專利名稱：一種復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種復(fù)方骨肽的注射劑及其制法，具體涉及一種復(fù)方骨肽的脂質(zhì)體注射劑及其制法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
復(fù)方骨肽是一種中藥提取物，具體是以3份質(zhì)量的健康豬或胎牛四肢骨與一份質(zhì)量比例的全蝎為原料，提取得到的粘稠狀產(chǎn)物。復(fù)方骨肽富含多種骨長(zhǎng)因子，主要成分多肽、氨基酸、有機(jī)鈣、磷、無(wú)機(jī)鈣、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，各成分有較強(qiáng)的相互協(xié)調(diào)作用，能夠促進(jìn)骨愈合，調(diào)節(jié)骨代謝，平衡骨生長(zhǎng)，具有較強(qiáng)的相互協(xié)調(diào)作用，且無(wú)胃腸反應(yīng)及成癮性，可安全有效的緩解骨質(zhì)疏松患者的痛苦。臨床上用于治療風(fēng)濕、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)增生、骨折等疾病。多肽類藥物分子量較大，分子易聚集，脂溶性差、不易透過(guò)生物膜，通常只能注射給藥。 目前上市的復(fù)方骨肽劑型主要為注射液和無(wú)菌凍干粉針。，普通工藝所制備的復(fù)方骨肽注射劑，物理和化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定性差，長(zhǎng)期存放藥品質(zhì)量會(huì)下降而且還會(huì)生成一些雜質(zhì)，帶來(lái)毒副作用，給臨床使用留下了隱患。凍干粉針制作周期長(zhǎng)，費(fèi)用高，價(jià)格貴。專利文獻(xiàn)CN1579541A公開了一種注射用復(fù)方骨肽及制備方法，經(jīng)過(guò)提取復(fù)方骨肽其，將復(fù)方骨肽和一定比例的賦形劑制成制劑，此制備方法為傳統(tǒng)的無(wú)菌凍干粉針劑的制備方法，制備過(guò)程復(fù)雜，費(fèi)用昂貴且藥物的生物利用度不高。而且復(fù)方骨肽溶液的主要成分為小分子多肽類物質(zhì)，在保存過(guò)程中極易引起聚合形成大分子，從而影響本品的生物活性和用藥安全。專利文獻(xiàn)CN1830485A公開了一種抗炎鎮(zhèn)痛藥物復(fù)方骨肽注射液及其制備方法。其經(jīng)過(guò)提取，將復(fù)方骨肽提取液在避光，充氮保護(hù)情況下制成注射液。但是復(fù)方骨肽在液體中容易發(fā)生聚集，生成大分子物質(zhì)，影響生物利用度，也加大了用藥的不安全性。專利文獻(xiàn)CN100998607A公開一種復(fù)方骨肽氯化鈉注射液及其制備方法。它由復(fù)方骨肽溶液、氯化鈉、注射用水組成。但是這種常規(guī)制備方法制作的復(fù)方骨肽注射液生物利用度低，且復(fù)方骨肽為大分子，容易發(fā)生聚集，增加了藥物的不安全性。專利文獻(xiàn)CN101156872A公開了一種復(fù)方骨肽制劑及其制備方法。其制劑包括小容量注射液和凍干粉針劑。但這種常規(guī)方法生產(chǎn)的制劑，導(dǎo)致藥物的不合格率會(huì)有所增加，增加人體的風(fēng)險(xiǎn)。專利文獻(xiàn)CN1903358A公開了一種口服復(fù)方骨肽藥物組合及其制備方法，此種方法采用環(huán)糊精包和技術(shù)增大復(fù)方骨肽的溶解性和穩(wěn)定性，但是該藥物為多肽類生物分子，體內(nèi)消化酶會(huì)分解藥物，影響藥物的吸收，降低生物利用度。在藥物載體輸送系統(tǒng)中，微乳、微球、納米粒、脂質(zhì)體、藥質(zhì)體等亞微粒的研究已經(jīng)成為藥物新劑型研究中非?；钴S的領(lǐng)域。將藥物包封于這些亞微粒中可以改變藥物在體內(nèi)的分布，增加藥物在靶器官的分布量，從而提高療效，減輕毒副作用。在靶向給藥系統(tǒng)中，脂質(zhì)體的研究較為廣泛，脂質(zhì)體在體內(nèi)具有良好的靶向性和生物相容性。作為一種新型藥物制劑，脂質(zhì)體制劑具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)具有緩釋作用活性成分緩慢釋放，延緩腎排泄和代謝，從而延長(zhǎng)作用時(shí)間，提高質(zhì)量效果；(2)降低藥物毒性；(3)增加藥物的溶解性，提高制劑質(zhì)量；(4)具有靶向性脂質(zhì)體所載的藥物在肝、脾網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)臟器局部維持高濃度，從而起到藥物器官靶向性作用；(5)具有對(duì)活性藥物成分的保護(hù)作用。