專利名稱：α-硫酸鋅在制備治療糖尿病并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及α -硫酸鋅在制備治療糖尿病并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
糖尿病幾乎所有的慢性并發(fā)癥都與腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)有關(guān)，但研究并未發(fā)現(xiàn)糖尿病患者血液中腎素或是血管緊張素II有所增高，循環(huán)中RAS的組份不但不升高，甚至下降。隨著多組織包括胰腺組織、脂肪組織、心臟組織中表達(dá)RAS各成分的發(fā)現(xiàn)，人們發(fā)現(xiàn)組織細(xì)胞局部的RAS在糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生過程中起到重要作用。
高糖引起氧化應(yīng)激是糖尿病慢性并發(fā)癥發(fā)病的起始和中心機(jī)制。細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激隨著葡萄糖水平增加而升高，同時(shí)細(xì)胞局部RAS組份的基因表達(dá)被激活，研究發(fā)現(xiàn)阻斷氧化應(yīng)激能減少RAS激活水平，阻斷RAS也能減少ROS產(chǎn)生。在局部阻斷RAS作用，不減少RAS相關(guān)基因在局部的表達(dá)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于根據(jù)高糖與局部RAS的關(guān)系，提供一種抗氧化劑在制備糖尿病并發(fā)癥藥物中應(yīng)用。實(shí)際上，本發(fā)明涉及α -硫辛酸在制備糖尿病并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用。涉及α-硫辛酸在制備糖尿病并發(fā)癥腎病藥物中的應(yīng)用。涉及α -硫辛酸在制備糖尿病并發(fā)癥高血壓藥物中的應(yīng)用。下面用α -硫辛酸的藥理實(shí)驗(yàn)及結(jié)果證明其在制藥領(lǐng)域中的應(yīng)用。將分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞株進(jìn)行分組實(shí)驗(yàn)(1)5. 5mM糖濃度將分化成熟的脂肪細(xì)胞分為3組，在無血清含有O. 2%BSA的DMEM培養(yǎng)液中饑餓12小時(shí)。將分化成熟的脂肪細(xì)胞分為2組，I組為5. 5mM糖濃度的無血清DMEM培養(yǎng)液對(duì)照，另外I組加入含a-硫辛酸的5. 5mM糖濃度的無血清DMEM培養(yǎng)液，培養(yǎng)48小時(shí)；(2)15mM糖濃度將分化成熟的脂肪細(xì)胞分為3組，在無血清含有O. 2%BSA的DMEM培養(yǎng)液中饑餓12小時(shí)。將分化成熟的脂肪細(xì)胞分為2組，I組為15mM糖濃度的無血清DMEM培養(yǎng)液對(duì)照，另外I組加入含a-硫辛酸的15mM糖濃度的無血清DMEM培養(yǎng)液，培養(yǎng)48小時(shí)；(3)25mM糖濃度將分化成熟的脂肪細(xì)胞分為3組，在無血清含有O. 2%BSA的DMEM培養(yǎng)液中饑餓12小時(shí)。將分化成熟的脂肪細(xì)胞分為2組，I組為25mM糖濃度的無血清DMEM培養(yǎng)液對(duì)照，另外I組加入含a-硫辛酸的25mM糖濃度的無血清DMEM培養(yǎng)液，培養(yǎng)48小時(shí)。結(jié)果不同糖濃度對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞局部RAS基因表達(dá)的影響誘導(dǎo)分化成熟的3T3-L1細(xì)胞在不同糖濃度包括5. 5mM, 15mM,25mM葡萄糖濃度作用48小時(shí)后，腎素、腎素結(jié)合蛋白、血管緊張素原、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶、AT1R、AT2R基因表達(dá)水平的變化與5. 5mM糖濃度組比較，15mM葡萄糖濃度能顯著的降低3T3-L1脂肪細(xì)胞中腎素結(jié)合蛋白的表達(dá)，而腎素、血管緊張素原、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶、AT1R、AT2R表達(dá)呈增高的趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。25mM葡萄糖組中腎素、血管緊張素原、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶、AT1R、AT2R表達(dá)顯著增高，較5. 5mM葡萄糖組分別增高51.71倍(F=170. 7，Ρ〈0· 0001), 12. 86倍(F=31. 56，Ρ〈0· 0001),3. 04 倍(F=7. 132，P=O. 0037),4. 16 倍(F=5. 167，P=O. 0118),2. 62 倍(F=3. 698，P=O. 0349)，而腎素結(jié)合蛋進(jìn)一步降低至76. 3% (F=8. 548，Ρ=0· 001)。由此可見，高糖濃度能夠增加腎素、血管緊張素原、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶、AT1R、AT2R表達(dá)，從而激活RAS系統(tǒng)。不同糖濃度對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞ROS的影響誘導(dǎo)分化成熟的3T3-L1細(xì)胞在不同糖濃度包括5. 5mM, 15mM,25mM葡萄糖濃度作用48小時(shí)后細(xì)胞內(nèi)ROS的表達(dá)15mM葡萄糖和25mM葡萄糖均能顯著增加細(xì)胞內(nèi)ROS的表 達(dá)，與5. 5mM葡萄糖對(duì)照組比分別增加141. 1%和198. 5% (F=22. 36，Ρ〈0· 0001)。