗體，并且測量與固定化CD98有關(guān)的標(biāo)記物的量。如果在測試樣品中相 對于對照樣品與固定化CD98有關(guān)的標(biāo)記物的量顯著降低，那么它表明所述第二抗體與所 述第一抗體競爭結(jié)合至CD98。在某些實(shí)施方式中，固定化CD98存在于細(xì)胞表面上或者在得 自在其表面上表達(dá)CD98的細(xì)胞的膜制備中。
[0286] 表位框并的高通量方法也是本領(lǐng)域中已知的。參見，例如，Jia等人，J. Immunol. Methods 2004, 288(1-2) :91-98,其描述了用于單克隆抗體鑒定的多路競爭性抗體框并的 方法；和 Miller 等人，J. Tmmunol. Methods 2011, 365 (1-2) : 118-25,其描述了通過多路配 對測定的鼠單克隆抗體的表位框并。
[0287] 表位定位
[028引"表位定位"是鑒別抗體在其祀標(biāo)蛋白抗原上的結(jié)合位點(diǎn)或表位的方法。抗體表位 可W是線性表位或構(gòu)象表位。線性表位是由蛋白質(zhì)中氨基酸的連續(xù)序列形成的。構(gòu)象表位 是由蛋白質(zhì)序列中間斷的氨基酸形成的，但是當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)折疊成其立體結(jié)構(gòu)時匯合在一起。
[0289] 用于定位祀標(biāo)蛋白抗原上抗體表位的多種方法在本領(lǐng)域中是已知的。該些包括突 變法、膚掃描法、展示法、涉及質(zhì)譜的方法和結(jié)構(gòu)確定。
[0290] 定點(diǎn)突變法涉及祀標(biāo)定點(diǎn)突變，其中通過沿蛋白序列系統(tǒng)引入取代，然后確定每 個取代對抗體結(jié)合的影響鑒別了關(guān)鍵氨基酸。該可W通過如化nnin曲am和Wells (1989) Science 244:1081-1085所述的"丙氨酸掃描突變"或人CD98中氨基酸殘基點(diǎn)突變的一些 其他形式來進(jìn)行。然而，突變研究還可W顯示對CD98的整體立體結(jié)構(gòu)是關(guān)鍵的但不直接參 與抗體-抗原接觸的氨基酸殘基，并因此其他方法對確認(rèn)使用該方法確定的功能性表位可 W是必需的。
[0291] 鳥槍突變定位利用祀標(biāo)基因廣泛的質(zhì)粒-突變文庫，其中文庫中每個克隆具有獨(dú) 特的氨基酸突變并且整個文庫覆蓋了祀標(biāo)蛋白中的每一個氨基酸。將構(gòu)成突變文庫的克隆 分別在微孔板中布置，在活哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)，并測試與所關(guān)也的抗體的免疫反應(yīng)性。通 過反應(yīng)性的損失鑒別了對抗體表位關(guān)鍵的氨基酸，然后在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)上定位W顯示表位。 通過自動分析，可W在數(shù)天至數(shù)周內(nèi)獲得新的表位圖。由于它使用了哺乳動物細(xì)胞內(nèi)蛋白 質(zhì)的天然結(jié)構(gòu)，因此所述技術(shù)允許線性和構(gòu)象表位結(jié)構(gòu)兩者在復(fù)雜蛋白質(zhì)上繪圖（Paes等 人，J. Am. Qiem. Soc. 131(20):6952-6954(2009) ;Banik and Doranz, Genetic !Engineering and Biotechnology News 3 (2):25-28 (2010))〇
[0292] 還可W使用膚掃描法確定抗CD98抗體結(jié)合的表位。在膚掃描中，測試了來自祀標(biāo) 蛋白質(zhì)CD98的重疊片段的短膚序列文庫結(jié)合所關(guān)也的抗體的能力。如"pepscan"法（WO 84/03564 ;W0 93/09872)中所述，合成了所述膚，并且例如使用化ISA或BIAC0RE，或者通過 任何多種固相篩選方法化eineke等人，Qirr. Opin. Biotechnol. 12:59-64, 2001)在芯片上 篩選所述膚的結(jié)合。該些膚篩選法可能不能檢測一些間斷的功能性表位，即涉及沿CD98多 膚鏈的一級序列不鄰接的氨基酸殘基的功能性表位。
[0293] 最近發(fā)展的被稱為化IPS (支架上的膚化學(xué)鍵）的技術(shù)可W用于定位構(gòu)象表位。所 述膚的松散端（loose end)固定至合成支架，從而所述支架膚可能能夠采用與完整蛋白中 相應(yīng)序列相同的立體結(jié)構(gòu)。CLIPS技術(shù)用于將線性膚固定至環(huán)狀結(jié)構(gòu)（"單環(huán)"形式），并 且將不同部分的蛋白結(jié)合位點(diǎn)集合在一起廣雙環(huán)"、"H環(huán)"等形式），從而產(chǎn)生了可W測 定抗體結(jié)合的構(gòu)象表位（美國專利No. 7972993)。