脂質(zhì)體(Liposome)最初是由英國(guó)學(xué)者Bangham和Standlish將磷脂分散在水中進(jìn)行電鏡觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)的。磷脂分散在水中自然形成多層囊泡，每層均未脂質(zhì)的雙分子層；囊泡中央和各層之間被水相隔開，雙分子層厚度約為4nm。后來(lái)，將這種具有類似生物膜結(jié)構(gòu)的雙分子小囊稱為脂質(zhì)體。脂質(zhì)體可分為多室脂質(zhì)體和膽識(shí)脂質(zhì)體。單室脂質(zhì)體又分為小單室脂質(zhì)體和大單室脂質(zhì)體。小單室脂質(zhì)體為球形，尺寸一般為20-50納米；大單室脂質(zhì)體的尺寸為微米數(shù)量級(jí)。1971年英國(guó)萊門等人開始將脂質(zhì)體用于藥物載體，主要作用機(jī)理是將藥物粉末或溶液包裹在脂質(zhì)體雙層脂質(zhì)膜所封閉的水相中或嵌入脂質(zhì)體雙層脂質(zhì)膜中，這種微粒具有類細(xì)胞結(jié)構(gòu)，進(jìn)入人體內(nèi)主藥被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬而激活機(jī)體的自身免疫功能，并改變被 包封藥物的體內(nèi)分布，使藥物主要在肝、脾、肺和骨髓等組織器官中積蓄，從而提高藥物的治療指數(shù)，減少藥物的治療劑量和降低藥物的毒性。近年來(lái)，隨著生物技術(shù)的不斷進(jìn)展，脂質(zhì)體制備工藝逐步完善，脂質(zhì)體作用機(jī)制進(jìn)一步闡明，加之脂質(zhì)體適合體內(nèi)降解、無(wú)毒性和無(wú)免疫原性，特別是大量試驗(yàn)數(shù)據(jù)證明脂質(zhì)體作為藥物載體可以提高藥物治療指數(shù)、降低藥物毒性和減少藥物副作用，并減少藥物劑
量等優(yōu)點(diǎn)。
發(fā)明內(nèi)容
為了形成品質(zhì)優(yōu)良的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑，重要的是尋找能與復(fù)方骨肽良好相容從而將其良好包封且不滲漏的成膜材料，以及尋找能使脂質(zhì)體形成穩(wěn)定注射劑的賦形劑成分。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明人進(jìn)行的大量研究和實(shí)現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)特定重量配比的復(fù)方骨肽、膽固醇、蛋黃磷脂酰肌醇、吐溫60、海藻糖和甘露醇能制成復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑，其中，作為藥物活性成分的復(fù)方骨肽的包封率高，脂質(zhì)體粒徑小且分布均勻，與現(xiàn)有技術(shù)中的復(fù)方骨肽注射劑相比，本發(fā)明制劑的藥物活性成分在體循環(huán)中的保留時(shí)間顯著延長(zhǎng)，藥物的生物相容性聞，生物利用度明顯提聞，療效明顯提聞。一方面，本發(fā)明提供一種復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑，其主要由以下重量配比的成分制成
復(fù)方骨3#
膽固醇4-20份
蛋黃磷脂酰肌醇8-80份
吐溫601-60份
海藻糖5-50份
優(yōu)選地，膽固醇與蛋黃磷脂酰肌醇之間的重量比為1:2-1:4之間。進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑主要由以下重量配比的成分制成
復(fù)方骨肽3份
膽固醇5-15份 蛋黃磷脂觥觀Jf10-45份
吐溫605-40份
海藻糖10-30份進(jìn)一步優(yōu)選地，膽固醇與蛋黃磷脂酰肌醇之間的重量比為1:2-1:3之間。再進(jìn)一步優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑由包括以下重量配比的藥
物和賦形劑成分制成
復(fù)方骨肽3#
解國(guó)醇10-15#
蛋黃磷脂肌醇20-30份
吐溫 6010-30#
