癌癥的靶向免疫治療的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種針對腫瘤的靶向集團(tuán)和免疫調(diào)節(jié)劑的偶聯(lián)復(fù)合物。此種復(fù)合物能在腫瘤微環(huán)境中激活針對腫瘤的免疫反應(yīng)，特異性地殺傷腫瘤細(xì)胞，從而達(dá)到治療腫瘤的目的。
【專利說明】癌癥的靶向免疫治療
[0001]發(fā)明背景:
[0002]治療性抗體在臨床上的應(yīng)用已有二十多年的時(shí)間了，臨床應(yīng)用的抗腫瘤抗體藥物現(xiàn)在已有十三種，包括 Rituxan(1997)，Herceptin(1998)，Mylotarg(2000)，Campath (2001)，Zeval in (2002), Bexxer (2003), Avastin (2004), Erbitux (2004)和Vectibix (2006) ；Arzerra (2009) ；Benlysta(2011) ；Yervoy (2011) ;Adcetris (2011)。革巴點(diǎn)主要集中在EGFR，Her2，CD20和VEGF四個分子上。
[0003]單純的治療性抗體的腫瘤細(xì)胞殺傷機(jī)制有三種(Scott AM，Wolchok JD, OldL1.Antibody therapy of cancer.Nat Rev Cancer.2012 Mar 22 ； 12 (4):278-87):1)抗體的直接作用即抗體使配體/受體信號的阻斷或激動活性、誘導(dǎo)凋亡、呈遞藥物。抗體的受體激動活性可產(chǎn)生直接腫瘤細(xì)胞殺傷作用，比如，有些抗體可結(jié)合到腫瘤細(xì)胞表面受體上，激活該受體，從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡(以線粒體為代表)。抗體也可以通過受體拮抗活性介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞殺傷，比如，某些抗體可結(jié)合到細(xì)胞表面受體上，并阻斷二聚化、激酶激活和下游信號，從而抑制增殖，促進(jìn)凋亡。抗體結(jié)合到酶上可以導(dǎo)致中和作用、信號阻斷和細(xì)胞死亡。2)通過免疫介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷機(jī)制包括補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒作用(complement-dependentcytotoxicity, CDC),抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(antibody-dependent cellularcytotoxicity, ADCC)，T細(xì)胞功能調(diào)控等。免疫介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞殺傷可通過以下途徑來完成:誘導(dǎo)吞噬作用；補(bǔ)體激活；抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用；遺傳修飾的T細(xì)胞通過單鏈可變片段靶向腫瘤；通過抗體介導(dǎo)抗原交叉遞呈給樹突狀細(xì)胞激活T細(xì)胞；抑制T細(xì)胞抑制性受體，如細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA4)。其中抗體Fe部分的功能對于通過⑶C和ADCC介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞殺傷作用尤其重要。3)抗體對腫瘤血管和基質(zhì)的特異性效應(yīng)。通過對血管受體拮抗或配體捕獲誘導(dǎo)血管和基質(zhì)細(xì)胞消融，包括:基質(zhì)細(xì)胞的抑制作用；向基質(zhì)細(xì)胞傳遞毒素；向脈管系統(tǒng)傳遞毒素。(Scott AM, Wolchok JD, Old L1.Antibodytherapy of cancer.Nat Rev Cancer.2012Mar 22 ； 12 (4):278-87.)
[0004]單純治療性單抗藥物的推動了抗癌藥物的研究發(fā)展，但仍有些問題需要進(jìn)一步研究解決。例如抗體的免疫原性，長`期使用的腫瘤靶點(diǎn)耐受，單純阻斷單一信號傳導(dǎo)通路的長期效果等等，總而言之，絕大部分的單純抗體都較難做到長期的，高效率的抑制和殺傷腫瘤細(xì)胞。
[0005]1964年《自然》雜志提出了抗體-藥物偶聯(lián)(ADC)技術(shù)的新思路，這方面的技術(shù)在近年來有了突破性的進(jìn)展。ADC是一種通過化學(xué)連接子(Iinkeri將強(qiáng)毒性藥物(Toxini與抗體共價(jià)連接起來?？贵w識別癌細(xì)胞表面的抗原分子，由于細(xì)胞內(nèi)吞ADC藥物的作用將其內(nèi)吞至胞質(zhì)內(nèi)，在胞內(nèi)特殊環(huán)境下，Linker水解后釋放的毒素來殺傷細(xì)胞。
[0006]Seattle Genetics 公司開發(fā)的這類藥物 Brentuximab Vedotin (商品名Adcetris)已通過了 FDA的上市批準(zhǔn)。它是由monomethyl auristatin E (MMAE)這種人工合成的毒性抗癌藥和特異性靶向淋巴瘤細(xì)胞特異性的CD30分子的抗體偶聯(lián)而成，提高了殺滅腫瘤細(xì)胞的作用。
[0007]現(xiàn)在，有數(shù)十款這類ADC藥物正在開展臨床試驗(yàn),其中Genentech生物技術(shù)公司和ImmunoGen公司聯(lián)合開發(fā)的曲妥珠單抗與美登素偶聯(lián)成的，用于治療乳腺癌的藥物T-DMl已經(jīng)進(jìn)入了最后上市前準(zhǔn)備。美登素是一種小分子毒素，可與微管蛋白結(jié)合，通過非還原的雙-馬來酰亞胺-丙二醇聯(lián)合體防止微管形成。而曲妥珠單抗可靶向作用于乳腺癌和胃癌人表皮生長因子受體2 (HER2)，是被批準(zhǔn)用于HER2陽性的癌癥的新藥，但曲妥珠單抗并非能夠促使所有的J1ER2陽性細(xì)胞凋亡。T-DMl結(jié)合了選擇性地靶向HER2受體的曲妥珠單抗與強(qiáng)效的細(xì)胞毒性劑maytansine而殺死腫瘤細(xì)胞。即T-DMl抗體與HER2受體結(jié)合，引起從偶聯(lián)物釋放的美登素細(xì)胞內(nèi)化，進(jìn)而殺死腫瘤細(xì)胞。T-DMl具有較好的整體療效和藥代動力學(xué)特性，并且毒性較低。