[0294] 還可W使用展示技術(shù)定位通過本發(fā)明的抗體結(jié)合的表位，所述展示技術(shù)包括，例 女口，如上所述的瞻菌體展示、微生物展示和核糖體/mRNA展示。在該些方法中，在瞻菌體或 細(xì)胞表面上展示了膚片段文庫。然后，使用選擇性結(jié)合測定，通過篩選抗該些片段的HlAb定 位表位。已發(fā)展了一些計算工具，其使得能夠基于使用瞻菌體展示所獲得的線性親合力選 擇的膚來預(yù)測構(gòu)象表位（Mayrose等人，Bioinformatics 23:3244-3246, 2007)。方法還可 用于通過瞻菌體展示檢測構(gòu)象表位。微生物展示系統(tǒng)還可W用于在細(xì)胞表面上表達(dá)正確折 疊的抗原片段W用于鑒別構(gòu)象表位（Coc虹an等人，J. Immunol. Meth. 287:147-158, 2004 ; Roclcberg 等人，化1:山"6 MethodsS: 1039-1045, 2008)。
[0295] 涉及蛋白水解和質(zhì)譜的方法也可W用于確定抗體表位炬aerga-化tiz等 人，Protein Sci. 2002化ne ;11 (6) :1300-1308)。在限制性蛋白水解中，在存在和不存在 所述抗體的情況下通過不同的蛋白酶切割抗原，并且通過質(zhì)譜法鑒別片段。表位是一旦 結(jié)合抗體則成為保護(hù)不受蛋白水解的抗原區(qū)域（Suckau等人，Proc.化tl. Acad. Sci. USA 87:9848-9852, 1990)。其他基于蛋白水解的方法包括，例如，選擇性化學(xué)修飾（Fiedler等 人，Bioconjugate ChemistiT 1998, 9(2):236-234, 1998)、表位切除（Van de Water 等 人，Clin. Immunol. Immunopathol. 1997, 85 (3) : 229-235, 1997)和最近發(fā)展的氨-気化/D) 交換法（Flanagan, N., Genetic Engineering and Biotechnology NewsS (2) :25-28, 2010)。
[0296] 還可W通過結(jié)構(gòu)方法確定本發(fā)明的抗體結(jié)合的表位，如晶體X射線結(jié)構(gòu)確定（例 女口，WO 2005/044853)、分子模型和核磁共振（NMR)光譜學(xué)，其包括當(dāng)游離時和當(dāng)與所關(guān)也 的抗體在復(fù)合物中結(jié)合時，Ik23R中活潑的醜胺氨的H-D交換率的NMR確定狂inn-化Stin 等人，（1992)Biochemist;ry31:11335-11347 ;Zinn-Justin 等人，（1993)Biochemist;ry 32:6884-6891)〇
[0297] 可W通過（例如）抗CD98抗體對結(jié)合至所述表位的篩選，通過用包含含有表位序 列的人CD98片段的膚使動物免疫，或者通過使用瞻菌體展示選擇結(jié)合至表位序列的抗體 可W獲得結(jié)合至與本發(fā)明的抗體相同的表位的其他抗體?？蒞預(yù)期結(jié)合至相同功能性表位 的抗體顯示出類似的生物活性，如阻斷CD98的生物活性，和可W通過抗體功能性測定確認(rèn) 的該些活性。
[029引其他活性測定
[0299] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗CD98抗體是抑制CD98生物活性的枯抗劑抗體。可 W測定本發(fā)明的抗CD98抗體W確定它們是否抑制CD98的生物活性，例如，與輕鏈的結(jié)合。 為了確定本發(fā)明的CD98抗體是否抑制與輕鏈的結(jié)合，根據(jù)Kim等人，Biochim. Bio地ys. Acta 1565:112-122, 2002中所述的方法，測定了 CD98抗體抑制癌細(xì)胞系中氨基酸吸收的 能力。
[0300] 在一個方面，還可W通過一系列測定來鑒定純化的抗CD98抗體，所述測定包括 (但不限于）N末端測序、氨基酸分析、非變性尺寸排阻高壓液相色譜法（HPLC)、質(zhì)譜法、離 子交換色譜法和木瓜蛋白酶消化。