海藻糖10-20價(jià)再進(jìn)一步優(yōu)選地，膽固醇與蛋黃磷脂酰肌醇之間的重量比為1:2。作為本發(fā)明的具體的實(shí)施方案之一，本發(fā)明復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑還可以加入10份的甘露醇制備成凍干粉針。作為用于形成脂質(zhì)體的磷脂，可以使用天然磷脂和合成磷脂。在本發(fā)明中，作為藥物活性成分的復(fù)方骨肽，其水溶性良好，脂溶性差。針對(duì)復(fù)方骨肽的特點(diǎn)，本發(fā)明人通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)蛋黃磷脂酰肌醇特別適于作為基礎(chǔ)磷脂成膜材料。蛋黃磷脂酰肌醇(PI)作為一種天然磷脂，其含量非常高，容易獲得，價(jià)格低廉。蛋黃磷脂酰肌醇的相變溫度較高，易于形成穩(wěn)定的脂質(zhì)體膜。在本發(fā)明的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑中，相對(duì)于3重量份的復(fù)方骨肽而言，蛋黃磷脂酰肌醇的用量為8-80重量份。如果蛋黃磷脂酰肌醇的用量低于8重量份，則無(wú)法形成穩(wěn)定的脂質(zhì)體；反之，如果蛋黃磷脂酰肌醇的用量的用量高于80重量份，則作為藥物活性成分的復(fù)方骨肽的包封率下降，注射劑的品質(zhì)以及療效降低。在本發(fā)明的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑中，膽固醇用于調(diào)節(jié)脂質(zhì)體的膜穩(wěn)定性。本發(fā)明人經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)膽固醇與蛋黃磷脂酰肌醇重量比為1:2-1:4時(shí)，能形成穩(wěn)定的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體。當(dāng)膽固醇與蛋黃磷脂酰肌醇重量比低于1:2時(shí)，膜穩(wěn)定性降低，復(fù)方骨肽易于滲漏；當(dāng)膽固醇與蛋黃磷脂酰肌醇重量比高于1:4時(shí)，復(fù)方骨肽脂質(zhì)體膜流動(dòng)性過(guò)高，被包裹在脂質(zhì)體內(nèi)的復(fù)方骨肽易于釋放。此外，研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)膽固醇與蛋黃磷脂酰肌醇重量比為1:2-1:4時(shí)，所形成的脂質(zhì)體毒性低。
研究表明，脂質(zhì)體的穩(wěn)定性與生物利用度有密切的對(duì)應(yīng)關(guān)系。穩(wěn)定性越高，生物利用度越高。因此，本發(fā)明的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑的穩(wěn)定性高，是導(dǎo)致藥物生物利用度高的因素之一。另一方面，本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，在本發(fā)明的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑中，相對(duì)于3重量份的復(fù)方骨肽而言，蛋黃磷脂酰肌醇的用量為8-80重量份，膽固醇為4-20重量份，且膽固醇與蛋黃磷脂酰肌醇重量比為1:2-1:4時(shí)，所形成的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑的包封率聞。在本發(fā)明的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑中，使用吐溫-60來(lái)進(jìn)一步改進(jìn)脂質(zhì)體膜的穩(wěn)定性。吐溫-60 (聚山梨醇-60)是一種非離子表面活性劑，當(dāng)用于蛋黃磷脂酰肌醇雙層膜中時(shí)，能提高該雙層膜之間的化學(xué)能，從而提高脂質(zhì)體在水性液體中的化學(xué)穩(wěn)定性，進(jìn)而提高復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑的穩(wěn)定性。