[0008]傳統(tǒng)的小分子化療藥物具有毒性強(qiáng)和藥代動力學(xué)的優(yōu)勢，但在治療腫瘤過程中可能結(jié)合和影響其他生理靶點(diǎn)產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用；抗體-藥物偶聯(lián)就是把具有優(yōu)異臨床療效的靶向特異性抗體和小分子藥物的藥代動力學(xué)結(jié)合起來?？贵w藥物偶聯(lián)物結(jié)構(gòu)是具有靶向作用的單克隆抗體與具有特定藥理學(xué)特性的化合物結(jié)合。這種技術(shù)的要求是治療性抗體必須具有靶點(diǎn)結(jié)合特異性；必須與一個具有治療或其他功能作用的分子如細(xì)胞毒素偶聯(lián)，諸多因素影響這類抗體的作用如偶聯(lián)抗體的細(xì)胞內(nèi)吞功能、偶聯(lián)穩(wěn)定性、細(xì)胞毒素的釋放及殺傷性等。
[0009]目前常用的毒素分子主要包括微管蛋白抑制劑Auristatin類似物monomethylauristatin E, monomethyl auristatin F 和美登素。monomethyl auristatin E 是人工合成的微管聚合物抑制劑，能夠抑制微管聚集，干擾腫瘤細(xì)胞有絲分裂和凋亡誘導(dǎo)作用(Naumovski L and Junutula JR.Glembatumumab vedotin, a conjugate ofan ant1-glycoprotein non-metastatic melanoma protein B mAb and monomethylauristatin E for the treatment of melanoma and breast cancer.Curr OpinMol Ther 2003 ； 12 (2):248-57.Francisco JA, Cerveny CG et al.cAClO-vcMMAE,an ant1-CD30-monomethyl auristatin E conjugate with potent and selectiveanti tumor activity.Blood 102(4): 1458-65) monomethyl auristatin F是一種抗有絲分裂的Auristatin衍生物，C末端具有帶電荷的苯基丙氨酸殘基，與未帶電荷的MMAE相t匕，它最小化細(xì)胞信號通·路的損傷，最小化細(xì)胞毒性。在大量CD30細(xì)胞株試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，mAb-maleimidocaproyl-繳氨酸-瓜氨酸-p-aminobenzyloxycarbony1-MMAF (mAb-Ll-MMAF)的毒性比單獨(dú) MMAF 強(qiáng) 2200 倍以上(Doronina SO et al., Enhanced activity ofmonomethylauristatin F through monoclonal antibody delivery:effects of linkertechnology on efficacy and toxicity.Bioconjug Chem, 2006 ； 17 (I):pll4_24)。美登素也是一種能與微管蛋白結(jié)合小分子毒素，通過非還原的雙-馬來酰亞胺-丙二醇聯(lián)合體防止微管形成。
[0010]抗體-藥物偶聯(lián)具有直接和間接殺傷癌細(xì)胞的作用，這種抗體使配體/受體信號的阻斷或激動活性、誘導(dǎo)凋亡同時(shí)還可以將負(fù)載藥物直接或間接(例如藥物、毒素、小分子干擾RNA或放射性同位素)呈遞或傳遞給腫瘤細(xì)胞。治療性偶聯(lián)抗體藥物就是利用抗體和偶聯(lián)藥物的雙重特性，一是結(jié)合功能，與靶分子特異性結(jié)合；二是抗體本身腫瘤細(xì)胞殺傷的效應(yīng)功能，三是偶聯(lián)藥物的特定功效。目前的抗體-藥物偶聯(lián)藥物是局限在如何直接殺傷腫瘤細(xì)胞。但基于這種技術(shù)在抗體，鏈接分子，毒素分子，鏈接技術(shù)等方面的高要求，以及能夠帶到腫瘤微環(huán)境內(nèi)的毒素分子有限，在實(shí)際臨床研究方面還存在著一定困難。[0011]本文引用的參考文獻(xiàn)不應(yīng)視為承認(rèn)是請求保護(hù)的本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)。
[0012]發(fā)明概述[0013]本發(fā)明涉及一個用于治療腫瘤的具有靶向細(xì)胞功效以及細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)功能的免疫治療分子，此免疫治療分子是具有靶向集團(tuán)-鏈接分子-調(diào)節(jié)劑結(jié)構(gòu)的偶聯(lián)復(fù)合物。此免疫治療分子在體內(nèi)能達(dá)到殺傷腫瘤細(xì)胞同時(shí)更有效的激活腫瘤免疫和的作用。
[0014]本發(fā)明提供一種靶向免疫治療分子，其具有如下結(jié)構(gòu):靶向集團(tuán)，連接集團(tuán)，和免疫調(diào)節(jié)劑，其中靶向集團(tuán)和免疫調(diào)節(jié)劑經(jīng)連接集團(tuán)連接在一起。
[0015]在一個實(shí)施方案中,所述靶向集團(tuán)可特異性地結(jié)合腫瘤。
[0016]在一個實(shí)施方案中，所述靶向集團(tuán)可特異性地結(jié)合腫瘤抗原。所述腫瘤抗原可選自⑶19，⑶20，⑶22，⑶33，⑶37，⑶40，⑶52，CD70，或CD79。所述腫瘤抗原也可選自 Syndecan-1, Lewis, MUCl，MUC16, PSMA, Cripto, EphA2, EphA3, EphB2, Av integrin,Mesothelin, TAG-72, CAIX，5T4， Folate Receptor 1， BT-062, SLC44A4, Nectin-4, GD2,ED-B, FAP, GPNMB, gpA33, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP，或 Tenascin。