[0301] 在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明考慮了具有一些但非全部效應(yīng)子功能的改變的抗體， 該使其成為在其中抗體的體內(nèi)半衰期是重要的但某些效應(yīng)因功能（如補(bǔ)體和ADCC)是 不必需的或有害的多種應(yīng)用中所期望的候選。在某些實(shí)施方式中，測量了抗體的化活 性W確保僅維持了所需的性質(zhì)?？蒞引入體外和/或體內(nèi)細(xì)胞毒性測定W確認(rèn)CDC和/ 或ADCC活性的降低/消除。例如，可W引入化受體（FcR)結(jié)合測定W確保所述抗體缺 少化Y R結(jié)合（因此很可能缺少ADCC活性），但是保留了化化結(jié)合性能。在美國專利 No. 5500362或者5821337中描述了評價所關(guān)也的分子的ADCC活性的體外測試的實(shí)例。 對于該些測定有用的效應(yīng)細(xì)胞包括周圍血單核細(xì)胞（PBMC)和自然殺傷（NK)細(xì)胞。作為 另外一種選擇或另外，可在體內(nèi)評價所關(guān)也的分子的ADCC活性，例如，在動物模型中，女口 Clynes等人，PNAS (USA) 95:652-656 (1998)中所公開的。還可W進(jìn)行Clq結(jié)合測定W確認(rèn) 抗體不能結(jié)合Clq，并因此缺少CDC活性。為了評價補(bǔ)體激活，可W進(jìn)行CDC測定，例如，女口 Gazzano-Santoro 等人，J. Immunol. Methods202:163(1996)中所述的。還可 W使用本領(lǐng)域 中已知的方法進(jìn)行化化結(jié)合和體內(nèi)清除/半衰期確定。
[0302] 盡管出于使理解清楚的目的已經(jīng)通過例證說明和實(shí)例詳細(xì)說明了上述發(fā)明，但所 述說明和實(shí)例不應(yīng)視為對本發(fā)明范圍的限制。在本文中引用的所有專利和科學(xué)文獻(xiàn)的公開 內(nèi)容明確地W其全部內(nèi)容作為參考并入。
[0303] 實(shí)施例
[0304] W下是本發(fā)明的方法和組合物的實(shí)例。應(yīng)理解考慮W上所提供的一般說明，可W 實(shí)踐多種其他實(shí)施方式。
[0305] 實(shí)施例1 ;急性髓性白血病（AML)腫瘤細(xì)胞表面上CD98的鑒定
[0306] 總計16個原發(fā)性AML樣品得自化ed化tchinson癌癥研究中也（FHCRC)。分析 了 11個來自健康供體的樣品。為了監(jiān)測各個AML樣品的質(zhì)量，進(jìn)行了 AML胚細(xì)胞的蘇木素 伊紅染色。僅分析了含有至少75%腫瘤細(xì)胞的樣品。另外，對得自Billings診所或佛羅 里達(dá)大學(xué)扣niversity of Florida)的23個原發(fā)性慢性淋己細(xì)胞性白血病（CLL)樣品和 得自合作人組織網(wǎng)絡(luò)（Cooperative Human Tissue Network)或國家疾病研究交流會（the ^tional Disease Research Interchange, NDRI)的 27 個原發(fā)性結(jié)腸直腸癌（CRC) W及 22個正常相鄰結(jié)腸對照樣品進(jìn)行分析。優(yōu)化樣品處理W最大程度維持樣品分離期間的細(xì)胞 存活力。確定AML、aL和CRC樣品的最佳標(biāo)記時間，從而使得能夠有效標(biāo)記而不會損害細(xì) 胞完整性。
[0307] 將表面標(biāo)記的抗原譜（sTAg)用于在16個核也AML樣品、5個骨髓單核細(xì)胞炬MMC) 對照和6個周圍血單核細(xì)胞（PBMC)對照樣品、20個核也化L樣品、27個CRC樣品和22個 正常相鄰結(jié)腸樣品中鑒別細(xì)胞上表面蛋白集合并定量繪制表面蛋白集合譜。化學(xué)標(biāo)記與完 整原發(fā)瘤細(xì)胞的AML腫瘤細(xì)胞膜有關(guān)的蛋白胞外域，然后使用固相親合樹脂通過色譜法富 集標(biāo)記的蛋白質(zhì)。如下所述，在質(zhì)譜分析前將洗脫的蛋白在-8(TC儲存。
[030引鑒別通過STAg法富集的蛋白并使用高分辨率鳥槍法液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（M巧定 量。將結(jié)合了線性離子阱的靈敏性和旋轉(zhuǎn)orbitrap質(zhì)量分析器所提供的高分辨率和質(zhì) 量準(zhǔn)確度的混合化errnoFisher LTQ-Orbitrap Velos 質(zhì)譜儀（Olsen 等人，Mol. Cell Proteomics 8:2759-2769,2009)偶聯(lián)至納流（nanoflow)液相色譜裝置，并用于基于鳥槍 法的自下而上的蛋白質(zhì)組學(xué)，W確定AML細(xì)胞表面富集部份中蛋白質(zhì)的同一性和定量豐 度測量（Yates等人，Annu. Rev. Biomed. E；ng. 11:49-79, 2009)。通過在線納流液相色譜， 根據(jù)疏水性分離來自富集的表面蛋白的膜蛋白酶消化液，同時通過質(zhì)譜儀動態(tài)記錄膚的 質(zhì)量和斷裂方式。