用于小體積施用的同種異型選擇的抗體的超濾濃縮的制作方法
【專利摘要】本文公開了高濃度抗體或免疫球蛋白制劑用于以小于3ml、小于2ml或小于1ml的體積而皮下施用、肌肉內(nèi)施用、經(jīng)皮膚施用或其它局部(區(qū)域性)施用的方法、組合物以及用途。優(yōu)選地，所述制劑含有pH為約5.2的高濃度制劑(HCF)緩沖液，所述緩沖液包含磷酸鹽、檸檬酸鹽、聚山梨酯80以及甘露醇。所述制劑更優(yōu)選地包含至少100mg/ml、150mg/ml、200mg/ml、250mg/ml或300mg/ml的抗體。用于制備所述高濃度制劑的方法包括超濾和滲濾以濃縮所述抗體并且將培養(yǎng)基交換成HCF緩沖液。其它實施方案涉及非G1m1(nG1m1)同種異型抗體如G1m3和/或nG1m1,2抗體的用途。與G1m1抗體相比，所述nG1m1抗體顯示出減小的免疫原性。
【專利說明】用于小體積施用的同種異型選擇的抗體的超濾濃縮
[0001]發(fā)明 人:Li Zeng、Rohini Mitra、Edmund A.Rossi> Hans J.Hansen、DavidM.Goldenberg
[0002]相關(guān)申請
[0003]本申請根據(jù)美國法典第35篇第119條(e)款要求2011年5月2日提交的臨時美國專利申請序號61/481，489和2011年7月20日提交的臨時美國專利申請序號61/509，850的權(quán)益。
[0004]序列表
[0005]本申請含有一個序列表，所述序列表已經(jīng)由申請系統(tǒng)(EFS-Web)以ASCII格式提交并且特此以引用的方式整體并入。于2012年4月27日創(chuàng)建的所述ASCII副本命名為IMM332W0.txt并且大小為26，386字節(jié)。
發(fā)明領(lǐng)域
[0006]本發(fā)明涉及免疫球蛋白、抗體和/或抗原結(jié)合抗體片段的穩(wěn)定的、高度濃縮的制劑的組合物和生產(chǎn)方法以及用途。在優(yōu)選的實施方案中，免疫球蛋白、抗體或其片段可以是非特異性的人免疫球蛋白(例如，IVIg);結(jié)合抗原的抗體，如結(jié)合CD22的抗體(例如，依帕珠單抗(epratuzumab))、結(jié)合0)20的抗體(例如，維妥珠單抗(veltuzumab) ；GA101)、結(jié)合⑶74的抗體(例如，米拉珠單抗(miIatuzumab))或結(jié)合HLA-DR的抗體(例如，IMMU-114或hL243)，雖然可以使用對抗其它抗原性靶標(biāo)的抗體。在更優(yōu)選的實施方案中，抗體或其片段的同種異型被選擇為非Glml人同種異型，如Glm3。甚至更優(yōu)選的是nGlml，2無效同種異型?？贵w或其片段可以是裸露的(未綴合的)或可以與至少一種治療劑或診斷劑綴合，所述治療劑或診斷劑不是細(xì)胞毒性劑或放射性核素。濃縮的抗體制劑對各種疾病的治療有用，所述疾病如自身免疫性疾病、免疫失調(diào)疾病、感染性疾病、癌癥(例如，癌瘤、肉瘤、黑素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、淋巴瘤、白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、濾泡性淋巴瘤、彌漫性大B-細(xì)胞淋巴瘤、T-細(xì)胞淋巴瘤或白血病、多發(fā)性骨髓瘤或非霍奇金淋巴瘤)、心血管疾病、神經(jīng)疾病或代謝疾病。在其它的優(yōu)選實施方案中，濃縮的抗體制劑可以通過皮下施用、肌肉內(nèi)施用或經(jīng)皮膚施用來施用，雖然涵蓋其它的施用方式(例如，鞘內(nèi)、腹膜內(nèi)、眼內(nèi)、顱內(nèi)等等)。在最優(yōu)選的實施方案中，抗體或其片段在微酸性的水性緩沖溶液中被濃縮到至少80mg/ml、更優(yōu)選地至少100mg/ml、更優(yōu)選地至少125mg/ml、更優(yōu)選地至少150mg/ml、更優(yōu)選地至少175mg/ml、更優(yōu)選地至少200mg/ml、更優(yōu)選地至少225mg/ml、更優(yōu)選地至少250mg/ml、更優(yōu)選地至少300mg/ml。所述制劑的其它組分可以包括:緩沖劑，如檸檬酸鹽或磷酸鹽；鹽，如氯化鈉；表面活性劑，如聚山梨酯80 ;和/或多元醇，如甘露醇。
[0007]背景
[0008]已經(jīng)提議施用單克隆抗體或其片段用于診斷和/或治療各種各樣的疾病狀態(tài)，如癌癥、感染性疾病、自身免疫或免疫功能障礙疾病、神經(jīng)疾病、心血管疾病以及代謝疾病。(參見，例如 Nadler 等,1980, Cancer Res 40:3147-54 ；Ritz 和 Schlossman, 1982, Blood59:1-11 ；ffaldmann, 2003, Nature Med 9:269-77 ；Ibbotson 等，2003，Am J CardiovascDrugs 3:381-86 ；Domer 等，2009，Nat Rev Rheumatol 5:433-41 ;Pul 等，2011，ExpertOpin Biol Ther 11:343-57)。還具體來說通過皮下注射而使用人免疫球蛋白混合物用于治療肝炎以及通過靜脈內(nèi)輸注用于治療各種自身免疫性疾病(參見，例如Powell 等，2006，Clin Transplant 20:524-25 ；Stiehm, 1997, Pediatr Infect Dis J16:696-707 ;Zandman 等，Clin Rev Allergy Immunol [2011 年 7 月 6 日的印刷前電子出版物];Kaveri 等，2011，Clin Exp Tmmunol 164:2-5)。
[0009]雖然靜脈內(nèi)輸注已經(jīng)是抗體施用的標(biāo)準(zhǔn)方式，但是輸注相關(guān)的反應(yīng)(如皮疹、蕁麻疹、紅斑、瘙癢、低血壓、支氣管痙攣或過敏)可能是嚴(yán)重的并且會明顯限制抗體輸注的速率。(參見，例如 Kang 和 Saif, 2007.J Supportive Oncol 5:451-57 ；Vogel, 2010, ClinJ Oncol Nursingl4:E10-21)o在某種程度上為了解決輸注相關(guān)反應(yīng)的發(fā)生，已經(jīng)提議皮下施用治療性抗體(Lundin 等,2002, Blood 100:768-73 ；Kavanaugh 等,ArthritisRheum，2009，60:976-86 ;Negrea 等，2011，Haematologica96:567-73)。還給出肌肉內(nèi)施用，如對于 IVIg 而言(Marzano 等，2010，Minerva Med 101:373-83 ；PauweIyn等，2010，Transplant Proc42:4399-402 ;Filipponi 等，2010，Dig Liver Dis 42:509-14)。另一種替代方案是經(jīng)皮膚施用(例如，Burton等，2011，Pharm Res 28:31-40 ；ffendorf等，2011，Pharm Res 28:22-30 ;Koutsonanos 等，2009，PLoS One 4:e4773)。雖然輸注部位反應(yīng)可能仍然發(fā)生，但是皮下施用、肌肉內(nèi)施用或經(jīng)皮膚施用將通過避免對長時間的靜脈內(nèi)施用及專用的輸注套房和工作人員的需要而產(chǎn)生減少的醫(yī)療保健成本，并且還可能減少全身性輸注反應(yīng)的發(fā)生(Lundin 等，2002.Blood 100:768-73 ；ffasserman, 2008, PatientPreference and Adherence, 2:163-66 ;Negrea等，2011，Haematologica 96:567-73),以及是對患者更耐受和方便的(包括自我施用的可能性)。因為與皮下施用、肌肉內(nèi)施用或經(jīng)皮膚施用相關(guān)的較低注射體積，所以存在對長期穩(wěn)定的并且可以被皮下施用、肌肉內(nèi)施用或經(jīng)皮膚施用(或通過要求小體積注射液的其它路徑而施用)的更濃縮的抗體或免疫球蛋白制劑的需要。
[0010]概述
`[0011]本發(fā)明涉及治療性免疫球蛋白、單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段的穩(wěn)定的、高度濃縮的制劑的組合物和生產(chǎn)方法以及用途；和用于低體積注射的用途。雖然本領(lǐng)域中已知許多的抗體生產(chǎn)方法并且可以使用這些方法，但優(yōu)選地是將編碼抗體或片段的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染至哺乳動物細(xì)胞系如SpEEE, SpESF或SpESF-X中(參見，例如美國專利號-J, 531，327 ；7，537,930 ;7，608，425 ;以及7，785, 880 ;每一個所述專利的實施例部分以引用的方式并入本文)。更優(yōu)選地，轉(zhuǎn)染和抗體表達(dá)均發(fā)生在無血清的培養(yǎng)基中，以減小生產(chǎn)費用并且去除污染性蛋白質(zhì)源。將抗體產(chǎn)生至細(xì)胞培養(yǎng)基中，用于進(jìn)一步純化。
[0012]在其它的優(yōu)選實施方案中，可以通過連續(xù)色譜法、例如通過親和柱色譜法和離子交換柱色譜法而從細(xì)胞培養(yǎng)基中純化所述抗體。非限制性的實例包括在蛋白質(zhì)A上的親和色譜法、在Q-SEPHAR0SE⑧上的陰離子交換色譜法以及在SP-SEPHAR0SE ?上的陽離子交換色譜法。更優(yōu)選地，使抗體在pH 5的檸檬酸鹽緩沖液中結(jié)合至SP-SEPHAR0SE ?樹脂，并且用含0.15M NaCl的pH 6的檸檬酸鹽緩沖液從柱上洗脫下來。來自SP-SEPHAR0SE ?柱的洗出液可以通過例如用于病毒去除的20nm過濾器來過濾。純化的抗體然后可以例如使用具有50KD MW截止過濾器的AMICON ?超濾單元來滲濾，以便將培養(yǎng)基交換成高濃度制劑緩沖液(HCF緩沖液)并且濃縮抗體用于儲存。在最優(yōu)選的實施方案中，HCF緩沖溶液可以包含磷酸鹽緩沖液(pH 5.2)、氯化鈉、聚山梨酯80、檸檬酸鹽以及甘露醇。聚山梨酯80用來減少蛋白質(zhì)聚集，而甘露醇使抗體在水性培養(yǎng)基中穩(wěn)定。滲濾將抗體濃縮至優(yōu)選地至少80mg/ml、更優(yōu)選地至少100mg/ml、更優(yōu)選地至少150mg/ml、更優(yōu)選地至少200mg/ml、更優(yōu)選地至少300mg/ml的最終濃度。濃縮的抗體展現(xiàn)出少的聚集或沒有聚集，并且優(yōu)選地在2°C至8°C下呈液體形式穩(wěn)定至少10個月。在甚至更優(yōu)選的實施方案中，聚山梨酯80在超濾步驟之后被添加至濃縮的抗體中。
