專利名稱：神秘果果樹枝葉提取物及其提取方法和應用的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及提取技術(shù)，具體是神秘果果樹枝葉提取物及其提取方法；本發(fā)明還涉及所述提取物在制備抗氧化劑和抗痛風藥物中的應用。
背景技術(shù)：
神秘果(Synsepalum dulcificum Denill)原產(chǎn)西非加納剛果一帶,屬熱帶常綠灌木，原產(chǎn)于西非熱帶地區(qū)。20世紀60年代引入我國海南、云南、廣西等熱帶亞熱帶地區(qū)種植。神秘果之英文名為Mysterious Fruit (神秘水果)或Miracle Fruit(不可思議的水果)，神秘果之神奇在于要將食之奇酸無比的水果轉(zhuǎn)化成甘甜如飴的果實，神秘果應可能提供制成酸性食品的助食劑，或制成可滿足糖尿病患者需要甜味的變味劑。此外，從神秘果 枝、葉中分離出具有良好抗氧化活性的酚酸類化合物。痛風是由于嘌呤代謝紊亂，導致血尿酸增高，和/或腎臟排泄尿酸減少，從而引起尿酸鹽在組織沉積的疾病，其自然病程分為無癥狀高尿酸血癥、急性痛風性關(guān)節(jié)炎、間歇期痛風、慢性痛風石性痛風四個階段，偶爾也會出現(xiàn)痛風性腎病。尿酸鹽沉積是痛風的特征性病理改變，也是急性痛風性關(guān)節(jié)炎的診斷依據(jù)。高尿酸血癥可能是癌癥發(fā)生的早期征兆。嚴重的痛風會引起與健康相關(guān)的生活質(zhì)量的下降甚至殘疾，痛風發(fā)作次數(shù)越多，受累關(guān)節(jié)越多，這種情況越嚴重。目前采用的降尿酸藥物包括別嘌呤醇、丙磺舒、苯溴馬隆、苯磺唑酮等。其中別嘌呤醇是通過抑制黃嘌呤氧化酶活性來減少尿酸產(chǎn)生，其副作用包括皮疹、胃腸副作用、頭痛、風疹和間歇性腎炎，其最大副作用是與發(fā)燒、骨髓抑制、肝臟毒性、腎衰竭和系統(tǒng)性超敏血管炎等有關(guān)的超敏癥狀。其他藥物也有類似的對健康不利的副作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種神秘果果樹枝葉提取物。本發(fā)明的目的還在于提供所述提取物的提取方法。本發(fā)明的目的還在于提供所述提取物在制備抗氧化劑中的應用。本發(fā)明的目的還在于提供所述提取物在制備抗痛風藥物中的應用。本發(fā)明的神秘果果樹枝葉提取物的提取方法，包括如下步驟(I)神秘果枝葉粉碎，得提取原料；(2)在提取原料中加入乙醇水溶液，回流提取2 5小時，過濾，上清夜減壓蒸餾，冷凍干燥，得枝葉粗提取物干粉；該提取物干粉脫除了蛋白質(zhì)、糖類、有機酸類等雜質(zhì)；其中采用乙醇水溶液進行回流處理，可選擇性地提取具有抗氧化性且具有抑制黃嘌呤氧化酶活性的酚酸類化合物；(3)取步驟⑵所得的干粉溶于水中，經(jīng)大孔吸附樹脂柱處理，然后乙醇水溶液洗脫，分離富集得到總酚含量較高的收集液；(4)將收集液分別進行真空濃縮，至原來體積的1/7 1/3，得濃縮液，冷凍干燥得精制枝葉提取物。
優(yōu)選方案如下步驟(I)中，神秘果枝葉粉碎后過20 80目篩，得到提取原料。步驟⑵所述乙醇水溶液的濃度為50% 90%體積。步驟(3)中，采用濃度為10% 90%體積的乙醇水溶液洗脫，所述洗脫液用量為柱床體積的3 6倍；所述大孔吸附樹脂為HP-20大孔吸附樹脂。步驟(4)中，冷凍干燥時間為20小時，得到的神秘果果樹枝葉提取物呈淺紅色。采取冷凍干燥，可避免提取物因高溫發(fā)生氧化而損失活性。經(jīng)檢測，得到的得到的神秘果果樹枝葉提取物主要成分為酚酸類化合物。得到的神秘果果樹枝葉提取物，對于DPPH 清除能力較強(IC5tl分別為7. 