在本發(fā)明的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑中，相對(duì)于3重量份的復(fù)方骨肽而言，吐溫-60的用量為1-60重量份。如果吐溫-60的用量低于I重量份，則由于其用量過(guò)低導(dǎo)致對(duì)復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑的穩(wěn)定性改進(jìn)不夠，反之，如果吐溫-60的用量高于60重量份，則用于其用量過(guò)高而導(dǎo)致脂質(zhì)體膜易于泄露。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用上述特定量的復(fù)方骨肽、蛋黃磷脂酰肌醇、膽固醇、蛋黃卵磷脂和吐溫-60時(shí)，可以得到品質(zhì)優(yōu)良的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體，其包封率和穩(wěn)定性都很高，毒性低，生物利用度高。在本發(fā)明的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑中，使用海藻糖和甘露醇作為賦形劑，進(jìn)一步用于形成穩(wěn)定的注射劑。海藻糖是由兩個(gè)葡萄糖分子以a，a，1，1-糖苷鍵構(gòu)成的非還原性糖，自身性質(zhì)非常穩(wěn)定，它最明顯的性質(zhì)是在無(wú)水的條件下有保護(hù)生物膜的能力，使脂質(zhì)體即使在脫水的情況下也保持形態(tài)完整。在本發(fā)明的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑中，海藻糖能有效保護(hù)脂質(zhì)體顆粒的形態(tài)和穩(wěn)定性，進(jìn)一步提高脂質(zhì)體注射劑的穩(wěn)定性。甘露醇在醫(yī)藥上是良好的利尿劑，降低顱內(nèi)壓、眼內(nèi)壓及治療腎藥、脫水劑、食糖代用品、也用作藥片的賦形劑及固體、液體的稀釋劑，尤其能為凍干粉針劑提供良好的成型支撐。本發(fā)明的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑，其復(fù)方骨肽的規(guī)格可以為30mg、2ml :30mg或5ml :75mg。另一方面，本發(fā)明還提供一種復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射液的制備方法，具體包括如下制備步驟(I)將膽固醇、蛋黃磷脂酰肌醇和吐溫60溶于緩沖鹽溶液中，制成空白脂質(zhì)體；(2)將上述制備的空白脂質(zhì)體經(jīng)流通蒸汽滅菌處理，然后超聲處理兩次，每次15分鐘；(3)無(wú)菌條件下，向溶液狀態(tài)的脂質(zhì)體中加入復(fù)方骨肽，不斷攪拌下加入海藻糖；(4)0. 45 Um微孔濾膜過(guò)濾，灌裝，滅菌，即得。另一方面，本發(fā)明還提供一種復(fù)方骨肽脂質(zhì)體凍干粉針注射劑的制備方法，具體包括如下制備步驟
(I)將膽固醇、蛋黃磷脂酰肌醇和吐溫60溶于緩沖鹽溶液中，制成空白脂質(zhì)體；(2)將上述制備的空白脂質(zhì)體經(jīng)流通蒸汽滅菌處理，然后超聲處理兩次，每次15分鐘；(3)無(wú)菌條件下，向溶液狀態(tài)的脂質(zhì)體中加入復(fù)方骨肽，不斷攪拌下加入海藻糖和
甘露醇；(4)0. 45 Um微孔濾膜過(guò)濾，灌裝，冷凍干燥，即得。上述所述的制備方法，其中所述的緩沖鹽溶液選自磷酸鹽緩沖溶液、枸櫞酸鹽緩沖溶液、碳酸鹽緩沖溶液、硼酸鹽緩沖溶液中的一種，優(yōu)選為pH為6. 8的磷酸鹽緩沖溶液。上述所述的制備方法，其中步驟(3)中所述的溶液狀態(tài)脂質(zhì)體的溫度為35°C。 上述所述的制備方法，其中步驟(4)中所述冷凍干燥的具體方式為，預(yù)凍溫度為-2(T-65°C，預(yù)凍時(shí)間為2 24小時(shí)，升華時(shí)間為12 48小時(shí)，再干燥溫度為(T35°C，再干燥時(shí)間為2 12小時(shí)；滅菌條件為12rC，30min。制備脂質(zhì)體的挑戰(zhàn)在于如何使脂質(zhì)體膜形成適當(dāng)大小、適當(dāng)結(jié)構(gòu)材料的包封率高的囊泡，而且這些材料在形成脂質(zhì)體不漏出。本發(fā)明人通過(guò)選擇適當(dāng)?shù)牟牧铣煞?、采用合適的制備工藝，獲得了品質(zhì)優(yōu)良的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑，脂質(zhì)體粒徑小，粒徑分布均勻，包封率高，穩(wěn)定性高。本發(fā)明的脂質(zhì)體注射劑減少了毒副作用，提高了制劑產(chǎn)品質(zhì)量，具有良好的制劑穩(wěn)定性，冷凍過(guò)程中脂質(zhì)體不會(huì)因脫水、融合、冰晶等發(fā)生破裂，長(zhǎng)期儲(chǔ)存后，脂質(zhì)體同樣保持良好的包封率。通過(guò)本發(fā)明方法制得的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑，提高了復(fù)方骨肽的溶解度，提高了制劑產(chǎn)品的質(zhì)量，減少了毒副作用，增加了藥物在體循環(huán)中的保留時(shí)間，提高了藥物的生物利用度，療效明顯提高；并且制備方法簡(jiǎn)單，適合于工業(yè)化大生產(chǎn)。
