專利名稱：用于防治酒精性脂肪肝的蜂膠乙醇提取物、制備方法及在生產(chǎn)口含片中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從動植物及其分泌物，特別是從蜂膠中提取活性物質(zhì)的工藝技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
經(jīng)WHO統(tǒng)計我國長期飲酒者近2億人，因酒精的毒性作用而致肝臟損害，嗜酒者中約2 / 3可發(fā)展為酒精性肝病(ALD)，其包括酒精性肝損傷、脂肪肝(AFL)、肝炎、肝纖維化和肝硬化，是順序漸進(jìn)的過程，發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜，中藥對AFL治療效果尚可。酒精性肝病是臨床上常見的肝病之一，主要是患者長期大量飲酒所致的肝損害。據(jù)西方研究，酒精性肝病是導(dǎo)致肝硬化的主要病因，幾乎50%的肝硬化患者都有長期飲酒的習(xí)慣。
近年來，隨著我國人民生活水平提高，生活方式和飲食習(xí)慣改變，酒精性肝病發(fā)病率明顯上升，成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病，并且逐漸向女性化、少年化發(fā)展。酒精性肝病在臨床上已屬多發(fā)病和常見病，所以，對酒精性肝病的臨床研究引起了廣泛的關(guān)注。酒精性肝病的好發(fā)年齡為30-50歲，其發(fā)病率逐年增加，且有年輕化和女性化的傾向。通過研究發(fā)現(xiàn)酒精性肝病患者年齡越大，飲酒史越長，飲酒量越大，肝功能損害就越重；酒精性肝病除與飲酒時間和飲酒量有關(guān)外，還和患者所飲酒類的質(zhì)量及患者的飲酒習(xí)慣密切相關(guān)，酒類質(zhì)量越差，其患病率越高；空腹飲用白酒或混合飲用多種酒類，患病率也會明顯增加；其次，雖然男性患者多于女性患者，但如果男女飲相同量的酒，女性較男性更容易患酒精性肝病，且臨床癥狀較男性嚴(yán)重。由于受自身體質(zhì)量、脂肪以及胃排空時間等因素的影響，女性的酒精性肝損害有高易感性。目前各種各樣的應(yīng)酬越來越多，由于酗酒所引起的各種肝臟疾病的發(fā)病率逐年提高，酒精性脂肪肝已經(jīng)成為影響現(xiàn)代人生活質(zhì)量的重要問題，社會迫切需要新型廉價的天然防治新產(chǎn)品的出現(xiàn)，而純天然的蜂產(chǎn)品具有很強(qiáng)的防治酒精性脂肪肝的作用，推廣使用
意義重大。酗酒可導(dǎo)致實質(zhì)器官的微血管改變和脂肪變性，進(jìn)而發(fā)展為器官的萎縮和硬化，最初可出現(xiàn)在肝臟、肺、心臟和腦；肥胖可使體內(nèi)游離脂肪酸(FFAs)增加，后者除本身引起的脂毒性外，還可抑制葡萄糖的氧化、抑制糖原合成、影響胰島β細(xì)胞功能，加速甘油三酯在肝細(xì)胞內(nèi)蓄積等。酒精和肥胖可使上述所有病理變化加重外，還可誘發(fā)脂肪性肝炎，并能促進(jìn)活性氧和活性乙醛-4-羥基乙醛基產(chǎn)生并增加，使酒精性脂肪肝(ASH)和非酒精性脂肪肝(NASH)都處在高水平的氧化應(yīng)激狀態(tài)，促使炎癥和纖維化不斷升級。