為了確定膚和蛋白質(zhì)的同一性，使用在快速處理Sorcerer2平臺上執(zhí)行 的 SEQ肥ST 算法處理原始 MS 數(shù)據(jù)（Lundgren 等人，Qirr. Protoc. Bioinformatics,第 13 章；13. 3單元，2009)，W確定實(shí)驗(yàn)斷裂方式和人蛋白質(zhì)組在娃片上所確定的那些之間的 最佳擬合匹配。使用 P 巧 tideProphet (Keller 等人，Anal. Qiem. 74:5383-5392, 2002)和 ProteinPro 地 et (Nesvizhskii 等人，Anal. Qiem. 75:4646-4658, 2003)軟件工具統(tǒng)計地驗(yàn) 證所得的匹配W確保最低可能的錯誤發(fā)現(xiàn)率（抑時并因此在候選混合物中包含僅大致鑒 別的蛋白質(zhì)。
[0309] 使用光譜計數(shù)法確定了 STAg樣品中所鑒別的蛋白質(zhì)的相對定量水平（Neilson等 人，Proteomics 11:535-553, 2011)。光譜計數(shù)基于經(jīng)驗(yàn)性實(shí)證；與來自每種蛋白質(zhì)的膚 有關(guān)的分配（陽性鑒別）光譜的數(shù)目與原始混合物中蛋白質(zhì)的相對豐度密切相關(guān)（Liu等 人，Anal.化em. 76:4193-4201，2004)。所鑒別的膚的光譜計數(shù)得自蛋白質(zhì)組學(xué)分析軟件 平臺，其包括ScafTold(蛋白質(zhì)組學(xué)軟件）和ProteoIQ(NuSep)，它們顯示、分選并過濾了 SEQ肥ST搜索的質(zhì)譜數(shù)據(jù)結(jié)果。將原始光譜計數(shù)轉(zhuǎn)化為百分比歸一化的光譜豐度因子（％ NAS巧值狂ybailov等人，J. Proteome Res. 5:2339-2347,2006) W說明蛋白質(zhì)長度差異和 樣本量的差異。使用定量FACS作為基于STAg質(zhì)譜法的原發(fā)性腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)的蛋白質(zhì) 組學(xué)譜的獨(dú)立、外部確認(rèn)性量度，將所選的單克隆抗體用于驗(yàn)證蛋白質(zhì)組學(xué)測量。
[0310] 使用sTAg，將具有SEQ ID NO ;1所示的氨基酸序列的異二聚體II型跨膜糖蛋白 CD98鑒別為在AML、化L和CRC腫瘤細(xì)胞表面上W高密度存在。如圖1所示，使用sTAg，在 16個原發(fā)性AML樣品中的7個中鑒別出了 CD98，其平均％ NSAF為0. 11，在20個原發(fā)性化L 樣品中的20個中鑒別出了 CD98,其平均％ NSAF為0. 15。在5個骨髓單核細(xì)胞炬MMC)樣 品中的5個和6個周圍血單核細(xì)胞（PBMC)樣品中的5個中鑒別出了 CD98,其平均％ NSAF 分別為0.05和0.06。另外，在27個原發(fā)性CRC樣品中的11個中鑒別出了 CD98,其平均％ NSAF為0. 10,而僅在1個正常相鄰的結(jié)腸樣品中鑒別出了 CD98,其平均％ NSAF小于0. 01。 基于該分析，相對于相應(yīng)的正常對照，CD98大量富集在患者來源的AML、化L和CRC原發(fā)性 腫瘤樣品的顯著部分上。
[0311] 實(shí)施例2 ;腫瘤中CD98的鑒別
[0312] 使用抗CD98單克隆抗體8-34B (參見實(shí)施例3)和同型對照抗體皿-121進(jìn)行抗體 滴定實(shí)驗(yàn)W建立將導(dǎo)致最小背景和最大信號檢測的稀釋。使用基于蒸汽的抗原修復(fù)（P冊.0 的巧樣酸緩沖液），對福爾馬林固定，石蠟包埋（FFP巧的組織或?qū)π迈r的冷凍組織W 1:50、 1:100、1:200和1:400進(jìn)行連續(xù)稀釋。由Igenica提供并且由LifeSpan制備冷凍的對照細(xì) 胞系（F244和巧44-巧和福爾馬林固定的對照細(xì)胞系（F244、RM和巧44-P)。選擇1:20和 1:50的8-34B的稀釋進(jìn)行福爾馬林固定，石蠟包埋組織的研究，而選擇1:400稀釋的8-34B 進(jìn)行新鮮冷凍組織的研究。
[0313] 主要檢測系統(tǒng)由載體抗小鼠第二抗體炬A-2000)和載體ABC-AP試劑盒（AK-5000) W及用于產(chǎn)生紫紅色沉淀的載體紅色基底試劑盒（SK-5100)構(gòu)成。還用陽性對照抗體（針 對CD31和波形蛋白）對組織染色，W確保保持了組織抗原并且它對免疫組織化學(xué)分析是可 使用的。僅選擇對CD31和波形蛋白染色是陽性的組織進(jìn)行剩下的研究。
[0314] 在15例惡性黑色素瘤中的10例W及18例肺癌中的4例中，W 1 ;20和1 ;50稀釋 的抗體8-34B對福爾馬林固定，石蠟包埋的組織顯示出陽性染色。另外，W 1:400稀釋，抗 體8-34B在6例冷凍肺癌樣品中的6例中W及2例冷凍黑素瘤樣品中的2例中顯示出陽性 染色。