[0017]在一個實(shí)施方案中，所述靶向集團(tuán)是抗體。所述抗體可以是單克隆抗體。所述單克隆抗體可以是人源化，或人源性單克隆抗體。在再一個實(shí)施方案中，所述靶向集團(tuán)選自 Rituxan (rituximab,利妥昔單抗)，Herceptin (trastuzumab,曲妥珠單抗)，或Erbitux (cetuximab,西妥昔單抗)。
[0018]在一個實(shí)施方案中，所述革巴向集團(tuán)選自a Fab, Fab’，F(xiàn)(ab' )2, single domainantibody, T and Abs dimer, Fv, scFv, dsFv, ds-scFv, Fd,單域抗體(linear antibody),小分子抗體(minibody),雙特異抗體(diabody),雙特異抗體片斷(bispecific antibodyfragment), bibody, tribody, sc-diabody, kappa (Iamda) body, BiTE, DVD-1g, SIP, SMIP,DART,或含有一個或多個 CDR 的抗體類似物(a small antibody mimetic comprising oneor more CDRs)。
[0019]在一個實(shí)施方案中，所述靶向集團(tuán)選自VEGFR的ATWLPPR多肽片段，Thrombospondin-lmimetics，CDCRGDCFCG (cyclic)多肽，SCH 221153 片段，NCNGRC (cyclic)多肽，CTTHWGFTLC 多肽，CGNKRTRGC 多肽(LyP-1)，Octreotide, Vapreotide, Lanreotide,C-3940 多月太，Decapeptyl, Lupron, Zoladex,或 Cetrorelix0
[0020]在一個實(shí)施方案中，權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團(tuán)是葉酸或其衍生物。
[0021 ] 在一個實(shí)施方案中，所述免疫調(diào)節(jié)劑是免疫激活劑。
[0022]在一個實(shí)施方案中，所述免疫調(diào)節(jié)劑是TLR配體。在一個實(shí)施方案中，所述免疫調(diào)節(jié)劑是下列 TLR 中至少一個的配體:TLR1，TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8，或TLR9。在再一個實(shí)施方案中，權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑是TLR7和TLR8的配體。
[0023]在一個實(shí)施方案中，所述免疫調(diào)節(jié)劑選自Imiquimod, Resiquimod (R848),IM02134, IM0205, MGN-1703, MGN-1704, Agatolimod, SD-101, QAX-935, DIMS0150, PollinexQuattro, 0M-174, Eritoran, TAK-242, N1-0101,聚肌胞苷酸(Poly 1: C), CpG 寡聚脫氧核苷酸，或干擾素_b。
[0024]在Iv實(shí)施方案中，所述連接集團(tuán)選自fe鏈，多妝鏈，二硫鍵鏈或硫釀鍵鏈。[0025]在一個實(shí)施方案中，所述連接集團(tuán)是可被酶切的或非酶切位點(diǎn)的。
[0026]本發(fā)明還提供一種藥物組合物，其包含所述的免疫治療分子或其藥物學(xué)可接受的鹽以及一種或多種藥物學(xué)可接受的載體。
[0027]在一個實(shí)施方案中，所述的藥物組合物，還含有第二化學(xué)治療劑。所述的第二化學(xué)治療劑可選自他莫昔芬、雷洛昔芬、阿那曲唑、依西美坦、來曲唑、imatanib、紫杉醇、環(huán)磷酰胺、洛伐他汀、minosine、吉西他濱、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、甲氨喋呤、多西他奇、戈舍瑞林、長春新堿、長春堿、諾考達(dá)唑、替尼泊苷、依托泊苷、吉西他濱、epo th i I one、諾維本、喜樹堿、柔紅霉素、放線菌素D、米托蒽醌、安吖啶、多柔比星、表柔比星或伊達(dá)比星。
[0028]本發(fā)明還提供一種一種治療細(xì)胞增生性疾病的方法，所述方法包括將治療有效量的如所述的免疫治療分子、或其藥物學(xué)可接受的鹽，與藥物學(xué)可接受的載體一起給藥于有此需要的對象，其中所述的細(xì)胞增生性疾病得到治療。
[0029]在一個實(shí)施方案中，所述的細(xì)胞增生性疾病為癌前期病變，或癌癥。其中所述的癌癥為肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、慢性髓細(xì)胞性白血病、黑素瘤或卵巢癌。
[0030]在一個實(shí)施方案中，所述的細(xì)胞增生性疾病為乳腺細(xì)胞增生性疾病。
[0031]在一個實(shí)施方案中，所述的乳腺細(xì)胞增生性疾病為乳腺癌前期病變。在再一個實(shí)施方案中，所述的乳腺癌前期病變選自乳腺非典型增生、原位管癌、和原位小葉癌。
[0032]在一個實(shí)施方案中，所述的乳腺細(xì)胞增生性疾病為乳腺癌。在再一個實(shí)施方案中，所述的乳腺癌為雌激素受體陰性乳腺癌。
[0033]在一個實(shí)施方案中，所述的治療分子、或其藥物學(xué)可接受的鹽與第二化學(xué)治療劑聯(lián)合給藥。在再一個實(shí)施方案中，所述的第二化學(xué)治療藥劑選自他莫昔芬、雷洛昔芬、阿那曲唑、依西美坦、來曲唑、imatanib、紫杉醇、環(huán)磷酰胺、洛伐他汀、minos ine、吉西他濱、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、甲氨喋呤、多西他奇、戈舍瑞林、長春新堿、長春堿、諾考達(dá)唑、替尼泊苷、依托泊苷、吉西他濱、epothi1ne、諾維本、喜樹堿、柔紅霉素、放線菌素D、米托蒽醌、安口丫啶、多柔比星、表柔比星或伊達(dá)比星。
[0034]在一個實(shí)施方案中，所述的癌癥治療包括腫瘤尺寸的減小。