92和8. Ou g/mL)，是谷胱甘肽的7. 9和7. 8倍；對于氧自由基吸收能力也很強(0RAC值分別為9425. 9和8383. 5Trolox u mol/g)，是谷胱甘肽的7. 0和6. 2倍；具有顯著的黃嘌呤氧化酶 抑制活性?？捎贸Ｒ?guī)的方法將神秘果果樹枝葉提取物用于制備抗氧化劑和抗痛風藥物以及預防痛風的藥物和保健品等，可以是片劑、沖劑、針劑、膠囊等。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點I、本發(fā)明方法采用不同濃度的乙醇回流選擇性提取出酚酸類化合物，先脫除蛋白質(zhì)、糖類、有機酸類等雜質(zhì)，然后采用大孔吸附樹脂富集酚酸類化合物，得到的葉提取物總酚含量達到66. 5%，枝提取物總酚含量達到84. 1%。2、本發(fā)明方法得到的枝葉提取物對于DPPH 清除能力較強(IC5tl分別為7. 92和
8.Ou g/mL)，是谷胱甘肽的7. 9和7. 8倍；對于氧自由基吸收能力也很強(0RAC值分別為9425. 9和8383. 5Trolox u mol/g)，是谷胱甘肽的7. 0和6. 2倍；具有顯著的黃嘌呤氧化酶抑制活性。3、本發(fā)明的植物資源豐富，提取得率高，安全無毒，可加工成天然抗氧化劑，或抗痛風藥物或保健食品。


圖I是本發(fā)明方法步驟⑴⑵得到的粉末制成5mg/mL水溶液(實施例I)抑制黃嘌呤氧化酶活性的柱狀圖。圖2是本發(fā)明方法得到的神秘果枝葉提取物制成5mg/mL水溶液(實施例2)抑制黃嘌呤氧化酶活性的柱狀圖。圖3是本發(fā)明方法得到的神秘果枝葉提取物抑制黃嘌呤氧化酶活性曲線圖。
具體實施例方式實施例I步驟(I)神秘果枝、葉分別粉碎，得提取原料，各分4等份；步驟⑵取神秘果枝、葉提取原料分別加入50%、70%、0%、90%乙醇，回流時間分別為5小時，減壓蒸餾，凍干分別得八種粉末。常規(guī)方法測定上述粉末成分及其提取率和含量，測定方法如F 標準曲線的繪制稱取120°C干燥恒重沒食子酸9. 4mg，蒸餾水定容至100ml。分別精密量取沒食子酸溶液 0. Iml,0. 2ml,0. 3ml,0. 4ml,0. 5ml,0. 6ml,0. 7ml,0. 8ml 置 IOml容量瓶中，加水至約6ml,搖勻，各加Folin-Ciocalteu試劑0. 5ml,搖勻,在I 8min內(nèi)加20%碳酸鈉溶液I. 5ml，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，40°C水浴保溫2小時，迅速冷卻，立即在760nm(總酹)測定吸光度,繪制標準曲線。提取物總酚含量測定按照標準曲線繪制方法，對上述粉末分別測定，結(jié)果如表I所示。表I
神秘果葉粉末神秘果枝粉末
乙醇濃度 -
_又提取率(％) 總含量(％) 提取率(％) 總酚含量(%)
50%23.419.810.723.7
70%24.217.710.223.5
90%23.615.811.820.3
_0%_252_8X)_134_57_表I可見，采用上述四種濃度乙醇提取均有較高的提取率。對葉的提取率高于對枝的提取率。提取物中以50%、70%、90%乙醇回流得到的組分中總酚含量最高。抗氧化性、黃嘌呤氧化酶抑制活性測定采用電子轉(zhuǎn)移法(DPPH 清除能力)和H質(zhì)子轉(zhuǎn)移法(氧自由基吸收能力(ORAC))兩種通用方法評價上述粉末的抗氧化能力，結(jié)果見表2。表 2 DPPH 清除能力(ICso^g/ml)ORAC (Trolox ^imol/g)
乙醇濃度
_神秘果葉粉末神秘果枝粉末神秘果葉粉末神秘果枝粉末