[0013]穩(wěn)定的、高度濃縮的抗體具有用于制備用于優(yōu)選地通過皮下施用、經(jīng)皮膚施用或肌肉內(nèi)施用而向受試者施用的藥劑的用途。然而，熟練的技術(shù)人員將認(rèn)識到本領(lǐng)域中已知的其它施用形式，如可以使用靜脈內(nèi)施用、腹膜內(nèi)施用、心室內(nèi)施用、眼內(nèi)施用和/或鞘內(nèi)施用。
[0014]有用的抗體可以結(jié)合本領(lǐng)域中已知的任何疾病相關(guān)的抗原。在疾病狀態(tài)例如是癌癥的情況下，許多由腫瘤細(xì)胞表達(dá)或以另外的方式與腫瘤細(xì)胞相關(guān)的抗原是本領(lǐng)域中已知的，所述抗原包括但不限于:碳酸酐酶IX、α-胎蛋白、0-輔肌動蛋白-4^3、對么33抗體有特異性的抗原、ART-4、Β7、Ba 733、BAGE, BrE3-抗原、CA125、CAMEL、CAP-1、CASP-8/m、CCCL19、CCCL21、CD1、CDla、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CDl 1A, CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD29、CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD45、CD46、CD52、CD54、CD55、CD59、CD64、CD66a_e、CD67、CD70、CD70L、CD74、CD79a、CD80、CD83、CD95、CD126、CD132、CD133、CD138、CD147、CD154、CDC27、CDK_4/m、CDKN2A、CXCR4、CXCR7、CXCL12、HIF-1 α、結(jié)腸特異性抗原 p (CSAp)、CEA (CEACAM5)、CEACAM6、c_met、DAM、EGFR、EGFRvII1、EGP-U EGP-2、ELF2-M、Ep-CAM、Flt_l、Flt_3、葉酸鹽受體、G250 抗原、GAGE、gplOO、GROB,HLA-DR、HMl.24、人絨毛膜促性腺激素(HCG)和它的亞基、HER2/neu、HMGB-1、缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1)、HSP70-2M、HST-2、la、IGF-`1R、IFN-Y、IFN-α、IFN-β、IL-2、IL-4R、IL-6R、IL-13R、IL-15R、IL-17R、IL-18R、IL-6,IL-8,IL-12,IL-15,IL-17,IL-18,IL-23,IL-25、胰島素樣生長因子-1 (IGF-1)、KC4-抗原、KS-1-抗原、KS1-4、Le-Y, LDR/FUT、巨噬細(xì)胞游走抑制因子(MIF)、MAGE, MAGE-3、MART-1、MART-2、NY-ESO-U TRAG-3、mCRP、MCP-1、MIP-1A、MIP-1B、MIF、MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5、MUC13、MUC16、MUM-1/2, MUM-3、NCA66、NCA95、NCA90、胰腺癌粘蛋白、胎盤生長因子、p53、PLAGL2、前列腺酸性磷酸酶、PSA、PRAME, PSMA,P1GF、ILGF、ILGF-1R、IL-6、IL-25、RS5、RANTES、T101、SAGE、S100、存活素、存活素 _2B、TAC、TAG-72、腱生蛋白、TRAIL 受體、TNF- α、Tn 抗原、Thomson-Friedenreich 抗原、腫瘤壞死抗原、TR0P-2、VEGFR、ED-B纖連蛋白、WT-1、17-1A-抗原、補體因子C3、補體因子C3a、補體因子C3b、補體因子C5a、補體因子C5、血管生成標(biāo)記物、bcl_2、bcl_6、Kras、cMET、致癌基因標(biāo)記物以及致癌基因產(chǎn)物(參見，例如Sensi等，Clin Cancer Res 2006，12:5023-32 ；Parmiani 等，J Tmmunol 2007， 178:1975-79 ;Novellino 等，Cancer Tmmunol Immunother2005，54:187-207)。優(yōu)選地，抗體結(jié)合 CD74、CD20、CD22 或 HLA-DR0
[0015]可以使用的示例性抗體包括但不限于:hRl (抗IGF-1R，2010年3月12日提交的美國專利申請序號12/722,645)、hPAM4(抗粘蛋白，美國專利號7，282，567)、hA20 (抗CD20，美國專利號 7，251，164)、hA19 (抗 CD19，美國專利號 7，109，304)、hIMMU31 (抗 AFP，美國專利號7, 300，655)、hLLl (抗CD74，美國專利號7，312，318)、hLL2 (抗CD22，美國專利號 7，074，403)、hMu-9(抗 CSAp，美國專利號 7，387，773)、hL243 (抗 HLA-DR，美國專利號7,612，180)、hMN-14(抗 CEACAM5，美國專利號 6,676,924)、hMN-15 (抗 CEACAM6，美國專利號 7，541，440)、hRS7(抗 EGP-1，美國專利號 7，238，785)、hMN_3 (抗 CEACAM6，美國專利號7，541，440)、Abl24和Ab125 (抗CXCR4，美國專利號7，138，496)，每一個引用的專利或申請的實施例部分以引用的方式并入本文。更優(yōu)選地，抗體是hA20 (維妥珠單抗)、hLL2 (依帕珠單抗)、hLLl (米拉珠單抗)或hL243 (IMMU-114)。
[0016]有用的替代抗體包括但不限于:阿昔單抗(abciximab)(抗糖蛋白IIb/IIIa);阿侖單抗(alemtuzumab)(抗 CD52);貝伐單抗(bevacizumab)(抗 VEGF)；西妥昔單抗(cetuximab)(抗EGFR);吉妥珠單抗(gemtuzumab)(抗CD33);替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan)(抗 CD2O);帕尼單抗(panitumumab)(抗 EGFR)；利妥昔單抗(rituximab)(抗0)20);托西莫單抗(tositumomab)(抗0)20);曲妥珠單抗(trastuzumab)(抗 ErbB2);阿巴伏單抗(abagovomab)(抗 CA-125);阿德木單抗(adecatumumab)(抗 EpCAM) ；atIizumab (抗 IL-6 受體)；貝那利珠單抗(benralizumab)(抗 CD125) ;CC49(抗 TAG-72) ;AB-PG1-XG1_026 (抗 PSMA,美國專利申請 11/983，372，保藏為 ATCC PTA-4405 和 PTA-4406) ；D2/B(抗 PSMA，WO 2009/130575);托珠單抗(tociIizumab)(抗 IL-6 受體)；巴利昔單抗(basiIiximab)(抗 0)25);達(dá)利珠單抗(daclizumab)(抗 0)25)；依法利珠單抗(efalizumab)(抗 QHla) ；GA101 (抗CD20 ；Glycart Roche);莫羅莫那-CD3 (muromonab_CD3)(抗 CD3 受體)；那他珠單抗(natal izumab)(抗 α 4 整聯(lián)蛋白);奧馬珠單抗(omalizumab)(抗 IgE)；抗 TNF- α抗體，如 CDP571 (Ofei 等，2011，Diabetes45:881_85)、MTNFA1、M2TNFA1、M3TNFA1、M3TNFAB1、M302B、M303 (Thermo Scientific, Rockford, IL);英夫利昔單抗(infliximab)(Centocor, Malvern, PA);塞妥珠單抗(certo I izumab pegol) (UCB, Brussels, Belgium)；抗 CD40L (UCB, Brussels, Belgium);阿達(dá)木單抗(adalimumab) (Abbott, Abbott Park, IL)；貝利單抗(Benlysta) (Human Genome Sciences);用于治療阿爾茨海默病的抗體,如Alz50 (Ksiezak-Reding等，1987，J Biol Chem 263:7943-47)、羅氏單抗(gantenerumab)、索拉珠單抗(solanezumab)以及英夫利昔單抗(infliximab);抗纖維蛋白抗體,像59D8、T2Gls、MHl ;抗111￥ 抗體，如 P4/D10 (美國專利申請序號 ll/745，692)、Ab 75,Ab 76,Ab 77 (Paulik等，1999，Biochem Pharmacol 58:1781-90)；以及對抗病原體的抗體，如CR6261 (抗流行性感冒)、艾韋單抗(exbivirumab)(抗肝炎B)、泛維珠單抗(felvizumab)(抗呼吸道合胞體病毒)、夫瑞韋如(foravirumab)(抗狂犬病病毒)、莫維珠單抗(motavizumab)(抗呼吸道合胞體病毒)、帕利珠單抗(Palivizumab)(抗呼吸道合胞體病毒)、帕諾庫單抗(panobacumab)(抗假單胞菌)、瑞非韋魯(rafivirumab)(抗狂犬病病毒)、瑞加韋單抗(regavirumab)(抗巨細(xì)胞病毒)、司韋單抗(sevirumab)(抗巨細(xì)胞病毒)、tivirumab (抗肝炎B)以及烏珠單抗(urtoxazumab)(抗大腸桿菌(E.coli))。
[0017]有用的抗體或抗原結(jié)合片段可以是嵌合的、人源化的或人的。對親本鼠抗體而言使用嵌合抗體是優(yōu)選的，因為它們擁有人抗體恒定區(qū)序列并且因此不會引起像鼠抗體那樣強(qiáng)烈的人抗小鼠抗體(HAMA)反應(yīng)。使用人源化的抗體是甚至更優(yōu)選的，以便進(jìn)一步減小誘導(dǎo)HAMA反應(yīng)的可能性。用于通過用相對應(yīng)的人抗體構(gòu)架區(qū)和恒定區(qū)序列替換鼠構(gòu)架區(qū)和恒定區(qū)序列來進(jìn)行鼠抗體的人源化的技術(shù)是本領(lǐng)域中眾所周知的并且已經(jīng)被應(yīng)用于眾多的鼠抗癌癥抗體中。抗體人源化還可以涉及用相對應(yīng)的來自親本鼠構(gòu)架區(qū)序列的殘基置換一個或多個人構(gòu)架氨基酸殘基。如下所討論，用于生產(chǎn)人抗體的技術(shù)也是眾所周知的。
