膠原水解物及其用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及膠原水解物及其用于治療和/或預(yù)防脂肪團(tuán)的用途。
【專利說明】膠原水解物及其用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及膠原水解物及其用于治療和/或預(yù)防脂肪團(tuán)的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]脂肪團(tuán)涉及皮膚性質(zhì)的不合需要的改變且在外觀上明顯地在皮膚表面中形成凹陷。受影響的幾乎僅為女性，不過隨著年齡增加，涉及多至80%至98%的女性。脂肪團(tuán)最主要在具有顯著皮下脂肪組織的區(qū)域中，即在臀部、屁股、腹部、大腿和上臂上出現(xiàn)。
[0003]根據(jù)最近的研究，認(rèn)為脂肪團(tuán)的成因是真皮和皮下結(jié)締組織中的特定改變，特別是由連接網(wǎng)狀真皮到位于皮下脂肪組織下的肌肉的膠原纖維形成的隔膜的收縮。這總體上引起皮膚的彈性降低。
[0004]對于脂肪團(tuán)的已知治療特別是包括物理方法，例如淋巴引流、超聲波或真空，不過這些通常并沒有產(chǎn)生成功或至少沒有產(chǎn)生持久的成功。局部使用化妝品例如乳膏或軟膏也沒有能夠?qū)χ緢F(tuán)實現(xiàn)任何病原性治療，因為在該現(xiàn)象中并不直接牽涉表皮的上皮層。
[0005]已知通過口服膠原水解物，可以在人類皮膚的健康方面實現(xiàn)有利的效果(參見V.Zague:“A new view concerning the effects of collagen hydrolysate intake on skinproperties (關(guān)于所攝入膠原水解物對皮膚性質(zhì)的作用的新觀點)”，在Arch.Dermatol.Res.2008(9)479中)。由于合適低分子量膠原肽的吸收能力和皮膚的良好灌注，所以口服 的膠原水解物的積聚在皮膚中以特別大的程度發(fā)生，濃度在攝取之后的約12至24小時的時間內(nèi)處于最大值(參見，M.Watanabe-Kamiyama 等！“Absorption and effectiveness oforally administered low molecularweight collagen hydrolysate in rats (在大鼠中經(jīng)口施用的低分子量膠原水解物的吸收和有效性)”，在J.Agric.Food Chem.2010 (58) 835中)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]在此背景下，本發(fā)明提出病原性治療和/或預(yù)防脂肪團(tuán)的新方法，所述方法包括使用膠原水解物。
[0007]因此，本發(fā)明的一方面涉及作為用于治療和/或預(yù)防脂肪團(tuán)的活性成分的膠原水解物。
[0008]在臨床試驗中也已經(jīng)顯示，在施用膠原水解物之后，皮膚的彈性適度增加。該作用在超過50歲的女性中特別顯著。較大的皮膚彈性使得脂肪團(tuán)的嚴(yán)重性降低。
[0009]另外，多種體外研究已經(jīng)顯示，通過膠原水解物刺激真皮結(jié)締組織的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的合成。通過皮膚細(xì)胞(皮膚成纖維細(xì)胞)形成的這些蛋白質(zhì)包括膠原(特別是I型)、彈性蛋白和蛋白多糖(例如，雙糖鏈蛋白多糖、多官能蛋白聚糖和核心蛋白聚糖)。這些蛋白質(zhì)以足夠量合成，決定著皮膚的細(xì)胞外基質(zhì)的形成和再生，這又是對真皮性質(zhì)例如彈性、回彈性和水分調(diào)控至關(guān)重要的決定性因素。
[0010]在本發(fā)明的上下文中使用的膠原水解物有利地具有相對較低的分子量。優(yōu)選至少90重量％的所述膠原水解物具有小于3，500Da的分子量，更優(yōu)選至少45重量％具有小于l，500Da的分子量。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可以用這種分子量特別低的組分實現(xiàn)更顯著的效果?？梢岳缃柚谀z滲透色譜法，使用由確定的膠原片段制成的校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)，非常精確且可重現(xiàn)地測定所述膠原水解物的分子量分布，其受相關(guān)極限值的影響。
[0011]根據(jù)本發(fā)明使用的膠原水解物的平均分子量(質(zhì)量平均摩爾質(zhì)量Mw)通常在約
