用白藜蘆醇抗卵巢衰老的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明是一種抗卵巢衰老的方法。該方法是將白藜蘆醇以30mg/L的濃度加入到小鼠的日常飲用水當(dāng)中，并使小鼠自由進(jìn)水進(jìn)食。本發(fā)明的方法能使小鼠的卵巢衰老發(fā)生時(shí)間延緩，維持卵子數(shù)量和質(zhì)量，因此對(duì)抵抗雌鼠的卵巢衰老具有重要意義。并且，人類的雌性生殖衰老與小鼠相似，該發(fā)明的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也可用于人類的抗卵巢衰老、延長(zhǎng)女性生殖年齡中，對(duì)于制藥提供直接證據(jù)。此外，除直接用藥外，在保健品中加入白藜蘆醇，也可以對(duì)抵抗卵巢衰老、延長(zhǎng)生殖年齡具有重要幫助。
【專利說(shuō)明】用白藜蘆醇抗卵巢衰老
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及用白藜蘆醇抗卵巢衰老的方法，屬于生物與新醫(yī)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]白藜蘆醇(1^8￥6以廿01，反式3，4’，5-三羥基芪)，化學(xué)名稱芪三酚，在1940年時(shí)從白藜蘆的根部首次被提取出來(lái)，之后在1983年時(shí)，人們又在中草藥虎杖的根部發(fā)現(xiàn)含量豐富的白藜蘆醇。它最初被認(rèn)為是一種植物抗毒素。在1992年，人們發(fā)現(xiàn)紅酒的抗腫瘤效果并發(fā)現(xiàn)紅酒中有濃度較高的白藜蘆醇后，這個(gè)化合物才開始收到廣泛的關(guān)注。接著大量的報(bào)道顯示白藜蘆醇可以阻止或者緩解一系列疾病的發(fā)生，包括癌癥、心血管疾病以及缺血性損傷。白藜蘆醇還可以增強(qiáng)生物體抗逆性，并延長(zhǎng)從酵母到脊椎動(dòng)物等不同生物的壽命O
[0003]白藜蘆醇對(duì)于生殖系統(tǒng)的作用的研究在近些年才開始興起。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在對(duì)大鼠喂白藜蘆醇4個(gè)月后發(fā)現(xiàn)，其卵巢中的健康卵泡數(shù)量明顯增多，而閉鎖卵泡明顯減少，研究者們推測(cè)白藜蘆醇可能在原始卵泡和初級(jí)卵泡的發(fā)育過(guò)程中起作用并抑制卵子的凋亡而延長(zhǎng)生殖壽命?？茖W(xué)家們還發(fā)現(xiàn)，Sirtl在卵巢中的黃體化的顆粒細(xì)胞中表達(dá)，而且白藜蘆醇可以刺激Sirtzl的表達(dá)量升高，并增強(qiáng)孕酮的分泌。白藜蘆醇是一種植物雌激素，它能夠與17β-雌二醇(17 β-Estradiol，17 β-Ε2)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合于雌激素受體(ER)并激活雌激素應(yīng)答基因的轉(zhuǎn)錄，因此在體外具有雌激素樣作用。
[0004]目前已知的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以及流行病學(xué)觀察都已顯示，白藜蘆醇對(duì)心血管疾病、骨質(zhì)疏松癥、腫瘤、阿茨海默癥等與絕經(jīng)后婦女常見疾病具有一定的療效。本研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)口服白藜蘆醇的方法可以抵抗雌鼠增齡過(guò)程中發(fā)生的卵巢衰老，從而白藜蘆醇的藥用價(jià)值進(jìn)一步得到了證實(shí)。又因?yàn)槿祟惡托∈蟮拇菩陨乘ダ线^(guò)程相似，該發(fā)明的結(jié)果也適用于延緩人類女性的卵巢衰老，只是在用量上會(huì)有所不同。除直接用藥外，在保健品中加入一定量的白藜蘆醇，也可以對(duì)延緩女性衰老、延長(zhǎng)生殖年齡具有重要作用。因此，本發(fā)明對(duì)延緩雌性生殖衰老的制藥提供直接的根據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明是一種通過(guò)口服白藜蘆醇抗卵巢衰老的方法。實(shí)驗(yàn)中采用生殖衰老速度較快的C57雌鼠，對(duì)實(shí)驗(yàn)組采取口服一定濃度的白藜蘆醇的方法，來(lái)檢測(cè)白藜蘆醇在延緩C57雌鼠卵巢衰老方面的作用。研究結(jié)果表 明，在喂藥一年后，白藜蘆醇喂藥組雌鼠所產(chǎn)后代數(shù)目高于同齡對(duì)照組雌鼠。對(duì)喂藥半年和喂藥一年的C57雌鼠的卵巢組織進(jìn)行包埋、切片、HE染色的結(jié)果表明，喂藥白藜蘆醇的雌鼠卵巢中的原始卵泡和初級(jí)卵泡的數(shù)量明顯多于同齡對(duì)照組；而生長(zhǎng)卵泡和成熟卵泡的數(shù)量也在喂藥一年后與對(duì)照組相比有明顯的提高。對(duì)于各組雌鼠進(jìn)行超排并染色的結(jié)果表明白藜蘆醇可以在一定程度上維持卵子的數(shù)量和質(zhì)量。同時(shí)，喂養(yǎng)白藜蘆醇的雌鼠卵巢中的端粒酶活性、端粒長(zhǎng)度以及衰老相關(guān)基因的表達(dá)都比同齡對(duì)照組要更接近于年輕對(duì)照組?！緦＠綀D】