[0018]治療性制劑可以包含抗體片段，如F (ab' ) 2、Fab、scFv、Fv或使用所述F (ab' )2、Fab,scFv的部分或全部輕鏈和重鏈的融合蛋白?？贵w還可以是多價的、或多價且多特異性的。抗體可以包括IgGl、IgG2a、IgG3或IgG4的人恒定區(qū)。
[0019]在更優(yōu)選的實施方案中，抗體的同種異型可選擇為使宿主對所施用的抗體的免疫原性反應(yīng)最小化，如下所更詳細(xì)地討論。優(yōu)選的同種異型是非Glml同種異型(nGlml)，如Glm3、Glm3, 1、Glm3, 2或Glm3，I, 2。非Glml同種異型對抗體免疫反應(yīng)性減少而言是優(yōu)選的。出人意料地，未發(fā)現(xiàn)濃縮的nGlml抗體的重復(fù)皮下施用誘導(dǎo)明顯的免疫反應(yīng)，盡管皮下施用的免疫原性增強(qiáng)。
[0020]各種實施方案可以涉及本發(fā)明方法和組合物治療疾病的用途，所述疾病包括但不限于:非霍奇金淋巴瘤、B細(xì)胞急性和慢性淋巴白血病、伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、毛細(xì)胞白血病、急性和慢性骨髓樣白血病、T細(xì)胞淋巴瘤和白血病、多發(fā)性骨髓瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、華氏巨球蛋白血癥、癌瘤、黑素瘤、肉瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤以及皮膚癌。癌瘤可以包括口腔、胃腸道、肺道、肺、乳房、卵巢、前列腺、子宮、子宮內(nèi)膜、宮頸、膀胱、胰腺、骨、腦、結(jié)締組織、肝、膽囊、腎、皮膚、中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及睪丸的癌瘤。
[0021]另外，本發(fā)明方法和組合物可以用來治療自身免疫性疾病,例如急性免疫性血小板減少、慢性免疫性血小板減少、皮肌炎、西登哈姆氏舞蹈病、重癥肌無力、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、狼瘡性腎炎、風(fēng)濕熱、多腺體綜合征、大皰性類天皰瘡、尋常天皰瘡、糖尿病(例如，少年糖尿病)、亨-舍二氏紫癜、鏈球菌感染后腎炎、結(jié)節(jié)性紅斑、大動脈炎、愛迪生氏病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、結(jié)節(jié)病、潰瘍性結(jié)腸炎、多形性紅斑、IgA腎病、結(jié)節(jié)性多動脈炎、強(qiáng)直性脊柱炎、古德帕斯丘氏綜合征、血栓閉塞性脈管炎、斯耶格倫氏綜合征、原發(fā)性膽汁性肝硬化、橋本氏甲狀腺炎、甲狀腺毒癥、硬皮癥、慢性活動性肝炎、多肌炎/皮肌炎、多軟骨炎、尋常天皰瘡、韋格納氏肉芽`腫病、膜性腎病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、脊髓癆、巨細(xì)胞動脈炎/多肌痛、惡性貧血、急進(jìn)性腎小球腎炎、牛皮癬或纖維性肺泡炎。
[0022]在替代實施方案中，濃縮的抗體制劑可以具有治療代謝疾病(如2型糖尿病或淀粉樣變性)、心血管疾病(如動脈粥樣硬化)或神經(jīng)疾病(如阿爾茨海默病)的用途。對治療此類病狀有用的抗體是本領(lǐng)域中已知的，如下所更詳細(xì)地討論。
[0023]在某些實施方案中，可以通過與作為本發(fā)明的一部分的一種或多種其它治療劑的聯(lián)合治療來增強(qiáng)疾病治療。在本發(fā)明中有用的已知治療劑包括:免疫調(diào)節(jié)劑(如細(xì)胞因子、淋巴因子、趨化因子及生長因子以及它們的抑制劑)、鞘氨醇抑制劑、激素、激素拮抗劑、寡核苷酸(如siRNA或RNAi)、光活性治療劑、抗血管生成劑以及促凋亡劑。其它更多的傳統(tǒng)治療劑(如細(xì)胞毒性藥物或放射性核素)可以在濃縮的抗體之前、與其同時或在其之后施用。
[0024]附圖簡述
[0025]提供以下附圖來說明本發(fā)明的優(yōu)選實施方案。然而，所要求保護(hù)的主題決不受附圖中所公開的說明性實施方案限制。
[0026]圖1.從細(xì)胞培養(yǎng)基中抗體的柱色譜法純化的示例性實驗方案。[0027]圖2.超濾濃縮的抗體的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳:㈧非還原性凝膠，⑶還原性凝膠。兩種凝膠示出(泳道I)麗標(biāo)準(zhǔn)物；(泳道2) hLLl IgG，起始IgG溶液(lOmg/mL)；(泳道3)儲存2個月之后的濃縮的hLLl IgG(215mg/mL)；(泳道4)hA20IgG,起始IgG溶液(5.lmg/mL);(泳道 5)儲存 10 個月之后的濃縮的 hA20IgG (162mg/mL);(泳道 6) hL243IgG,起始IgG溶液(8.9mg/mL)；(泳道7)儲存10個月之后的濃縮的hL243IgG(101mg/mL)。所使用的 MW 標(biāo)準(zhǔn)物分別是 6.5KD、14KD、21KD、31KD、45KD、66KD、97KD、116KD 以及 200KD。
[0028]圖3.超濾濃縮的抗體的等電聚焦凝膠示出(泳道1)口1標(biāo)準(zhǔn)物；(泳道2)111^1186，起始IgG溶液(10mg/mL);(泳道3)儲存2個月之后的濃縮的hLLlIgG(215mg/mL);(泳道4)hA20IgG，起始IgG溶液(5.lmg/mL)；(泳道5)儲存10個月之后的濃縮的hA20IgG(162mg/mL)；(泳道6)hL243IgG，起始IgG溶液(8.9mg/mL)；(泳道7)儲存10個月之后的濃縮的 hL243IgG(101mg/mL)。所使用的 MW 標(biāo)準(zhǔn)物分別是 6.5KD、14KD、21KD、31KD、45KD、66KD、97KDU16KD 以及 200KD。
[0029]圖4.儲存10個月之后的超濾濃縮的hLLlIgG溶液(215mg/mL)的代表性SE HPLC色譜圖。
[0030]圖5.儲存10個月之后的超濾濃縮的hA20IgG溶液(162mg/mL)的代表性SE HPLC色譜圖。
[0031]圖6.儲存10個月之后的超濾濃縮的hL243IgG溶液(101mg/mL)的代表性SE HPLC色譜圖。
[0032]圖7.維妥珠單抗(SEQ ID NO:33)與利妥昔單抗(SEQ ID NO:34)重鏈恒定區(qū)序列的比較。相同的殘基由星號表明。兩種不同的同種異型抗體的重鏈恒定區(qū)序列中僅有四個氨基酸殘基不同。這兩種抗體之間輕鏈恒定區(qū)序列是相同的。
[0033]圖8.hL243的氨基酸序列。hL243IgG4P重鏈的整個可變區(qū)和恒定區(qū)序列如SEQ IDN0:37所示，其中恒定區(qū)加有下劃線。hL243IgG4P重鏈的單獨恒定區(qū)序列如SEQ ID NO:38所示。hL243輕鏈的整個可變區(qū)和恒定區(qū)序列如SEQ ID NO:39所示，其中恒定區(qū)加有下劃線。hL243輕鏈的單獨恒定區(qū)序列如SEQ ID N0:40所示。
[0034]詳述
[0035]定義
[0036]提供以下定義有利于理解本文中的公開內(nèi)容。在沒有確切定義一個術(shù)語的情況下，所述術(shù)語根據(jù)它的平常意義和普通意義來使用。
[0037]如本文中所使用，“一個(種)”和“所述”可以是指單數(shù)或復(fù)數(shù)，除非上下文另外闡明僅意指單數(shù)。
[0038]“抗體”是指全長(即，天然存在的或通過正常免疫球蛋白基因片段重組過程所形成的)免疫球蛋白分子(例如，IgG抗體)；或免疫球蛋白分子的免疫活性的(即，抗原結(jié)合的)部分，像抗體片段。
[0039]“抗體片段”是抗體的一部分,如F(ab' )2、F(ab)2、Fab'、Fab、Fv、scFv、單域抗體(DAB 或 VHH)等，包括 IgG4 的半分子(van der Neut Kolfschoten 等，2007, Science317:1554-1557)。無論結(jié)構(gòu)如何，抗體片段與完整抗體所識別的相同抗原結(jié)合。例如，抗⑶74抗體片段與⑶74的表位結(jié)合。術(shù)語“抗體片段”還包括由可變區(qū)組成的分離的片段，如由重鏈和輕鏈的可變區(qū)組成的“Fv”片段；重組的單鏈多肽分子，其中輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)由肽接頭(“scFv蛋白”)連接；以及由模仿高變區(qū)的氨基酸殘基組成的最小識別單元。[0040]“嵌合抗體”是一種重組蛋白，其含有的可變域包括來源于一種物種的抗體(優(yōu)選地嚙齒動物抗體)的互補決定區(qū)(CDR)，而抗體分子的恒定域來源于人抗體的那些恒定域。對于獸醫(yī)應(yīng)用而言，嵌合抗體的恒定域可以來源于其它物種(如貓或狗)的那些恒定域。
[0041]“人源化抗體”是一種重組蛋白，其中來自一種物種的抗體(例如，嚙齒動物抗體)的CDR從嚙齒動物抗體的可變重鏈和可變輕鏈轉(zhuǎn)移至人重鏈可變域和輕鏈可變域(包括人構(gòu)架區(qū)(FR)序列)中?？贵w分子的恒定域來源于人抗體的那些恒定域。