[0035]在一個實(shí)施方案中，所述的癌癥為轉(zhuǎn)移癌。在再一個實(shí)施方案中，所述的癌癥治療包括抑制轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞的侵襲。
[0036]從本文提供的其它描述，包括不同實(shí)施例，本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將是顯而易見的。所提供的實(shí)施例舉例說明在實(shí)踐本發(fā)明中有用的不同組分和方法。實(shí)施例不限制請求保護(hù)的本發(fā)明?；诒竟_內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以鑒定和采用對于實(shí)踐本發(fā)明有用的其他組分和方法。
[0037]附圖簡述
[0038]圖1.Balb/c裸鼠注射4xl06腫瘤細(xì)胞建立癌癥模型，每3天鼠尾靜脈注射給藥一次，對照組(n = 10)抗體 IgG 5mg/kg, Trastuzumab 抗體組(n = 10) 5mg/kg, R848 組(n =10) 30ug, Tra。stuzumab偶聯(lián)R848抗體組(n = 10) 5mg/kg,實(shí)驗(yàn)為50天測定腫瘤體積為其中觀察項(xiàng)目之一。
[0039]發(fā)明詳述
[0040]樹突細(xì)胞是一類在免疫應(yīng)答與免疫耐受中發(fā)揮重要作用的免疫細(xì)胞，其最突出的功能特點(diǎn)是在病毒刺激下產(chǎn)生大量的I型干擾素，因此又被稱為是天然I型干擾素生產(chǎn)細(xì)胞。
[0041]樹突狀細(xì)胞是迄今所知的功能最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞。根據(jù)其表面分子標(biāo)記，樹突狀細(xì)胞可以被分成二個亞型，漿細(xì)胞樣樹突細(xì)胞(plasmacytoid DC, pDC)和骨髓樣樹突細(xì)胞(myeloid DC，mDC)。通過大量產(chǎn)生I型干擾素、細(xì)胞因子、趨化因子以及與其它細(xì)胞之間的相互作用等途徑，漿細(xì)胞樣樹突細(xì)胞廣泛地參與到機(jī)體的固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答過程中，它可以調(diào)控NK、T、B等細(xì)胞參與免疫反應(yīng)的強(qiáng)度、持續(xù)時(shí)間以及應(yīng)答方式，從而在腫瘤、感染和自身免疫性疾病過程中均發(fā)揮十分重要的功能(Liu Y.T.1PC professionaltype I interferon-producing cells and plasmacytoid dendritic cell precursors.Annu Rev Immunol.2005 ;23:275-306.Gilliet M，Cao W,Liu Y.T.Plasmacytoid dendriticcells !sensing nucleic acids in viral infection and autoimmune diseases.Nat RevImmuno12008Aug ；8 (8):594-606)。
[0042]研究發(fā)現(xiàn)許多實(shí)體腫瘤如乳腺癌和頭，頸腫瘤，卵巢癌中有pDC的侵潤(Treilleux I，Blay JY，Bendriss-Vermare N et al.Dendritic cell infiltration andprognosis of early stage breast cancer.Clin Cancer Res 2004;10:7466-7474，Hartmann E，Wollenberg B，Rothenfusser S et al.1dentification and functionalanalysis of tumor—infiltrating plasmacytoid dendritic cells in head and neckcancer.Cancer Res 2003 ；63:6478-6487.Zou WP, Machelon V，Cou1mb-L^ Hermin A，etal.Stromal-derived factor-1 in human tumors recruits and alters the functionof plasmacytoid precursor dendritic cells.Nat Med 2001 ；7:1339-1346)而腫瘤細(xì)胞分泌的因子抑制的DC細(xì)胞的成熟(Gabrilovich DI，Corak J，Ciernik IF etal.Decreased antigen presentation by dendritic cells in patients with breastcancer.Clin Cancer Res 1997 ;3:483-490.Bell D，Chomarat P, Broyles D et al.1nbreast carcinoma tissue， immature dendritic cells reside within the tumor，whereas mature dendritic cel ls are located in peritumoral areas.J Exp Med1999 ；190:1417-1425.Menetrier-Caux C，Montmain G，Dieu MC et al.1nhibition ofthe differentiation of dendritic cells from CD34(+)progenitors by tumor cells:role of interleukin-6 and macrophage colony-stimulating factor.Bloodl998 ；92:4778-4791)。這些未成熟的DC細(xì)胞沒能起到調(diào)節(jié)免疫功能的作用。有證據(jù)表明Toll樣受體7激動劑Imiquimod，和Toll樣受體9激動劑CpG類藥物能夠剌激腫瘤周邊的pDC產(chǎn)生I型 IFN進(jìn)而抑制腫瘤的發(fā)展。