作為彈性蛋白酶活性抑制劑的植物甾醇新用途及含有它的組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明針對植物甾醇的彈性蛋白酶減活性進(jìn)行探究后得以完成，本發(fā)明涉及一種作為彈性蛋白酶活性抑制劑的植物甾醇的新用途及以有效成分含有而改善皮膚彈力乃至治療皮膚傷口的外用劑組合物；本發(fā)明的含有植物甾醇的組合物不僅能夠在不引起皮膚副作用的情形下安全地使用，還通過彈性蛋白酶減活性改善皮膚彈力而得以大幅增強(qiáng)皮膚防老化效果及皮膚傷口治愈效果。
【專利說明】作為彈性蛋白酶活性抑制劑的植物留醇新用途及含有它的組合物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種發(fā)揮彈性蛋白酶活性抑制劑功能的植物留醇及以其為有效成分的組合物，該組合物通過彈性蛋白酶減活性而改善皮膚彈力并且得以大幅增強(qiáng)皮膚防老化效果及皮膚傷口治愈效果。
【背景技術(shù)】[0002]在皮膚中，彈性蛋白纖維和膠原纖維一起在真皮(epiderm)內(nèi)側(cè)形成交聯(lián)鍵而提供皮膚彈力。隨著年齡增加，皮膚在組織學(xué)上呈現(xiàn)出彈性蛋白纖維缺乏與凝集、膠原纖維減少、炎細(xì)胞浸潤增加的現(xiàn)象，在生物化學(xué)上則出現(xiàn)作為彈性蛋白分解酶的彈性蛋白酶的活性度顯著增加的現(xiàn)象。因此，彈性蛋白酶的作用使得皮膚彈力急劇減弱而出現(xiàn)凹陷(sagging)現(xiàn)象。彈性蛋白酶是目前為止發(fā)現(xiàn)的唯一能夠分解彈性蛋白的酶,抑制它就能從根本上減少皮膚老化。
[0003]為了延遲皮膚老化而把保濕劑、抗炎癥劑、彈性蛋白及針對膠原交聯(lián)鍵被破壞的組織的營養(yǎng)劑及添加劑等加入化妝料內(nèi)，但從根本上延遲老化是有限的。因此需要一種抑制劑，其能夠從根本上把維持皮膚彈力的彈性蛋白及膠原的分解加以抑制。
[0004]雖然為了該目的而使用其結(jié)構(gòu)與動物性提取物或膠原及彈性蛋白相似的合成肽(peptide)衍生物等物質(zhì)，但其具有安全性及穩(wěn)定性問題并且也沒有達(dá)到本領(lǐng)域所要求的預(yù)期效果，因此迫切需要開發(fā)出一種比現(xiàn)有技術(shù)對人體安全而且效果良好的新功能性物質(zhì)，日本國專利公開第2004-018793號公報(bào)公開了細(xì)毛火燒蘭、紅山無葉蘭、金蘭花、羽蝶蘭等具有彈性蛋白酶減活性效果的成分。
[0005]但這樣的事實(shí)目前還沒有被廣泛地認(rèn)知，亦即，植物留醇可以通過彈性蛋白酶減活性而改善皮膚彈力并且得以大幅增強(qiáng)皮膚防老化效果及皮膚傷口治愈效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]發(fā)明需要解決的技術(shù)課題
[0007]本發(fā)明人們以植物性天然物為對象探索了能夠改善彈性蛋白降低及破壞所導(dǎo)致的皮膚彈力減弱現(xiàn)象并且解決皮膚安全性及化妝料配合時(shí)的穩(wěn)定性問題的抗老化物質(zhì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)植物留醇顯示出良好的彈性蛋白酶抑制效果，涂敷在人的皮膚上時(shí)也能明顯地改善皮膚彈力而顯著提升防老化效果及皮膚傷口治愈效果，從而完成了本發(fā)明。
[0008]因此，本發(fā)明的目的是提供一種含有植物留醇的外用劑組合物，該植物留醇不引起皮膚副作用并且有效地抑制彈性蛋白酶的活性而發(fā)揮皮膚彈力改善效果及皮膚傷口治愈效果。
[0009]解決課題的技術(shù)方案
[0010]為了解決上述課題，本發(fā)明提供一種作為彈性蛋白酶活性抑制劑的植物留醇新用途。[0011]較佳地，上述植物甾醇是(6 -谷甾醇(Beta sitosterol)或豆甾醇(stigmasterol)。
[0012]為了解決另一個(gè)課題，本發(fā)明提供一種以抑制彈性蛋白酶活性的植物留醇為有效成分的皮膚外用劑組合物。