[0042]“人抗體”是從轉(zhuǎn)基因小鼠中獲得的抗體，所述轉(zhuǎn)基因小鼠已經(jīng)被基因工程化以作為對抗原挑戰(zhàn)的反應(yīng)而產(chǎn)生特異性人抗體。在此技術(shù)中，將人重鏈基因座和輕鏈基因座的元件引入至來源于胚胎干細(xì)胞系的小鼠品系中，所述胚胎干細(xì)胞系含有內(nèi)源重鏈基因座和輕鏈基因座的靶向破壞。轉(zhuǎn)基因小鼠可以合成對人抗原有特異性的人抗體，并且小鼠可以用來產(chǎn)生分泌人抗體的雜交瘤。用于從轉(zhuǎn)基因小鼠中獲得人抗體的方法由Green等，Nature Genet.7:13 (1994)、Lonberg 等，Nature368:856 (1994)以及 Taylor 等，Int.1mmun.6:579(1994)描述。完全人抗體還可以通過基因轉(zhuǎn)染或染色體轉(zhuǎn)染方法以及曬菌體展示技術(shù)來構(gòu)建，所有所述方法和技術(shù)是本領(lǐng)域中已知的。(參見，例如McCafferty等，Nature 348:552-553 (1990)，公開了從來自未免疫供體的免疫球蛋白可變域基因庫(repertoire)中體外產(chǎn)生人抗體及其片段)。在此技術(shù)中，將抗體可變域基因框內(nèi)克隆至絲狀噬菌體的主要或次要外殼蛋白基因中，并且作為功能性抗體片段展示在噬菌體顆粒表面上。因為絲狀顆粒含有噬菌體基因組的單鏈DNA拷貝，所以基于抗體功能性質(zhì)的選擇也導(dǎo)致編碼展現(xiàn)出那些性質(zhì)的抗體的基因的選擇。以此方式，噬菌體模擬B細(xì)胞的一些性質(zhì)。可以在各種形式下進(jìn)行噬菌體展示，對于它們的綜述，參見例如Johnson和Chiswell, Current Opinion in Structural Biology 3:5564-571(1993)。還可以由體外活化的B細(xì)胞來產(chǎn)生人抗體。(參見，美國專利號5，567，610和5，229，275)。
[0043]“治療劑”是對疾病的治療有用的原子、分子或化合物。治療劑的實例包括但不限于:抗體、抗體片段、藥物、細(xì)胞因子或趨化因子抑制劑、促凋亡劑、酪氨酸激酶抑制劑、毒素、酶、核酸酶、激素、免疫調(diào)節(jié)劑、反義寡核苷酸、siRNA, RNA1、螯合劑、硼化合物、光活性劑、染料以及放射性同位素。
[0044]“診斷劑”是對診斷疾病有用的原子、分子或化合物。有用的診斷劑包括但不限于:放射性同位素、染料、造影劑、熒光化合物或分子以及增強(qiáng)劑(例如，順磁離子)。優(yōu)選地，診斷劑選自由以下組成的組:放射性同位素、增強(qiáng)劑以及熒光化合物。
[0045]“免疫綴合物”是抗體與原子、分子或更高有序的結(jié)構(gòu)(例如，與脂質(zhì)體)、治療劑或診斷劑的綴合物?！奥憧贵w”是沒有與任何其它藥劑綴合的抗體。
[0046]“裸抗體”通常是沒有與治療劑綴合的完整抗體。之所以如此是因為抗體分子的Fe部分提供效應(yīng)子功能，如補體結(jié)合和ADCC (抗體依賴的細(xì)胞毒性)，其使可導(dǎo)致細(xì)胞溶解的機(jī)制得以實施。然而，F(xiàn)e部分可能不是治療功能所需要的，而其它機(jī)制(如凋亡)可以得以發(fā)揮作用。裸抗體包括多克隆抗體和單克隆抗體兩者；以及某些重組抗體，如嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。
[0047]如本文中所使用，術(shù)語“抗體融合蛋白”是重組產(chǎn)生的抗原結(jié)合分子，其中抗體或抗體片段被連接至另一種蛋白質(zhì)或肽，如相同的或不同的抗體或抗體片段或DDD肽或AD肽。融合蛋白可以包含單一抗體組分、不同抗體組分的多價或多特異性的組合或同一抗體組分的多個拷貝。融合蛋白可以另外地包含抗體或抗體片段和治療劑。適用于此類融合蛋白的治療劑的實例包括免疫調(diào)節(jié)劑和毒素。一種優(yōu)選的毒素包含核糖核酸酶(RNA酶)，優(yōu)選地為重組RNA酶。
[0048]“多特異性抗體”是可以同時結(jié)合至少兩個具有不同結(jié)構(gòu)的靶標(biāo)(例如，兩個不同的抗原、在同一抗原上的兩個不同表位、或半抗原和/或抗原或表位)的抗體?！岸鄡r抗體”是可以同時結(jié)合至少兩個具有相同或不同結(jié)構(gòu)的靶標(biāo)的抗體。價態(tài)表明抗體對單一抗原或表位具有多少個結(jié)合臂或位點；即，一價的、二價的、三價的或多價的?？贵w的多價性意味著抗體可以使用多種相互作用結(jié)合抗原，從而增加結(jié)合抗原的親合力。特異性表明抗體能夠結(jié)合多少個抗原或表位；即，單特異性的、雙特異性的、三特異性的、多特異性的。使用這些定義，天然抗體(例如，IgG)是二價的，因為它具有兩個結(jié)合臂，但所述抗體是單特異性的，因為它結(jié)合一個表位。多特異性的、多價的抗體是含有多于一個具有不同特異性的結(jié)合位點的構(gòu)建體。
[0049]“雙特異性抗體”是可以同時結(jié)合兩個具有不同結(jié)構(gòu)的靶標(biāo)的抗體。雙特異性抗體(bsAb)和雙特異性抗體片段(bsFab)可以具有:至少一個臂，其特異性地結(jié)合例如B細(xì)胞抗原或表位、T細(xì)胞抗原或表位、骨髓樣細(xì)胞抗原或表位、漿細(xì)胞抗原或表位以及肥大細(xì)胞抗原或表位；和至少一個其它的臂，其特異性地結(jié)合帶有治療劑或診斷劑的可靶向的綴合物。可以使用分子工程來產(chǎn)生各種雙特異性抗體。
[0050]單克隆抗體的制備
[0051]本文中所描述 的組合物、制劑以及方法可以包括單克隆抗體。特定抗原的嚙齒動物單克隆抗體可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法來獲得。(參見，例如Kohler和 Milstein, Nature 256:495(1975)，和 Coligan 等，(編著)，CURRENT PROTOCOLS INIMMUNOLOGY,第 I 卷，第 2.5.1-2.6.7 頁(John ffiley&Sons 1991))。用于克隆鼠免疫球蛋白可變域的一般技術(shù)已經(jīng)例如由 Orlandi 等，Proc.Nat' I Acad.Sc1.USA86:3833 (1989)的出版物公開。
[0052]嵌合抗體
[0053]嵌合抗體是一種重組蛋白，其含有的可變域包括來源于一種動物物種(如嚙齒動物抗體)的CDR，而抗體分子的其余部分(即恒定域)來源于人抗體。用于構(gòu)建嵌合抗體的技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。例如，Leung等，Hybridoma 13:469 (1994)公開了他們?nèi)绾瓮ㄟ^使編碼LL2單克隆抗體(抗⑶22抗體)的Vk和Vh域的DNA序列與對應(yīng)的人恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域和IgG1恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域組合來產(chǎn)生LL2嵌合體。此出版物還分別提供了 LL2輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)(V1^PVh)的核苷酸序列。
[0054]人源化抗體
[0055]嵌合單克隆抗體可以通過用一個或多個不同的人FR替換嵌合抗體可變域中的鼠FR的序列來人源化。確切地說，將小鼠CDR從小鼠免疫球蛋白的可變重鏈和可變輕鏈轉(zhuǎn)移至相對應(yīng)的人抗體的可變域中。因為簡單地將小鼠⑶R轉(zhuǎn)移至人FR中經(jīng)常導(dǎo)致抗體親和力的減少或甚至喪失，所以可能要求額外的修飾以便恢復(fù)鼠抗體的原始親和力。這可以通過將FR區(qū)中的一個或多個某些人殘基用它們的鼠對應(yīng)物替換以獲得對其表位擁有良好結(jié)合親和力的抗體來完成。(參見，例如Tempest等，Biotechnology 9:266(1991)和Verhoeyen等，Science 239:1534(1988))。用于產(chǎn)生人源化抗體的技術(shù)例如由Jones等,Nature 321:522 (1986) >Riechmann 等,Nature 332:323 (1988) >Verhoeyen 等,Science239:1534(1988)、Carter 等，Proc.Nat' I Acad.Sci.USA 89:4285 (1992), Sandhu, Crit.Rev.Biotech.12:437(1992)以及 Singer 等，J.1mmun.150:2844(1993)公開。
[0056]人抗體
[0057]完全人抗體可以從轉(zhuǎn)基因的非人動物中獲得。(參見，例如Mendez等，NatureGenetics, 15:146-156，1997 ;美國專利號5，633，425)。用于使用組合方法或被人免疫球蛋白基因座轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)基因動物來產(chǎn)生完全人抗體的方法是本領(lǐng)域中已知的(例如，Mancini 等,2004, New Microbiol.27:315-28 ；Conrad 和 Scheller, 2005, Comb.Chem.HighThroughput Screen.8:117-26 ；Brekke 和 Loset,2003, Curr.0pin.Pharmacol.3:544-50 ；每個文獻(xiàn)以引用的方式并入本文)。此類完全人抗體預(yù)計展現(xiàn)出比嵌合抗體或人源化抗體甚至更少的副作用，并且在體內(nèi)用作基本上內(nèi)源性的人抗體。在某些實施方案中，所要求保護(hù)的方法和工序可以使用由此類技術(shù)產(chǎn)生的人抗體。
[0058]在一種替代方案中，曬菌體展示技術(shù)可以用來產(chǎn)生人抗體(例如,Dantas-Barbosa等，2005, Genet.Mol.Res.4:126-40，所述文獻(xiàn)以引用的方式并入本文)。還可以從正常的人或從展現(xiàn)出特定疾病狀態(tài)(如癌癥)的人中產(chǎn)生人抗體(Dantas-Barbosa等，2005)。從患病的個體中構(gòu)建人抗體的優(yōu)點是:可以使循環(huán)抗體庫偏向于對抗疾病相關(guān)抗原的抗體。
[0059]在此方法的一個非限制性實例中，Dantas-Barbosa等(2005)從骨肉瘤患者中構(gòu)建了人Fab抗體片段的噬菌體展示文庫。通常，從循環(huán)血液淋巴細(xì)胞中獲得總RNA(同上)。從U、Y以及K鏈抗體庫克隆重組的Fab并且將其插入至噬菌體展示文庫中(同上)。使用針對重鏈和輕鏈免疫球蛋白序列的特異性引物，將RNA轉(zhuǎn)變?yōu)閏DNA并且用來制作FabcDNA 文庫(Marks 等，1991，J.Mol Biol.222:581—97)。根據(jù) Andris-Widhopf 等(2000 年，在 Phage Display Laboratory Manual, Barbas 等(編著)，第 I 版，Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Sp`ring Harbor, NY第9.1至9.22頁中所述,所述文獻(xiàn)以引用的方式并入本文)進(jìn)行文庫構(gòu)建。用限制性核酸內(nèi)切酶消化最終的Fab片段并且插入至噬菌體基因組中，以制作噬菌體展示文庫。此類文庫可以通過標(biāo)準(zhǔn)的噬菌體展示方法來篩選。熟練的技術(shù)人員將認(rèn)識到此技術(shù)僅是示例性的，并且可以使用任何用于通過噬菌體展示而制作和篩選人抗體或抗體片段的已知方法。