(Dummer R, Urosevic M, Kempf W et al.1miquimod in basalcell carcinoma:how does it work ? Br J Dermatol 2003 ；149:57-58.Miller RL,Gerster JF, Owens ML et al Imiquimod applied topically:a novel immune responsemodifier and new class of drug.1nt J ImmunopharmacoI 1999 ；21:1-14.HofmannMA, Kors C， Audring H et al Phase I evaluation of intralesionally injectedTLR9_agonist PF—3512676 in patients with basal cell carcinoma or metastaticmelanoma.J Immunother2008 ；31:520-527).[0043]本發(fā)明涉及一個用于治療腫瘤的具有靶向細(xì)胞功效以及細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)功能的免疫治療分子，此免疫治療分子是具有靶向集團(tuán)-鏈接分子-調(diào)節(jié)劑結(jié)構(gòu)的偶聯(lián)復(fù)合物。此免疫治療分子在體內(nèi)能達(dá)到激活腫瘤免疫和殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。[0044]本發(fā)明提供一種靶向免疫治療分子，其具有如下結(jié)構(gòu):靶向集團(tuán)，連接集團(tuán)，和免疫調(diào)節(jié)劑，其中靶向集團(tuán)和免疫調(diào)節(jié)劑經(jīng)連接集團(tuán)連接在一起。
[0045]1.革巴向集團(tuán)
[0046]1.1.腫瘤靶點(diǎn)
[0047]腫瘤靶點(diǎn)是腫瘤細(xì)胞表面相對特異的受體或特定的基因表達(dá)蛋白以及相關(guān)的配體，可溶性蛋白等。針對該靶標(biāo)的抗體或其他藥物特異性干預(yù)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的信號通路直接或阻斷信號通路來抑制腫瘤細(xì)胞生長或促進(jìn)其凋亡，迄今為止，已有幾十余種分子靶點(diǎn)藥物被批準(zhǔn)用于實(shí)體腫瘤或血液系統(tǒng)腫瘤的臨床研究及治療，另有數(shù)種分子靶向藥物用于血液系統(tǒng)腫瘤。目前非實(shí)體腫瘤如血液病腫瘤較常見的靶點(diǎn)為CD19，CD20，CD22, CD30, CD33, CD37, CD40, CD52, CD70, CD79 ;而在實(shí)體腫瘤中 Syndecan-1, Lewis,MUCl，EpCAM, Her I, Her2, Her3, MUC16, PSMA, Cripto, EphB2, EphA2, EphA3, Av integrin,Mesothelin, TAG-72, CAIX，5T4， folate receptor 1， BT-062, SLC44A4, Nectin-4, GD2,ED-B, FAP, GPNMB, gpA33, VEGF, VEGFR, MET, IGF1R, TNFR, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP,Tenascin。(Scott AM, Wolchok JD, Old L1.Antibody therapy of cancer.Nat RevCancer.2012 Mar22 ；12(4):278-87.)
[0048]1.2.治療性抗體
[0049]臨床上成功的案 例如:Rituxan (Rituximab,利妥昔單抗)，是人鼠嵌合抗體,用來治療B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤。它作用在表達(dá)于B細(xì)胞表面的⑶20抗原，90%以上的B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤均有表達(dá)。Rituxan與⑶20結(jié)合通過⑶C和ADCC引發(fā)B細(xì)胞溶解，同時(shí)也可使藥物抵抗性的人體淋巴細(xì)胞對一些化療藥的細(xì)胞毒性敏感。
[0050]Herceptin(Trastuzumab,曲妥珠單抗)是人源化的單抗,作用在人表皮生長因子受體HER2的胞外區(qū)域，25%-30%的乳腺癌有表達(dá)。Herc印tin抗腫瘤作用認(rèn)為是I)使HER2受體的表達(dá)下調(diào)，抑制HER2的胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)道通路，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。2)與免疫機(jī)制有關(guān)，通過依賴抗體的ADCC和⑶C殺傷腫瘤細(xì)胞。
[0051]Erbitux(Cetuximab,西妥昔單抗)是人鼠嵌合抗體，作用在表皮生長因子受體(EGFR)。Erbitux與EGFR結(jié)合可抑制其信號轉(zhuǎn)道通路，影響細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移以及血管生成。抑制EGFR信號轉(zhuǎn)道通路可增強(qiáng)化療藥物和放射治療的療效。
[0052]Avastin(Bevacizumab,貝伐單抗)是人源化的單抗,其作用祀點(diǎn)是血管皮生長因子(VEGF)。它與VEGF結(jié)合抑制VEGFR的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，結(jié)果導(dǎo)致抑制腫瘤的新血管生成。
[0053]1.3.其它抗體