[0013]較佳地，本發(fā)明皮膚外用劑組合物的上述植物留醇是P -谷留醇或豆甾醇。
[0014]較佳地，本發(fā)明皮膚外用劑組合物的上述植物留醇的含量為相比于整體組合物總重量的0.001到10重量％。
[0015]本發(fā)明皮膚外用劑組合物可以是皮膚彈力改善用化妝料組合物(Cosmeticcomposition)或皮膚傷口治愈用藥學(xué)組合物。
[0016]有益效果 [0017]如前所述，本發(fā)明的植物留醇通過彈性蛋白酶減活性改善改善皮膚彈力而得以大幅增強(qiáng)皮膚防老化效果及皮膚傷口治愈效果。
【具體實(shí)施方式】
[0018]本發(fā)明提供一種作為彈性蛋白酶抑制劑的植物留醇的新用途及以其為有效成分而有效地抑制彈性蛋白酶活性的外用劑組合物。
[0019]一般來說，植物留醇由于穩(wěn)定乳化狀態(tài)的能力較強(qiáng)而在制造化妝品或油墨時(shí)作為乳化劑使用，包括人類在內(nèi)的動物攝取豆留醇與(6-谷留醇時(shí)可以降低血中的總膽固醇水平及LDL膽固醇水平，因此其作為醫(yī)藥品原料而發(fā)揮重要作用。而且，植物留醇還被認(rèn)為能減少心絞痛、心肌梗塞癥之類的冠心病(coronary heart disease)的危險(xiǎn)性。
[0020]本發(fā)明的植物留醇雖然可以從水果、蔬菜、堅(jiān)果類、谷類、豆類及植物性油脂，例如油菜籽油、玉米油、葵花油、裸麥、麥、大麥、雀麥等含有高濃度植物留醇的植物資源中萃取，但不限于上述上述植物資源。該植物留醇可以通過各種方法獲得，考慮到經(jīng)濟(jì)效益時(shí)，較佳地，從制作大豆油時(shí)獲取的脫臭餾出物分離而獲得。
[0021]上述植物留醇利用非極性萃取用溶劑對油菜籽油、玉米油、葵花油、裸麥、麥、大麥、雀麥等含有高濃度植物留醇的植物資源進(jìn)行萃取、過濾并制成，萃取用溶劑可以使用己燒(hexane)、乙醚(ether)、苯(benzene)、氯仿(chloroform)、環(huán)己燒(cyclohexane)、甲苯(toluene)，可以利用超臨界萃取之類的方法萃取?？梢酝ㄟ^單獨(dú)進(jìn)行或并行進(jìn)行充填有C18或硅膠凝體(silica gel)等各種合成樹脂的柱色譜分離(column chromatography)及高性能液體色譜分析法(HPLC)等而從上述植物提取物分離及精煉植物留醇。然而，有效成分的萃取及分離精煉方法不必一定要限定于上述方法。
[0022]以相對于組合物總重量的0.001~10重量％含有上述植物甾醇。本發(fā)明為了得到所期望的效果而以相對于組合物總重量的0.001~10重量％含有上述植物留醇。低于
0.001重量％時(shí)難以得到適當(dāng)效能，超過10重量％時(shí)會影響到產(chǎn)品的安全性與穩(wěn)定性。
[0023]作為直接涂敷在皮膚上發(fā)揮作用的組合物，本發(fā)明的外用劑組合物不會對藥學(xué)組合物乃至化妝料組合物的劑型加以特別限制，例如，可以制成柔潤化妝水、緊致化妝水、營養(yǎng)化妝水、營養(yǎng)霜、按摩霜、精化露(essence)、眼霜、眼部修護(hù)霜(eye essence)、清潔霜、清潔乳霜、潔面霜、卸妝水、面膜膏、化妝粉、護(hù)膚乳(body lotion)、身體乳(cream)、身體護(hù)理油、身體精化乳(body essence)、身體清潔劑、染發(fā)劑、生發(fā)水(hair tonic)、頭發(fā)護(hù)理液(scalp treatment)、乳霜(lotion)、軟膏、化妝膠水(gel)、乳液(cream)、模料(patch)或
噴霧劑等。
[0024]下面結(jié)合實(shí)施例及試驗(yàn)例具體說明本發(fā)明的構(gòu)成及作用效果，但本發(fā)明不限于這些例子。
[0025][實(shí)施例1]用大豆油脫臭餾出物制造植物甾醇