[0315] 表1 ;肺癌和黑素瘤中陽性CD98染色的頻率
[0316]

【權(quán)利要求】
1. 一種特異性結(jié)合至人CD98的分離的抗體或其功能性片段，其中，所述抗體或功能性 片段結(jié)合至包含人CD98的殘基A377、D397、1398、G400和A401的表位。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的抗體或功能性片段，其中，所述表位還包含人CD98的 殘基D374和L378。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的分離的抗體或功能性片段，其中，所述表位還包含人CD98的 殘基P379和G380。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的分離的抗體或功能性片段，其中，所述表位還包含人CD98的 殘基F395和P396。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的分離的抗體或功能性片段，其中，所述表位還包含人CD98的 殘基 Q381、P382 和 P399。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的抗體或功能性片段，其中，所述表位還包含選自由人 CD98 的 D374、L378、P379、G380、Q381、P382、F395、P396 和 P399 組成的組中的任意一個或 多個其他殘基。
7. -種特異性結(jié)合至人CD98的分離的抗體或其功能性片段，其中，所述抗體結(jié)合至包 含人CD98的殘基P379、G380、D397和1398的表位。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的分離的抗體或功能性片段，其中，所述表位還包含人CD98的 殘基F395和P396。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的分離的抗體或功能性片段，其中，所述表位還包含人CD98的 殘基 Q381、P382、P399、G400 和 A401。
10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的分離的抗體或功能性片段，其中，所述表位還包含人CD98的 殘基 D374、A377 和 L378。
11. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的分離的抗體或功能性片段，其中，所述表位還包含選自由人 CD98 的 D374、A377、L378、Q381、P382、F395、P396、P399、G400 和 A401 組成的組中的任意一 個或多個其他殘基。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的抗體或功能性片段，其中，所述抗體或功能性片段結(jié) 合至包含人 CD98 的殘基 D374、A377、L378、P379、G380、Q381、P382、F395、P396、D397、I398、 P399、G400 和 A401 的表位。
13. -種特異性結(jié)合至人CD98的分離的抗體或其功能性片段，其中，所述抗體或功能 性片段結(jié)合至包含在人⑶98的氨基酸殘基369-405內(nèi)的表位。
14. 一種特異性結(jié)合至人CD98的分離的抗體或其功能性片段，其中，所述抗體或功能 性片段結(jié)合至由人CD98的氨基酸殘基369-405組成的表位。
15. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或功能性片段，其中，所述抗體是單克隆抗體。
16. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的抗體或功能性片段，其中，所述單克隆抗體是人源化抗體、 人抗體或嵌合抗體。
17. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或功能性片段，其中，所述片段是Fab、F(ab'）2、Fv或 Sfv片段。
18. -種分離的抗體或其功能性片段，其包含來自具有選自SEQ ID NO :8和SEQ ID NO: 12的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的全部三個重鏈互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)，和/或來自具有選 自SEQ ID N0:10和SEQ ID N0:14的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的全部三個輕鏈⑶R。