[0060]在另一種替代方案中，使用如上所討論的標(biāo)準(zhǔn)免疫實驗方案，已經(jīng)被基因工程化以產(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因動物可以用來產(chǎn)生對抗基本上任何免疫原性靶標(biāo)的抗體。用于從轉(zhuǎn)基因小鼠中獲得人抗體的方法由Green等，Nature Genet.7:13 (1994)、Lonberg等，Nature368:856(1994)以及 Taylor 等，Int.1mmun.6:579 (1994)描述。這樣一個系統(tǒng)的非限制性實例是來自 Abgenix (Fremont, CA)的 XenoMouse ? (例如，Green 等,1999, J.1mmunol.Methods 231:11-23，所述文獻(xiàn)以引用的方式并入本文)。在XenoMouse?和類似的動物中，小鼠抗體基因已經(jīng)被滅活并且被功能性人抗體基因替換，而小鼠免疫系統(tǒng)的其余部分保持完整。
[0061]用含有人IgH和IgK基因座的部分的種系配置的YAC (酵母人工染色體)來轉(zhuǎn)化XenoMouse?，所述基因座部分包括大部分可變區(qū)序列連同附屬基因和調(diào)控序列。人可變區(qū)庫可以用來獲得產(chǎn)抗體的B細(xì)胞，所述B細(xì)胞可以通過已知的技術(shù)加工成雜交瘤。用靶標(biāo)抗原免疫的XenoMouse ?將通過正常的免疫反應(yīng)產(chǎn)生人抗體，所述人抗體可以通過以上討論的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)收犾和/或廣生?？蔂斓枚喾NXenoMouse⑧說系，其中每一種都能夠廣生不同類別的抗體。已經(jīng)顯示轉(zhuǎn)基因產(chǎn)生的人抗體具有治療潛力，同時保持正常人抗體的藥物代謝動力學(xué)性質(zhì)(Green等，1999)。熟練的技術(shù)人員將認(rèn)識到所要求保護(hù)的組合物和方法不限于使用XenoMouse ?系統(tǒng)，而是可以使用任何已經(jīng)被基因工程化以產(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因動物。
[0062]杭體克降和產(chǎn)牛
[0063]各種技術(shù)(如嵌合或人源化抗體的產(chǎn)生)可以涉及抗體克隆和構(gòu)建的工序。感興趣的抗體的抗原結(jié)合V K (可變輕鏈)和Vh (可變重鏈)序列可以通過各種分子克隆工序(如RT-PCR、5’-RACE以及cDNA文庫篩選)來獲得。來自表達(dá)鼠抗體的細(xì)胞的抗體的V基因可以通過PCR擴(kuò)增來克隆并且測序。為了證實其真實性，可以將克隆的\和Vh基因在細(xì)胞培養(yǎng)物中表達(dá)為嵌合抗體，如由Orlandi等(Proc.Natl Acad Sci, USA, 86:3833 (1989))所描述?；赩基因序列，然后可以設(shè)計并且構(gòu)建人源化抗體，如由Leung等(Mol.1mmunol., 32:1413(1995))所描述。
[0064]cDNA可以通過一般的分子克隆技術(shù)由任何已知的產(chǎn)生鼠抗體的雜交瘤系或轉(zhuǎn)染細(xì)胞系制備(Sambrook 等，Molecular Cloning, A laboratory manual,第2 版(1989))?？梢允褂靡?VK1BACK 和 VKlFOR (Orlandi 等，1989)或由 Leung 等(BioTechniques, 15:286(1993))描述的延伸的引物組來擴(kuò)增抗體的V κ序列。可以使用引物對 VH1BACK/VH1F0R(Orlandi 等，1989)或由 Leung 等(Hybridoma, 13:469(1994))描述的與鼠IgG的恒定區(qū)退火的引物來擴(kuò)增Vh序列?？梢酝ㄟ^長寡核苷酸模板合成與PCR擴(kuò)增的組合來構(gòu)建人源化V基因，如由Leung等(Mol.1mmunol., 32:1413 (1995))所描述。
[0065]可以將Vk的PCR產(chǎn)物亞克隆進(jìn)入分期載體(staging vector),如基于pBR327的分期載體(VKpBR)，所述分期載體含有Ig啟動子、信號肽序列以及適宜的限制位點?？梢詫h的PCR產(chǎn)物亞克隆進(jìn)入類似的分期載體，如基于pBluescript的VHpBS。含有Vk和Vh序列連同啟動子和信號肽序列一起的表達(dá)盒可以從VKpBR和VHpBS中切除并且分別連接入適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體，如pKh和pGlg (Leung等，Hybridoma, 13:469 (1994))。可以將表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染進(jìn)入適當(dāng)?shù)募?xì)胞并且監(jiān)測上清液中嵌合、人源化或人抗體的產(chǎn)生?；蛘?，可以切除Vk和Vh表達(dá)盒并且亞克隆進(jìn)入單一表達(dá)載體,如pdHL2,如由Gillies等(J.1mmunol.Methods125:191(1989))所描述并且還在 Losman 等，Cancer, 80:2660 (1997)中所示。
[0066]在一個替代實施方案中，表達(dá)載體可以被轉(zhuǎn)染進(jìn)入已經(jīng)在無血清培養(yǎng)基中預(yù)適應(yīng)轉(zhuǎn)染、生長以及表達(dá)的宿主細(xì)胞?？梢允褂玫氖纠约?xì)胞系包括Sp/EEE、Sp/ESF以及Sp/ESF-X細(xì)胞系(參見，例如美國專利號7，531，327 ;7，537，930以及7，608，425 ;每一個所述專利的實施例部分以引用的方式并入本文)。這些示例性細(xì)胞系基于Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞系、用突變型Bcl-EEE基因轉(zhuǎn)染、暴露于甲氨蝶呤以擴(kuò)增轉(zhuǎn)染的基因序列并且預(yù)適應(yīng)無血清細(xì)胞系以用于蛋白質(zhì)表達(dá)。
[0067]抗體同種異型[0068]治療性抗體的免疫原性與輸注反應(yīng)風(fēng)險增加和治療性反應(yīng)的持續(xù)時間減少相關(guān)(Baert等，2003，N Engl J Med 348:602-08)。治療性抗體在宿主中誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的程度可以部分地通過抗體的同種異型來確定(Stickler等，2011，Genes and Immunity12:213-21)?？贵w同種異型與抗體的恒定區(qū)序列中特定位置上的氨基酸序列變化相關(guān)。含有重鏈Y -型恒定區(qū)的IgG抗體的同種異型命名為Gm同種異型(1976，J Immunol117:1056-59)。
[0069]對于常見的IgGl人抗體而言，最普遍的同種異型是Glml (Stickler等，2011，Genes and Immunity 12:213-21)。然而，Glm3同種異型也頻繁地出現(xiàn)在白種人(Caucasians)中(同上)。已經(jīng)報道了當(dāng)向非Glml (nGlml)接受者(如Glm3患者)施用時，Glml抗體含有傾向于誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的同種異型序列(同上)。當(dāng)向Glml患者施用時，非Glml同種異型抗體不是作為免疫原性的(同上)。
[0070]人Glml同種異型包含重鏈IgGl的CH3序列中的Kabat位置356上的氨基酸天冬氨酸和Kabat位置358上的亮氨酸。nGlml同種異型包含Kabat位置356上的氨基酸谷氨酸和Kabat位置358上的甲硫氨酸。Glml和nGlml同種異型兩者均包含Kabat位置357上的谷氨酸殘基，并且所述同種異型有時稱為DEL和EEM同種異型。針對示例性抗體利妥昔單抗(SEQ ID NO:34)和維妥珠單抗(SEQ ID N0:33)，在圖7中顯示出Glml和nGlml同種異型抗體的重鏈恒定區(qū)序列的非限制性實例。
[0071]Jefferis和Lefranc (2009，mAbsl: 1-7)綜述了作為IgG同種異型的特征的序列變化和它們對免疫原性的影響。他們報道了與Glml7同種異型中的Kabat214上的賴氨酸殘基相比，Glm3同種異型的特征在于Kabat位置214上的精氨酸殘基。nGlml, 2同種異型的特征在于Kabat位置356上的谷氨酸、Kabat位置358上的甲硫氨酸以及Kabat位置431上的丙氨酸。Glml, 2同種異型的特征在于Kabat位置356上的天冬氨酸、Kabat位置358上的亮氨酸以及Kabat位置431上的甘氨酸。除了重鏈恒定區(qū)序列變體之外，Jefferis和Lefranc (2009)報道了 κ輕鏈恒定區(qū)中的同種異型變體，其中Kml同種異型的特征在于Kabat位置153上的纈氨酸和Kabat位置191上的亮氨酸，Kml, 2同種異型的特征在于Kabat位置153上的丙氨酸和Kabat位置191上的亮氨酸，并且Km3同種異型的特征在于Kabat位置153上的丙氨酸和Kabat位置191上的纈氨酸。