[0026]把大豆油脫臭餾出物(植物留醇含量:27% )200g與甲苯200g倒入3L的三口燒瓶后用300rpm攪拌并且升溫到90°C，然后添加25% (w/w)NaOH溶液200g。之后，在80°C下以300rpm攪拌上述反應(yīng)生成物并且緩慢地添加50% (w/w)硫酸溶液150g,再攪拌15分鐘后靜置，清除水層而得到油層。反復(fù)清洗油層直到硫酸被完全清除為止，在110°C下進(jìn)行減壓壓縮清除甲苯后加以過濾。在上述過濾物上混合甲醇300g后倒入3L的三口燒瓶，然后在65°C下反應(yīng)30分鐘后冷卻到室溫，再攪拌24小時(shí)，把攪拌過程中生成的固定生成物加以過濾后利用甲醇200g清洗，把固體生成物加以減壓蒸餾完全清除甲醇后制成植物甾醇。所制成的植物甾醇的良率與純度分別為75%與98%。
[0027][實(shí)施例2]植物甾醇的分離及確認(rèn)
[0028]針對上述植物留醇1.5g進(jìn)行了 C18柱色譜分離。此時(shí)，所使用的柱溶出液以甲醇與水各自按照80: 20(v/v)的體積比混合的溶劑起始而在40分鐘內(nèi)逐漸增加甲醇比率以使得甲醇成為100%，溶劑的溶出速度與檢測波長各為60ml/分與UV 210nm。進(jìn)行上述C18柱色譜分離后從亞組份48~52與55~60得到了 P -谷甾醇0.75g與豆甾醇0.38g。
[0029]所分離的植物甾醇的儀器分析結(jié)果如下。
[0030]化合物I ( @ -谷甾`醇)
[0031]1H-NMR(CDClyeOOMHz) S 3.53 (tdd，1H，J = 4.5，4.2，3.8Hz，H-3)，8 5.36 (t, 1H, J=6.4Hz,H-5), 8 0.93(d,3H,J = 6.5Hz，H_19)，8 0.84(t,3H,J = 7.2Hz，H_24)，8 0.83 (d,3H, J = 6.4Hz，H-26)，8 0.81 (d, 3H, J = 6.4Hz，H-27)，8 0.68 (s, 3H, H_28), 8 1.01 (s, 3H,H-29)
[0032]13C-NMR (CDCl3,150MHz) 8 37.5 (C-1)，8 31.9 (C_2)，8 72.0 (C_3)，8 42.5 (C_4)，S 140.9(C-5)，S 121.9(C-6)，8 32.1 (C-7), 8 32.1 (C-8), 8 50.3 (C-9), 8 36.7 (C-1O),8 21.3 (C-1l) , S 39.9(C-12)，S42.6(C_13)，S56.9(C_14)，S26.3(C_15)，8 28.5 (C-16) , 8 56.3 (C-17) , 8 36.3 (C-18) , 8 19.2 (C-19) , 8 34.2 (C-20),8 26.3 (C-21) , 8 46.1 (C-22) , S 23.3(C_23), S 12.2(C_24), S29.4(C_25)，8 20.1(C-26)，8 19.6(C—27)，8 19.0(C—28)，8 12.0(C—29)
[0033]EIMS(C29H48O m/z (re1.1nt.)):412[M+] (39.7 % ) ,351 (13.5 % ) ,314(7.0 % ),300(25.5% ),271(38.4% ),229(8.6% ) ,213(10.6% ) ,55(100% )
[0034]化合物2(豆甾醇)
[0035]1H-NMR(CDClyeOOMHz) S 3.51 (tdd，1H，J = 4.5，4.3，3.8Hz，H_3)，8 5.31(t,lH, J=6.lHz，H-5)，8 0.91(d,3H,J = 6.2Hz，H_19)，8 4.98 (m, lH,H-20), 8 5.14 (m，1H，H—21)，8 0.83(t，3H，J = 7.lHz，H-24)，8 0.82(d，3H，J = 6.6Hz，H_26)，8 0.80(d，3H，J = 6.6Hz,H-27), S0.71(s，3H，H-28)，8 1.03(s,3H, H-29)