圖1是復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑的血藥濃度-時(shí)間曲線。其中
實(shí)施例1 ■^實(shí)I!例2實(shí)施倒3 對(duì)比詞I HF對(duì)比_2 對(duì)比例3 —I—Jilt!樣
具體實(shí)施例方式以下通過(guò)具體優(yōu)選的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明。這些實(shí)施例僅是說(shuō)明性的，并不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射液的制備所用成分及其重量如下復(fù)方骨肽300g
膽固醇400g
蛋黃磷脂酰肌醇800g
吐溫60IOOg
海藻糖500g
采用如下工藝制備復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射液(I)將400g膽固醇、800g蛋黃磷脂酰肌醇和IOOg吐溫60溶于2000ml pH為6. 8
的磷酸鹽緩沖鹽溶液中，制成空白脂質(zhì)體；(2)將上述制備的空白脂質(zhì)體經(jīng)流通蒸汽滅菌處理，然后超聲處理兩次，每次15分鐘；(3)無(wú)菌條件下，向35°C溶液狀態(tài)的脂質(zhì)體中加入300g復(fù)方骨肽，不斷攪拌下加A 500g海藻糖；(4) 0.45 iim微孔濾膜過(guò)濾，灌裝，然后在121°C滅菌30min，即得復(fù)方骨肽脂質(zhì)體
注射液。實(shí)施例2復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射液的制備所用成分及其重量如下
復(fù)方骨肽750g
IS固醇500g
蛋黃磷臘釀肌醇IOOOg
吐溫605OOg
海藻糖I OOOg采用如下工藝制備復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射液(I)將500g膽固醇、IOOOg蛋黃磷脂酰肌醇和500g吐溫60溶于5000ml pH為6. 8
的磷酸鹽緩沖鹽溶液中，制成空白脂質(zhì)體；(2)將上述制備的空白脂質(zhì)體經(jīng)流通蒸汽滅菌處理，然后超聲處理兩次，每次15分鐘；(3)無(wú)菌條件下，向35°C溶液狀態(tài)的脂質(zhì)體中加入750g復(fù)方骨肽，不斷攪拌下加A iooog海藻糖；(4)0. 45 iim微孔濾膜過(guò)濾，灌裝，然后在121°C滅菌30min，即得復(fù)方骨肽脂質(zhì)體
注射液。實(shí)施例3復(fù)方骨肽脂質(zhì)體凍干粉針注射劑的制備所用成分及其重量如下復(fù)方骨肽300g
膽固醇400g
蛋黃鱗ISitiL醇soog
吐溫60IOOg
海藻糖500g
甘露醇IOOOg采用如下工藝制備復(fù)方骨肽脂質(zhì)體凍干粉針注射劑(I)將400g膽固醇、800g蛋黃磷脂酰肌醇和IOOg吐溫60溶于2000ml的pH為 6. 8的磷酸鹽緩沖鹽溶液中，制成空白脂質(zhì)體；(2)將上述制備的空白脂質(zhì)體經(jīng)流通蒸汽滅菌處理，然后超聲處理兩次，每次15分鐘；(3)無(wú)菌條件下，向35°C溶液狀態(tài)的脂質(zhì)體中加入300g復(fù)方骨肽，不斷攪拌下加A 500g海藻糖和IOOOg甘露醇；(4)0. 45 Um微孔濾膜過(guò)濾，灌裝，然后進(jìn)行凍干，預(yù)凍溫度為_45°C，預(yù)凍時(shí)間為22小時(shí)，升華時(shí)間為40小時(shí)，再干燥溫度為35°C。再干燥時(shí)間為12小時(shí)，即得復(fù)方骨肽脂質(zhì)體凍干粉針注射劑。對(duì)比例1-3復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑的制備采用分別與實(shí)施例1相同的生產(chǎn)工藝，將如下表I中所示的對(duì)比例1-3中的成分分別制成復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑；表I對(duì)比例1-3中所用成分