[0054]目前在研發(fā)的針對腫瘤靶點(diǎn)的治療性抗體藥物有血液系統(tǒng)疾病腫瘤方面的抗⑶19，⑶20，⑶22，⑶33，⑶37，⑶40，⑶52，⑶70，⑶79單克隆抗體；有用于治療實(shí)體腫瘤的抗 Syndecan-1, Lewis, MUCl, MUC16, PSMA, Cripto, EphA2, EphA3, EphB2, Av integrin,Mesothelin, TAG-72, CAIX，5T4， Folate Receptor 1， BT-062, SLC44A4, Nectin-4, GD2,ED-B, FAP, GPNMB, gpA33, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, Tenascin 抗體等。(Scott AM, Wolchok JD, Old L1.Antibody therapy of cancer.Nat Rev Cancer.2012Mar22 ；12(4):278-87)
[0055]下表列舉了以腫瘤抗原分類的各種正在研發(fā)的治療性抗體:
[0056]1.4.抗體片段或變體[0057]下表列舉了可用于腫瘤抗原抗體結(jié)合的各種抗體形式以及正在研究的腫瘤靶
點(diǎn)
[0058]
抗體結(jié)構(gòu)靶點(diǎn)列舉
scFvCC49, ERBB2, Ley
DiabodyLey and TAG-72
AffibodyERBB2
MinibodyCEA, ERBB2
Protein-FcAngiopoietin I, angiopoietin 2， VEGFRI, VEGFR2
Intact IgGCD20, CD33, EGFR, ERBB2, VEGF
IgE and IgMGM2
Drug conjugatesCD30, CD33 and ERBB2
Loaded nanoparticles A33, EGFR and transferrin
BispecificsCD19 - CD3, EPCAM - CD3，gplOO - CD3
[0059]可結(jié)合抗原的抗體片斷或衍生物:a Fab, Fab’，F(xiàn)(ab ' )2, single domainantibody, T and Abs dimer, Fv, scFv, dsFv, ds-scFv, Fd,單域抗體(linear antibody),小分子抗體(minibody),雙特異抗體(diabody),雙特異抗體片斷(bispecific antibodyfragment), bibody, tribody, sc-diabody, kappa (Iamda) body, BiTE, DVD-1g, SIP, SMIP,DART,或含有一個或多個 CDR 的抗體類似物(a small antibodymi metic comprising oneor more CDRs)。
[0060]1.5?其它可特異性結(jié)合腫瘤的分子
[0061]研究發(fā)現(xiàn)許多多肽類分子較特異性的作用在腫瘤血管方面和細(xì)胞表面激素受體上。如腫瘤血管方面的有VEGFR的ATWLPPR多肽片段，作用在CD36的Thrombospondin-1mimetics,在 Integrins avb 3and avb 5 的 ACDCRGDCFCG(cyclic)多妝和 SCH 221153片段，作用在 Aminop^tidase 上的 NCNGRC(cyclic)多肽；作用在 MMP_2and MMP-9 的CTTHWGFTLC和Lymphatic vessels的CGNKRTRGC多肽(LyP-1);在細(xì)胞表面激素受體上有 omatostatin receptors 的 Octreotide, Vapreotide 和 Lanreotide；Bombesin/GRPreceptor 的 C-3940 多妝，HRH 受體的 Decapeptyl, Lupron, Zoladex, Cetrorelix。
[0062]近年來，F(xiàn)olic acid的研究進(jìn)展引人注目，葉酸是一種小分子維生素，是細(xì)胞分裂所必須的。腫瘤細(xì)胞分裂異常，其表面存在著高表達(dá)的葉酸受體(FR，F(xiàn)olatereceptor)以便捕捉足夠的葉酸來支持細(xì)胞分裂。
[0063]數(shù)據(jù)表明FR在腫瘤細(xì)胞的表達(dá)比正常細(xì)胞高出20-200倍以上，各種惡性腫瘤FR表達(dá)率分別是卵巢癌82 %，非小細(xì)胞肺癌66 %，腎癌64 %，結(jié)腸痛34 %，乳腺癌29 %，(Xia ff, Low PS.Late-targeted therapies for cancer.1 Med Chem.2010 ；14 ；53(19):6811-24)且與上皮腫瘤組織的惡性程度及轉(zhuǎn)移侵襲程度呈正相關(guān)。FA可以通過細(xì)胞表面的FR介導(dǎo)內(nèi)吞作用將FA吞入胞內(nèi)，而FA通過其羧基與藥物形成FA復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)仍然保持高度親和力，并在酸性條件下(PH值為5) FR與FA脫離，F(xiàn)A并將藥物釋放在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。
[0064]臨床上可以利用這個傳遞藥物系統(tǒng)來達(dá)到選擇性攻擊腫瘤細(xì)胞。葉酸分子量小，無免疫原性，穩(wěn)定性強(qiáng)，合成價(jià)格低廉，重要的是與藥物或載體之間的化學(xué)鍵偶聯(lián)簡單易行，以FA為靶向分子構(gòu)建藥物傳遞系統(tǒng)成為治療腫瘤的研究熱點(diǎn)之一。目前在臨床試驗(yàn)階段的EC145 (FA化療藥物偶聯(lián)復(fù)合物)能有效的攻擊癌細(xì)胞(Pribble P and EdelmanMJ.EC145:a novel targeted agent for adenocarcinoma of the lung.Expert Opin.1nvestig.Drugs(2012) 21:755-761)。
[0065]2.免疫調(diào)節(jié)劑
[0066]2.1.TLR 配體
[0067]Toll like receptor (Toll樣受體，TLR)是樹突細(xì)胞重要的模式識別受體并在其分化和功能成熟中發(fā)揮重要作用，TLR通過識別細(xì)菌、蟲體、真菌和病毒等保守的病原相關(guān)分子模式(PAMP)而捕獲病原體，刺激樹突細(xì)胞分化和功能成熟。