19. 一種分離的抗體或其功能性片段，其包含來自具有選自SEQ ID NO :8和SEQ ID NO: 12的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的全部三個重鏈CDR，和來自具有選自SEQ ID NO :10和 SEQ ID NO :14的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的全部三個輕鏈⑶R。
20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的抗體，其中，所述抗體包含選自SEQ ID NO :8和SEQ ID NO: 12的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。
21. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的抗體，其中，所述抗體包含由SEQ ID NO :10和SEQ ID NO: 14組成的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。
22. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的抗體，其中，所述抗體還包含由SEQ ID NO :10和SEQ ID NO :14組成的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。
23. 根據(jù)權(quán)利要求22所述的抗體，其中，所述抗體包含SEQ ID NO :8的重鏈可變結(jié)構(gòu) 域序列和SEQ ID NO : 10的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。
24. 根據(jù)權(quán)利要求22所述的抗體，其中，所述抗體包含SEQ ID NO: 12的重鏈可變結(jié)構(gòu) 域序列和SEQ ID NO: 14的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。
25. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的人源化抗體，其中，所述抗體包含選自SEQ ID NO :22和SEQ ID NO :23的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。
26. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的人源化抗體，其中，所述抗體包含選自SEQ ID NO :20和SEQ ID NO :21的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。
27. 根據(jù)權(quán)利要求25所述的人源化抗體，還包含選自SEQ ID N0:20和SEQ ID N0:21 的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。
28. 根據(jù)權(quán)利要求27所述的人源化抗體，其中，所述抗體包含SEQ ID NO :20的輕鏈可 變結(jié)構(gòu)域序列和SEQ ID NO :22的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。
29. 根據(jù)權(quán)利要求27所述的人源化抗體，其中，所述抗體包含SEQ ID NO :21的輕鏈可 變結(jié)構(gòu)域序列和SEQ ID NO :23的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。
30. 根據(jù)權(quán)利要求27所述的人源化抗體，其中，所述抗體包含SEQ ID NO :21的輕鏈可 變結(jié)構(gòu)域序列和SEQ ID NO :22的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。
31. 結(jié)合至與權(quán)利要求30所述的抗體基本相同的表位的抗體。
32. 結(jié)合至與權(quán)利要求1-31中任一項(xiàng)所述的抗體基本相同的表位的結(jié)合劑。
33. 根據(jù)權(quán)利要求32所述的結(jié)合劑，其中，所述結(jié)合劑抑制表達(dá)CD98的腫瘤的生長。
34. 根據(jù)權(quán)利要求32所述的結(jié)合劑，其為抗體或其功能性片段。
35. 根據(jù)權(quán)利要求32所述的結(jié)合劑，它是anticalin、adnectin、親和體、DARPin、 fynomer、affitin、affilin、高親和性多聚體、扭結(jié)菌素肽或者工程設(shè)計的Kunitz型抑制劑。