[0072]對于治療性抗體而言，維妥珠單抗和利妥昔單抗分別是對治療各種各樣血液惡性腫瘤和/或自身免疫性疾病有用的、對抗CD20的人源化和嵌合IgGl抗體。表1比較了利妥昔單抗與維妥珠單抗的同種異型序列。如在表1和圖7中所示，利妥昔單抗(Glml7，I)是DEL同種異型IgGl，在利妥昔單抗中的賴氨酸相對維妥珠單抗中的精氨酸在Kabat位置214(重鏈CHl)上具有額外序列變化。已經(jīng)報道了在受試者中維妥珠單抗比利妥昔單抗的免疫原性小(參見，例如 Morchhauser 等，2009，J Clin Oncol 27:3346-53 ；Goldenberg等，2009，Blood 113:1062-70 ；Robak&Robak, 2011, BioDrugs 25:13-25)，這種作用已經(jīng)被歸因于人源化抗體與嵌合抗體之間的差異。然而，EEM與DEL同種異型之間的同種異型差異也可能解釋維妥珠單抗的更低免疫原性。
[0073]表1.利妥昔單抗對維妥珠單抗的同種異型
【權(quán)利要求】
1.一種皮下施用、肌肉內(nèi)施用或經(jīng)皮膚施用治療性的抗體或免疫球蛋白的方法，所述方法包括: a)在高濃度制劑緩沖液中產(chǎn)生濃縮的抗體或免疫球蛋白溶液；以及 b)通過皮下遞送、肌肉內(nèi)遞送或經(jīng)皮膚遞送而向患者施用所述濃縮的抗體或免疫球蛋白溶液； 其中，所施用的濃縮的抗體溶液的體積選自由以下組成的組:3ml或更少、2ml或更少以及Iml或更少。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體或免疫球蛋白被濃縮到至少80mg/ml、至少100mg/ml、至少 125mg/ml、至少 150mg/ml、至少 175mg/ml、至少 200mg/ml、至少 225mg/ml、至少 250mg/ml 或至少 300mg/ml。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所施用的抗體或免疫球蛋白的量選自由以下組成的組:40mg、80mg、160mg、240mg 以及 320mg。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中重復(fù)所述施用。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中皮下施用的、肌肉內(nèi)施用的或經(jīng)皮膚施用的抗體在比靜脈內(nèi)施用相同抗體低的劑量下有效。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述高濃度制劑緩沖液的PH為5.2并且包含檸檬酸鹽、磷酸鹽、氯化鈉、聚山梨酯80以及甘露醇。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述高濃度制劑緩沖液包含6.2mM 一水合檸檬酸、105mM氯化鈉、1.2mM二水合檸檬酸鈉、8.7mM磷酸氫二鈉、5.5mM磷酸二氫鈉、0.1%聚山梨酯80以及66mM甘露醇。
8.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述高濃度制劑緩沖液進(jìn)一步包含精氨酸和谷氨酸。
9.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述聚山梨酯80在所述抗體或免疫球蛋白被濃縮之后添加至所述濃縮的抗體或免疫球蛋白溶液中。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中在所述抗體或免疫球蛋白被濃縮之后添加聚山梨酯80減少了濃縮過程中所形成的沉淀的量。
11.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體或免疫球蛋白通過超濾和滲濾來濃縮。
12.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體是非Glml(nGlml)抗體。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述抗體具有Glm3重鏈同種異型。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述抗體具有nGlml,2重鏈無效同種異型(nullallotype)。
15.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述抗體具有Km3輕鏈同種異型。
16.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述抗體包含重鏈恒定區(qū)氨基酸殘基精氨酸-214、谷氨酸-356、甲硫氨酸-358以及丙氨酸-431。
17.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列是SEQIDNO:33 或 SEQ ID NO:38。
18.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體輕鏈恒定區(qū)的氨基酸序列是SEQIDN0:40。
19.如權(quán)利要求13所述的方法，其中，當(dāng)向所述患者施用時，所述Glm3同種異型抗體的免疫原性比Glml同種異型抗體小。
20.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，在所述抗體被濃縮之前，通過在蛋白質(zhì)A樹脂、陰離子交換樹脂以及陽離子交換樹脂上的連續(xù)柱色譜法而從細(xì)胞培養(yǎng)基中純化所述抗體。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中使所述抗體在包含25mM檸檬酸鹽(pH5.0)的緩沖液中結(jié)合至所述陽離子交換樹脂，并且用包含25mM檸檬酸鹽(pH 6.0)、150mM氯化鈉的洗脫緩沖液從所述陽離子交換樹脂上洗脫下來。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中從所述陽離子交換樹脂上洗脫下來的所述抗體通過在包含7.4mM檸檬酸鹽(pH 5.2)的高濃度制劑緩沖液中的滲濾和超濾而進(jìn)行濃縮。
23.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體選自由以下組成的組:單克隆抗體、單克隆抗體的抗原結(jié)合片段、雙特異性抗體、多特異性抗體、免疫綴合物以及抗體融合蛋白。
24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述免疫綴合物包含至少一種非細(xì)胞毒性的治療劑或診斷劑。
25.如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述治療劑選自由以下組成的組:免疫調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞因子、趨化因子、酪氨酸激酶抑制劑、生長因子、干細(xì)胞生長因子、淋巴毒素、成血因子、集落刺激因子(CSF)、白細(xì)胞介素(IL)、干擾素(IFN)、激素以及酶。
26.如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述治療劑選自由以下組成的組:紅細(xì)胞生成素、血小板生成素、腫瘤壞死因子-a (TNF)、TNF-β、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、干擾素-α、干擾素-β、干擾素- Y、命名為“SI因子”的干細(xì)胞生長因子、人生長激素、N-甲硫氨?；松L激素、牛生長激素、甲狀旁腺激素、甲狀腺素、胰島素、胰島素原、松弛素、松弛素原、促卵泡激素(FSH)、促甲狀腺激素(TSH)、促黃體激素(LH)、肝生長因子、前列腺素、成纖維細(xì)胞生長因子、催乳素、胎盤催乳素、OB蛋白、苗勒抑制物質(zhì)、小鼠促性腺素相關(guān)的肽、抑制素、激活素、血管內(nèi)皮生長因子、整聯(lián)蛋白、NGF-β、血小板生長因子、TGF-α、TGF-β、胰島素樣生長因子-1、胰島素樣生長因子_11、巨噬細(xì)胞-CSF(M-CSF)、IL-U IL-1 a、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、IL_25、LIF、FLT-3、血管抑素、血小板反應(yīng)蛋白、內(nèi)皮抑素以及LT。
27.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體是裸抗體。
28.如權(quán)利要求27所述的方法，其進(jìn)一步包括向所述個體施用至少一種治療劑。
29.如權(quán)利要求28所述的方法，其中所述治療劑選自由以下組成的組:藥物、前藥、毒素、酶、酪氨酸激酶抑制劑、鞘氨醇抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞因子、激素、第二抗體、第二抗體片段、免疫綴合物、放射性核素、反義寡核苷酸、RNA1、抗血管生成劑、促凋亡劑以及細(xì)胞毒性劑。
30.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體結(jié)合選自由以下組成的組的抗原:碳酸酐酶 IX、CCCL19、CCCL21、CSAp、CD1、CDla、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CDl 1A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、IGF-1R、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD29、CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD45、CD46、CD52、CD54、CD55、CD59、CD64、CD66a_e、CD67、CD70、CD70L、CD74、CD79a、CD80、CD83、CD95、CD126、CD133、CD138、CD147、CD154、AFP、PSMA、CEACAM5、CEACAM-6、c-MET, B7、纖連蛋白的ED-B、因子H、FHL-1、Flt_3、葉酸鹽受體、GROB, HMGB-1、缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)、HMl.24、胰島素樣生長因子-1 (ILGF-1)、IFN- y、IFN- a、IFN- β、IL-2, IL-4R、IL-6R、IL-13R、IL-15R、IL-17R、IL-18R、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-23、IL-25、IP-10、MAGE、mCRP、MCP-l、MIP-lA、MIP-lB、MIF、MUCl、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5、MUC5a、MUC5c、MUC16、PAM4 抗原、NCA-95、NCA-90、la、HMl.24、EGP-1 (又稱為 TROP-2)、EGP-2、HLA-DR、腱生蛋白、Le (y)、RANTES、T101、TAC、Tn 抗原、Thomson-Friedenreich 抗原、腫瘤壞死抗原、TNF- a、TRAIL受體(Rl和R2)、VEGFR、EGFR、P1GF、補體因子C3、補體因子C3a、補體因子C3b、補體因子C5a、補體因子C5以及致癌基因產(chǎn)物。