糖脂代謝異常和酗酒還可以表現(xiàn)在對胰島素抵抗(IR)的協(xié)同作用，IR是肥胖和超重人群代謝綜合征的一個重要標(biāo)志，同時也是FFAs在肝臟聚集的標(biāo)志，肝細(xì)胞中的FFAs可以作為非TG代謝物的載體，加速組織破壞和炎癥浸潤及纖維化；酒精可以介導(dǎo)周圍型IR并刺激肝臟脂肪酸代謝，還可以在乙醇脫氫酶介導(dǎo)乙醇氧化成乙醛過程中，由于NAD+向NADH轉(zhuǎn)化使NAD+消耗增力口，促進(jìn)FFAs合成，抑制脂質(zhì)分解，最終導(dǎo)致TG在肝細(xì)胞內(nèi)蓄積。另外，與傳統(tǒng)飲酒者導(dǎo)致明顯的營養(yǎng)缺乏和體重降低不同，狂飲者可能會食欲增加，更多的攝入纖維、高脂等食物，使酒精中獲得的額外能量不能通過減少食物攝入量來抵消，最終導(dǎo)致體重增加及肥胖。在慢性酗酒、糖尿病和肥胖條件下，粘膜損傷導(dǎo)致的腸道滲透性增強(qiáng)，使腸道細(xì)菌分解產(chǎn)生的巨大分子物質(zhì)如病原體相關(guān)的分子進(jìn)入腸內(nèi)循環(huán)，并通過門脈系統(tǒng)進(jìn)人肝臟，激活肝星狀細(xì)胞表達(dá)TLRs。在TLRs配體刺激后，纖維原細(xì)胞激活MAP信號途徑，激活NF-κ B，促使膠原肌纖維原細(xì)胞分泌大量前炎癥細(xì)胞因子及化學(xué)因子，使血管周圍產(chǎn)生炎癥反應(yīng)和纖維化。尤其是腫瘤壞死因子-α、白介素_6、血清內(nèi)毒素/脂多糖和血漿膠原激活抑制劑-I等可以作為兒童NAFLD向NASH轉(zhuǎn)化的重要生物標(biāo)記物。長期過度飲酒，可使肝細(xì)胞發(fā)生脂肪變性、壞死和再生，導(dǎo)致酒精性肝病(ALD);在組織病理學(xué)上主要表現(xiàn)為三種形式酒精性脂肪肝、酒精性肝炎和酒精性肝硬化，這三種形式可單獨(dú)也可混合存在。隨著生活條件的改善，酗酒有增多趨勢。由于我國肝病主要由肝炎病毒引起，肝炎病毒攜帶者的數(shù)量更多，可能掩蓋了實際上是酒精作為病因的肝病。因此， 正確認(rèn)識酒精引起的肝損害，及時診斷和防治具有重要的意義。據(jù)研究，酒精性肝病的病因是乙醇的過量攝入，攝入的乙醇主要在十二指腸和上段回腸通過單純擴(kuò)散吸收，胃也能緩慢吸收少量的乙醇，進(jìn)入血液循環(huán)中的乙醇隨著血流迅速擴(kuò)散，在肝、肺及腦等血管分布較多的器官很快達(dá)到平衡。乙醇不能儲存，必須被代謝，肝臟是體內(nèi)乙醇代謝的最主要器官，其中90 95%在肝臟通過乙醇脫氫酶(ADH)和微粒體乙醇氧化酶系統(tǒng)(MEOs)進(jìn)行氧化代謝，長期大量飲酒在加重肝臟負(fù)擔(dān)的同時，很大程度上對肝臟造成損傷。乙醇代謝后的主要產(chǎn)物是乙醛，同時還產(chǎn)生氧應(yīng)激產(chǎn)物，乙醛隨后又被乙醛脫氫酶(ALDH)氧化代謝最終的產(chǎn)物是二氧化碳和水。戒酒是ALD治療關(guān)鍵的措施之一，戒酒可明顯提高ALD患者的生存質(zhì)量。戒酒后可使ALD的肝功能異常迅速好轉(zhuǎn)，明顯提高生存率；對于輕微ALD，戒酒后可不繼續(xù)發(fā)展；肝硬化已充分形成，且有門脈高壓和食管靜脈曲張者，戒酒也難以逆轉(zhuǎn)，但可改善活動進(jìn)程，減少并發(fā)癥的發(fā)生。酒精性肝病患者通常合并熱量/蛋白質(zhì)缺乏性營養(yǎng)不良，而營養(yǎng)不良又可加劇酒精性肝損傷。因此，酒精性肝病患者宜給予富含優(yōu)質(zhì)蛋白和維生素B類、高熱量的低脂軟食，必要時適當(dāng)補(bǔ)充支鏈氨基酸為主的復(fù)方氨基酸制劑。