【附圖說(shuō)明】
[0006]圖1為用白藜蘆醇喂藥一年后平均每只小鼠見栓后生仔數(shù)目(A)和平均每只小鼠受孕后生仔數(shù)目(B)?！皀”為參與實(shí)驗(yàn)的小鼠數(shù)目，在B圖中，n為受孕小鼠數(shù)目。從圖中可以看到，喂藥一年后平均每只小鼠見栓后生仔數(shù)目與年老組相比有明顯增多，并且在單獨(dú)計(jì)算受孕小鼠的平均生仔數(shù)目時(shí)，喂藥組小鼠相對(duì)于年老對(duì)照組來(lái)講也有更好的表現(xiàn)。
[0007]圖2為用白藜蘆醇喂藥一年后各組小鼠的卵巢形態(tài)(A)和各級(jí)卵泡數(shù)目(原始和初級(jí)卵泡數(shù)目(B)、次級(jí)和生長(zhǎng)卵泡數(shù)目(C)、閉鎖卵泡數(shù)目(D))。在A圖中，年輕對(duì)照組的卵巢中清晰可見數(shù)量眾多的各級(jí)卵泡，而年老對(duì)照組基本看不到健康卵泡的存在。然而，白藜蘆醇喂藥組中的卵泡數(shù)量有一定的提升。這個(gè)結(jié)果在B圖、C圖和D圖的卵泡計(jì)數(shù)結(jié)果中也再一次被證實(shí)。
[0008]圖3為用白藜蘆醇喂藥一年后各組小鼠卵巢中的端粒長(zhǎng)度。端粒長(zhǎng)度對(duì)于維持生物體的壽命有重要作用，而隨著年齡機(jī)體內(nèi)積累下來(lái)活性氧化物會(huì)對(duì)端粒DNA造成損傷，以致端粒長(zhǎng)度變短。從圖中我們可以看到，端粒長(zhǎng)度在喂藥組中相對(duì)于年老對(duì)照組有顯著的提升，更接近于年輕對(duì)照組。
[0009]圖4為用白藜蘆醇喂藥一年后各組小鼠的衰老相關(guān)基因p21 (A)和Sirtl (B)的表達(dá)情況。P21基因表達(dá)隨著年齡的增加而上升，Sirtl基因表達(dá)隨著年齡的增加而下降。這兩個(gè)基因的表達(dá)量在白藜蘆醇喂藥組中更接近于年輕對(duì)照組，而與年老對(duì)照組相比呈現(xiàn)比較顯著的差異。
[0010]圖5為喂藥半年(A)和一年⑶時(shí)各組小鼠超排后的卵子數(shù)量。對(duì)兩個(gè)年齡段的各組小鼠施以一定量的激素使其超數(shù)排卵，將輸卵管劃破后釋放出卵泡，此時(shí)記錄每只雌鼠取到的卵子個(gè)數(shù)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，喂藥半年時(shí)，各組小鼠的卵子數(shù)目沒(méi)有顯著差異，而到了一年時(shí)，年老對(duì)照組的卵子數(shù)目顯著下降，而白藜蘆醇喂藥組的卵子數(shù)目在一定程度上得以維持，與年老對(duì)照組相比有顯著的提升。
[0011]圖6為喂藥半年時(shí)各組小`鼠超排后取得的卵子的質(zhì)量。(紡錘體形態(tài)比較(A)、正常率比較(B))。A圖中顯示的是M II期的卵子經(jīng)過(guò)微管染色(綠色)和核酸(藍(lán)色)染色后，用熒光顯微鏡照相后的形態(tài)。紡錘體的正常形態(tài)和染色體的正常排列是卵子進(jìn)行下一步分裂至關(guān)重要的條件。在年老對(duì)照組中，染色體排列異常的情況增多(如圖A所示)，標(biāo)志著卵子質(zhì)量的下降。進(jìn)一步的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，在喂藥半年時(shí)，紡錘體與染色體排列正常的卵子在年老對(duì)照組中明顯降低，而這一個(gè)值在白藜蘆醇喂藥組中得到顯著提升，說(shuō)明白藜蘆醇的攝入可以維持卵巢衰老過(guò)程中發(fā)生的卵子質(zhì)量的下降。
[0012]星號(hào)表示兩組之間存在顯著性差異，代表p < 0.05，“#”代表p < 0.01，“***”代表P < 0.001?！癥oung”代表2個(gè)月齡的年輕對(duì)照組，“Old”代表與喂藥組同齡的喂正常飲用水的年老對(duì)照組，“Res”代表飲用水中添加了 30mg/L的白藜蘆醇的喂藥組。
【具體實(shí)施方式】
[0013]將白藜蘆醇以30mg/L的濃度加入到小鼠的日常飲用水中，讓其自由進(jìn)水進(jìn)食。
【權(quán)利要求】
1.一種延緩雌鼠卵巢衰老的方法，即將白藜蘆醇加入到雌鼠的引用水中，使其長(zhǎng)期并自由地飲用這樣的水。
2.因?yàn)槿说纳乘ダ吓c小鼠相似，該發(fā)明也適用于抗人的卵巢衰老，只是在用量上不同。
3.該發(fā)明除 應(yīng)用于直接用藥外，在保健藥品中加入白藜蘆醇以期獲得抗小鼠及人類的卵巢生殖衰老的作用。
【文檔編號(hào)】A61P15/08GK103565782SQ201210251414
【公開日】2014年2月12日 申請(qǐng)日期:2012年7月20日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月20日
【發(fā)明者】劉夢(mèng)圓, 劉林 申請(qǐng)人:南開大學(xué)