31.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述濃縮的抗體或免疫球蛋白溶液包含結(jié)合相同或不同抗原的兩種或更多種抗體。
32.如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述濃縮的抗體或免疫球蛋白溶液包含抗體的組合，其中每種抗體結(jié)合選自由以下組成的組的抗原:⑶19、⑶20、⑶22、⑶74、⑶79a、⑶40L、ILGF-Rl、TR0P2、CEACAM5、CECAM6、HLA-DR、IFN a、IL-6 以及 TNF- α。
33.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述雙特異性抗體結(jié)合兩種不同的抗原，每種抗原選自由以下組成的組:CD19、CD20、CD22、CD74、CD79a、CD40L、ILGF-Rl、TR0P2、CEACAM5、CECAM6、HLA-DR、IFN α、IL-6 以及 TNF- α。
34.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體選自由以下組成的組:hRl(抗IGF-1R)、hPAM4 (抗粘蛋白)、hA20 (抗 CD20)、GAlOl (抗 CD20)、hA19 (抗 CD19)、hIMMU31 (抗 AFP)、hLLl (抗 CD74)、hLL2 (抗 CD22)、hMu-9 (抗 CSAp)、hL243 (抗 HLA-DR)、hL243IgG4P (抗HLA-DR)、hMN-14 (抗 CEACAM5)、hMN_15 (抗 CEACAM6)、hRS7 (抗 EGP-1)、hMN_3 (抗 CEACAM6)、Ab124 (抗 CXCR4)以及 Ab12 5 (抗 CXCR4)。
35.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體選自由以下組成的組:依帕珠單抗(epratuzumab)、維妥珠單抗(veltuzumab)、米拉珠單抗(milatuzumab)、hL243 (抗 HLA-DR)以及 hL243IgG4P (抗 HLA-DR)。
36.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述患者具有選自由以下組成的組的疾病:自身免疫性疾病、免疫失調(diào)疾病、感染性疾病、癌瘤、肉瘤、淋巴瘤、白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、濾泡性淋巴瘤、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、阿爾茨海默病、2型糖尿病、I型糖尿病、淀粉樣變性、心血管疾病、神經(jīng)疾病以及代謝疾病。
37.如權(quán)利要求36所述的方法，其中所述自身免疫性疾病選自由以下組成的組:急性特發(fā)性血小板減少性紫癜、慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜、皮肌炎、西登哈姆氏舞蹈病、重癥肌無力、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、狼瘡性腎炎、風(fēng)濕熱、多腺體綜合征、大皰性類天皰瘡、糖尿病、亨-舍二氏紫癜、鏈球菌感染后腎炎、結(jié)節(jié)性紅斑、大動脈炎、愛迪生氏病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、結(jié)節(jié)病、潰瘍性結(jié)腸炎、多形性紅斑、IgA腎病、結(jié)節(jié)性多動脈炎、強(qiáng)直性脊柱炎、古德帕斯丘氏綜合征、血栓閉塞性脈管炎、斯耶格倫氏綜合征、原發(fā)性膽汁性肝硬化、橋本氏甲狀腺炎、甲狀腺毒癥、硬皮癥、慢性活動性肝炎、多肌炎/皮肌炎、多軟骨炎、大皰性類天皰瘡、尋常天皰瘡、韋格納氏肉芽腫病、膜性腎病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、脊髓癆、巨細(xì)胞動脈炎/多肌痛、惡性貧血、急進(jìn)性腎小球腎炎、牛皮癬以及纖維性肺泡炎。
38.如權(quán)利要求36所述的方法，其中當(dāng)所述皮下施用的、肌肉內(nèi)施用的或經(jīng)皮膚施用的抗體作為單一注射給予時，在80mg或更低、160mg或更低、240mg或更低、320mg或更低或400mg或更低的劑量下展現(xiàn)出對抗所述疾病的功效。
39.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述抗體片段選自由以下組成的組:F(ab')2、F (ab) 2> Fab> Fab'以及 scFv 片段。
40.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體包含選自由以下組成的組的人恒定區(qū):IgGU IgG2a、IgG3 以及 IgG4。
41.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述雙特異性抗體包含至少一個用于腫瘤相關(guān)的抗原的結(jié)合位點和至少一個用于半抗原的結(jié)合位點，并且所述方法進(jìn)一步包括向所述患者施用可靶向構(gòu)建體，其中所述可靶向構(gòu)建體包含所述半抗原的至少一個拷貝并且被附接到至少一種診斷劑或治療劑。
42.一種用于皮下施用、肌肉內(nèi)施用或經(jīng)皮膚施用的組合物，其包含處于高濃度制劑緩沖液中的治療性抗體，其中所述緩沖液的pH為5.2并且包含檸檬酸鹽、磷酸鹽、氯化鈉、聚山梨酯80以及甘露醇。
43.如權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述高濃度制劑緩沖液包含6.2mM 一水合檸檬酸、105mM氯化鈉、1.2mM 二水合檸檬酸鈉、8.7mM磷酸氫二鈉、5.5mM磷酸二氫鈉、0.1%聚山梨酯80以及66mM甘露醇。
44.如權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述高濃度制劑緩沖液進(jìn)一步包含精氨酸和谷氨酸。
45.如權(quán)利要求42所述的組合物,其中所述抗體的濃度為至少80mg/ml、至少IOOmg/ml、至少 125mg/ml、至少 150mg/ml、至少 175mg/ml、至少 200mg/ml、至少 225mg/ml、至少250mg/ml 或至少 300mg/ml。
46.如權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述`抗體是nGlml同種異型。
47.如權(quán)利要求46所述的組合物，其中所述抗體具有Glm3重鏈同種異型。
48.如權(quán)利要求47所述的組合物，其中所述抗體具有nGlml，2重鏈無效同種異型。
49.如權(quán)利要求46所述的組合物，其中所述抗體具有Km3輕鏈同種異型。
50.如權(quán)利要求46所述的組合物，其中所述抗體包含重鏈恒定區(qū)氨基酸殘基精氨酸-214、谷氨酸-356、甲硫氨酸-358以及丙氨酸-431。
51.如權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述抗體重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列是SEQIDNO:33 或 SEQ ID NO:38。
52.如權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述抗體輕鏈恒定區(qū)的氨基酸序列是SEQIDN0:40。
53.如權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述抗體是裸抗體。
54.如權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述抗體與至少一種非細(xì)胞毒性的治療劑或診斷劑綴合。
55.如權(quán)利要求54所述的組合物，其中所述治療劑選自由以下組成的組:免疫調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞因子、趨化因子、酪氨酸激酶抑制劑、生長因子、干細(xì)胞生長因子、淋巴毒素、成血因子、集落刺激因子(CSF)、白細(xì)胞介素(IL)、干擾素(IFN)、激素以及酶。
56.如權(quán)利要求54所述的組合物，其中所述治療劑選自由以下組成的組:紅細(xì)胞生成素、血小板生成素、腫瘤壞死因子-a (TNF)、TNF-β、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、干擾素-α、干擾素-β、干擾素-Y、命名為“SI因子”的干細(xì)胞生長因子、人生長激素、N-甲硫氨酰基人生長激素、牛生長激素、甲狀旁腺激素、甲狀腺素、胰島素、胰島素原、松弛素、松弛素原、促卵泡激素(FSH)、促甲狀腺激素(TSH)、促黃體激素(LH)、肝生長因子、前列腺素、成纖維細(xì)胞生長因子、催乳素、胎盤催乳素、OB蛋白、苗勒抑制物質(zhì)、小鼠促性腺素相關(guān)的肽、抑制素、激活素、血管內(nèi)皮生長因子、整聯(lián)蛋白、NGF-β、血小板生長因子、TGF-α、TGF-β、胰島素樣生長因子-1、胰島素樣生長因子_11、巨噬細(xì)胞-CSF(M-CSF)、IL-U IL-1 a、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、IL_25、LIF、FLT-3、血管抑素、血小板反應(yīng)蛋白、內(nèi)皮抑素以及LT。