I,700Da至約2，300Da范圍內(nèi)。
[0012]在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方式中，所述膠原水解物包含至少四種具有600Da至1，200Da的分子量的特征性肽。膠原水解物含有具有不同鏈長或分子量的肽，這些肽在所述膠原的蛋白質(zhì)鏈分解時出現(xiàn)，其中取決于所述水解物的生產(chǎn)條件，這些肽的分子量分布可能顯著不同。已經(jīng)驚奇地發(fā)現(xiàn)具有上述性質(zhì)的膠原水解物在合成基質(zhì)蛋白質(zhì)方面具有特別有利的作用，即比不含所述特征性肽的膠原水解物顯示出明顯更好的結(jié)果。
[0013]特別是借助于MALDI質(zhì)譜，可以確定所述膠原水解物的特征性肽的存在，其中所述特征性肽在質(zhì)譜上表現(xiàn)為峰。優(yōu)選地，用借助于MALDI測定的質(zhì)譜發(fā)現(xiàn)的分子量分布中，所述至少四種特征性肽具有與其周圍強(qiáng)度相比較至少兩倍、更優(yōu)選至少四倍的強(qiáng)度。
[0014]在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方式中，所述膠原水解物包含620Da至690Da的肽、790Da至860Da的肽、980Da至1，050Da的肽和1，175Da至1，245Da的肽。所述膠原水解物還可以具有1，500Da至3，500Da的特征性肽。
[0015]優(yōu)選地，所述膠原水解物具有12重量％或更高的羥基脯氨酸含量。通過脯氨酸的后轉(zhuǎn)譯羥基化形成的氨 基酸羥基脯氨酸僅出現(xiàn)在膠原中，使得在所述膠原水解物中高比例的羥基脯氨酸為廣泛缺乏的其它結(jié)締組織蛋白(例如，彈性蛋白和蛋白多糖)提供了度量，取決于生產(chǎn)方法，這些結(jié)締組織蛋白的片段也可以以特定量包含在膠原水解物中。
[0016]有利的是，通過明膠的酶促水解生產(chǎn)所述膠原水解物。明膠包括變性的膠原，且借助于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的多種方法從多種動物物種的結(jié)締組織或骨骼獲得。在本發(fā)明的上下文中，作為膠原水解物用原料使用的明膠優(yōu)選從特別是豬或牛的哺乳動物的皮膚中提取，不過也并不排除使用來自家禽的明膠。豬明膠、特別是豬皮明膠特別優(yōu)選地作為原料。
[0017]通常借助于內(nèi)切蛋白酶實施所述明膠的酶促水解且在本發(fā)明的情況下優(yōu)選按次序使用多種內(nèi)切蛋白酶(即，至少兩種不同的內(nèi)切蛋白酶)，由此相應(yīng)地影響所得膠原水解物的氨基酸分布，且增加所述水解物的積極作用。
[0018]根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方式，通過至少兩種具有不同特異性的內(nèi)切蛋白酶的連續(xù)作用生成所述膠原水解物，所述至少兩種內(nèi)切蛋白酶特別是至少兩種不同的金屬蛋白酶和/或絲氨酸蛋白酶，即在特定氨基酸之前或之后分解膠原分子的氨基酸序列的蛋白酶。有利地，所述金屬蛋白酶和/或絲氨酸蛋白酶是如下的酶，該酶來自微生物枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、米曲霉和蜂蜜曲霉。
[0019]借助于選擇合適的內(nèi)切蛋白酶，不僅可以獲得所述膠原水解物的特征性分子量分布，而且可以影響在所述水解物中獲得的肽末端處的氨基酸的類型。在這方面，優(yōu)選例如所述膠原水解物的至少50%的N-端氨基酸為疏水氨基酸，特別是丙氨酸、亮氨酸和異亮氨酸。
[0020]根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方式，所述膠原水解物被提供成腸道施用，特別是口服形式。與局部施用的情況相比，在口服時，經(jīng)血液循環(huán)實現(xiàn)所述膠原水解物向作用部位，即特別是皮膚成纖維細(xì)胞的更有效的傳輸。另外，該施用形式通常對于使用者明顯更容易。
[0021]因為膠原水解物從在食品法規(guī)下批準(zhǔn)的原料中提取，所以其可以在本發(fā)明的上下文中優(yōu)選作為營養(yǎng)增補劑使用，以治療和/或預(yù)防脂肪團(tuán)。這樣的營養(yǎng)增補劑可被確定為“營養(yǎng)品”或“口服美妝品”。
[0022]可以以幾乎任何形式提供所述營養(yǎng)增補劑，所述形式例如為片劑、膠囊、糖衣丸、錠劑、藥袋或凝膠或溶液(例如，在單安瓿中或在飲料中)。