[0068]到現(xiàn)在為止，一共有10個人類和13個鼠類TLR家族相繼被發(fā)現(xiàn)。它們在細(xì)胞內(nèi)均有一定的分布。TLR1、2、4、5、6表達(dá)于細(xì)胞表面，TLR3、7、8、9存在于細(xì)胞的胞內(nèi)體(endosome) 0它們均屬I型跨膜蛋白，由胞外區(qū)(550-980個氨基酸)、跨膜段和胞內(nèi)區(qū)(約130個氨基酸)3部分組成。胞外區(qū)富含亮氨酸重復(fù)序列(LRR)，能識別病原體成分；胞內(nèi)區(qū)有一個Toll/IL-lR(TIR)區(qū)域，是高度保守的蛋白質(zhì)相互作用區(qū)，通過與轉(zhuǎn)接分子的相互作用轉(zhuǎn)導(dǎo)信號，是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的核心元件。
[0069]近年來以TLR為靶向藥物的研究也有突破性的進(jìn)展，如通過TLR7MYD88信號途徑誘導(dǎo)IFNa、IL6和TNFa的生成來調(diào)`節(jié)免疫抗病毒、抗腫瘤藥物的TLR7/8靶向激動劑Imiquimod 和已通過臨床二期試驗(yàn)的 Resiquimod(R848) (Hemmi H, Kaisho T, Takeuchi0, et al.Small antiviral compounds activate immune cells via the TLR7 Myd88dependent signaling pathway.Nat Immunol, 2002 ;3:196—200 ;Panter G, Kuznik A,Jerala R.Therapeutic applications of nucleic acids as ligands for Toll likereceptors.Curr Opin Mol Ther,2009 ；11:133-145.Kronenberger B, Zeuzem S.Currentand future treatment option for HCV, Ann Hepatol, 2009 ；8:103-112).針對 TLR9 革巴點(diǎn)的 M02134，IM0205, MGN-1703, MGN-1704, CpG-ODN 藥物 Agatolimod，SD-101, QAX-935,DIMS0150等；TLR4也是人們關(guān)注的靶點(diǎn)之一現(xiàn)在臨床研究藥物有單磷酰酯質(zhì)A成分的Pollinex Quattro, 0M-174, Eritoran, TAK-242, N1-0101 等等
[0070]表中列舉了已報(bào)道的臨床前或臨床研究的能通過各種途徑激活TLR的分子以及其作用的TLR和臨床適應(yīng)癥
【權(quán)利要求】
1.一種靶向免疫治療分子，其具有如下結(jié)構(gòu):靶向集團(tuán)，連接集團(tuán)，和免疫調(diào)節(jié)劑，其中靶向集團(tuán)和免疫調(diào)節(jié)劑經(jīng)連接集團(tuán)連接在一起。
2.權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團(tuán)可特異性或優(yōu)先地結(jié)合腫瘤。
3.權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團(tuán)可特異性或優(yōu)先地結(jié)合腫瘤抗原。
4.權(quán)利要求3的免疫治療分子，其中所述腫瘤抗原選自⑶19，⑶20，⑶22，⑶33，⑶37，CD40, CD52, CD70，或 CD79。
5.權(quán)利要求3的免疫治療分子,其中所述腫瘤抗原選自Syndecan-1,Lewis, MUCl,MUC16, PSMA, Cripto, EphA2, EphA3, EphB2, Av integrin, Mesothelin, TAG-72, CAIX，5T4，F(xiàn)olate Receptor 1，BT-062，SLC44A4, Nectin-4，GD2，ED-B，F(xiàn)AP，GPNMB,gpA33，MET，IGF1R,TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP，或 Tenascin。
6.權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團(tuán)是抗體。
7.權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團(tuán)是單克隆抗體。
8.權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團(tuán)是人源化，或人源性單克隆抗體。
9.權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述祀向集團(tuán)選自RituxanCrituximab,利妥昔單抗),Herceptin (trastuzumab,曲妥珠單抗)，或 Erbitux (cetuximab,西妥昔單抗)。
10.權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團(tuán)選自aFab, Fab’，F(xiàn)(ab/ )2,single domain antibody, T and Abs dimer,Fv, scFv, dsFv, ds-scFv, Fd,單域抗體(linearantibody),小分子抗體(minibody),雙特異抗體(diabody),雙特異抗體片斷(bispecificantibody fragment), bibody, tribody, sc-diabody, kappa (Iamda) body, BiTE, DVD-1g,SIP, SMIP，DART，或含有一個或多個⑶R的抗體類似物。
11.權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團(tuán)選自VEGFR的ATWLPPR多肽片段，Thrombospondin-1 mimetics, CDCRGDCFCG(cyclic)多肽，SCH 221153 片段，NCNGRC(eyelie)多肽，CTTHWGFTLC 多肽，CGNKRTRGC 多肽(LyP-1)，Octreotide,Vapreotide, Lanreotide, C-3940 多月太，Decapeptyl, Lupron, Zoladex,或 Cetrorelix0
12.權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團(tuán)是葉酸或其衍生物。