57.如權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述抗體結(jié)合選自由以下組成的組的抗原--碳酸酐酶 IX、CCCL19、CCCL21、CSAp、CDl、CDla、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CDl 1A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、IGF-1R、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD29、CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD45、CD46、CD52、CD54、CD55、CD59、CD64、CD66a_e、CD67、CD70、CD70L、CD74、CD79a、CD80、CD83、CD95、CD126、CD132、CD133、CD138、CD147、CD154、AFP、PSMA,CEACAM5、CEACAM-6、B7、纖連蛋白的 ED-B、因子 H、FHL-1、Flt_3、葉酸鹽受體、GROB、HMGB-1、缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)、HMl.24、胰島素樣生長因子-1 (ILGF-1)、IFN1、IFN-a、IFN-β、IL-2、IL-4R、IL-6R、IL-13R、IL-15R、IL-17R、IL-18R、IL-6, IL-8, IL-12, IL-15, IL-17,IL-18、IL-25、IP-10、MAGE、mCRP、MCP-l、MIP-lA、MIP-lB、MIF、MUCl、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5、PAM4 抗原、NCA-95、NCA-90、la、HMl.24、EGP-1、EGP-2、HLA-DR、腱生蛋白、Le (y)、RANTES,T101、TAC、Tn 抗原、Thomson-Friedenreich 抗原、腫瘤壞死抗原、TNF- a、TRAIL 受體(Rl 和R2)、VEGFR、EGFR、P1GF、補體因子C3、補體因子C3a、補體因子C3b、補體因子C5a、補體因子C5以及致癌基因產(chǎn)物。
58.如權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述抗體選自由以下組成的組:hRl(抗IGF-1R)、hPAM4 (抗粘蛋白)、hA20 (抗 CD20) ,GAlOl (抗 CD20)、hA19 (抗 CD19)、hIMMU31 (抗AFP)、hLLl (抗 CD74)、hLL2(抗 CD22)、hMu_9 (抗 CSAp)、hL243 (抗 HLA-DR)、hL243 IgG4P (抗HLA-DR)、hMN-14 (抗 CEACA M5)、hMN_15 (抗 CEACAM6)、hRS7 (抗 EGP-1)、hMN_3 (抗 CEACAM6)、Ab124 (抗 CXCR4)以及 Ab125 (抗 CXCR4)。
59.如權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述抗體選自由以下組成的組:依帕珠單抗、維妥珠單抗、米拉珠單抗、hL243 (抗HLA-DR)以及hL243IgG4P (抗HLA-DR)。
60.如權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述抗體是結(jié)合兩種不同抗原的雙特異性抗體，每種抗原選自由以下組成的組:CD19、CD20、CD22、CD74、CD79a、CD40L、ILGF-Rl、TR0P2、CEACAM5、CECAM6、HLA-DR, IFN α、IL-6 以及 TNF- α。
61.如權(quán)利要求42所述的組合物在制備用于治療疾病的藥劑中的用途，所述疾病選自由以下組成的組:自身免疫性疾病、免疫失調(diào)疾病、癌瘤、肉瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑素瘤、淋巴瘤、白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、濾泡性淋巴瘤、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、阿爾茨海默病、I型糖尿病或2型糖尿病、淀粉樣變性以及動脈粥樣硬化。
62.如權(quán)利要求61所述的用途，其中所述抗體存在于所述藥劑中的量為SOmg或更低、160mg或更低、240mg或更低、320mg或更低或400mg或更低。
63.如權(quán)利要求61所述的用途，其中所述藥劑用于皮下施用、肌肉內(nèi)施用或經(jīng)皮膚施用，并且待施用的體積選自由以下組成的組:3ml或更少、2ml或更少以及Iml或更少。
64.如權(quán)利要求61所述的用途，其中所述組合物中的抗體的濃度為至少80mg/ml、至少100mg/ml、至少 125mg/ml、至少 150mg/ml、至少 175mg/ml、至少 200mg/ml、至少 225mg/ml、至少 250mg/ml 或至少 300mg/ml。
65.如權(quán)利要求61所述的用途，其中當(dāng)皮下施用、肌肉內(nèi)施用或經(jīng)皮膚施用時，所述抗體在比當(dāng)靜脈內(nèi)施用時低的劑量下有效。
66.如權(quán)利要求61所述的用途，其中所述自身免疫性疾病選自由以下組成的組:急性特發(fā)性血小板減少性紫癜、慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜、皮肌炎、西登哈姆氏舞蹈病、重癥肌無力、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、狼瘡性腎炎、風(fēng)濕熱、多腺體綜合征、大皰性類天皰瘡、尋常天皰瘡、糖尿病、亨-舍二氏紫癜、鏈球菌感染后腎炎、結(jié)節(jié)性紅斑、大動脈炎、愛迪生氏病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、結(jié)節(jié)病、潰瘍性結(jié)腸炎、多形性紅斑、IgA腎病、結(jié)節(jié)性多動脈炎、強(qiáng)直性脊柱炎、古德帕斯丘氏綜合征、血栓閉塞性脈管炎、斯耶格倫氏綜合征、原發(fā)性膽汁性肝硬化、橋本氏甲狀腺炎、甲狀腺毒癥、硬皮癥、慢性活動性肝炎、多肌炎/皮肌炎、多軟骨炎、尋常天皰瘡、韋格納氏肉芽腫病、膜性腎病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、脊髓癆、巨細(xì)胞動脈炎/多肌痛、惡性貧血、急進(jìn)性腎小球腎炎、牛皮癬以及纖維性肺泡炎。
67.一種制備濃縮的抗體制劑用于皮下施用、肌肉內(nèi)施用或經(jīng)皮膚施用的方法，所述方法包括: a)通過在蛋白質(zhì)A樹脂、陽離子交換樹脂以及陰離子交換樹脂上的連續(xù)柱色譜法來純化所述抗體； b)通過超濾來濃縮所述抗體；以及 c)使用滲濾將所述緩沖液交換成pH介于4.5與5.5之間的高濃度制劑緩沖液，所述高濃度制劑緩沖液包含檸檬酸鹽、磷酸鹽、氯化鈉、聚山梨酯80以及甘露醇。
68.如權(quán)利要求67所述的方法，其中所述高濃度制劑緩沖液進(jìn)一步包含精氨酸和谷氨酸。`
69.如權(quán)利要求67所述的方法,其中所述抗體被濃縮到至少80mg/ml、至少100mg/ml、至少 125mg/ml、至少 150mg/ml、至少 175mg/ml、至少 200mg/ml、至少 225mg/ml、至少 250mg/ml 或至少 300mg/ml。
70.如權(quán)利要求67所述的方法，其進(jìn)一步包括以選自由以下組成的組的體積，通過皮下遞送、肌肉內(nèi)遞送或經(jīng)皮膚遞送來施用所述抗體:3ml或更少、2ml或更少以及Iml或更少。
71.如權(quán)利要求67所述的方法，其中所施用的抗體的量選自由以下組成的組:40mg、80mg、160mg、240mg 以及 320mg。
72.如權(quán)利要求67所述的方法，其中所述高濃度制劑緩沖液包含6.2mM —水合檸檬酸、105mM氯化鈉、1.2mM二水合檸檬酸鈉、8.7mM磷酸氫二鈉、5.5mM磷酸二氫鈉、0.1%聚山梨酯80以及66mM甘露醇。
73.如權(quán)利要求72所述的方法，其中所述聚山梨酯80在所述抗體被濃縮之后添加至所述濃縮的抗體溶液中，以減少濃縮過程中所形成的沉淀的量。
74.如權(quán)利要求67所述的方法，其中所述抗體是非Glml(nGlml)抗體。
75.如權(quán)利要求74所述的方法，其中所述抗體具有Glm3重鏈同種異型。
76.如權(quán)利要求75所述的方法，其中所述抗體具有nGlml，2重鏈無效同種異型。
77.如權(quán)利要求67所述的方法，其中所述抗體具有Km3輕鏈同種異型。
78.如權(quán)利要求74所述的方法，其中所述抗體包含重鏈恒定區(qū)氨基酸殘基精氨酸-214、谷氨酸-356、甲硫氨酸-358以及丙氨酸-431。
79.如權(quán)利要求67所述的方法，其中所述抗體重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列是SEQIDNO:33 或 SEQ ID NO:38。
80.如權(quán)利要求67所述的方法，其中所述抗體輕鏈恒定區(qū)的氨基酸序列是SEQIDN0:40。
81.如權(quán)利要求67所述的方法，其中所述抗體是結(jié)合兩種不同抗原的雙特異性抗體，每種抗原選自由以下組成的組:CD19、CD20、CD22、CD74、CD79a、CD40L、ILGF-RU TROP2、CEACAM5、CECAM6、HLA-DR、IFN α、IL-`6 以及 TNF- α。
【文檔編號】A61K51/10GK103501825SQ201280020130
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2012年5月1日 優(yōu)先權(quán)日:2011年5月2日
【發(fā)明者】L·曾, R·米特拉, E·A·羅西, H·J·漢森, D·M·戈德堡 申請人:免疫醫(yī)療公司