嚴(yán)重的酒精性肝病應(yīng)執(zhí)行臥床休息，疾病的穩(wěn)定階段應(yīng)做肌肉鍛煉，如非劇烈運(yùn)動、體操、游泳，家庭中簡單易行的身體鍛煉同樣有效。目前，有關(guān)酒精性脂肪肝的確切發(fā)生機(jī)制尚未完全明了；一般認(rèn)為長期飲酒可使體內(nèi)乙醛生成量增加，NADH/NAD的平衡改變而導(dǎo)致脂肪代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)紊亂，酒精性脂肪肝是由于乙醇削弱了正常肝細(xì)胞的代謝及肝細(xì)胞膜的穩(wěn)定性。①乙醇中間產(chǎn)物乙醛及乙酸，可使還原性輔酶I與輔酶II的比值升高，從而抑制線粒體三羧酸循環(huán)，使肝內(nèi)脂肪酸代謝發(fā)生障礙。②酒精有特異性地增加膽堿需要量的作用，磷脂的不足影響了脂蛋白的合成，從而使運(yùn)出發(fā)生障礙。③大量飲酒致胃腸功能紊亂，影響微量元素的吸收，使體內(nèi)氧化磷酸化和脂肪酸β氧化受損，血中游離脂肪酸增多，促進(jìn)脂肪肝形成，大量乙醇刺激腎上腺及垂體-腎上腺軸，增加脂肪組織分解率，使甘油三脂合成增加并堆積。④長期飲酒可誘導(dǎo)肝微粒體中細(xì)胞色素Ρ450的活性，其活性增加更加重乙醇及代謝產(chǎn)物對肝臟的毒性作用。酒精中毒引起的肝損傷的機(jī)理比較復(fù)雜，除了乙醇的直接毒性作用外，乙醇代謝過程中，產(chǎn)生大量的氧自由基，引起肝臟脂質(zhì)過氧化，是形成肝臟損傷的一個原因。從防治效果看，戒酒對酒精性肝病的治療預(yù)后非常重要，戒酒為終生治療，僅此一項即可改變肝病進(jìn)程。加強(qiáng)社會宣傳教育、改變生活方式、減少烈性酒精耗量、早期診治酒精肝及提高戒酒成功率等，可逐步減少酒精性肝病的發(fā)病率。研究表明雙環(huán)醇有良好的保肝降酶作用，從ALT、AST、ALP和GGT的恢復(fù)速度和程度明顯優(yōu)于多烯磷脂酰膽堿組，其機(jī)理可能是誘導(dǎo)體內(nèi)抗氧化物谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)和還原型谷胱甘肽(GSH)，提高肝細(xì)胞抗氧化能力，提高肝細(xì)胞線粒體內(nèi)GSH水平，雙環(huán)醇還能保護(hù)肝線粒體結(jié)構(gòu)，對抗各類肝損傷負(fù)效應(yīng)；雙環(huán) 醇不是抑制劑，而是通過清除氧自由基，保護(hù)肝細(xì)胞膜，使肝細(xì)胞核DNA免受損傷及減少細(xì)胞凋亡的發(fā)生而起到保肝作用；雙環(huán)醇可減輕酒精引起的脂質(zhì)過氧化招致的肝損傷，從而改善炎癥壞死，表明雙環(huán)醇為一種治療酒精性脂肪肝的較好藥物選擇。由于脂肪肝并非為獨(dú)立性病種，通過引發(fā)肝功能的損傷，引起血液生化指標(biāo)和酶值的變化。在反應(yīng)肝細(xì)胞損傷的檢測項目中，以血清酶值最常見，如谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH)等。當(dāng)肝臟發(fā)生脂肪變時，由于肝細(xì)胞受到損害，細(xì)胞變性、壞死，細(xì)胞膜破碎或細(xì)胞膜的通透性增加，肝細(xì)胞中所含的ALT就會被釋放到血液中，使血中ALT活性增加。由于ALT主要存在于肝細(xì)胞中，當(dāng)其明顯升高時常提示有肝損傷；肝臟發(fā)生脂肪變時，多以ALT升高為主。