抗氧化劑對(duì)細(xì)胞內(nèi)ROS及RAS各成分表達(dá)的影響為了明確高糖濃度下ROS變化對(duì)RAS各成分表達(dá)的影響，我們?cè)谡T導(dǎo)分化完全的3T3-L1脂肪細(xì)胞中加入抗氧化劑α -硫辛酸，培養(yǎng)48小時(shí)后檢測(cè)3T3-L1脂肪細(xì)胞中R0S、腎素、腎素結(jié)合蛋白、血管緊張素原、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶、AT1R、AT2R表達(dá)的變化。α-硫辛酸能顯著降低25mM葡萄糖引起的細(xì)胞內(nèi)ROS至69. l%(t=3. 184，P=O. 008)。而在5. 5mM葡萄糖組及15mM葡萄糖濃度條件下，α-硫辛酸對(duì)細(xì)胞內(nèi)的ROS無顯著影響。在5. 5mM葡萄糖組及15mM葡萄糖組，α -硫辛酸對(duì)腎素、血管緊張素原mRNA表達(dá)無顯著性改變。在25mM葡萄糖組，給以α -硫辛酸處理后，腎素、血管緊張素原mRNA表達(dá)分別降至原來的 43. 8% (t=3. 953，P=O. 002),43. 5% (t=2. 803，P=O. 013)，并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在15mM葡萄糖組及25mM葡萄糖組，α -硫辛酸對(duì)腎素結(jié)合蛋白均有顯著的降低作用(t=2. 803，P=O. 013)。α -硫辛酸在不同糖濃度條件下，對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶、AT1R、AT2R變化均無顯著的改變。本發(fā)明結(jié)果表明高糖能顯著的增加AGT的表達(dá)。此外，高糖還能激活3T3-L1脂肪細(xì)胞中RAS其他各基因的表達(dá)，包括腎素，AGT, ACE, AT1R，AT2R，相反腎素結(jié)合蛋白的表達(dá)減少。同時(shí)，高血糖顯著增加細(xì)胞內(nèi)活性氧，引起的氧化應(yīng)激。應(yīng)用抗氧化劑α-硫辛酸通過降低細(xì)胞內(nèi)活性氧水平可降低腎素及ACT的表達(dá)，從而可用于糖尿病并發(fā)的腎病和高血壓的藥物制備。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例(1)5. 5mM糖濃度將分化成熟的脂肪細(xì)胞分為3組，在無血清含有O. 2%BSA的DMEM培養(yǎng)液中饑餓12小時(shí)。將分化成熟的脂肪細(xì)胞分為2組，I組為5. 5mM糖濃度的無血清DMEM培養(yǎng)液對(duì)照，另外I組加入含a-硫辛酸的5. 5mM糖濃度的無血清DMEM培養(yǎng)液，培養(yǎng)48小時(shí)；(2)15mM糖濃度將分化成熟的脂肪細(xì)胞分為3組，在無血清含有O. 2%BSA的DMEM培養(yǎng)液中饑餓12小時(shí)。將分化成熟的脂肪細(xì)胞分為2組，I組為15mM糖濃度的無血清DMEM培養(yǎng)液對(duì)照，另外I組加入含a-硫辛酸的15mM糖濃度的無血清DMEM培養(yǎng)液，培養(yǎng)48小時(shí)；(3)25mM糖濃度將分化成熟的脂肪細(xì)胞分為3組，在無血清含有O. 2%BSA的DMEM培養(yǎng)液中饑餓12小時(shí)。將分化成熟的脂肪細(xì)胞分為2組，I組為25mM糖濃度的無血清DMEM培養(yǎng)液對(duì)照，另外I組加入含a-硫辛酸的25mM糖濃度的無血清DMEM培養(yǎng)液，培養(yǎng)48小時(shí)。相對(duì)于低葡萄糖組，中葡萄糖組與高葡萄糖組細(xì)胞內(nèi)的活性氧均有顯著性增加。高葡萄糖組中腎素、血管緊張素原、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶、血管緊張素I型受體、血管緊張素2型受體均有顯著性增加，中葡萄糖組也表現(xiàn)出相同的趨勢(shì)但不顯著性差異。而腎素結(jié)合蛋白在中葡萄糖組及高葡萄糖組均顯著降低；抗氧化劑α-硫酸鋅可阻斷高糖引起的細(xì)胞內(nèi)活性氧的增加，從而阻斷高葡萄糖誘導(dǎo)的腎素及AGT表達(dá)的增加。
以上所述為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，但本發(fā)明不應(yīng)該局限于該實(shí)施例所公開的內(nèi)容。所以凡是不脫離本發(fā)明所公開的精神下完成的等效或修改，都落入本發(fā)明保護(hù)的范圍。
權(quán)利要求
1.a-硫辛酸在制備治療糖尿病并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用。
2.a _硫辛酸在制備治療糖尿病并發(fā)癥腎病藥物中的應(yīng)用。
3.a -硫辛酸在制備治療糖尿病并發(fā)癥高血壓藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了α-硫辛酸在制備糖尿病并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明結(jié)果表明高糖能顯著的增加AGT的表達(dá)。此外，高糖還能激活3T3-L1脂肪細(xì)胞中RAS其他各基因的表達(dá)，包括腎素，AGT，ACE，AT1R，AT2R，相反腎素結(jié)合蛋白的表達(dá)減少。同時(shí)，高血糖顯著增加細(xì)胞內(nèi)活性氧，引起的氧化應(yīng)激。應(yīng)用抗氧化劑α-硫辛酸通過降低細(xì)胞內(nèi)活性氧水平可降低腎素及ACT的表達(dá)，從而可用于糖尿病并發(fā)的腎病和高血壓的藥物制備。
文檔編號(hào)A61P9/12GK103006641SQ20121057676
公開日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2012年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月26日
發(fā)明者寧光, 方萍, 湯正義, 崔斌, 王衛(wèi)慶 申請(qǐng)人:上海市內(nèi)分泌代謝病研究所