[0023]可選地，所述膠原水解物可以包含在食品或高檔食品項中，例如包含在糖果中或在用于制作飲料的速溶粉中。所述水解物因此可以在沒有另外施力的情況下在正常營養(yǎng)的情況下(作為“功能性食品”)被使用者消耗。在這方面，特別有利的是所述膠原水解物基本沒有味道。
[0024]有利的是,提供約1.5g至5g、優(yōu)選約2g至3g、更優(yōu)選約2.3g至2.7g的所述膠原水解物的每日攝入量。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，通過口服該量的水解物，能夠?qū)崿F(xiàn)顯著的效果，不能通過增加該日劑量而大幅增強(qiáng)該效果。
[0025]在根據(jù)本發(fā)明使用時，所述膠原水解物可以與對健康且特別是對皮膚健康具有有利作用的其它活性成分、尤其與具有抗氧化作用的活性成分組合。這樣的活性成分優(yōu)選選自維生素，特別是維生素C和E，礦物，ω-3脂肪酸，ω-6脂肪酸，ω-9脂肪酸，生物素，葉黃素，番茄紅素，咖啡因，葡糖胺，軟骨素，透明質(zhì)酸，葉酸，氨基酸，泛醌-10，超氧化物歧化酶和得自薔薇果、防臭木或綠茶的植物提取物。
[0026]在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方式中，所述膠原水解物的服用被提供成治療和/或預(yù)防特別是超過50歲的女性且通常是絕經(jīng)后期女性的脂肪團(tuán)。在通常受脂肪團(tuán)嚴(yán)重影響的該年齡組中，如由如下所述的臨床試驗所顯示的，效果特別顯著。
[0027]本發(fā)明還涉及治療和/或預(yù)防患者的脂肪團(tuán)的方法，所述方法包括特別是以口服形式施用膠原水解物至患者。
[0028]已經(jīng)關(guān)于根據(jù)本發(fā)明的用途，特別是在所述膠原水解物的性質(zhì)和施用劑量方面，描述了所述方法的優(yōu)選實施方式。
[0029]本發(fā)明還涉及膠原水解物用于治療和/或預(yù)防如下伸展疤痕的用途，該伸展疤痕處于特別是在孕婦中出現(xiàn)的所謂的妊娠伸展疤痕(妊娠紋)的形式。這些條紋的成因是由皮膚的嚴(yán)重拉伸引起的皮下結(jié)締組織中的細(xì)小撕裂。類似于脂肪團(tuán)，所述撕裂的出現(xiàn)也可以通過在施用膠原水解物的情況下增加皮膚彈性來抵消。
[0030]本發(fā)明的又一方面涉及膠原水解物用于治療和/或預(yù)防由于由褥瘡潰瘍引起的壓力產(chǎn)生的皮膚局部損傷、例如出現(xiàn)褥瘡的用途。這涉及經(jīng)受外部壓力的皮膚，其不利作用可以通過增加皮膚的彈性來減少?！緦＠綀D】

【附圖說明】
[0031]現(xiàn)在將基于以下實施例并參考附圖更詳細(xì)地描述本發(fā)明的這種優(yōu)點和其它優(yōu)點，附圖顯示:
[0032]圖1A至IC:關(guān)于對I型膠原、雙糖鏈蛋白多糖或多功能蛋白聚糖的合成的刺激的圖示；
[0033]圖2Α和圖2Β:關(guān)于在無毛小鼠中皮膚水分增加的圖示；
[0034]圖3:關(guān)于對CE蛋白的合成的刺激的圖示；[0035]圖4A至4C:多種膠原水解物的MALDI質(zhì)譜；及
[0036]圖5A和圖5B:關(guān)于對I型膠原、核心蛋白聚糖和多功能蛋白聚糖的合成的刺激的圖示。
【具體實施方式】
[0037]實施例:
[0038]1.膠原水解物的生成和性質(zhì)
[0039]為了生成用于本發(fā)明用途的膠原水解物，將濃度為20重量％至40重量％的豬皮明膠(A型,200g至250g Bloom)(干燥材料)的水溶液用作原料。通過微生物來源的兩種不同的內(nèi)切蛋白酶在50°C至60°C下連續(xù)作用120分鐘至180分鐘來酶促水解該明膠，其中使用來自枯草芽孢桿菌或來自解淀粉芽孢桿菌的內(nèi)切蛋白酶作為第一酶，且使用來自地衣芽孢桿菌的內(nèi)切蛋白酶作為第二酶。隨后，使所述酶熱失活且將溶液噴霧干燥。
[0040]可以借助于凝膠滲透色譜法使用以下參數(shù)測定所得膠原水解物的分子量分布:
[0041]靜止相:TSK2000SWXL (Tosoh Bioscience GmbH(日本東曹股份有限公司))
[0042]流動相:0.4mol/l 磷酸二氫鈉，ρΗ5.3
[0043]流速:0.5ml/ 分鐘
[0044]校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn):確定的膠原-1型片段(弗賴伯格，F(xiàn)ILK)
[0045]檢測:UV檢測器 Knauer K-2501，在 214nm 下
[0046]該測定產(chǎn)生該膠原水解物(在下文中稱作低分子水解物)的分子量分布，如在下表1中所陳述的。出于比較目的，在表1中，還顯示用相同方法測定的市售膠原水解物的分子量分布(在下文中稱作聞分子水解物):
[0047]表1
[0048]
【權(quán)利要求】