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)是診斷肝細(xì)胞實質(zhì)損害的主要項目，其高低往往與病情輕重相平行。有人把脂肪肝和冠心病比喻成高脂血癥一根繩上的兩個螞蚱，因為肥胖、高脂血癥、糖尿病和酗酒是脂肪肝的常見病因，而這些因素也同樣與動脈粥樣硬化和冠心病關(guān)系密切。有明顯心肌損傷和血流動力學(xué)紊亂，T細(xì)胞免疫功能下降，肝活檢研究顯示，這些病例中91. 4%有肝細(xì)胞脂肪變性。一般而言，酒精脂肪肝屬可逆性疾病，早期診斷并及時治療?？苫謴?fù)正常。長期食用高脂食物或大量飲酒，酒精會直接毒害肝細(xì)胞，影響其結(jié)構(gòu)及功能；許多人就是因為飲酒過度才患上酒精性肝炎、脂肪肝致使肝臟受損。而肝損傷可導(dǎo)致甘油三酯(TG)下降，甘油三酯是長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，是人體內(nèi)含量最多的脂類，大部分組織均可以利用甘油三酯分解產(chǎn)物供給能量，是體內(nèi)能量的主要來源。脂肪肝會導(dǎo)致食入的大量脂肪吸收減少，膽汁分泌不足，不能分解吃進(jìn)去的脂肪，脂肪在肝臟形成脂肪滴從而加重病情。蜂膠是蜜蜂采集膠源植物的幼芽或愈傷組織分泌的樹脂狀物質(zhì)，并混合自身腺體的分泌物、花粉和蜂蠟等混合而成的一種具有黏性的膠狀物質(zhì)。蜂膠富含多種生物活性物質(zhì)，尤其是含有大量的黃酮類物質(zhì)，具有多種醫(yī)療保健功效，被譽(yù)為“紫色黃金”。蜂膠在采收過程中不可避免的會混入木屑、蜂尸、雜草、沙石等雜質(zhì)，在用于食品、藥品等之前，必須經(jīng)提純凈化，否則不能夠服用。蜂膠提取方法不同所得的有效成分也不相同，目前常用提取方法有乙醇提取法、水提取法、超臨界提取法、超聲波輔助提取法、酶提取法、硼高分子電解質(zhì)法、微波輔助提取法。通過研究發(fā)現(xiàn)不同提取方法、不同提取溶媒會表現(xiàn)不同的藥理藥效，表現(xiàn)出提取方式與藥理藥效具有明顯的相關(guān)性。通過比較，超臨界CO2萃取法，不但設(shè)備昂貴、操作條件不易掌握，而且提取物得率低且抑菌能力較乙醇浸提法低，但該方法萃取物安全、無殘留、無污染，有一定的開發(fā)前景，目前主要還是用于實驗室研究。有機(jī)溶劑浸提法常用的有機(jī)溶劑有乙醇、乙醚、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇等，其中乙醇最為常用。乙醇浸提法所需設(shè)備簡單，試劑容易購得，操作也十分方便，用乙醇作為提取溶劑，可以很容易使蜂膠脫蠟，并且可以保護(hù)一些多酚類物質(zhì)，從而獲得富含多酚類物質(zhì)的精制蜂膠，故乙醇是最常用的提取溶劑，特別是70 %和80%的乙醇。雖然有時也用95%的乙醇進(jìn)行提取，但與水醇溶液相比，水醇溶液提取可以使蜂蠟更快地游離出來，同時提取液中還富含大量的多酚類物質(zhì)。用不同濃度的乙醇對蜂膠進(jìn)行提取，并測定不同濃度提取液中黃酮類物質(zhì)的吸收光譜，結(jié)果顯示在290nm處，80%乙醇提取的蜂膠提取液中有最高的吸收峰，這也就意味著其中含有最多的黃酮類物質(zhì)，主要是莰菲醇、刺槐黃素和異櫻花素。但是，用60%的乙醇提取出的最多的黃酮類物質(zhì)是異櫻花素、槲皮素和莰非醇，70%的乙醇可以提取出最多的喬松素和櫻花素；用純水可以提取出一些易溶于水的多酚類物質(zhì)，甲醇、正己烷、氯仿有時也被作為提取劑使用。