50% 33.98 35.16 3451.90 3206.38 70% 37.12 34.89 3287.78 3415.98 90% 42.93 39.32 2824.26 3107.06 0% 90.70 166.80 1405.38 1338.43 谷胱甘肽_62J2_1343.14_如表2所示，神秘果枝葉粉末DPPH 清除能力與氧自由基吸收能力(ORAC)具有較強的正相關(guān)性。神秘果枝葉粉末具有較強的抗氧化活性。以乙醇水溶液回流提取物抗氧化性最強，其抗氧化性超過谷胱甘肽。神秘果枝葉乙醇回流得到的粉末具有一定的黃嘌呤氧化酶抑制活性。高尿酸血癥和痛風患者體內(nèi)氧化應激水平增加，氧化損傷嚴重。因此，對高尿酸血癥和痛風患者來說，抑制黃嘌呤氧化酶活性、防止自由基形成、避免尿酸過量產(chǎn)生是非常重要的。圖I是本實施例得到的粉末的抑制黃嘌呤氧化酶活性柱狀圖。圖I顯示，各粉末配制成5mg/mL水溶液時，具有一定的黃嘌呤氧化酶抑制活性，其中以70%乙醇提取物粉末的活性最好，其黃嘌呤氧化酶抑制活性超過20%，而0%乙醇提取物粉末的5mg/mL水溶液未顯示出黃嘌呤氧化酶抑制活性。
實施例2步驟(3)取實施例
權(quán)利要求
1.一種神秘果果樹枝葉提取物的提取方法，其特征在于包括如下步驟 (1)神秘果枝葉粉碎，得提取原料； (2)在提取原料中加入乙醇水溶液，回流提取2 5小時，過濾，上清夜減壓蒸餾，冷凍干燥，得枝葉粗提取物干粉； (3)取步驟(2)所得的干粉溶于水中，經(jīng)大孔吸附樹脂處理，然后用乙醇水溶液洗脫，得到收集液； (4)將收集液分別進行真空濃縮，至原來體積的1/7 1/3，得濃縮液，冷凍干燥得精制枝葉提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(I)中，神秘果枝葉粉碎后過20 80目篩，得到提取原料。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于步驟(2)所述乙醇水溶液的濃度為50% 90%體積。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于步驟(3)中，采用濃度為10 90%體積的乙醇水溶液洗脫，所述洗脫液用量為柱床體積的3 6倍；所述大孔吸附樹脂為HP-20大孔吸附樹脂。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于步驟(4)中，冷凍干燥時間為20小時。
6.權(quán)利要求I 5之一所述方法得到的神秘果果樹枝葉提取物。
7.權(quán)利要求6所述神秘果果樹枝葉提取物在制備抗氧化劑中的應用。
8.權(quán)利要求6所述神秘果果樹枝葉提取物在制備抗痛風藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種神秘果果樹枝葉提取物的提取方法，包括將神秘果枝葉粉碎，得提取原料；加入乙醇水溶液，回流提取2～5小時，過濾，上清夜減壓蒸餾，冷凍干燥，得枝葉粗提取物干粉溶于水中，經(jīng)大孔吸附樹脂處理，然后用乙醇水溶液洗脫，得到收集液分別進行真空濃縮，冷凍干燥得精制枝葉提取物；得到的提取物含總酚66.5％，枝提取物含總酚84.1％。對于DPPH·清除能力是谷胱甘肽的7.9和7.8倍；對于氧自由基吸收能力是谷胱甘肽的7.0和6.2倍；具有良好的黃嘌呤氧化酶抑制活性；可用于制備抗氧化劑、抗痛風藥物和保健品。
文檔編號A61K36/185GK102743421SQ20121024121
公開日2012年10月24日 申請日期2012年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月12日
發(fā)明者萬福群, 趙謀明 申請人:萬福群