__AM_對(duì)比例I_對(duì)比例2_對(duì)比例3
* 復(fù)方骨肽30%75 30%
膽固醇4《)0g/2()0g
蛋黃磷脂酖肌//2500
蛋黃卵磷脂/SOOg/
磷脂酖乙醇/fc800g//甘氨酸鈉/WOOg/
吐溫60/80g
吐溫 80i§0gSOOg/
海藻糖//300g
蔗糖500gI/
氯化鈉/IOOOg/
_甘露 S 祭_/_/_300g其中，“/”表示未使用，且對(duì)比例3僅是簡(jiǎn)單的冷凍干燥，沒有預(yù)凍、升華和再干燥的過(guò)程。試驗(yàn)例I脂質(zhì)體粒徑的測(cè)定室溫條件下，取實(shí)施例1-3和對(duì)比例1-3中的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑，置于SubmicronParticle Sizer Model 370粒徑檢測(cè)儀的樣品管中，測(cè)定粒徑大小分布及平均粒徑；用投射電子顯微鏡觀察粒子形態(tài)。結(jié)果示于下表2中。表2脂質(zhì)體粒徑檢測(cè)結(jié)果
+均粒徑
實(shí)施例1229.9nm球狀，均勾
對(duì)比f(wàn)rl I43 LHnm不均勻》雜名L
實(shí)施《 2232.2nm球狀，均勻 對(duì)比例2421.9nm不均勻.雜亂
實(shí)施例3206.5nra球狀，均勻-^..^32-4522ng-........全1-從表2可知，實(shí)施例1-3制得的脂質(zhì)體粒徑均勻，顯球形，大小均一；對(duì)比例1-3制得的脂質(zhì)體粒徑不均勻，形狀不定，大小不一。具體而言，即使在采用同樣的生產(chǎn)工藝時(shí)，實(shí)施例1-3中所得復(fù)方骨肽脂質(zhì)體的顆粒外觀及其平均粒徑明顯優(yōu)于對(duì)比例1-3中所得的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體。說(shuō)明當(dāng)使用本發(fā)明所用成分以外的成分時(shí)，或當(dāng)成分用量在本發(fā)明限定的成分用量范圍外時(shí)，或當(dāng)制備方法的凍干工藝不同于本發(fā)明時(shí)，所得復(fù)方骨肽脂質(zhì)體的外觀劣于本發(fā)明，平均粒徑明顯大出很多。試驗(yàn)例2包封率的測(cè)定將實(shí)施例1-3和對(duì)比例1-3中制備的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑以5000r/min的轉(zhuǎn)速高速離心，離心20分鐘，取上清液，用甲醇溶解，HPLC法測(cè)復(fù)方骨肽含量，計(jì)算包封率，結(jié)果不于下表3中。表3包封率測(cè)定結(jié)果
「 n 編號(hào)實(shí)施例1 對(duì)比例I 實(shí)施例2 對(duì)比例2 實(shí)施例3 對(duì)比例3--
包封率 85.8% 52.2%87.9% 51.9% 88.6% 53.2%由表3可知，實(shí)施例1-3制備的脂質(zhì)體制劑的包封率顯著的高于對(duì)比例1-3的脂質(zhì)體制劑的包封率。說(shuō)明當(dāng)使用本發(fā)明所用成分以外的成分時(shí)，或當(dāng)成分用量在本發(fā)明限定的成分用量范圍外時(shí)，或當(dāng)制備方法的凍干工藝不同于本發(fā)明時(shí)，所得脂質(zhì)體的脂質(zhì)體包封率低于本發(fā)明。試驗(yàn)例3穩(wěn)定性考察將本發(fā)明實(shí)施例1-3和對(duì)比例1-3制備的樣品和上市注射用復(fù)方骨肽凍干粉針(批號(hào)20110224，南京新百藥業(yè)有限公司)分別置于高溫40°C、相對(duì)濕度75%的條件下6個(gè)月，進(jìn)行加速試驗(yàn)考察，實(shí)驗(yàn)結(jié)果示于下表4中。表4加速試驗(yàn)結(jié)果
時(shí)間樣品性狀有關(guān)物質(zhì)(％)含量(％)
^實(shí)施例1白色凍千粉末QM993
實(shí)施例2白色凍干粉末0.9199.8
實(shí)施例3白色凍千粉末0.9199.7
對(duì)比例I白色凍千粉束1.0399.5
權(quán)利要求