國內(nèi)外對有機(jī)溶劑浸提蜂膠總黃酮的研究主要圍繞其影響因素(如乙醇濃度、提取時間、料液比、提取溫度)以及其他處理輔助措施(如微波處理、超聲波處理)等方面展開。超聲波輔助提取可以大大縮短提取時間，近年來已成為蜂膠總黃酮提取工藝研究的熱點(diǎn)。以往大多圍繞超聲波處理時間、超聲波功率等方面進(jìn)行研究，關(guān)于超聲波頻率變化對蜂膠總黃酮提取影響的研究報道較少，且研究也不夠深入。我們經(jīng)過多年研究發(fā)現(xiàn)了蜂膠中還存在一類具有解酒和防治酒精性脂肪肝功能的物質(zhì)，但是采用目前常用蜂膠乙醇提取方法得率較低，因而效果不顯著，或者大劑量使用目前市場有售的蜂膠產(chǎn)品才可能達(dá)到目的，為此我們 提出該發(fā)明申請，本發(fā)明使用的蜂膠劑量與現(xiàn)行的服用劑量一致。蜂王漿是5至15日齡工蜂舌腺和上腭腺所分泌的乳白色或淡黃色乳狀液體，是蜂王幼蟲整個發(fā)育期和雄蜂幼蟲前期的唯一食物，類似于哺乳動物的乳汁，又稱蜂皇漿、王漿、蜂乳。對蜂王漿的重視和注意，首先是發(fā)現(xiàn)了喂飼蜂蜜的幼蜂只能長成工蜂，壽命一般3 O 4 O天，最長7— 8個月，而喂飼蜂王漿的幼蜂能夠長成蜂王，壽命長達(dá)3 5年，這一現(xiàn)象提示人們利用蜂王漿作為延年益壽的食品，但對其性質(zhì)和作用機(jī)理并不了解。到I 8 8 8年，德國化學(xué)家A Von Planta才第一個對蜂王漿的組分進(jìn)行一般性研究，至此人們開始了探討蜂王漿的奧妙，但對蜂王漿進(jìn)行包括生物學(xué)、化學(xué)藥理和臨床實驗的全面研究，還是最近幾十年才開始的，至今人們對蜂王漿中的一些微量生物活性物質(zhì)還未完全研究清楚。目前，已確定的功能因子約9大類它們是肽和蛋白質(zhì)類；功能性甜味劑；功能性油脂；自由基清除劑；維生素；微量活性元素；活性多糖；黃酮類化合物及微生態(tài)因子如乳酸菌等。根據(jù)人們的研究發(fā)現(xiàn)，蜂王漿中含有這些豐富的功能因子，對人類有極強(qiáng)的營養(yǎng)保健功能和醫(yī)療作用?，F(xiàn)代研究表明蜂王漿可減輕ALD病程中肝細(xì)胞的損傷作用，對損傷后的肝臟組織有促進(jìn)再生的作用，其作用機(jī)制可能是通過降低或抑制C0X-2的生成，避免過度的炎性反應(yīng)，達(dá)到減輕線粒體及脂質(zhì)過氧化損傷，從而降低血清AST和ALT的水平；蜂王漿降低了TNF-α在肝細(xì)胞中的表達(dá)，而TNF-α作為炎性因子，介導(dǎo)了肝細(xì)胞的炎性反應(yīng)，免疫反應(yīng)、肝細(xì)胞凋亡和擴(kuò)增肝纖維化等多種病理和生理活動。分析蜂王漿TNF-α降低的原因可能是蜂王漿是天然的氧自由基清除劑，可以減少ROS引起的核轉(zhuǎn)錄因子的活化，從而減少受其調(diào)控的TNF-α基因的表達(dá)。蜂王漿在酒精性肝病的形成過程中能夠抑COX -2和TNF-α的表達(dá)，對酒精性肝損傷有一定的保護(hù)作用。蜂王漿還對CC14肝纖維化大鼠的肝臟纖維化血清學(xué)指標(biāo)及肝臟病理形態(tài)學(xué)均具有顯著的改善作用，但對已經(jīng)形成肝纖維化后的肝組織纖維化改善不明顯，其可能的機(jī)制為蜂王漿能改善肝組織的炎癥、減少ECM的合成和抑制TNF-α的分泌。過去已經(jīng)研究出蜂王漿和蜂膠具有天然的功能協(xié)調(diào)和一致性，二者結(jié)合使用效果會更好?？