13.權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑是免疫激活劑。
14.權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑是TLR配體，NodLile Receptor配體，RIG-1-Like Receptor 配體。。
15.權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑是下列TLR中至少一個的配體:TLRl，TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8，或 TLR9。
16.權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑是TLR7和TLR8的雙配體。
17.權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑選自Imiquimod，Resiquimod (R848)，IM02134,頂0205，MGN-1703，MGN-1704, Agatolimod, SD-101，QAX-935,DIMS0150, Pollinex Quattro, OM-174, Eritoran, TAK-242，N1-0101，聚肌胞苷酸(Poly1: C)，CpG寡聚脫氧核苷酸，和I型干擾素，IL-12，IL-23，IL~1, IL-15。
18.權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述連接集團(tuán)選自腙鏈，多肽鏈，二硫鍵鏈或硫醚鍵鏈。
19.權(quán)利要求1的免疫治療分子，其中所述連接集團(tuán)是可被酶切的或非酶切位點(diǎn)的。
20.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1所述的治療分子或其藥物學(xué)可接受的鹽以及一種或多種藥物學(xué)可接受的載體。
21. 權(quán)利要求20所述的藥物組合物，其還含有第二化學(xué)治療劑。
22.權(quán)利要求21所述的藥物組合物，其中所述的第二化學(xué)治療劑選自他莫昔芬、雷洛昔芬、阿那曲唑、依西美坦、來曲唑、imatanib、紫杉醇、環(huán)磷酰胺、洛伐他汀、minosine、吉西他濱、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、甲氨喋呤、多西他奇、戈舍瑞林、長春新堿、長春堿、諾考達(dá)唑、替尼泊苷、依托泊苷、吉西他濱、印othilone、諾維本、喜樹堿、柔紅霉素、放線菌素D、米托蒽醌、安吖啶、多柔比星、表柔比星或伊達(dá)比星。
23.一種治療細(xì)胞異常增殖的方法，所述方法包括將治療有效量的如權(quán)利要求1中所定義的治療分子、或其藥物學(xué)可接受的鹽，與藥物學(xué)可接受的載體一起給藥于有此需要的對象，其中所述的細(xì)胞異常增殖得到有效調(diào)節(jié)。
24.權(quán)利要求23所述的方法，其中所述的細(xì)胞異常增殖為癌前期病變。
25.權(quán)利要求23所述的方法，其中所述的細(xì)胞異常增殖為癌癥。
26.權(quán)利要求25所述的方法，其中所述的癌癥為肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、慢性髓細(xì)胞性白血病、黑素瘤或卵巢癌，黑素瘤或卵巢癌，皮膚、鼻竇、喉的乳頭狀瘤，子宮、皮膚、肺、鼻咽、陰莖、喉的乳頭狀癌。甲狀腺、乳腺、胃腸、肺、支氣管腺瘤，甲狀腺癌、胃癌，腎盂和膀胱的移行上皮癌，皮膚基底細(xì)胞癌，皮膚、舌、唇的血管肉瘤，骨肉瘤，顱內(nèi)的星形細(xì)胞瘤和多形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，惡性神經(jīng)鞘瘤，成神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤，腦膜肉瘤，何杰金氏病，非何杰金氏病，白血病、絨毛上皮癌，惡性葡萄胎，多發(fā)骨髓瘤，以及惡性黑色素瘤等。
27.權(quán)利要求23所述的方法，其中所述的細(xì)胞異常增殖為乳腺細(xì)胞增生性疾病。
28.權(quán)利要求27所述的方法，其中所述的乳腺細(xì)胞異常增殖為乳腺癌前期病變。
29.權(quán)利要求28所述的方法，其中所述的乳腺癌前期病變選自乳腺非典型增生、原位管癌、和原位小葉癌。
30.權(quán)利要求27所述的方法，其中所述的乳腺細(xì)胞增生性疾病為乳腺癌。
31.權(quán)利要求30所述的方法，其中所述的乳腺癌為雌激素受體陰性乳腺癌。
32.權(quán)利要求23所述的方法，其中所述的治療分子、或其藥物學(xué)可接受的鹽與第二化學(xué)治療劑聯(lián)合給藥。
33.權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的第二化學(xué)治療藥劑選自他莫昔芬、雷洛昔芬、阿那曲唑、依西美坦、來曲唑、imatanib、紫杉醇、環(huán)磷酰胺、洛伐他汀、minosine、吉西他濱、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、甲氨喋呤、多西他奇、戈舍瑞林、長春新堿、長春堿、諾考達(dá)唑、替尼泊苷、依托泊苷、吉西他濱、epothi 1ne、諾維本、喜樹堿、柔紅霉素、放線菌素D、米托蒽醌、安吖啶、多柔比星、表柔比星或伊達(dá)比星。
34.權(quán)利要求23所述的方法，其中所述的癌癥治療包括腫瘤尺寸的減小。
35.權(quán)利要求25所述的方法，其中所述的癌癥為轉(zhuǎn)移癌。
36.權(quán)利要求25所述的方法，其中所述的癌癥治療包括抑制轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞的侵襲。
【文檔編號】A61K39/00GK103566377SQ201210248481
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2012年7月18日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月18日
【發(fā)明者】李立新 申請人:上海博笛生物科技有限公司