36. -種能夠結(jié)合至CD98的結(jié)合劑，其中，根據(jù)權(quán)利要求1-31中任一項(xiàng)所述的抗體在 競爭性結(jié)合測定中置換所述結(jié)合劑。
37. -種能夠結(jié)合至CD98的結(jié)合劑，其中，所述結(jié)合劑在競爭性結(jié)合測定中置換根據(jù) 權(quán)利要求1-31中任一項(xiàng)所述的抗體。
38. 根據(jù)權(quán)利要求36所述的結(jié)合劑，其中，所述結(jié)合劑是抗體或其功能性片段。
39. 根據(jù)權(quán)利要求37所述的結(jié)合劑，其中，所述結(jié)合劑是抗體或其功能性片段。
40. 根據(jù)權(quán)利要求1_31、34和38-39中任一項(xiàng)所述的抗體或功能性片段，其中，所述抗 體或片段結(jié)合至細(xì)胞毒性試劑。
41. 根據(jù)權(quán)利要求40所述的抗體或功能性片段，其中，所述細(xì)胞毒性試劑選自化療劑、 藥物、生長抑制劑、毒素或放射性同位素。
42. 根據(jù)權(quán)利要求1-31、34和38-39中任一項(xiàng)所述的抗體或功能性片段，其中，所述抗 體或片段結(jié)合至可檢測的標(biāo)志物。
43. 根據(jù)權(quán)利要求40所述的抗體或功能性片段，其中，所述可檢測的標(biāo)志物選自放射 性同位素、金屬螯合劑、酶、熒光化合物、生物發(fā)光化合物和化學(xué)發(fā)光化合物。
44. 產(chǎn)生根據(jù)權(quán)利要求15所述的單克隆抗體的轉(zhuǎn)基因動物。
45. 產(chǎn)生根據(jù)權(quán)利要求15所述的單克隆抗體的雜交瘤。
46. 包含編碼根據(jù)權(quán)利要求1-31、34和38-39中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段的多核苷 酸的載體。
47. 包含根據(jù)權(quán)利要求1-31、34和38-43中任一項(xiàng)所述的抗體或功能性片段和可藥用 載體的藥物組合物。
48. -種抑制表達(dá)⑶98的癌細(xì)胞生長的方法，所述方法包括將所述細(xì)胞暴露于根據(jù)權(quán) 利要求1-31、34和38-43中任一項(xiàng)所述的抗體或功能性片段。
49. 根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中，所述癌細(xì)胞來自于選自膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸 癌、直腸癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、腎癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、 神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋巴瘤或白血病，或者任何這些癌癥的轉(zhuǎn)移癌的癌癥。
50. 根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，其中，所述癌細(xì)胞來自于急性髓細(xì)胞性白血病。
51. -種用于治療受試者中癌癥的方法，包括向所述受試者施用根據(jù)權(quán)利要求47所述 的藥物組合物。
52. 根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中，所述癌癥選自膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸 癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、腎癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神經(jīng)膠 質(zhì)瘤、淋巴瘤或白血病，或者任何這些癌癥的轉(zhuǎn)移癌。
53. 根據(jù)權(quán)利要求52所述的方法，其中，所述癌癥是急性髓細(xì)胞性白血病。
54. 根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中，所述受試者是復(fù)發(fā)性或難治性急性髓細(xì)胞性 白血病。
55. 根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中，將所述抗體或功能性片段與一種或多種化學(xué) 治療化合物組合向所述受試者施用，其中所述化學(xué)治療化合物選自苯達(dá)莫司汀鹽酸鹽、環(huán) 磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、氟達(dá)拉濱、阿糖胞苷、吉西他濱、潑尼松、潑尼松龍、甲潑尼龍、紫杉醇、 多西他賽、長春瑞濱、長春新堿、依托泊苷、伊立替康、蒽環(huán)霉素、多柔比星、順鉬、卡鉬和利 妥昔單抗。