诤?，是一類不經(jīng)過胃消化，直接通過口腔粘膜吸收進(jìn)入血液，采用在口腔中可溶解的物質(zhì)為主要包衣材料進(jìn)行包衣而制成的片劑?？煞乐顾嵝约懊笇δ承┧幬锏钠茐幕蚍乐顾幬飳ξ傅膹?qiáng)烈刺激性；經(jīng)過研究我們發(fā)現(xiàn)蜂王漿中有許多生物活性物質(zhì)在胃中易被胃酸破壞，而通過舌下粘膜可以直接吸收，所以制作口含片可以更好地保護(hù)生物活性物質(zhì)免遭破壞，提高產(chǎn)品的使用效果。人們在大量飲酒的同時也攝取了大量的食物，特別是高油高脂性食物使人胃呈高飽腹?fàn)顟B(tài)，其胃容物的排空一般需要2小時左右，如果同時服用解酒的藥物，由于服用量與胃容物相比相差太懸殊，很難發(fā)揮作用而失效，但如果采用大劑量的解酒藥物，又會受到胃容量的限制而無法實施，所以飯后使用的解酒藥物必須采用不經(jīng)過胃的方式，這就是我們?yōu)槭裁匆_發(fā)口含片的主要原因。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明第一目的在于發(fā)明一種能高效地從根本上防治酒精性脂肪肝的蜂膠乙醇提取物。 本發(fā)明為采用乙醇從蜂膠中提取的分子量小于4000D的固形物含量大于90%的生物活性干燥物。發(fā)明人經(jīng)試驗證明，從蜂膠中提取的分子量小于4000D的乙醇溶解的生物活性物質(zhì)具有較好的防治酒精性脂肪肝的效果。本發(fā)明另一目的是提出上述用于防治酒精性脂肪肝的蜂膠乙醇提取物的制備方法。包括以下步驟
1)將蜂膠置于_18°C的環(huán)境溫度條件下冷凍20 40小時后粉碎；
2)常溫常壓下將體積濃度為50% 90%的食用酒精與粉碎后的蜂膠按I 6 I的重量比混合，于10 40°C的溫度條件下密閉浸泡I 2天；
3)將浸泡后的液體再次加入粉碎后的蜂膠，并重復(fù)兩至三次，取得最后一次浸泡液，以8000 12000轉(zhuǎn)冷凍離心10 12分鐘除去固體雜質(zhì)，取乙醇溶解蜂膠的上清液；
4)將上清液在室溫I 5度下以4000D分子篩超濾分離，取得分子量小于4000D的蜂膠乙醇提取物；
5)將上述分子量小于4000D的蜂膠乙醇提取物置于乙醇蒸餾回收器中，蒸去食用酒精，得到分子量小于4000D的固形物含量大于90%的生物活性干燥物。目前研究發(fā)現(xiàn)影響蜂膠提取活性的因素主要有溫度、pH值、提取次數(shù)、溶劑種類、溶劑濃度、浸泡時間、提取時間等。不同的提取工藝及溶媒提取的蜂膠，其有效成分會有所不同，提取方法不同，提取的成分、含量、溶劑都可能影響其機(jī)能發(fā)揮，造成種種差異，進(jìn)而出現(xiàn)不同的藥理作用。本發(fā)明將蜂膠冷凍后使蜂膠變脆，確保粉碎蜂膠時做到細(xì)度均勻，便于有效成分的提?。环淠z與乙醇的合適比例混合是為了確保蜂膠中有效乙醇溶性物質(zhì)能夠得到最大化的溶解；通過浸泡利于蜂膠中有效的生物活性物質(zhì)的分離、溶解和保持活性，密閉是為了防止蜂膠中活性成分被氧化，防止揮發(fā)性成分損失；多次浸泡的工藝是確保乙醇溶液中提取分離出的蜂膠中防治酒精性脂肪肝的物質(zhì)保持活性和含量；冷凍離心是確保離心分離時的溫度較低，保證蜂膠乙醇提液中蜂蠟更好地析出，使提取出來的蜂膠更純，利于下一步超濾時得到足夠多的有效物質(zhì)；經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)分子量4000D以下的蜂膠乙醇溶性物質(zhì)均具有較強(qiáng)的防治酒精性脂肪肝的作用，通過4000D的分子篩，確保提取液純清、透明，使提取物純凈，控制提取溫度是確保乙醇溶性物質(zhì)純潔性的最關(guān)鍵措施之一；通過乙醇蒸餾回收器回收乙醇得到蜂膠固形物含量大于90%的干燥物，除去乙醇是為了便于下一步的應(yīng)用。