1.一種復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑，其特征在于主要由以下重量配比的成分制成復(fù)方骨敷3#膽固醇4-20份蛋黃鱗IIftfL醇8-80翁吐溫601-60份海藻糖5-50份甘露轉(zhuǎn)·0-20德％優(yōu)選地，膽固醇與蛋黃磷脂酰肌醇之間的重量比為1:2-1:4，優(yōu)選地，甘露醇10份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑，其主要由以下重量配比的成分制成復(fù)方骨肽3份膽固醇5-15輸?shù)包S磷脂酰肌醇1045份吐溫605-40份海藻It10-30份甘露醇0-10份,優(yōu)選地，膽固醇與蛋黃磷脂酰肌醇之間的重量比為1:2-1: 3。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑，其主要由以下重量配比的成分制復(fù)方骨肽3份膽固醇10-15份蛋黃磷脂酰肌醇 20-30份吐溫6010-30份海藻糖 10-20份甘露醇0-10份,優(yōu)選地，膽固醇與蛋黃磷脂酰肌醇之間的重量比為1:2。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑包括凍干粉針和注射液， 其特征在于復(fù)方骨肽的規(guī)格為30mg、2ml :30mg或5ml :75mg。
5.一種制備復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑的方法，其特征在于包括如下步驟(1)將膽固醇、蛋黃磷脂酰肌醇和吐溫60溶于緩沖鹽溶液中，制成空白脂質(zhì)體；(2)將上述制備的空白脂質(zhì)體經(jīng)流通蒸汽滅菌處理，然后超聲處理兩次，每次15分鐘；(3)無(wú)菌條件下，向溶液狀態(tài)的脂質(zhì)體中加入復(fù)方骨肽，不斷攪拌下加入海藻糖和甘露成醇；(4)0. 45 μ m微孔濾膜過(guò)濾，灌裝，滅菌或冷凍干燥，即得復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述的緩沖鹽溶液是選自磷酸鹽緩沖溶液、枸櫞酸鹽緩沖溶液、碳酸鹽緩沖溶液、硼酸鹽緩沖溶液中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述的緩沖鹽溶液為pH為6.8的磷酸鹽緩沖溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑的制備方法，其特征在于步驟(3)中所述的溶液狀態(tài)脂質(zhì)體的溫度為35°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑的制備方法，其特征在于步驟(4)中所述的冷凍干燥步驟為預(yù)凍溫度為_2(T-65°C，預(yù)凍時(shí)間為2 24小時(shí)，升華時(shí)間為12 48 小時(shí)，再干燥溫度為(T35°C，再干燥時(shí)間為2 12小時(shí)；滅菌條件為121°C，30min。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑在制備骨關(guān)節(jié)藥中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開一種復(fù)方骨肽脂質(zhì)體注射劑及其制法。該脂質(zhì)體注射劑由特定重量配比的復(fù)方骨肽、膽固醇、蛋黃磷脂酰肌醇、吐溫60、海藻糖和甘露醇制成。本發(fā)明的脂質(zhì)體注射劑具有良好的制劑穩(wěn)定性，冷凍過(guò)程中脂質(zhì)體不會(huì)因融合、冰晶等發(fā)生破裂，長(zhǎng)期儲(chǔ)存后，脂質(zhì)體同樣保持良好的包封率；本發(fā)明提高了復(fù)方骨肽的溶解度，提高了制劑產(chǎn)品的質(zhì)量，減少了毒副作用，增加了藥物在體循環(huán)中的保留時(shí)間，提高了藥物的生物利用度，療效明顯提高；并且制備方法簡(jiǎn)單，適合于工業(yè)化大生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61P19/02GK102988423SQ20121055912
公開日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2012年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月20日
發(fā)明者王平 申請(qǐng)人:海南百思特醫(yī)藥科技有限公司