[0036]13C-NMR (CDCl3,150MHz) 8 37.6 (C-1)，8 32.1 (C_2)，8 72.1 (C_3)，8 42.4 (C_4)，S 141.1(C-5)，S 121.8(C-6)，8 31.8 (C-7), 8 31.8 (C-8), 8 50.2 (C-9), 8 36.6 (C-1O),8 21.5 (C-1l) , 8 39.9 (C-12) , “2.4(C-13)，S56.8(C_14)，S24.4(C_15)，8 29.3 (C-16), 8 56.2 (C-17), 8 40.6 (C-18), 8 21.7(C-19), 8 138.7 (C-20),8 129.6 (C-21) , 8 46.1 (C-22) , S 25.4(C_23), 8 12.1 (C-24) , S29.6(C_25)，
820.2 (C-26), S 19.8(C-27)，S 18.9(C_28)，S 12.2 (C-29)
[0037]EIMS (C29H50O m/z (rel.1nt.)):414[M+] (100 % ), 396 (30.8 % ),381(14.0 % )，329(13.7 % ) ,303(22.1 % ) ,255(11.8 % ) ,213(12.2 % ), 145(18.5 % ) ,95(21.6 % ),81(21.3% ) ,55(25.8% ) ,43(45.0% )?
[0038][試驗(yàn)例I]植物甾醇的彈性蛋白酶抑制效果
[0039]彈性蛋白酶萃取自豬胰臟，使用了 Sigma公司產(chǎn)品。利用基于憑借胰臟彈性蛋白酶的合成肽(peptide)基質(zhì)(Sigma)的水解的試驗(yàn)法進(jìn)行了試驗(yàn)，把光波長410nm處的每單位時(shí)間的4-硝基苯胺(4-nitroanilide)排放量的增加作為彈性蛋白酶的催化劑活性值。把各試驗(yàn)溶液調(diào)劑到lmg/ml的一定濃度后各自提取40iU，在此添加溶于50mMTris-HCl buffer (pH8.6)的 proporcine pancreas elastase(2.5U/ml)溶液 40iil 后，把作為基質(zhì)而溶于 50mM Tris-HCl buffer (pH8.6)的 N-succinyl-(L-Ala) 3-p-nitroanilide(0.5mg/ml)添加80 u 1，然后在37°C進(jìn)行了 30分鐘反應(yīng)。對于從基質(zhì)生成的4-硝基苯胺的生成量，在410nm測量了吸收度，利用下列數(shù)學(xué)式I計(jì)算了彈性蛋白酶抑制程度。
[0040][數(shù)學(xué)式I]`
[0041]彈性蛋白酶抑制率) = 1_(試料添加組的吸收度/試料非添加組的吸收度)XlOO
[0042]【表1】
[0043]
【權(quán)利要求】
1.作為彈性蛋白酶活性抑制劑的植物留醇新用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的作為彈性蛋白酶活性抑制劑的植物留醇新用途，其特征在于，上述植物留醇是(6-谷留醇或豆甾醇。
3.以抑制彈性蛋白酶活性的植物留醇為有效成分的皮膚外用劑組合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，上述植物留醇是3-谷甾醇或豆甾醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，上述植物留醇的含量為相比于整體組合物總重量的0.001到10重量％。
6.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，上述外用劑組合物是皮膚彈力改善用化妝料組合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，上述外用劑組合物是皮膚傷口治愈用藥學(xué)組 合物。
【文檔編號】A61P17/02GK103655221SQ201210391238
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2012年10月16日 優(yōu)先權(quán)日:2012年9月13日
【發(fā)明者】具昌燮, 金珉珍, 鄭倫朱, 張東逸 申請人:柯得股份有限公司