綜上，本發(fā)明采用改良乙醇提取法，提取效率更高，速度更快，特別是能夠顯著提高蜂膠中防治酒精性脂肪肝有效的成分，顯示出很強(qiáng)的防治酒精性脂肪肝的作用。本發(fā)明的第三個目的是提出用于防治酒精性脂肪肝的蜂膠乙醇提取物的用途 用途之一是以所述用于防治酒精性脂肪肝的蜂膠乙醇提取物、蜂王漿凍干粉、異麥芽
糖醇、山梨糖醇、硬脂酸鎂和薄荷腦制成用于制備防治酒精性脂肪肝的蜂膠口含片；所述蜂膠乙醇提取物、蜂王漿凍干粉、異麥芽糖醇、山梨糖醇、硬脂酸鎂和薄荷腦酒精溶液分別占口含片的 10 30%、10 20%、50 70%、5 10%、O. 2 O. 6% 和 O. I O. 4%。 經(jīng)試驗，利用蜂膠乙醇提取物合并蜂王漿防治酒精性脂肪肝效果顯著，且無副作用，而且費(fèi)用低廉，簡單易行。蜂膠是蜜蜂采集膠源植物的幼芽或愈傷組織分泌的樹脂狀物質(zhì)，并混合自身腺體的分泌物、花粉和蜂蠟等混合而成的一種具有黏性的膠狀物質(zhì)。蜂膠富含多種生物活性物質(zhì)，尤其是含有大量的黃酮類物質(zhì)，具有多種醫(yī)療保健功效，被譽(yù)為“紫色黃金”。蜂王漿是5-1 5日齡工蜂舌腺和上腭腺所分泌的乳白色或淡黃色乳狀液體，是蜂王幼蟲整個發(fā)育期和雄蜂幼蟲前期的食物，類似于哺乳動物的乳汁，又稱蜂皇漿、王漿、蜂乳。研究發(fā)現(xiàn)，蜂王漿中含有豐富的功能因子，對人類有極強(qiáng)的營養(yǎng)保健功能和醫(yī)療作用。蜂膠乙醇提取物合并蜂王漿能夠在基因水平上發(fā)揮防治酒精性脂肪肝的藥理作用，但對蜂膠和蜂王漿中是何物質(zhì)起作用目前研究不多，對其防治酒精性脂肪肝的分子機(jī)理不完全清
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/E. ο但是本發(fā)明已經(jīng)基本解決了蜂膠合并蜂王漿防治酒精性脂肪肝的分子機(jī)理，為此，提出申請本發(fā)明專利。本發(fā)明就是利用乙醇提取的方法從蜂膠中分離出對防治酒精性脂肪肝有治療效果的成份，合并蜂王漿生產(chǎn)防治酒精性脂肪肝的口含片。作為口含片的優(yōu)點(diǎn)是使用方便、吸收快，直接吸收進(jìn)入肝臟解酒效果好、價格低廉；飲酒后胃內(nèi)呈飽腹?fàn)顟B(tài)，會對解酒效果產(chǎn)生不利影響，而制作成口含片可以很好地克服這一不良情況，口含片可作為防治酒精性脂肪肝產(chǎn)品使用，價廉物美。 經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，蜂王漿和蜂膠乙醇提取物中有許多生物活性物質(zhì)在胃中易被胃酸破壞，所以制作口含片可以更好地保護(hù)生物活性物質(zhì)免遭破壞，提高產(chǎn)品的使用效果。


圖I為自然健康對照組肝臟組織切片圖。圖2為自然健康對照組腎臟組織切片圖。圖3為酒精性脂肪肝模型組肝臟組織切片圖。圖4為酒精性脂肪肝模型組腎臟組織切片圖。圖5為灌胃本發(fā)明口含片組肝臟組織切片圖。圖6為灌胃本發(fā)明口含片組腎臟組織切片圖。
具體實施例方式一、制備防治酒精性脂肪肝乙醇提取物干粉