56. 根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中，所述癌癥與細(xì)胞表面上CD98的表達(dá)增加有關(guān)。
57. -種檢測生物樣品中CD98的存在性的方法，包括在允許所述抗體與CD98結(jié)合的條 件下將所述生物樣品與根據(jù)權(quán)利要求1_31、34和38-43中任一項(xiàng)所述的抗體接觸，并檢測 所述抗體和CD98之間是否形成復(fù)合物。
58. 根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中，所述生物樣品來自于患有或者懷疑患有癌癥 的哺乳動物，所述癌癥選自膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、腎 癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋巴瘤或白血病，或者任何 這些癌癥的轉(zhuǎn)移癌。
59. -種診斷與CD98表達(dá)增加有關(guān)的癌癥的方法，包括將測試細(xì)胞與根據(jù)權(quán)利要求 1-31、34和38-43中任一項(xiàng)所述的抗體接觸；通過檢測所述抗體與⑶98的結(jié)合確定⑶98的 表達(dá)水平；和將所述測試細(xì)胞中的⑶98表達(dá)水平與對照細(xì)胞中的⑶98表達(dá)水平相比較，其 中與對照細(xì)胞相比，所述測試細(xì)胞中較高的CD98的表達(dá)水平指示存在與CD98表達(dá)增加有 關(guān)的癌癥。
60. 根據(jù)權(quán)利要求59所述的方法，其中，所述測試細(xì)胞來自于懷疑患有癌癥的患者，所 述癌癥選自膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、腎癌、口腔癌、卵巢 癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋巴瘤或白血病，或者任何這些癌癥的轉(zhuǎn)移 癌。
61. 根據(jù)權(quán)利要求60所述的方法，其中，所述方法包括確定所述測試細(xì)胞表面上CD98 的表達(dá)水平，和將所述測試細(xì)胞表面上CD98的表達(dá)水平與對照細(xì)胞表面上CD98的表達(dá)水 平相比較。
62. 根據(jù)權(quán)利要求61所述的方法，其中，所述測試細(xì)胞是癌細(xì)胞，并且所述對照細(xì)胞是 相同組織類型的正常細(xì)胞。
63. 權(quán)利要求1-31、34和38-43中任一項(xiàng)所述的抗體或功能性片段在藥物制備中的用 途，其中，所述藥用于在抑制表達(dá)CD98的癌細(xì)胞的生長的方法中。
64. 根據(jù)權(quán)利要求1-31、34和38-43中任一項(xiàng)所述的抗體或功能性片段，用于抑制表達(dá) ⑶98的癌細(xì)胞的生長。
65. 權(quán)利要求47所述的藥物組合物在藥物制備中的用途，其中，所述藥物用于治療受 試者中的癌癥的方法中。
66. -種包含根據(jù)權(quán)利要求1-31、34和38-43中任一項(xiàng)所述的抗體或功能性片段和可 藥用載體的藥物組合物，用于治療受試者中的癌癥。
67. 權(quán)利要求1-31、34和38-43中任一項(xiàng)所述的抗體或功能性片段在藥物制備中的用 途，其中，所述藥物用于檢測生物樣品中CD98的存在性的方法中。
68. 根據(jù)權(quán)利要求1-31、34和38-43中任一項(xiàng)所述的抗體或功能性片段，用于檢測生物 樣品中CD98的存在性的方法中。
69. 權(quán)利要求1-31、34和38-43中任一項(xiàng)所述的抗體或功能性片段在藥物制備中的用 途，其中，所述藥物用于診斷與CD98表達(dá)增加有關(guān)的癌癥的方法中。
70. 根據(jù)權(quán)利要求1_31、34和38-43中任一項(xiàng)所述的抗體或功能性片段，用于診斷與 CD98表達(dá)增加有關(guān)的癌癥的方法中。
【文檔編號】A61P35/00GK104302669SQ201280067876
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2012年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2011年11月23日
【發(fā)明者】約翰·利平科特, 愛德華·泰恩·頓·凡德霍斯特, 約瑟夫·扎克維加, 候昂·特朗 申請人:伊格尼卡生物治療公司