1.膠原水解物，其作為用于治療和/或預(yù)防脂肪團(tuán)的活性成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠原水解物，至少90重量％的所述膠原水解物具有小于3，500Da的分子量，優(yōu)選至少45重量％的所述膠原水解物具有小于1，500Da的分子量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的膠原水解物，所述膠原水解物包含至少四種具有600Da至1，200Da的分子量的特征性肽。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的膠原水解物，其中在借助于MALDI質(zhì)譜發(fā)現(xiàn)的分子量分布中，所述至少四種特征性肽具有與其周圍強(qiáng)度相比至少兩倍、優(yōu)選至少四倍的強(qiáng)度。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中的一項所述的膠原水解物，所述膠原水解物包含620Da至690Da 的肽、790Da 至 860Da 的肽、980Da 至 I, 050Da 的肽和 I, 175Da 至 I, 245Da 的肽。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中的一項所述的膠原水解物，所述膠原水解物還包含具有I, 500Da至3，500Da的分子量的特征性肽。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中的一項所述的膠原水解物，所述膠原水解物具有12重量％或更高的羥基脯氨酸含量。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中的一項所述的膠原水解物，其中通過明膠的酶促水解生產(chǎn)所述膠原水解物。
9.根據(jù)權(quán)利要 求8所述的膠原水解物，所述明膠為豬明膠，特別是豬皮明膠。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的膠原水解物，其中經(jīng)由具有不同特異性的至少兩種內(nèi)切蛋白酶、特別是至少兩種不同金屬蛋白酶和/或絲氨酸蛋白酶的連續(xù)作用生成所述膠原水解物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的膠原水解物，其中所述金屬蛋白酶和/或絲氨酸蛋白酶選自如下的酶，該酶來自微生物枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、米曲霉和蜂蜜曲霉。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求中的一項所述的膠原水解物，其中所述膠原水解物的至少50%的N-端氨基酸為疏水氨基酸，特別是丙氨酸、亮氨酸和異亮氨酸。
13.根據(jù)前述權(quán)利要求中的一項所述的膠原水解物，其中所述膠原水解物被提供成腸道使用、特別是口服。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的膠原水解物，其中所述膠原水解物為營養(yǎng)增補劑且特別是以片劑、膠囊、糖衣丸、錠劑、藥袋、凝膠或溶液的形式存在。
15.根據(jù)權(quán)利要求13或14所述的膠原水解物，其中提供約1.5g至5g、優(yōu)選約2g至3g、更優(yōu)選約2.3g至2.7g的所述膠原水解物的每日攝入量。
16.根據(jù)前述權(quán)利要求中的一項所述的膠原水解物，其中所述膠原水解物與一種或多種另外的活性成分相組合，所述活性成分選自維生素、礦物、ω-3脂肪酸、ω-6脂肪酸、ω-9脂肪酸、生物素、葉黃素、番茄紅素、咖啡因、葡糖胺、軟骨素、透明質(zhì)酸、葉酸、氨基酸、泛醌-10、超氧化物歧化酶和來自薔薇果、防臭木或綠茶的植物提取物。
17.根據(jù)前述權(quán)利要求中的一項所述的膠原水解物，其中所述膠原水解物被提供成施用至超過50歲的女性，特別是絕經(jīng)后期的女性。
18.膠原水解物，其作為用于治療和/或預(yù)防伸展疤痕、特別是懷孕有關(guān)的伸展疤痕的活性成分。
【文檔編號】A61K38/39GK104010697SQ201280058817
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2012年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2011年11月29日
【發(fā)明者】漢斯-烏爾里?！じダ紫? 斯特芬·奧瑟爾, 斯特凡·豪斯曼斯 申請人:格利達(dá)股份公司