I、將蜂膠置于_18°C的環(huán)境溫度條件下冷凍20 40小時后粉碎。2、常溫常壓下將體積濃度為50% 90%的食用酒精與粉碎后的蜂膠按I 6 I的重量比混合，于10 40°C的溫度條件下密閉浸泡I 2天。3、以第一次浸泡后的浸泡液再次繼續(xù)浸泡新的粉碎后蜂膠，等浸泡結(jié)束后，再次浸泡新的粉碎后蜂膠。4、取重復(fù)第三次浸泡后的浸泡液以8000 12000轉(zhuǎn)冷凍離心10 12分鐘除去固體雜質(zhì)，取乙醇溶解蜂膠的上清液。5、將上清液在室溫I 5度下以4000D分子篩超濾分尚，取得分子量小于4000D的蜂膠乙醇提取物。6、將上述分子量小于4000D的蜂膠乙醇提取物置于乙醇蒸餾回收器中，蒸去食用酒精，得到分子量小于4000D的固形物含量大于90%的生物活性干燥物。二、制備蜂膠防治酒精性脂肪肝的口含片
1、典型的幾種質(zhì)量配比表(單位kg)
權(quán)利要求
1.用于防治酒精性脂肪肝的蜂膠乙醇提取物，為采用乙醇從蜂膠中提取的分子量小于4000D的固形物含量大于90%的生物活性干燥物。
2.一種如權(quán)利要求I所述用于防治酒精性脂肪肝的蜂膠乙醇提取物的制備方法，其特征在于包括以下步驟 1)將蜂膠置于_18°C的環(huán)境溫度條件下冷凍20 40小時后粉碎； 2)常溫常壓下將體積濃度為50% 90%的食用酒精與粉碎后的蜂膠按I 6 I的重量比混合，于10 40°C的溫度條件下密閉浸泡I 2天； 3)將浸泡后的液體再次加入粉碎后的蜂膠，并重復(fù)兩至三次，取得最后一次浸泡液，以8000 12000轉(zhuǎn)冷凍離心10 12分鐘除去固體雜質(zhì)，取乙醇溶解蜂膠的上清液； 4)將上清液在室溫I 5°下以4000D分子篩超濾分離，取得分子量小于4000D的蜂膠乙醇提取物； 5)將上述分子量小于4000D的蜂膠乙醇提取物置于乙醇蒸餾回收器中，蒸去食用酒精，得到分子量小于4000D的固形物含量大于90%的生物活性干燥物。
3.—種如權(quán)利要求I所述用于防治酒精性脂肪肝的蜂膠乙醇提取物在生產(chǎn)口含片中的應(yīng)用，其特征在于以所述用于防治酒精性脂肪肝的蜂膠乙醇提取物、蜂王漿凍干粉、異麥芽糖醇、山梨糖醇、硬脂酸鎂和薄荷腦制成用于制備防治酒精性脂肪肝的蜂膠口含片；所述蜂膠乙醇提取物、蜂王漿凍干粉、異麥芽糖醇、山梨糖醇、硬脂酸鎂和薄荷腦酒精溶液分別占口含片的 10 30%、10 20%、50 70%、5 10%、O. 2 O. 6% 和 O. I O. 4%。
全文摘要
用于防治酒精性脂肪肝的蜂膠乙醇提取物、制備方法及在生產(chǎn)口含片中的應(yīng)用，涉及從動植物，特別是從蜂膠中提取有效物質(zhì)合并蜂王漿制備口含片的工藝技術(shù)領(lǐng)域。先將蜂膠冷凍、粉碎除雜，再以常壓常溫乙醇重復(fù)浸泡三次后，冷凍離心除去固體雜質(zhì)，取乙醇上清溶液，最后，在1～5℃的環(huán)境溫度下分離出分子量為4000D以下的蜂膠乙醇提取物，經(jīng)乙醇蒸餾回收得到干粉，將蜂膠粉與蜂王漿凍干粉、異麥芽糖醇、硬脂酸鎂和薄荷腦等混合制防治酒精性脂肪肝蜂膠口含片，本發(fā)明對于防治酒精性脂肪肝效果顯著，且無副作用，而且費(fèi)用低廉，簡單易行。
文檔編號A61P1/16GK102940649SQ20121050023
公開日2013年2月27日 申請日期2012年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月30日
發(fā)明者周斌, 葉滿紅 申請人:揚(yáng)州大學(xué)